CN110585283B - 一种调节头皮微生态平衡的中药组方及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种调节头皮菌群平衡的中药组方，包含当归、侧柏叶、苦参、厚朴、月季，其中，所述当归的重量配比为6～12份、所述侧柏叶的重量配比10～20份、所述苦参的重量配比20～30份、所述厚朴的重量配比20～30份、所述月季重量比20～30份。本发明还提出了所述组方的制备方法。本发明克服传统工艺制备中药提取液存在的颜色深、有效成分保留少、杂质多等问题。本发明还提出了所述中药组方具有平衡头皮菌群微生态的应用。

Description

一种调节头皮微生态平衡的中药组方及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及皮肤菌群调节技术领域，具体涉及一种调节头皮微生态平衡的中药组方，及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤是人体内外环境交界的一个生物活性界面，人体皮肤表面定植着大量的微生物，包括细菌、真菌、病毒、衣原体和某些原虫等，它们与人类在共同的历史进化过程中形成了独特的生态结构。人体皮肤不同部位有其不同的生态位(ecological niche)，定植的微生物种类和数目也不尽相同。皮肤菌群可分为常驻菌和暂住菌两大类，大部分暂驻菌可通过其特殊配体，透过皮肤的保护膜和表皮，继而到达真皮，并可诱导真皮免疫反应，导致局部或系统疾病。通常情况下，常驻菌和暂住菌之间存在共生或拮抗作用，参与表皮脂质膜的形成，构成生物屏障，并且营养皮肤、参与皮肤细胞代谢。皮肤具有维持微生态平衡的能力，如果宿主的皮肤、环境和菌群之间处于不协调状态即微生态失调，就会造成皮肤的病理损害。
与人体其它部位的皮肤相比，头皮是一个独特的生态位，其特征表现为毛发密集、大量的汗腺、皮脂腺和相对湿度高。同时，脱落的角质形成细胞、汗腺分泌产生的矿物离子以及皮脂腺分泌产生的脂质等为微生物提供了丰富的营养来源。头皮的上述特征为微生物的定植和生长创造了适宜的条件。正常头皮的微生物群主要由细菌和真菌等组成，其中细菌菌群主要是痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)，而真菌微生物主要为马拉色菌(Malassezia)。研究显示，头皮上马拉色菌占真菌总数的96％，其中限制性马拉色菌(Malassezia restricta)和球形马拉色菌(Malassezia globosa)为主要的优势种属。研究显示，头屑患者与健康人相比，头皮表面马拉色菌和表皮葡萄球菌数目增加，而痤疮丙酸杆菌数目却显著减少。此外，对同一个体的头皮屑部位和健康部位的微生物进行检测对比，也发现存在此种差异。MeGinley等研究发现，痤疮丙酸杆菌在健康人，头屑和脂溢性皮炎患者头皮所占的比例分别是26％，6％和1％，即随着头皮炎症程度的加重，痤疮丙酸杆菌的数目逐渐减少，这可能与其严格厌氧性有关。上述现象表明，头皮表面微生物间失衡与头皮屑的产生有关。
马拉色菌是一种亲脂性厚壁孢子菌，缺乏糖基水解酶，不能通过降解碳水化合物来满足自身生长需求，但却可以通过其它方式摄取营养物质。研究发现，马拉色菌能够分泌多种酯酶，使其能够通过分解皮脂腺产生的皮脂从而在人体皮肤上生存和繁殖。目前认为，球形马拉色菌和限制性马拉色菌是引起头屑的主要相关病原菌。当头皮油脂分泌过多时，马拉色菌大量繁殖，它们在酯酶的作用下水解皮脂腺分泌的三酰甘油，消耗饱和脂肪酸，释放刺激性的不饱和脂肪酸(如十八烯酸)和其它炎症分子，导致个体头皮出现头屑相关症状。这是由于十八烯酸会诱导表皮角质形成细胞钙离子内流，导致表皮分化异常，屏障破坏，经表皮失水 (TEWL)率升高，从而诱导皮肤脱屑，而炎症分子作为芳香烃受体的配体在接触性致敏过程中参与刺激性免疫反应。另外，马拉色菌本身或产生的某些毒力因子、代谢物等可刺激头皮，导致头皮角质层过度增生，促使角质层细胞以白色或灰色鳞屑的形式异常脱落，形成头屑。然而，调查显示，头屑人群在使用具有抗马拉色菌活性的洗发用品后并不能完全去除头屑，这表明头屑的产生可能涉及多种微生物，而不是某个微生物(马拉色菌)单独作用的结果。
发明内容
本发明提出真正有效解决头屑问题的有效途径是应用具有恢复头皮微生物之间、微生物与环境之间的稳态的制剂及制备方法，克服了现有技术存在的上述缺点。有鉴于此，本发明提供了一种调节头皮微生态平衡的中药组方及其制备方法和应用。
