CN110568107B - 一种树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法 - Google Patents

一种树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法，该方法采用气相色谱‑质谱联用法测定树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质，即用含除水剂无水硫酸镁的样品管收集树苔香植物或提取物，加入1~10mL甲醇溶液充分振荡10~30min后，取1~2mL萃取溶液至色谱瓶，迅速密封后，经气相色谱‑质谱联用仪分析，外标法定量；本检测方法适用于树苔香植物或提取物中3,4‑二甲基苯酚、3‑甲氧基‑5‑甲基苯酚、3‑甲氧基‑2,5,6‑三甲基苯酚、3,5‑二羟基甲苯、2,5‑二羟基甲苯、5‑甲氧基‑2,3‑二甲酚、2,5‑二甲基‑1,4‑苯二酚等树苔香酚类物质的同时检测，具有快速、准确、操作简单等优点。

Description

一种树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法
技术领域
本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种专用于树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质检测的方法。
背景技术
树苔（Everniafurfuraceae）属松萝科（Usneaceae）树花属（Ramalina）植物，主要分布于云南、贵州等地，由于产地地形复杂、气候多变，形成的树苔品种种类繁多，有丛生树花（Ramalinafastigiata）、裂树花（Ramalinaminuscula）和拟树花（Ramalinacommista）等，表面主要呈灰绿色或暗绿色，其中的化学成分种类、含量各不相同。工业上，主要通过石油醚或苯等碳氢系列的溶剂提取树苔中的活性成分得到树苔浸膏，用乙醇进一步加工除去蜡质等杂质后可得树苔净油，树苔类提取物青香独特自然，树脂气息浓郁，透发性好，留香持久，是一类及其重要的天然地衣香料，目前在卷烟、化妆品等行业广泛应用。通过研究发现酚类化合物对树苔香有直接或间接的贡献，比如3,5-二羟基甲苯（也叫3,5-甲苯二酚或地衣酚）对树苔香韵有着直接的贡献。
对于树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的研究有利于了解和掌握树苔香气成分的来源和含量，提高自主调香过程对香料原料和产品质量的控制能力。由于树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质含量较低，检测时干扰较大，对样品前处理的要求较高，且树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法目前未见报道，因此，专用于树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质检测的方法尤为重要。
发明内容
本发明的目的是提供一种树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法，具有快速、准确、操作简单等优点。
本发明所采用的技术方案是：用含0.5~2g除水剂无水硫酸镁的样品管收集树苔香植物或提取物0.1~1g，加入1~10mL甲醇溶液充分振荡10~30min后，取1~2mL萃取溶液至色谱瓶，迅速密封后，经气相色谱-质谱联用仪分析，根据组分峰面积定量；
所述的气相色谱条件为：色谱柱为DB-5MS柱或HP-5MS，长度60 m×内径0.25 mm×膜厚0.25 µ m；载气为氦气（He）；进样口温度为170~190℃；恒流模式，柱流量0.5~1.2 mL/min，分流比6:1~12:1；程序升温为40~70℃，保持1~5 min，以2~4℃/min的速率升温至150~180℃，保持5~10 min；
所述的质谱条件为：电离方式为电子轰击源（EI），离子源温度为180~200℃，电离能量为65~75 eV，四极杆温度为120 ~150℃，选择离子监测模式，离子选择参数：3,4-二甲基苯酚定量离子122、定性离子107；3-甲氧基-5-甲基苯酚定量离子138、定性离子109；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚定量离子166、定性离子151；3,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子95；2,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子123；5-甲氧基-2,3-二甲酚定量离子152、定性离子137；2,5-二甲基-1,4-苯二酚定量离子138、定性离子123。
本发明的树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质检测的方法具有以下积极效果：
（1）步骤简单，该方法只需萃取、干燥后即可进样分析，处理步骤简单，易于推广；
（2）准确性高，大大减少了待分析物在净化转移过程中的损失，增加了分析过程的准确性，3,4-二甲基苯酚的相对标准偏差在1.68%~2.64%之间、3-甲氧基-5-甲基苯酚的相对标准偏差在2.38%~3.82%之间、3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚的相对标准偏差在1.16%~5.69%之间、3,5-二羟基甲苯的相对标准偏差在2.13%~4.36%之间、2,5-二羟基甲苯的相对标准偏差在3.16%~4.49%之间、5-甲氧基-2,3-二甲酚的相对标准偏差在1.56%~4.24%之间、2,5-二甲基-1,4-苯二酚的相对标准偏差在1.69%~3.38%之间；
（3）环境友好，在提高分析准确性的同时，减少了对环境的污染；
本发明用于树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测，具有快速、准确、操作简单等优点。
附图说明
图1是树苔香植物提取物中树苔香酚类物质的气相色谱图；
其中，保留时间为6.8 min的色谱峰为3,4-二甲基苯酚、保留时间为12.6 min的色谱峰为3-甲氧基-5-甲基苯酚、保留时间为14.3 min的色谱峰为3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚、保留时间为15.3 min的色谱峰为3,5-二羟基甲苯、保留时间为16.6 min的色谱峰为2,5-二羟基甲苯、保留时间为17.7 min的色谱峰为5-甲氧基-2,3-二甲酚、保留时间为18.3min的色谱峰为2,5-二甲基-1,4-苯二酚。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述，本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例1
用含0.5g除水剂无水硫酸镁的样品管收集树苔香提取物（浸膏）0.1 g，加入1mL甲醇溶液充分振荡10min后，取1mL萃取溶液至色谱瓶，迅速密封后，经气相色谱-质谱联用仪分析，根据组分峰面积定量；
