CN110551822B - 一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，尤其涉及一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用。RNF31是一种E3泛素连接酶，本发明首次发现了RNF31基因表达与食管癌细胞系迁移能力相关，通过检测受试食管癌细胞系中RNF31的表达，可以判断受试食管癌细胞系迁移能力的强弱。本发明中的受试食管癌细胞是分别转染目的基因siRNA和不含目的基因siRNA，利用western blot和q‑PCR技术检测siRNA沉默效率。食管癌细胞系迁移的判断，是通过划痕和和transwell实验可准确反映细胞的迁移能力。根据对受试食管癌细胞系RNF31蛋白和mRNA含量的检测即可快速判断食管癌的迁移表型。

Description

一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，尤其涉及一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用。

背景技术

食管癌早期诊断的缺乏，大部分患者在就诊时已处于食管癌中晚期阶段，尽管目前有多种治疗手段上的改进，然而患者5年生存率总体仍然徘徊在15％左右，尤其对于晚期食管癌的效果不甚理想。食管癌的早期发现和治疗，是提高患者的生存率的有效手段。

然而食管癌患者早期症状常不明显，因此食管癌的早期发现对于食管癌病人有至关重要的作用。但是，目前关于早期食管癌细胞迁移判断相关的分子标志物很少，导致早期想要判断食管癌细胞的是否迁移很难，从而耽误病情拖延。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用。

本发明是这样实现的，一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物，所述分子标志物包括RNF31基因和/或RNF31基因的表达产物，所述RNF31基因的序列见SEQ ID NO.5。

进一步，所述RNF31基因的表达产物包括RNF31 mRNA和/或RNF31蛋白。

如上所述的食管癌细胞系迁移表型的分子标志物在食管癌细胞系迁移表型判断中的应用。

如上所述的食管癌细胞系迁移表型的分子标志物在制备用于检测食管癌细胞系的试剂盒中的应用。

进一步，所述检测食管癌细胞系的试剂盒包括RT-PCR检测试剂盒或实时定量PCR检测试剂盒或蛋白免疫检测试剂盒。

进一步，所述RT-PCR检测试剂盒和/或实时定量PCR检测试剂盒包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所述的扩增RNF31基因的引物。该对引物对于RNF31基因具有很高的扩增效率，检测结果更为准确。

进一步，所述蛋白免疫检测试剂盒包括与RNF31蛋白特异性结合的抗体。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：

本发明首次发现了RNF31基因表达与食管癌细胞系迁移能力相关，通过检测食管癌细胞系中RNF31的表达，可以判断受试患者食管癌细胞系迁移能力的强弱。食管癌细胞迁移能力可在一定程度上反映食管癌恶性程度。针对食管癌恶性程度高低，可及时采取相应的预防和治疗措施。为食管癌早期发现、早期治疗提供了新思路。

RNF31蛋白属于E3泛素连接酶，本发明通过在食管癌细胞系转染siRNA从而引起RNF31基因沉默，利用western blot和q-PCR检测siRNA沉默效果。设置对照组和沉默组，每组细胞分别铺24孔板，待细胞长满后人为创造一处均一的划痕，分别记录划痕愈合的情况，记录至其中一组细胞划痕完全愈合。每组细胞分别取10万个细胞置于孔径为8.0um的transwell小室内在培养箱中培养20h后，终止培养，以4％多聚甲醛固定后，再经结晶紫染色。此时可在显微镜下判断每组细胞穿出transwell小室的细胞数量。根据细胞划痕愈合的快慢及穿transwell小室的能力可判定食管癌细胞系迁移表型。

附图说明

图1为本发明试验例1中检测siRNA在蛋白水平上对RNF31的沉默效果；

图2为本发明试验例2中检测siRNA在mRNA水平上对RNF31的沉默效果；

图3为本发明试验例3中利用划痕实验检测不同组细胞系迁移能力的高低；

图4为本发明试验例4中利用transwell实验检测不同组细胞系迁移能力的高低。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明披露了一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用，具体如下各实施例所示。本发明中涉及的RNF31基因序列及蛋白的序列分别见SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6。

实施例1 western blot检测RNF31基因蛋白水平的差异表达

本实施例涉及细胞(EC9706)购于上海中科院细胞库。

1.1.获得转染食管癌细胞系：

SiRNA—小干扰RNA，可以引起与之序列匹配的靶基因mRNA的降解。从而导致细胞或机体产生基因沉默的表型。

本实施例中，NC、siRNF31#1、siRNF31#2购自sigma公司，NC为一段无意义不会引起任何基因沉默现象的RNA序列。详细序列如下：

将siRNA或者control通过脂质体介导的转染方式转染食管癌细胞系EC9706。细胞培养和转染详细步骤如下：

EC9706细胞的培养和传代：细胞购于中科院细胞库，将细胞置于CO₂培养箱中培养，待细胞完全贴壁后，弃去原有培养，加入新鲜的培养液RPMI1640+10％FBS继续培养，每日在倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况，待细胞长满培养瓶底90％左右开始传代。用预热的PBS洗涤1-2次，再向培养瓶内加入胰蛋白酶消化液(0.25％胰酶+0.02％EDTA)1mL，37℃消化2min后将培养瓶放置于显微镜下观察。当细胞脱落瓶壁后并加入1mL RPMI1640以终止消化反应，用移液器轻柔反复吹打细胞，将细胞收集至5mL离心管内以每分钟1000转的速度离心3分钟，弃去上清，加入1mL RPMI1640重悬细胞形成细胞悬液，吸取适量悬液转移至新的培养瓶中，加入新鲜培养基混合均匀后置于CO₂恒温培养箱中培养。待细胞达90％汇合度后，按上述传代方法将F2细胞接种到24孔板上培养24h。

细胞的转染：将siRNF31#1和siRNF31#2作为实验组，NC作为对照组，各取1μL，分别加入到50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释；取1μL脂质体Lipofectamine RNAiMAXReagent加入于50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释，然后将脂质体稀释液加入至siRNA稀释液中，充分混匀，置于室温条件下孵育20min。将复合物按顺序分别加入上述步骤中已接种培养细胞的24孔板中的培养基中，每孔加入100μL。