本发明提出一种用于调节头皮微生态平衡的中药组方，该组方的原料包含当归、侧柏叶、苦参、厚朴、月季。
其中，原料当归是指伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。
其中，原料侧柏叶是指柏科植物侧柏PLatycladus orientalis(L.)Franco的干燥枝梢和叶。
其中，原料苦参是指豆科植物苦参的干燥根。
其中，原料厚朴是指木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮。
其中，原料月季是指蔷薇科植物月季Rosa chinensis Jacq.的干燥花。
其中，所述当归的重量配比为6～12份、所述侧柏叶的重量配比10～20份、所述苦参的重量配比20～30份、所述厚朴的重量配比20～30份、所述月季重量比20～30份；优选地，所述当归的重量配比为8-10份、所述侧柏叶的重量配比15-18份、所述苦参的重量配比24-28份、所述厚朴的重量配比24-28份、所述月季重量比24-28份。
本发明是以二仙丸(其原料为当归和侧柏叶)为基础组方，增加了苦参、厚朴和月季三味药材。
本发明产品是以二仙丸作为基础，根据文献显示，二仙丸具有较好的抑制马拉色菌增长的抑制作用，且安全性比ZPT高，同时，二仙丸能有效抑制角HaCaT的炎症反应。因此，二仙丸具有较好的去屑作用。苦参、厚朴和月季这三味药材也具有较好的抑制马拉色菌的作用，并且苦参还具有较好的抑制表皮葡萄球菌的作用。本发明研究发现侧柏叶对马拉色菌的抑制作用较弱，但是与当归合用后抑制作用要好于当归，因此，侧柏叶可以增强当归的去屑作用。本发明研究还发现苦参、厚朴和月季对痤疮丙酸杆菌有一定的抑制作用，但是当其三者配伍使用后则对痤疮丙酸杆菌无抑制作用。
本发明还提出了一种中药组方的制备方法，具体步骤包括如下：
(1)制备当归、苦参的提取液；
a)将原料当归、苦参加入水，浸泡，超声波处理，循环渗滤提取，滤出提取液；
b)将药渣加入水，浸泡，超声波处理，循环渗滤提取，滤出提取液；重复1-2次；
c)合并步骤a)、b)得到的提取液，减压浓缩；
d)加入絮凝剂絮凝，膜过滤至澄清，浓缩定容，得到所述当归、苦参的提取液；
(2)制备侧柏叶、厚朴、月季的提取液；
a)将侧柏叶、厚朴、月季加入乙醇，按渗漉法提取；
b)过滤，取滤液；
c)将前一步骤得到的滤液浓缩除乙醇，静置，过滤至澄清；
d)滤液浓缩，得到所述侧柏叶、厚朴、月季的提取液；
(3)将前述步骤1)、2)得到的所述当归、苦参的提取液、所述侧柏叶、厚朴、月季的提取液混合，加入醇溶液，混合均匀，静置，过滤至澄清，即得到所述中药组方。
步骤(1)中，所述循环渗滤提取的条件为：提取温度为45～75℃、提取时间为1～2小时；优选地，为提取温度为50-55℃、提取时间为75-90分钟。
以上提取条件可以最大限度的提取这些中药的有效成分，由于温度不高也不会破坏其中的有效成分，提取时间为1-2个小时在提取出有效成的同时，减少杂质的提出。
步骤(1)中，所述浸泡的时间为2-4小时；优选地，为2.5-3.5小时。
步骤(1)中，所述超声波的功率为20000-50000HZ；优选地，为30000-40000HZ。
步骤(1)中，所述减压浓缩的条件为50-70℃，0.03-0.08MPa。
步骤(1)中，所述絮凝剂包括壳聚糖、101果汁澄清剂、ZTC组合絮凝剂等；优选地，为壳聚糖。
步骤(2)中，所述加入乙醇的浓度为50wt％～70wt％；优选地，为60wt％。
步骤(2)中，所述渗漉提取的条件为：20～30℃提取10-24h；优选地，为24～26℃提取 18-20h。
步骤(2)中，所述静置的条件为：-5℃-4℃静置24-48h；优选地，为-2℃-2℃静置35-40h。
步骤(3)中，所述醇溶液为丙二醇、丁二醇、甲基丙二醇等中的一种或几种；优选地，为丙二醇。
步骤(3)中，所述静置的条件为：-5℃-4℃静置24-48h；优选地，为-2℃-2℃静置35-40h。
在一个具体实施方式中，本发明中药组方的制备方法，具体步骤包括如下：
(1)当归6～12份、苦参20～30份加入6-15倍水，浸泡2-4小时，超声波20000-50000HZ，45-75℃，循环渗滤提取1-2h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水6-15倍水，超声波20000-50000HZ，45-75℃，循环渗滤提取1-2h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1-2倍。