所述的气相色谱条件为：色谱柱为DB-5MS柱，长度60 m×内径0.25 mm×膜厚0.25µ m；载气为氦气（He）；进样口温度为170℃；恒流模式，柱流量0.5 mL/min，分流比6:1；程序升温为40℃，保持1min，以2℃/min的速率升温至150℃，保持5 min；
所述的质谱条件为：电离方式为电子轰击源（EI），离子源温度为180℃，电离能量为65 eV，四极杆温度为120℃，选择离子监测模式，离子选择参数：3,4-二甲基苯酚定量离子122、定性离子107；3-甲氧基-5-甲基苯酚定量离子138、定性离子109；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚定量离子166、定性离子151；3,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子95；2,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子123；5-甲氧基-2,3-二甲酚定量离子152、定性离子137；2,5-二甲基-1,4-苯二酚定量离子138、定性离子123（图1）。
按照上述方法，3,4-二甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为2.71ng/mg，相对标准偏差为1.68%；3-甲氧基-5-甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.66ng/mg，相对标准偏差为2.38%；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.12ng/mg，相对标准偏差为1.16%；3,5-二羟基甲苯的5次平行测定结果的平均值为302.17ng/mg，相对标准偏差为2.13%；2,5-二羟基甲苯的5次平行测定结果的平均值为0.15ng/mg，相对标准偏差在3.16%之间；5-甲氧基-2,3-二甲酚的5次平行测定结果的平均值为2.16ng/mg，相对标准偏差为1.56%；2,5-二甲基-1,4-苯二酚的5次平行测定结果的平均值为6.18ng/mg，相对标准偏差为1.69%。
实施例2
用含1 g除水剂无水硫酸镁的样品管收集树苔香植物0.5g，加入5mL甲醇溶液充分振荡20min后，取1.5mL萃取溶液至色谱瓶，迅速密封后，经气相色谱-质谱联用仪分析，根据组分峰面积定量；
所述的气相色谱条件为：色谱柱为HP-5MS，长度60 m×内径0.25 mm×膜厚0.25 µm；载气为氦气（He）；进样口温度为180℃；恒流模式，柱流量0.8mL/min，分流比8:1；程序升温为60℃，保持3 min，以3℃/min的速率升温至160℃，保持8 min；
所述的质谱条件为：电离方式为电子轰击源（EI），离子源温度为190℃，电离能量为70 eV，四极杆温度为130℃，选择离子监测模式，离子选择参数：3,4-二甲基苯酚定量离子122、定性离子107；3-甲氧基-5-甲基苯酚定量离子138、定性离子109；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚定量离子166、定性离子151；3,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子95；2,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子123；5-甲氧基-2,3-二甲酚定量离子152、定性离子137；2,5-二甲基-1,4-苯二酚定量离子138、定性离子123。
按照上述方法，3,4-二甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.23ng/mg，相对标准偏差为1.84%；3-甲氧基-5-甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.32ng/mg，相对标准偏差为3.22%；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.08ng/mg，相对标准偏差为3.69%；3,5-二羟基甲苯的5次平行测定结果的平均值为15.21ng/mg，相对标准偏差为3.36%；2,5-二羟基甲苯的5次平行测定结果的平均值为0.11ng/mg，相对标准偏差为3.49%；5-甲氧基-2,3-二甲酚的5次平行测定结果的平均值为0.15ng/mg，相对标准偏差为3.24%；2,5-二甲基-1,4-苯二酚的5次平行测定结果的平均值为1.06ng/mg，相对标准偏差为2.38%。
实施例3
用含2 g除水剂无水硫酸镁的样品管收集树苔香提取物（净油）1g，加入10mL甲醇溶液充分振荡30min后，取2mL萃取溶液至色谱瓶，迅速密封后，经气相色谱-质谱联用仪分析，根据组分峰面积定量；
所述的气相色谱条件为：色谱柱为HP-5MS，长度60 m×内径0.25 mm×膜厚0.25 µm；载气为氦气（He）；进样口温度为190℃；恒流模式，柱流量1.2 mL/min，分流比12:1；程序升温为70 ℃，保持5 min，以4℃/min的速率升温至180℃，保持10 min；
所述的质谱条件为：电离方式为电子轰击源（EI），离子源温度为200℃，电离能量为75eV，四极杆温度为150℃，选择离子监测模式，离子选择参数：3,4-二甲基苯酚定量离子122、定性离子107；3-甲氧基-5-甲基苯酚定量离子138、定性离子109；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚定量离子166、定性离子151；3,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子95；2,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子123；5-甲氧基-2,3-二甲酚定量离子152、定性离子137；2,5-二甲基-1,4-苯二酚定量离子138、定性离子123。
按照上述方法，3,4-二甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为2.44ng/mg，相对标准偏差为2.64%；3-甲氧基-5-甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.64ng/mg，相对标准偏差为3.82%；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚的5次平行测定结果的平均值为0.11ng/mg，相对标准偏差为5.69%；3,5-二羟基甲苯的5次平行测定结果的平均值为299.16ng/mg，相对标准偏差为4.36%；2,5-二羟基甲苯的5次平行测定结果的平均值为0.14ng/mg，相对标准偏差为4.49%；5-甲氧基-2,3-二甲酚的5次平行测定结果的平均值为2.11ng/mg，相对标准偏差为3.24%；2,5-二甲基-1,4-苯二酚的5次平行测定结果的平均值为6.12ng/mg，相对标准偏差为3.38%。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (1)