1.2提蛋白

将转染过的二十四孔板的培养基弃去，加入1xloading buffer 100uL，将loadingbuffer与细胞完全混匀使loading buffer充分裂解细胞获得蛋白样，收集于1.5mL离心管内，置于100℃金属浴中煮10分分钟，即为制好的蛋白样。

1.3 western blot

将制好的蛋白样用SDS-聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，一抗为RNF31抗体(abcam，货号ab125189)。

1.4曝光

将条带用曝光机曝光，观察条带情况。

1.5结果分析

如图1所示，与对照组相比，siRNF31#1组和siRNF31#2组的RNF31基因的蛋白水平显著降低。

实施例2 Q-PCR检测RNF31基因mRNA水平的差异表达

本实施例涉及细胞(EC9706)购于上海中科院细胞库。

2.1.获得转染食管癌细胞系：

将siRNA或者control通过脂质体介导的转染方式转染食管癌细胞系EC9706。细胞培养和转染详细步骤如下：

EC9706细胞的培养和传代：细胞购于中科院细胞库，将细胞置于CO₂培养箱中培养，待细胞完全贴壁后，弃去原有培养，加入新鲜的培养液RPMI1640+10％FBS继续培养，每日在倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况，待细胞长满培养瓶底90％左右开始传代。用预热的PBS洗涤1-2次，再向培养瓶内加入胰蛋白酶消化液(0.25％胰酶+0.02％EDTA)1mL，37℃消化2min后将培养瓶放置于显微镜下观察。当细胞脱落瓶壁后并加入1mL RPMI1640以终止消化反应，用移液器轻柔反复吹打细胞，将细胞收集至5mL离心管内以每分钟1000转的速度离心3分钟，弃去上清，加入1mL RPMI1640重悬细胞形成细胞悬液，吸取适量悬液转移至新的培养瓶中，加入新鲜培养基混合均匀后置于CO₂恒温培养箱中培养。待细胞达90％汇合度后，按上述传代方法将F2细胞接种到24孔板上培养24h。

细胞的转染：将siRNF31#1和siRNF31#2作为实验组，NC作为对照组，各取1μL，分别加入到50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释；取1μL脂质体Lipofectamine RNAiMAXReagent加入于50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释，然后将脂质体稀释液加入至siRNA稀释液中，充分混匀，置于室温条件下孵育20min。将复合物按顺序分别加入上述步骤中已接种培养细胞的24孔板中的培养基中，每孔加入100μL。

2.2提RNA

用RNA提取试剂盒(品牌TIANGEN货号DP430)提取不同组细胞系RNA，并测量所提RNA浓度。

2.3逆转录

取5*PrimeScript RT Master MIX：2μL，所提RNA：1μg；补充ddH₂O至总体积10μL，于PCR仪中进行逆转录，反应体系为37℃15分钟，85℃5秒。

2.4做Q-PCR

SEQ ID NO.1：RNF31上游引物5‘-accccctattgagagagattgct-3’；

SEQ ID NO.2：RNF31下游引物5‘-tggagcctgggacagagg-3’；

SEQ ID NO.3：36B4上游引物5‘-ggcgacctggaagtccaact-3’；

SEQ ID NO.4：36B4下游引物5‘-ccatcagcaccacagccttc-3’。

按appliedbiosystems公司SYBR Select Master Mix试剂盒检测相关基因的表达(36B4为内参)的反应体系为：每个样本内有SYBR17uL，去RNA酶水14μL，上游引物1μL，下游引物1μL，逆转录的cDNA 1μL，每个样本分成3个副孔点样至96孔板内，做Q-PCR，反应体系为Holding Stage:50℃2分钟，95℃10分钟，Cycling Stage：95℃，15秒，50℃，1分钟，Numberof Cycles:40。

2.5结果分析

如图2所示，与对照组相比，siRNF31#1组和siRNF31#2组的RNF31基因的mRNA水平显著降低。

实施例3 RNF31基因沉默后划痕实验的差异

本实施例涉及细胞(EC9706)购于上海中科院细胞库。

3.1.获得转染食管癌细胞系：

将siRNA或者control通过脂质体介导的转染方式转染食管癌细胞系EC9706。细胞培养和转染详细步骤如下：

EC9706细胞的培养和传代：细胞购于中科院细胞库，将细胞置于CO₂培养箱中培养，待细胞完全贴壁后，弃去原有培养，加入新鲜的培养液RPMI1640+10％FBS继续培养，每日在倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况，待细胞长满培养瓶底90％左右开始传代。用预热的PBS洗涤1-2次，再向培养瓶内加入胰蛋白酶消化液(0.25％胰酶+0.02％EDTA)1mL，37℃消化2min后将培养瓶放置于显微镜下观察。当细胞脱落瓶壁后并加入1mL RPMI1640以终止消化反应，用移液器轻柔反复吹打细胞，将细胞收集至5mL离心管内以每分钟1000转的速度离心3分钟，弃去上清，加入1mL RPMI1640重悬细胞形成细胞悬液，吸取适量悬液转移至新的培养瓶中，加入新鲜培养基混合均匀后置于CO₂恒温培养箱中培养。待细胞达90％汇合度后，按上述传代方法将F2细胞接种到24孔板上培养24h。

细胞的转染：将siRNF31#1和siRNF31#2作为实验组，NC作为对照组，各取1μL，分别加入到50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释；取1μL脂质体Lipofectamine RNAiMAXReagent加入于50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释，然后将脂质体稀释液加入至siRNA稀释液中，充分混匀，置于室温条件下孵育20min。将复合物按顺序分别加入上述步骤中已接种培养细胞的24孔板中的培养基中，每孔加入100μL。