(4)加入絮凝剂(壳聚糖或101果汁澄清剂等)絮凝，膜过滤至澄清，浓缩定容至与投入药材等重量；
(5)侧柏叶10～20份、厚朴20～30份、月季20～30份，加入20～30倍50wt％～70wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)20-30℃渗漉提取10-24小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，-5℃至4℃静置24-48h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至，与投入药材等重量；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入1-5倍量的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，在-5℃至4℃静置24-48h，过滤至澄清得中药组方。
本发明制备方法中，分而合的工艺步骤，能够有效保存有效物质，去除无效杂质。当归和苦参通过水作为溶剂，提取水溶性的有效成分，避免了小极性杂质的提出；侧柏叶、厚朴和月季则以乙醇作为溶剂，提取出醇溶性有效成分，避免了大极性杂质的提出。
且，本发明制备方法中，用渗漉法能够有效减少挥发性物质的损失，如当归中的挥发油 (如藁本内酯、丁烯基酰内酯、茴香酸等)，其具有较好的抑菌作用，是当归抑菌的主要成分。
且，通过絮凝、陈化(低温静置)较容易去除部分杂质(蛋白质，鞣制和树脂等物质)，防止对抑菌作用产生影响，从而更好地保留小分子物质(小分子物质是指如苦参中的苦参碱、厚朴中的厚朴酚、侧柏叶和月季中的总黄酮、当归中的挥发油等)，在满足化妆品使用要求 (如具有较好的功效性，符合化妆品使用规范，以及在化妆品体系中可以稳定存在)和美感 (如颜色浅，气味淡)上有重要贡献。
本发明通过低温渗漉提取有效减少色素提出、通过分步提取，选择不同的提取溶剂，能够更好的提取出有效成分、通过分步提取以及絮凝和陈化(低温静置)步骤，大大减少杂质的提出，以及出去一些大分子杂质。因此，本发明制备方法能够克服传统工艺制备中药提取液存在的颜色深、有效成分保留少、杂质多等问题。
本发明还提出了所述中药组方在制备抑制马拉色菌、抑制表皮葡萄球菌、拮抗对有益菌痤疮丙酸杆菌的抑制的产品中的应用。
其中，所述中药组方对所述马拉色菌或表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度值MIC均在2％以下。
其中，所述产品包括用于治疗头皮屑、头皮瘙痒疾病的外用制剂、头皮护理品。
本发明制备方法得到的中药组方，对有害菌起有效抑制，且对有益菌无抑制作用，从而达到菌群平衡的效果。这一平衡结果正是取决于本发明特定的合理组方，特别是月季的加入。
本发明有益效果包括，本发明特定的组方起协同作用、成分之间特定的含量比例以及制备工艺中的专门步骤次序及特定条件，实现了抑制有害菌马拉色菌、表皮葡萄球菌、拮抗对有益菌(痤疮丙酸杆菌)的抑制等功效。
具体实施方式
结合以下具体实施例，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例1：制备本发明中药组方
(1)当归60克、苦参200克，加入6倍水，浸泡2小时，超声波20000HZ，45℃，循环渗滤提取1h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水6倍水，超声波20000HZ，45℃，循环渗滤提取1h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至260克；
(5)侧柏叶200克、厚朴300克、月季240克，加入30倍70wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)30℃渗漉提取24小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，4℃静置48h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至740克；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入1000克的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，4℃静置48h，过滤至澄清得中药组方。