1.一种树苔香植物或提取物中树苔香酚类物质的检测方法，其特征在于：用含0.5~2g无水硫酸镁的样品管收集树苔香植物或提取物0.1~1g，加入1~10mL甲醇溶液充分振荡10~30min后，取1~2mL萃取溶液至色谱瓶，迅速密封后，经气相色谱-质谱联用仪分析，根据组分峰面积定量；
所述的气相色谱条件如下：
色谱柱为DB-5MS柱或HP-5MS，长度60 m×内径0.25 mm×膜厚0.25 µ m；载气为氦气；进样口温度为170~190℃；恒流模式，柱流量0.5~1.2 mL/min，分流比6:1~12:1；程序升温为40~70℃，保持1~5 min，以2~4℃/min的速率升温至150~180℃，保持5~10min；
所述的质谱条件如下：
电离方式为电子轰击源EI，离子源温度为180~200℃，电离能量为65~75eV，四极杆温度为120 ~150℃，选择离子监测模式，离子选择参数：3,4-二甲基苯酚定量离子122、定性离子107；3-甲氧基-5-甲基苯酚定量离子138、定性离子109；3-甲氧基-2,5,6-三甲基苯酚定量离子166、定性离子151；3,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子95；2,5-二羟基甲苯定量离子124、定性离子123；5-甲氧基-2,3-二甲酚定量离子152、定性离子137；2,5-二甲基-1,4-苯二酚定量离子138、定性离子123。
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气相色谱-飞行时间质谱法测定橡苔精油中的橡苔单甲醚与合成橡苔;王凯 等;《云南省烟草学会2014年学术年会优秀论文集》;20150301;73-80 *

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