3.2划痕

待细胞长满后用枪头在细胞中间划十字伤痕，并每隔12h将细胞置于显微镜下拍照，观察其愈合情况。

3.3结果分析

将所拍照片按照时间对应，如图3，可发现与对照组相比，沉默RNF31基因后划痕愈合能力明显增强。

实施例4 RNF31基因沉默后transwell实验的差异

本实施例涉及细胞(EC9706)购于上海中科院细胞库。

4.1.获得转染食管癌细胞系：

将siRNA或者control通过脂质体介导的转染方式转染食管癌细胞系EC9706。细胞培养和转染详细步骤如下：

EC9706细胞的培养和传代：细胞购于中科院细胞库，将细胞置于CO₂培养箱中培养，待细胞完全贴壁后，弃去原有培养，加入新鲜的培养液RPMI1640+10％FBS继续培养，每日在倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况，待细胞长满培养瓶底90％左右开始传代。用预热的PBS洗涤1-2次，再向培养瓶内加入胰蛋白酶消化液(0.25％胰酶+0.02％EDTA)1mL，37℃消化2min后将培养瓶放置于显微镜下观察。当细胞脱落瓶壁后并加入1mL RPMI1640以终止消化反应，用移液器轻柔反复吹打细胞，将细胞收集至5mL离心管内以每分钟1000转的速度离心3分钟，弃去上清，加入1mL RPMI1640重悬细胞形成细胞悬液，吸取适量悬液转移至新的培养瓶中，加入新鲜培养基混合均匀后置于CO₂恒温培养箱中培养。待细胞达90％汇合度后，按上述传代方法将F2细胞接种到24孔板上培养24h。

细胞的转染：将siRNF31#1和siRNF31#2作为实验组，NC作为对照组，各取1μL，分别加入到50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释；取1μL脂质体Lipofectamine RNAiMAXReagent加入于50μL减血清培养基(Opti-MEM)中进行稀释，然后将脂质体稀释液加入至siRNA稀释液中，充分混匀，置于室温条件下孵育20min。将复合物按顺序分别加入上述步骤中已接种培养细胞的24孔板中的培养基中，每孔加入100μL。

4.2transwell实验

每组细胞分别取10万个细胞置于孔径为8.0um的transwell小室内，小室内放200uL无血清培养基，小室下为500uL20％血清培养基，将其在培养箱中培养20h后，终止培养，以4％多聚甲醛固定后，再经结晶紫染色。此时可在显微镜下判断每组细胞穿出transwell小室的细胞数量。

4.3结果分析

在显微镜下判断每组细胞穿出transwell小室的细胞数量，如图4，可发现与对照组相比，沉默RNF31基因后穿过transwell小室的细胞明显增多。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 郑州大学第一附属医院

新乡医学院

<120> 一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(RNF31-F)

<400> 1

accccctatt gagagagatt gct 23

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(RNF31-R)

<400> 2

tggagcctgg gacagagg 18

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(36B4-F)

<400> 3

ggcgacctgg aagtccaact 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(36B4-R)

<400> 4

ccatcagcac cacagccttc 20

<210> 5

<211> 13787

<212> DNA

<213> RNF31(RNF31)

<400> 5

atagctaggg ccaactggaa gtccagggtt ggggtaagag aggtgggagt atggcaaagg 60

gggtattcag tggcggggct cccccaagaa ggctcgaccg caagtagcgg acggagagag 120

atcagagcga gtgggagggg cagccagagg gagcgcctgg ggtggagaag gactagcagc 180

tcttagaaga gagcgggcag gggttgggtg agggtcttcc ctctgccttc aggacagacc 240

ggagatgggg cgggactcgc tcgagagggg ttagggccgg ccagagtcgg ttcccctgca 300

gggtgggact tcctcggtga ggcccggagc gtaccggact ggtccagcta gaaaaagaaa 360

ggttttgagc tgaataggat aaccccgcgc ctgcggctat ccggaagggg tggaaccaga 420

ttgggggaag gcggggaaga gcgcttgact gagggaagat gctggcgcgc tctgagggag 480

gagccaggag ccatttgcct tctcattggt tgggacctgg ccctccctct tggccgcgcc 540

ccctggtttc ctgacaccgc tccaacctta accttaagcc ccgcccgttc ctccgaaatt 600

gggtcgcagt cccaccctct ctcctagtac ttcctgttct cggctaaccc tggcgctggg 660

ccgggggctg gagagtgacc gtggtctgag tgacctgggg cggctgcgtg ggccggggtg 720

ggcctcaaag ccgggcacca gacgggaggg gcggcgctcg ggccgcgcgc tgcccgcgcc 780

gggtcctggc gggcggcgag gctggggctg actcctgcct caggatgccg ggggaggaag 840

aggagcgggc cttcctggtg gcccgcgagg agctggcgag cgccctgagg agggattccg 900

ggcaggcgtt ttccctggag cagctccggc cgctactagc cagctctctg ccgctagccg 960

cccgctacct gcagctggac gccgcacgcc ttgtccgctg caacgctcat ggggaggtga 1020

ggcccggccc cgcttggaag ggggacacca gggcctgagg cccaggccac gctcacacct 1080

ctctgctctc cttgctccca gccccgaaac tacctcaaca ccctgtccac ggctctgaac 1140

atcctggaga aatacggccg caaccttctc agccctcagc ggcctcggta ctggcgtggt 1200

gtcaagttta ataaccctgt ctttcgcagc acggtggatg ctgtgcaggt gaatcccctg 1260

gccttatggg agagggggct ggggtttggc tagaaaaggc ctgaggttgt gctgaatggg 1320

aaggggtcca gccctactag gcaggaaacc tcctgggtgg tgactcgttt gaatgtgtgg 1380

caggggggcc gagatgtgct gcgattatat ggctacacag aggagcaacc agatgggttg 1440

agcttccccg aagggcagga ggagccagat gagcaccagg ttgctacagt cacactggaa 1500

gtactgctgc ttcggacaga gctcagcctg ctattgcagg tgagatgctc ctctagtctt 1560

gatggactta tgcaccaggg ctggggagcc cagcctaact caagtaagtt tgaggacccc 1620

cgtgctgctg aactatgggc atagttcagc attctgggag ctccgggtac tgattttcct 1680

tctgtgaatg ttaagggacc agggcttaga gggagggctt tgttctaggg gtctagctgg 1740

aaaccgtttt tatctgtatt attgcagaat actcatccaa gacagcaggc actggagcag 1800

ctgttggaag acaaggttga agatgatgta aggaaggcag gaaaggggct ggtgtacaaa 1860

ggaaacagga attgtgagac tctgtgtccc taaaccctta ttcattccct gccctttctt 1920

tttcagatgc tgcagctttc agaatttgac cccctattga gagagattgc tcctggcccc 1980

ctcaccacac cctctgtccc aggtattatt ggtcctaaat tggggaccag gtaggaagct 2040

atattgatgg aaatttggga tgctcctctg tcttcttggt tatcttcctt tgtgtttgtt 2100

tgttttgaga cggagttttg ctcttgttgc ccaggctgga gtgcaatggt gcgatctccg 2160

ctcaccgcaa cctccacctc ccgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagtag 2220