实施例2制备本发明中药组方
(1)当归90克、苦参250克，加入8倍水，浸泡3小时，超声波30000HZ，60℃，循环渗滤提取1.5h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水8倍水，超声波30000HZ，60℃，循环渗滤提取1h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至340克；
(5)侧柏叶150克、厚朴250克、月季200克，加入20倍50wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)20℃渗漉提取18小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，-5℃静置24h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至600克；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入2000克的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，-5℃静置24h，过滤至澄清得中药组方。
实施例3制备本发明中药组方
(1)当归120克、苦参300克，加入15倍水，浸泡4小时，超声波50000HZ，75℃，循环渗滤提取2h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水15倍水，超声波50000HZ，75℃，循环渗滤提取2h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的2倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至320克；
(5)侧柏叶100克、厚朴300克、月季300克，加入25倍60wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)25℃渗漉提取10小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，0℃静置36h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至700克；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入4000克的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，0℃静置36h，过滤至澄清得中药组方。
对比实施例1制备当归提取液
(1)当归60克，加入6倍水，浸泡2小时，超声波20000HZ，45℃，循环渗滤提取1h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水6倍水，超声波20000HZ，45℃，循环渗滤提取1h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至60克，加入60克的丙二醇，混合均匀；
(5)将步骤(4)、提取液，4℃静置48h，过滤至澄清得当归提取液。
对比实施例2制备苦参提取液
(1)苦参200克，加入6倍水，浸泡2小时，超声波20000HZ，45℃，循环渗滤提取 1h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水6倍水，超声波20000HZ，45℃，循环渗滤提取1h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至200克，加入200克的丙二醇，混合均匀；
(5)将步骤(4)、提取液，4℃静置48h，过滤至澄清得苦参提取液。
对比实施例3制备侧柏叶提取液
(1)侧柏叶200克，加入30倍70wt％的乙醇渗漉法提取；
(2)30℃渗漉提取24小时，过滤，取滤液；
(3)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，4℃静置48h，过滤至澄清；
(4)步骤(3)滤液浓缩至740克；