ctgggattac aggcatgcgc caccgcgctc ggctaatttt gtatttttgg tagagatggg 2280

gtttctccat gttggtcagg ctggtctgga actcctgacc tcaagtgatc cacccacctc 2340

agcctcccaa agtgctaaga ttacctgcat gagccaccac gcccggcctc tttgtttttt 2400

aaaagagatt aaaattgttt ccttgggtcc agatgtttaa aaagtagtct tgtgatttgc 2460

ccccatccac agcagattca gatgtagcct ggtctttttt ggaaagatgt tccatctctc 2520

ctgccctcca ggctccactc ctggtccctg cttcctctgt ggttctgccc caggcacact 2580

gcactgccca tcctgtaaac aggccctgtg tccagcctgt gaccacctgt tccatggaca 2640

cccatcccgt gctcatcacc tccgccagac cctgcctggg gtcctgcagg gtacccacct 2700

gagccccagg tgagagggct tctcttctgg gtgggagtga aatttagaga acttaagatc 2760

acttgattat ggactacctg ccagtttctg tgctaaagac tgtttaatag aggacaagta 2820

gccagtcaga accctgaaag agataataga catacacatc aagcaggtag caattgcagt 2880

aacccaggtt gttatggtaa taggtggttt gcaacctagt ctgaagggtc agctgaatca 2940

ggtggcaata ttttaaacac ctagtgtagg tcaggccatg tgttagcagt atctactagg 3000

aagaagtgag ctttaagctg tcatttaaat gttgcataag ctatgggtat aggagtattc 3060

gagacagaca atgtgtgcaa aggccagtga catgagttgt tacccaggaa atggagaatg 3120

cttagaggtg agggatccag gcaccaggtg ccacttcagc aggccatgtc tgcttttcca 3180

ttacagttta cctgcctcag cccaaccacg gccccagtcg acctccctgc tggccctggg 3240

agacagctct ctttcttccc ctaatcctgc aagtgctcat ttgccctggc actgtgctgc 3300

ctgtgccatg ctaaatgagc cttgggcagt gctctgtgtg gcctgtgatc ggccccgagg 3360

ctgtaagggg ttggggttgg gaactgaggg tccccaagga actggaggcc tagaacctga 3420

tcttgcacgg ggtcggtggg cctgccagag ctgtaccttt gagaatgagg cagctgctgt 3480

gctatgttcc atatgtgagc gacctcggct ggcccagcct cccagcttgg tggtggattc 3540

ccgagatgct ggcatttgcc tgcaacccct tcaggtaact ggccttccca gctctttatc 3600

gtgtgttacc tcaggcattc tcttccctat cccatgtttt ccttcagttc ctcccaactc 3660

cctgtatttc tgttgtgaac ttcagccagc cagtcaaagg gataattctc tctgccttcc 3720

cagcaggggg atgctttgct ggcctctgcc cagagtcaag tctggtactg tattcactgt 3780

accttctgca actcgagccc tggctgggtg tgtgttatgt gcaaccggac tagtagcccc 3840

attccagcac aacatgcccc ccggccctat gccagctctt tggaaaaggg accccccaag 3900

cctgggcccc cacgacgcct tagtgccccc ctgcccagtt cctgtggaga tcctgagaag 3960

cagcgccaag acaagatgcg ggaagaaggc ctccagctag tgagcatgat ccgggtaagg 4020

actgggcctg cgatgaggta gggctgagct ggtctgggaa aggagatgct gcaggtggtt 4080

aatagtttct atgaatcttg ttattgttag cagcagctgc ctgttactga ggcagttacc 4140

attgctgtac actgatgaca tgatccatat gtctgagctg agccactgtc accatcttag 4200

ttcaggctga gggtgggtga agggtgcccc tcctgatggg cgggactgtg ccttaggaag 4260

gggaagccgc aggtgcctgt ccagaggaga tcttctcggc tctgcagtac tcgggcactg 4320

aggtgcctct gcagtggttg cgctcagaac tgccctacgt cctggagatg gtggctgagc 4380

tggctggaca gcaggaccct gggctgggtg ccttttcctg tcaggaggcc cggagagcct 4440

ggctggatcg tcatggcaac cttgatgaag ctgtggagga gtgtgtgagg accaggcgaa 4500

ggaaggtatc agctgtgctg gatatgggat agggtcgaga gtctgcatct ctcacactct 4560

cccttgcttg ctttcccact tcattccccc ttgccactcc catcttgcag gtgcaggagc 4620

tccagtctct aggctttggg cctgaggagg ggtctctcca ggcattgttc cagcacggag 4680

gtgatgtgtc acgggccctg actgagctac agcgccaacg cctagagccc ttccgccagc 4740

gcctctggga cagtggccct gagcccaccc cttcctggga tgggccagac aagcaggtgc 4800

tgggaggagg caagaagccc aagggtccac ctagaggagc aagagggagc tgaggggaag 4860

ggtccctgga gtctgacagc acttcccccc tccacctgaa tcatattgca gagcctggtc 4920

aggcggcttt tggcagtcta cgcactcccc agctggggcc gggcagagct ggcactgtca 4980

ctgctgcagg agacacccag gaactatgag ttgggggatg tggtagaagc tgtgaggcac 5040

agccaggacc gggccttcct gcgccgcttg cttgcccagg agtgtgccgt gtgtggctgg 5100

gccctgcccc acaaccgggt aagtccctcc ccacgatacc tggtccaaga attactctat 5160

tcttttggac ccccatccta ccccagtctc catctctgat cctgtcttct gctcttcagt 5220

tgcccatata cccctgaagg ctcctgggag ggggaagtca ggaacaggct tatctcctcc 5280

cttttaaaac aatgttctat tatggaaatt ttcaaacatg caatagtaga aaaattgtac 5340

tacactgtat aacaaattcc catacccccc tgcaacccct ccacttccag tgtatttgtc 5400

atcaagcttc agcaattgtc aacaaacatg atcagtcttt atttcacata tatacacaga 5460

tggctattat gatatcaaat atcaggcata atatagttta taaatgtttc cgtatatatc 5520

tctaaaatgt aaaactttat ttatttattt acttatttat tttttttaga tggaatttca 5580