(5)将步骤(4)所得提取液，加入200克的丙二醇，混合均匀；
(6)将步骤(5)、提取液，4℃静置48h，过滤至澄清得侧柏叶提取液。
对比实施例4制备厚朴提取液
(1)厚朴300克，加入30倍70wt％的乙醇渗漉法提取；
(2)30℃渗漉提取24小时，过滤，取滤液；
(3)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，4℃静置48h，过滤至澄清；
(4)步骤(3)滤液浓缩至300克；
(5)将步骤(4)、所得提取液，加入300克的丙二醇，混合均匀；
(6)将步骤(5)、提取液，4℃静置48h，过滤至澄清得厚朴提取液。
对比实施例5制备月季提取液
(1)月季240克，加入30倍70wt％的乙醇渗漉法提取；
(2)30℃渗漉提取24小时，过滤，取滤液；
(3)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，4℃静置48h，过滤至澄清；
(4)步骤(3)滤液浓缩至240克；
(5)将步骤(4)、所得提取液，加入240克的丙二醇，混合均匀；
(6)将步骤(5)、提取液，4℃静置48h，过滤至澄清得月季提取液。
对比实施例6制备对比组方
(1)当归130克、苦参350克，加入18倍水，浸泡5小时，超声波60000HZ，80℃，循环渗滤提取3h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水18倍水，超声波50000HZ，80℃，循环渗滤提取3h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的3倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至480克；
(5)侧柏叶80克、厚朴150克，月季150克，加入15倍40wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)15℃渗漉提取6小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，-10℃静置18h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至380克；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入800克的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，-10℃静置18h，过滤至澄清得中药组方。
对比实施例7制备对比组方
(1)当归50克、苦参350克，加入5倍水，浸泡1小时，超声波10000HZ，35℃，循环渗滤提取0.5h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水5倍水，超声波10000HZ，35℃，循环渗滤提取0.5h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至200克；
(5)侧柏叶250克、厚朴350克、月季350克，加入35倍80wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)40℃渗漉提取36小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，10℃静置36h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至950克；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入1000克的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，10℃静置36h，过滤至澄清得中药组方。
对比实施例8制备对比组方
(1)当归130克、苦参150克，加入5倍水，浸泡1小时，超声波10000HZ，35℃，循环渗滤提取0.5h，滤出提取液；
(2)药渣继续加水5倍水，超声波10000HZ，35℃，循环渗滤提取0.5h，滤出提取液，重复1-2次。
(3)合并滤液，减压浓缩至药材重量的1倍。
(4)加入壳聚糖澄清剂絮凝，膜过滤至澄清，定容至200克；
(5)侧柏叶250克、厚朴350克、月季350克，加入35倍80wt％的乙醇渗漉法提取；