cccttgcccc caggctggag tgcaatggcg tgatctcggc tcactgtaac ctctgcctcc 5640

tccaagcaat tctcctgcct cagcctcctg agtagctggg attacaggca cccgccacca 5700

cactcggcta atttttgtat ttttagtaga gacagggttt cgccatattg gccaggctgg 5760

tctcgagctc ttgacctcta caattatttt aaatacagag taaaaccaaa ataaaacaca 5820

tacagagcca gtctaactac tctgacctag agtacgtgga gtctcaggaa ctaagaaggg 5880

cttattccta taaactggat atttgctgat attaaagaat taccaggctg ggcgcggtgg 5940

ctcacgcctc taatgccagc actttgggag gccaaggcag gccgatcatg aggtcaggag 6000

atcgagacca tcctggctga cgcagtgaaa ccctgtctgt actaaaaatg taaaaaatta 6060

gccaggtgtg gtggcaggcg cctgtagtcc cagctactca ggaggctgag gcaggagaat 6120

ggcgtgaact caggaggcgg agcttgcagt gagccgagat cgcgccactg cactccagcc 6180

tgggcaacag cgcaagactc cgtcttaaaa aaaaaaaaaa agaattactg ttcatttttg 6240

tgtgtgtgtg tgacagtgct actgtggcta tgttttcaaa aagaattttg ctgggcatga 6300

tgcctcatgc ctgtaatcct agagctttgg gaggctgagg tgggagaata ccttgaagcc 6360

aggagttaga gaccagcatg ggcaacataa caagactccc atctctaaaa aaataaataa 6420

aggtccgggc atggtggctc acgcctgtca tccctgcact ttgggaggcc aacgtgggtg 6480

gatcacgagg tcaagagatt gagaccatcc tggtcgacat ggtgaaaccc cgtctctact 6540

aaaaatacaa aaattagcca ggcgtggtgg cgtgcacctg taatcccagc tactcgagag 6600

gctaaggcag gagaatcgct tgaacctggg aggtggaggt tgcagtgagc caagatcgtg 6660

ccaccgcact ccagcctggg cgacagaatg agattccgtc tcaaaaaaaa aacttaaatt 6720

aaaaaaaata ataaaataca taaagttggc caggcgcagt ggctcatacc tgtaatccta 6780

gcactttggg aggctgaggt gggtggatca cctgaggtca ggagttcgag accagcctga 6840

ccaacatggt gaaaccctgt ctctacaaaa aatacaaaaa ttagccgggt gtggtagtgg 6900

gtgcctgtaa tcccagctac ttgggaggct gaggcaggaa aatctcttga acctgggaga 6960

cagaggttgc agtgagccag gattgcgcca cagcactcca gtctgagcga cagagtgaga 7020

ctctgtctca aaataaatta aataaataaa taaatgtaga atctacagga agtttcaaaa 7080

atagtgcata gagtcctgtg tacttttcac taaccttcac tcagcgatga catttttttg 7140

agacggagtc tcgctctgtc gccctggctg gagcgcagtc gcgcaatcat ggctcactgc 7200

aacctctgcc tcccggttca agcgattctc ctgtcccagc ctcccaagta gctgtgatta 7260

caggcatctg caatcatgcc cggctaattt tttttttttt gagacagagt tttgctcttg 7320

ttgcccagcc tggagtgcaa tggtgcgatc tcggctcact gcagcctccg cctcccgagt 7380

tcaagtgatt ctcctgcctc agcctcccga gtagctggga ttacaggcat gcgccaccac 7440

acttggctaa ttttgtattt ttagtagaga cgggtcaggc tggtctggaa ctccagatct 7500

caggtgatcc gcctgcctca gcctcccaaa gtgctgggat tacaggcata agccatggtg 7560

cctggcctaa tttttgtatt tttagtagag acaaggtttc acaatgttgg ccaggctggt 7620

ctcgaactcc tagcctcaag tgatgcgccc gccttggctt cccaaagtac tgggattaca 7680

ggtgtgagcc agcgtgcccg gcccccagtg gtgacttctt atatagttat agtacaatat 7740

caagaccaag aaataagaca ttgctccaat gttagctata ctacaggtct tgttcatttt 7800

tctcatggat atgccgctgt gtgtatgtgt ggttctatgc agttctgtcc cacgtatgga 7860

tgcatataac caccaccata atcaagatac agattgtttc atcaccacaa aggaactctc 7920

tcatgtacct ctttagttat acccttctgc ccccacttct agtcacctgg caaccatgaa 7980

gctgttctcc acctctatag ttttgtcatt tcaagcatgt tatttgtata tttaatggaa 8040

tatgaatgtt tttataggca cttttgcctt taccttaggt gtcaccattg tctattttcc 8100

tccacccgac tgtcttcaga tgtttacgtt gcctgcctgg cccctgctgg cacttgaggt 8160

tgttaaccct gcccagttgt taattagacc ctgatttctt agtggacacc tggccactgc 8220

ctcttcccta gcctggcagc tgtggcttct gaccccctcc cctccaaccc ctcaccctcc 8280

agatgcaggc cctgacttcc tgtgagtgca ccatctgtcc tgactgcttc cgccagcact 8340

tcaccatcgc cttgaaggag aagcacatca cagacatggt gtgccctgcc tgtggccgcc 8400

ccgacctcac cgatgacaca cagttgctca gctacttctc tacccttgac atccaggtac 8460

tgcagcccct ctaggactca ggtaccctga gctttgaaca gggaccctcc cacccaccac 8520

ctctgcatcc tgtccccagc ttcgcgagag cctagagcca gatgcctatg cgttgttcca 8580

taagaagctg accgagggtg tgctgatgcg ggaccccaag ttcttgtggt gtgcccaggt 8640

aagtggcctg cccagggcag ctactgtgga ggggcagggg atggttccag gtcaggcctt 8700

tgataacttt atgctcttgc acttccagtg ctcctttggc ttcatatatg agcgtgagca 8760

gctggaggca acttgtcccc agtgtcacca gaccttctgt gtgcgctgca agcgccaggt 8820

gaggcacatt catcctttca gaaatacttg ctgagctact gccaggtact gtgttagact 8880