(6)40℃渗漉提取36小时，过滤，取滤液；
(7)滤液浓缩除醇至30wt％乙醇，10℃静置36h，过滤至澄清；
(8)步骤(7)滤液浓缩至950克；
(9)将步骤(4)、步骤(8)所得提取液，混合均匀，并加入6900克的丙二醇，混合均匀；
(10)将步骤(9)、混合液体，10℃静置36h，过滤至澄清得中药组方。
表1：本发明实施例1-3中的不同的技术特征
Figure RE-GDA0002195333490000091
表2：对比实施例1-8中的不同的技术特征
Figure RE-GDA0002195333490000101
应用实施例1：马拉色菌抑菌实验
1.实验材料及试剂
1.1样品
用生理盐水配制。
1.2试验菌株
马拉色菌(ATCC 44344)
1.3培养基
马拉色菌固体培养基：葡萄糖40g/L，琼脂15g/L，蛋白胨10g/L，4％橄榄油，蒸馏水溶解，调节pH为6.8～7.0，115℃20min高压灭菌；马拉色菌液体培养基：蛋白胨10g/L，葡萄糖40g/L，4％橄榄油，蒸馏水溶解，调节pH为6.8～7.0，115℃20min高压灭菌。
2方法
2.1菌悬液制备及接种
将受试菌在马拉色菌固体培养基上传代培养后，以确保菌落的纯化和活力，挑取单克隆至50mL马拉色菌液体培养基，30℃培养24h。
2.2抑菌作用的测定
采用杯碟法，在培养皿中倒入马拉色菌固体培养基，待凝固后，在此培养基上倒入马拉色菌浓度为105～l06CFU/mL的马拉色菌培养基(冷却至50℃时，加入马拉色菌，混匀)。在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径(6.0±0.1)mm，外径(8.0±0.1)mm，高(10.0±0.1)mm，在杯内分别注入待测样品，用生理盐水作为正常生长对照，每个样品做2个平行试验。30℃恒温箱中培养2d后，用直尺测量各种药品的抑菌圈直径，取其平均值。
2.3最低抑菌浓度(MIC值)的测定
2.3.1样品制备
2.3.2菌液制备
用马拉色菌液体培养基稀释菌悬液，使其最终菌浓度为105～l06CFU/mL。
2.3.3培养及结果判读
在微孔中加入菌液100μL和100μL不同浓度的样品(质量比0.5％、1％、2％、4％、6％、 8％、10％、12％)，同时设不加菌的阴性对照和不加药液的正常生长对照，每种药做3个平行，取平均值。置30℃湿盒孵育，48h后观察结果。由于马拉色菌为嗜脂性的，菌落浮在液体表面，微黄色，薄薄一层漂浮在透明的液基表面，肉眼观察非常清晰，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。
表3:10mg/ml各实施例对马拉色菌抑菌圈实验
Figure RE-GDA0002195333490000111
根据结果显示本发明实施例1～3抑菌圈均大于对比实施例1-8，具有较好的抑制马拉色菌的效果。对比实施例1～5为单个药材的抑菌效果，结果显示其效果均没有5个药材配伍后的抑菌效果好，且对比实施例6～8显示，其抑菌效果均没有本发明实施例1-3制备方法效果好。
表4：各实施例马拉色菌MIC值测定
Figure RE-GDA0002195333490000121
“-”代表无菌生长；“+”代表有菌生长。
根据结果显示本发明实施例1和3的MIC值为0.5％，实施例2的MIC值为0.25％，均显示较好的抑菌效果；对比实施例1～8的MIC值分别为6％、3％、5％、3％、3％、2％、3％、2％，其MIC值均大于本发明产品，且对比实施例中的复方效果要好于单味中药效果。即，本发明产品对马拉色菌的抑菌效果要好于单味中药效果以及与本发明提取方法不同的提取液。
应用实施例2：表皮葡萄球菌抑菌实验
1.实验材料及试剂
1.1样品
用生理盐水配制。
1.2试验菌株
表皮葡萄球菌ATCC 12228(gim1.143)。
1.3培养基
(1)TSB固体培养基：蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，K2HPO4 2.5 g/L，酵母提取物3g/L，琼脂15g/L，蒸馏水溶解，调节pH为7.2±0.2，115℃高压灭菌20min；TSB液体培养基：蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，K2HPO4 2.5 g/L，酵母提取物3g/L，蒸馏水溶解，调节pH为 7.2±0.2，115℃高压灭菌20min。
1.4耗材