caggggagtt tgtgtactgg agagcaaaac agacatgagc tctgaggtca aaagagctta 8940

cagactactc agaaagacta ggcacaagga gaaagggaag cagagggagg gaggaaatcg 9000

ggagggaaag gaaaggggag gaggaaggaa ggaaggaaag aaagtaagcc agaggaacta 9060

attatacata ggcataaatt ctatgaagaa aacaaacagg aacctgagat cagggtaaca 9120

gagtggacct acttagggta gagaggtcag acaagtcttc tctaaaatgg tttaagctca 9180

ggcctaaaca ttaaaaagaa gccagccatg caaagagcat ttgggagaga aagaacaaca 9240

catggaaagg ccagaatcag aaaaaagtgt tgtatggctg gagcctggaa agcaaggcgg 9300

gaatggcagg tggtcagaga gaagccagct gccaggtctg tagagccctg gaggccacgt 9360

gaagcaggcg tccgtctgcc ttcattctga gataaagcaa gggtgatact atctcattta 9420

tctttcgttt atttatttat ttatttattt ttagagacaa ctcactgtca cccaggctgg 9480

ggtccactgg tgcagtcaca gctcactgca gcctccaact cctggtctca agtgatccct 9540

cgcctcagcc ttccaaagta ctgggattac aggcatgagc cactatgccc agccacattt 9600

atcttttaag aagtgtaata tttggctagg catggtggct tccgcctgta atcccagcac 9660

tttgggaggc catggtgggt ggatcacttg aggttgggag ttcaagacca gcctcccaat 9720

atggtgaaac cccgtctcta ctaaaaatac aaaaattagc cgggtgtggt ggcatgtgcc 9780

tgtaatccca actactctgg aggctgaggc aggagaatcg cttgaaccca ggaggtggag 9840

gctgcagtga gccaagatca cgccattgca ctccagcctg ggtgacagag cgagactcca 9900

tctcaaaaaa aaaaaaagaa gtgtaatatt tgatacgaaa aaaatttcat ctgcatcatg 9960

tctgaaataa agtgaacacc tgagactacc acagaaccaa aacaccacca atcctgtgga 10020

agctacctga cttacagttt tgaaggactt ttgacagcca tggggagaat tgaccctagg 10080

ggagcaggaa tgggaaacag agagactagt aaccgaggca agcaattgag gcaaggtctg 10140

atggtggcct ggagtaaagt ggtagcagta gggatgaagg aaaaggggat atggttgaga 10200

tggtctgtgg ggtggaaaca aggcaaaagt agtgtgaggt ggtaggagaa aatgaaagga 10260

ccaaggatgg cctctcattt tgagatctga gcaaatggta ggtggcagtg acataaacca 10320

agctggggaa ccactggatg tgagtggagg ggccagcaag aaaggccagg ggatgggata 10380

gagctcccat gtgaagccta ctttccctct ggcagtggga ggagcagcac cgaggtcgga 10440

gctgtgagga cttccagaac tggaaacgca tgaacgaccc agaataccag gcccagggcc 10500

tagcaatgta tcttcaggaa aacggcattg gtaaggcctc cctactcggc ctgtttgctc 10560

agaagcctgt cattgccagc agctctcttc ctgagggcct tgagttgcag cggcagctcc 10620

agccctgacc tcttgtcctt tgcagactgc cccaaatgca agttctcgta cgccctggcc 10680

cgaggaggct gcatgcactt tcactgtacc cagtgccgcc accagttctg cagcggctgc 10740

tacaatgcct tttacgccaa gaatgtaagc ccagagagtt ggggaagggg tggaagggtg 10800

gggggtgcca ttggctttga gagtcagagg ctattgagga gtggccccgg ggaagagaag 10860

aggtcaacgg gatgtaaagc acaactctct gtccccttac cctttgcttg ctcctccaat 10920

gtctccatct cccctcaccc ttacacccct cacgcagggg ttcctgagag gccaggaccc 10980

caacagtctc caacttcctc tctcccatct gggtttctgc cagaaatgtc cagagcctaa 11040

ctgcagggtg aaaaagtccc tgcacggcca ccaccctcga gactgcctct tctacctgcg 11100

ggactggact gctctccggc ttcagaagct gctacaggtc agaggtggcc aggagagaag 11160

aagacagggc ccagggtggg caagaatgga aaaggctccg tgctaggaat tgcaacaggg 11220

acttggcatc aaggggaatg taacacccat ctgtctctcc tcctcaggac aataacgtca 11280

tgtttaatac agagcctcca gctggggccc gggcagtccc tggaggtgag tgttaggaca 11340

agcctttgag aagaggagat ggtgtgctgg gctcccaccg tgtgatgggt aaaggggagg 11400

cttgggtctg gggtcacttg ttgcatgccc tttggcaagt taattgagac ccaaggcctt 11460

gtttcttccg ctgtaaaatg gaggtagtat ccaccttgca gctaagccat tttacataag 11520

acatctttaa agaacctggt acccaagaag gcattaatac taattttctt ctcccattcc 11580

caaatgatca taattaatta attagttcaa tgagtgttta atgagaagtg ctagttgcag 11640

ggcactgttt taggttccat gagggcaaca gaaaggtgtt acatatggtt ctaacctctg 11700

tcacttctta cagtgtagac agaggtaagt ctacagtcca taccaccctg aatgtgactg 11760

atcttttctg atcttggagg ctaagcaggt tcgggcctgg ttagtacttg gatgagagat 11820

tggctgggaa ttccaggtgc tataggtttt aaatttattt tttaaaaaat agaggtggcc 11880

ggccgggcac attggctcat gcctgtaatc ccagcacttt gggaagccaa ggcgggtgaa 11940

tcacgaagtc agatcgagac catcctggct aacacggtga aaccccatct ctactaaaaa 12000

tacaaaaaat tagccgggcg tggtggcggg cgcctgtagt cccagctact cgggaggctg 12060

aggcaggaga atggcatgaa cccgggaggc ggagcttgca gtgagcagag atggcgccac 12120

cgcactccag cctgggcaac agagcgagac ttcgtctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 12180

aaaaatgtgg ctgggcacgg tggctcatgc ctgtaatctc agcactttgg gaggccgagg 12240

caggtggatc acctgacgtc aggagttcgt gaccaacctg gccaacaagg tgaaaccctg 12300

tctctactaa aaatacaaaa aaattagcaa ggtgtggtgg caggcacctg taatcccacc 12360

tactcgggtg gctgaggcag gagaatcact tgaacccggg aggtggagat tgcagtgagc 12420

caagattgcg ccattgcact ccagtccagc ctgggcaaca agagtgaaac tccatctcaa 12480

aaaaaaaaaa aaaaaaaacc agaggtagcc aatagccagg agtggtggtg gctcacaccc 12540

ataatcccag cactttggga ggctaaggca agaggattac ttgagcccag gagtttgaga 12600

ccagcccaaa caacatagtg agaccctgtc tctatttaaa aaataaaaat aaaaaaaaga 12660

ggtaagatct tccgataata agttaactag tcaagagata aataacaacc aaaaaaaaaa 12720

aaaaaaaaaa aacactatct caagagggta tgtgtttatg agccaaaagc cagcttggat 12780

aaaagtaggg acaaggtccc tgcctctgta tcagatggtc tgccgttgac ggcacctctg 12840

agtacccacc agcaccactg ggaaagcagg agttgctgtg ctcggtccct tccttggagg 12900

ctgccttccc tgccttgtgg atatcccagt tctggagctt tgtggtcatt ggcctcccaa 12960

cagaggctcc cttcttccct cacctttagg cggctgccga gtgatagagc agaaggaggt 13020

tcccaatggg ctcagggacg aagcttgtgg caaggaaact ccagctggct atgccggcct 13080

gtgccagtga gtgccagcag gacatgggca tggtgttggg cagtgggtag aagtggtgag 13140

ggcatgccca ggcagtaaaa tgggtccttg ggagcagtag gtcttgcagt gggtgggagg 13200

gaggaggctt tctgggcaag ggcatgggta gatagtagca ggcagtgtgg gcacaggtgg 13260

gttgttaatc ttgttcgtcc aggtgtctca gagtccagct atgttagaca cactcagtta 13320

atattagcca acacaacaaa tattctgctc ccttttctcc ccagggcaca ctacaaagag 13380

tatcttgtga gcctcatcaa tgcccactcg ctggacccag ccaccttgta tgaggtggaa 13440

gagctggaga cggccactga gcgctacctg cacgtacgcc cccagccttt ggctggagag 13500

gatccccctg cttaccaggc ccgcttgtta caggtatagc ctccacccag cctcatctct 13560

taacccaccc tacagaagtc acctggtgct gactgtgtct gagctccagg cttccaatat 13620

cattaccttc tctctccttc tgcagaagct gacagaagag gtacccttgg gacagagtat 13680

cccccgcagg cggaagtagc tgagggcaag ggtcccgatg agggtcccat ggcctgctcc 13740

ctcaggaaca gctccagcac caataaagag gcatcttacc acccagg 13787

<210> 6

<211> 1072

<212> PRT

<213> RNF31(RNF31)