培养皿、锥形瓶、牛津杯、移液枪、96孔培养板、聚丙烯管、试管、涂布棒
2方法
2.1菌悬液制备及接种
(1)取甘油保藏的表皮葡萄球菌100μL涂布于营养琼脂固体培养基上，35℃培养1d，用生理盐水重悬，得到菌悬液，并用平板培养法计数，将测试菌浓度调整为105～106CFU/mL。
2.2样品抑菌作用的测定
2.2.1杯碟法
在培养皿中倒入TSB琼脂固体培养基，待凝固后，在此培养基上均匀涂布测试菌100μL。在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径(6.0±0.1)mm，外径(8.0±0.1)mm，高(10.0±0.1)mm，在杯内分别注入200μL待测样品，用生理盐水或含一定量的DMSO的生理盐水作为对照。 35℃恒温箱中培养2d后，用直尺测量各种药品的抑菌圈直径，取其平均值。
2.3最低抑菌浓度(MIC值)的测定
2.3.1最低抑制表皮葡萄球菌浓度(MIC)的测定方法如下：
(1)药液制备
将待测样品用生理盐水稀释成实验浓度。
(2)菌液制备TSB液体培养基稀释菌悬液，使其最终菌浓度为l05CFU/mL。
(3)培养及结果判读在微孔中加入菌液100μL和100μL样品(质量比0.5％、1％、2％、 4％、6％、8％、10％、12％)，同时设不加菌的阴性对照和不加药液的正常生长对照，每种药做3个平行，取平均值。置37℃或30℃湿盒孵育，48h后观察结果，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。
表5:10mg/ml各实施例对表皮葡萄球菌抑菌圈实验
Figure RE-GDA0002195333490000131
Figure RE-GDA0002195333490000141
结果显示本发明实施例1～3抑菌圈均大于对比实施例1-8，具有较好的抑制表皮葡萄球菌的效果；对比实施例1～5显示，其抑菌圈均小于5种药材配伍使用的提取液，抑菌效果较差；对比实施例6～8显示，其抑菌圈均小于本发明实施例1～3，因此，其抑制表皮葡萄球菌效果较本发明产品差。
表6：各实施例表皮葡萄球菌MIC值测定
Figure RE-GDA0002195333490000142
Figure RE-GDA0002195333490000151
“-”代表无菌生长；“+”代表有菌生长。
根据结果显示本发明实施例1～3对表皮葡萄球菌的MIC为0.5％，而对比实施例1～8对表皮葡萄球菌的MIC值分别为6％、4％、5％、3％、4％、3％、3％、2％，即对比实施例1-8对表皮葡萄球菌的MIC值均大于本发明实施例1-3，因此，本发明产品对表皮葡萄球菌具有较好的抑菌效果。即，本发明产品对表皮葡萄球菌的抑菌效果要好于单味中药效果以及与本发明提取方法不同的提取液。
应用实施例3：痤疮丙酸杆菌抑菌实验
1.实验材料及试剂
1.1样品
用生理盐水或含一定量的DMSO的生理盐水稀释。
1.2试验菌株
痤疮丙酸杆菌(ATCC6919)
1.3培养基
(1)液体培养基：胰蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，葡萄糖5g/L，NaCl 5g/L，酵母膏3g/L，醋酸钠3g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，蒸馏水溶解，调节pH 为6.8±0.2，115℃高压灭菌20min；
(2)固体培养基：在液体培养基的基础上加入琼脂15g/L。
1.4耗材
培养皿、锥形瓶、牛津杯、移液枪、聚丙烯管、96孔板、试管、涂布棒、厌氧培养盒、厌氧袋与厌氧指示剂。
2方法
2.1菌悬液制备及接种
(1)冷冻管开封，用无菌吸管吸取0.3-0.4mL适宜的液体培养基，滴入冷冻管内，轻轻振荡，使冻干菌体层悬浮状；取0.2mL菌体悬液，移植于斜面培养基中，剩余菌液加入液体培养基中，于37℃厌氧条件培养。
(2)取活化后菌悬液0.5mL于液体培养基中，于37℃厌氧条件培养2d，为实验菌悬液。
2.2样品抑菌作用的测定
采用杯碟法。在培养皿中固体培养基，待凝固，在此培养基上倒入含痤疮丙酸杆菌(105CFU/mL)的固体培养基，凝固后，在培养基上等距离放2个无菌牛津杯[内径(6.0±0.1)mm，外径(8.0±0.1)mm，高(10.0±0.1)mm，在杯内分别注入200μL待测样品，用生理盐水或含一定量的DMSO的生理盐水作为对照。37℃厌氧培养2d后，用直尺测量各种药品的抑菌圈直径，取其平均值。
2.3中药提取物最低抑菌浓度(MIC值)的测定
2.3.1药液制备
将待测样品直接用培养基(或含一定量DMSO的培养基)稀释成试验浓度。
2.3.2菌液制备用液体培养基稀释菌悬液，使其最终菌浓度为l05CFU/mL。
2.3.3培养及结果判读在微孔中加入菌液100μL和100μL样品(质量比0.5％、1％、2％、 4％、6％、8％、10％、12％)，同时设不加菌的阴性对照和不加药液的正常生长对照，每种药做3个平行，取平均值。置37℃厌氧孵育，48h后观察结果，采用直接法读取数据。结果判断的前提是生长对照良好，空白对照无菌生长清晰，其它孔随药物浓度梯度升高而菌的生长受到抑制。
表7:10mg/ml各实施例对痤疮丙酸杆菌抑菌圈实验
Figure RE-GDA0002195333490000161
根据结果显示，仅对比实施例2和对比实施例5，即苦参和月季在10mg/ml的时候对痤疮丙酸杆菌有抑菌作用，同时也表明5味中药配伍使用后对痤疮丙酸杆菌的抑制作用要小于单味药材。
表8：各实施例痤疮丙酸杆菌MIC值测定
Figure RE-GDA0002195333490000171
“-”代表无菌生长；“+”代表有菌生长。
根据结果显示，本发明实施例1～3对痤疮丙酸杆菌的MIC值均＞6％，表明本发明产品对痤疮丙酸杆菌无明显抑制作用；而对比实施例2、4、5对痤疮丙酸杆菌的MIC值分别为3％、 4％、6％，显示苦参、厚朴和侧柏叶对痤疮丙酸杆菌有一定的抑制作用；对比实施例6～8均显示出一定的对痤疮丙酸杆菌的抑制作用。即，本发明产品对表皮益生菌痤疮丙酸杆菌无明显抑制作用，克服了单味药对该益生菌的抑制作用。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离本发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。

Claims (5)

1.一种用于调节头皮微生态平衡的中药组方，其特征在于，所述中药组方原料包含当归、侧柏叶、苦参、厚朴以及月季；
所述当归的重量配比为6~12份、所述侧柏叶的重量配比10~20份、所述苦参的重量配比20~30份、所述厚朴的重量配比20~30份、所述月季重量比20~30份；
所述中药组方的制备包括以下步骤：
1）制备当归、苦参的提取液；
a)将原料当归、苦参加入水，浸泡，超声波处理，循环渗滤提取，滤出提取液；
b)将药渣加入水，浸泡，超声波处理，循环渗滤提取，滤出提取液；重复1-2次；
c)合并步骤a)、b)得到的提取液，减压浓缩；
d)加入絮凝剂絮凝，膜过滤至澄清，浓缩定容，得到所述当归、苦参的提取液；
所述步骤1）中，所述循环渗滤提取的条件为提取温度为45~75℃、提取时间为1~2小时；所述浸泡的时间为2-4小时；所述超声波的功率为20000-50000HZ；
2）制备侧柏叶、厚朴、月季的提取液；
a)将侧柏叶、厚朴、月季加入乙醇，按渗漉法提取；所述渗漉提取的条件为：20~30℃提取10-24h；
b)过滤，取滤液；
c)将步骤b)得到的滤液浓缩除醇，静置，过滤至澄清；
d)滤液浓缩，得到所述侧柏叶、厚朴、月季的提取液；
所述步骤2）中，所述加入乙醇的浓度为50wt%~70wt%；所述静置的条件为：-5~4℃静置24~48h；
3）将前述步骤1）、2）得到的所述当归、苦参的提取液、所述侧柏叶、厚朴、月季的提取液混合，加入醇溶液，混合均匀，静置，过滤至澄清，即得到所述中药组方；
所述步骤3）中，所述醇溶液为丙二醇、丁二醇、甲基丙二醇中的一种或几种；所述静置的条件为：-5-4℃静置24~48h。
2.如权利要求1所述的中药组方，其特征在于，所述步骤1）中，所述絮凝剂包括壳聚糖、101果汁澄清剂、ZTC组合絮凝剂。
3.如权利要求1或2所述的中药组方在制备抑制马拉色菌、抑制表皮葡萄球菌、拮抗对有益菌痤疮丙酸杆菌的抑制的产品中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述中药组方对所述马拉色菌或表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度值MIC均在2%以下。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产品包括用于治疗头皮屑、头皮瘙痒疾病的外用制剂、头皮护理品。
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