<400> 6

Met Pro Gly Glu Glu Glu Glu Arg Ala Phe Leu Val Ala Arg Glu Glu

1 5 10 15

Leu Ala Ser Ala Leu Arg Arg Asp Ser Gly Gln Ala Phe Ser Leu Glu

20 25 30

Gln Leu Arg Pro Leu Leu Ala Ser Ser Leu Pro Leu Ala Ala Arg Tyr

35 40 45

Leu Gln Leu Asp Ala Ala Arg Leu Val Arg Cys Asn Ala His Gly Glu

50 55 60

Pro Arg Asn Tyr Leu Asn Thr Leu Ser Thr Ala Leu Asn Ile Leu Glu

65 70 75 80

Lys Tyr Gly Arg Asn Leu Leu Ser Pro Gln Arg Pro Arg Tyr Trp Arg

85 90 95

Gly Val Lys Phe Asn Asn Pro Val Phe Arg Ser Thr Val Asp Ala Val

100 105 110

Gln Gly Gly Arg Asp Val Leu Arg Leu Tyr Gly Tyr Thr Glu Glu Gln

115 120 125

Pro Asp Gly Leu Ser Phe Pro Glu Gly Gln Glu Glu Pro Asp Glu His

130 135 140

Gln Val Ala Thr Val Thr Leu Glu Val Leu Leu Leu Arg Thr Glu Leu

145 150 155 160

Ser Leu Leu Leu Gln Asn Thr His Pro Arg Gln Gln Ala Leu Glu Gln

165 170 175

Leu Leu Glu Asp Lys Val Glu Asp Asp Met Leu Gln Leu Ser Glu Phe

180 185 190

Asp Pro Leu Leu Arg Glu Ile Ala Pro Gly Pro Leu Thr Thr Pro Ser

195 200 205

Val Pro Gly Ser Thr Pro Gly Pro Cys Phe Leu Cys Gly Ser Ala Pro

210 215 220

Gly Thr Leu His Cys Pro Ser Cys Lys Gln Ala Leu Cys Pro Ala Cys

225 230 235 240

Asp His Leu Phe His Gly His Pro Ser Arg Ala His His Leu Arg Gln

245 250 255

Thr Leu Pro Gly Val Leu Gln Gly Thr His Leu Ser Pro Ser Leu Pro

260 265 270

Ala Ser Ala Gln Pro Arg Pro Gln Ser Thr Ser Leu Leu Ala Leu Gly

275 280 285

Asp Ser Ser Leu Ser Ser Pro Asn Pro Ala Ser Ala His Leu Pro Trp

290 295 300

His Cys Ala Ala Cys Ala Met Leu Asn Glu Pro Trp Ala Val Leu Cys

305 310 315 320

Val Ala Cys Asp Arg Pro Arg Gly Cys Lys Gly Leu Gly Leu Gly Thr

325 330 335

Glu Gly Pro Gln Gly Thr Gly Gly Leu Glu Pro Asp Leu Ala Arg Gly

340 345 350

Arg Trp Ala Cys Gln Ser Cys Thr Phe Glu Asn Glu Ala Ala Ala Val

355 360 365

Leu Cys Ser Ile Cys Glu Arg Pro Arg Leu Ala Gln Pro Pro Ser Leu

370 375 380

Val Val Asp Ser Arg Asp Ala Gly Ile Cys Leu Gln Pro Leu Gln Gln

385 390 395 400

Gly Asp Ala Leu Leu Ala Ser Ala Gln Ser Gln Val Trp Tyr Cys Ile

405 410 415

His Cys Thr Phe Cys Asn Ser Ser Pro Gly Trp Val Cys Val Met Cys

420 425 430

Asn Arg Thr Ser Ser Pro Ile Pro Ala Gln His Ala Pro Arg Pro Tyr

435 440 445

Ala Ser Ser Leu Glu Lys Gly Pro Pro Lys Pro Gly Pro Pro Arg Arg

450 455 460

Leu Ser Ala Pro Leu Pro Ser Ser Cys Gly Asp Pro Glu Lys Gln Arg

465 470 475 480

Gln Asp Lys Met Arg Glu Glu Gly Leu Gln Leu Val Ser Met Ile Arg

485 490 495

Glu Gly Glu Ala Ala Gly Ala Cys Pro Glu Glu Ile Phe Ser Ala Leu

500 505 510

Gln Tyr Ser Gly Thr Glu Val Pro Leu Gln Trp Leu Arg Ser Glu Leu

515 520 525

Pro Tyr Val Leu Glu Met Val Ala Glu Leu Ala Gly Gln Gln Asp Pro

530 535 540

Gly Leu Gly Ala Phe Ser Cys Gln Glu Ala Arg Arg Ala Trp Leu Asp

545 550 555 560

Arg His Gly Asn Leu Asp Glu Ala Val Glu Glu Cys Val Arg Thr Arg

565 570 575

Arg Arg Lys Val Gln Glu Leu Gln Ser Leu Gly Phe Gly Pro Glu Glu

580 585 590

Gly Ser Leu Gln Ala Leu Phe Gln His Gly Gly Asp Val Ser Arg Ala

595 600 605

Leu Thr Glu Leu Gln Arg Gln Arg Leu Glu Pro Phe Arg Gln Arg Leu

610 615 620

Trp Asp Ser Gly Pro Glu Pro Thr Pro Ser Trp Asp Gly Pro Asp Lys

625 630 635 640

Gln Ser Leu Val Arg Arg Leu Leu Ala Val Tyr Ala Leu Pro Ser Trp

645 650 655

Gly Arg Ala Glu Leu Ala Leu Ser Leu Leu Gln Glu Thr Pro Arg Asn

660 665 670

Tyr Glu Leu Gly Asp Val Val Glu Ala Val Arg His Ser Gln Asp Arg

675 680 685

Ala Phe Leu Arg Arg Leu Leu Ala Gln Glu Cys Ala Val Cys Gly Trp

690 695 700

Ala Leu Pro His Asn Arg Met Gln Ala Leu Thr Ser Cys Glu Cys Thr

705 710 715 720

Ile Cys Pro Asp Cys Phe Arg Gln His Phe Thr Ile Ala Leu Lys Glu

725 730 735

Lys His Ile Thr Asp Met Val Cys Pro Ala Cys Gly Arg Pro Asp Leu

740 745 750

Thr Asp Asp Thr Gln Leu Leu Ser Tyr Phe Ser Thr Leu Asp Ile Gln

755 760 765

Leu Arg Glu Ser Leu Glu Pro Asp Ala Tyr Ala Leu Phe His Lys Lys

770 775 780

Leu Thr Glu Gly Val Leu Met Arg Asp Pro Lys Phe Leu Trp Cys Ala

785 790 795 800

Gln Cys Ser Phe Gly Phe Ile Tyr Glu Arg Glu Gln Leu Glu Ala Thr

805 810 815

Cys Pro Gln Cys His Gln Thr Phe Cys Val Arg Cys Lys Arg Gln Trp

820 825 830

Glu Glu Gln His Arg Gly Arg Ser Cys Glu Asp Phe Gln Asn Trp Lys

835 840 845

Arg Met Asn Asp Pro Glu Tyr Gln Ala Gln Gly Leu Ala Met Tyr Leu

850 855 860

Gln Glu Asn Gly Ile Asp Cys Pro Lys Cys Lys Phe Ser Tyr Ala Leu

865 870 875 880

Ala Arg Gly Gly Cys Met His Phe His Cys Thr Gln Cys Arg His Gln

885 890 895

Phe Cys Ser Gly Cys Tyr Asn Ala Phe Tyr Ala Lys Asn Lys Cys Pro

900 905 910

Glu Pro Asn Cys Arg Val Lys Lys Ser Leu His Gly His His Pro Arg

915 920 925

Asp Cys Leu Phe Tyr Leu Arg Asp Trp Thr Ala Leu Arg Leu Gln Lys

930 935 940

Leu Leu Gln Asp Asn Asn Val Met Phe Asn Thr Glu Pro Pro Ala Gly

945 950 955 960

Ala Arg Ala Val Pro Gly Gly Gly Cys Arg Val Ile Glu Gln Lys Glu

965 970 975

Val Pro Asn Gly Leu Arg Asp Glu Ala Cys Gly Lys Glu Thr Pro Ala

980 985 990

Gly Tyr Ala Gly Leu Cys Gln Ala His Tyr Lys Glu Tyr Leu Val Ser

995 1000 1005

Leu Ile Asn Ala His Ser Leu Asp Pro Ala Thr Leu Tyr Glu Val Glu

1010 1015 1020

Glu Leu Glu Thr Ala Thr Glu Arg Tyr Leu His Val Arg Pro Gln Pro

1025 1030 1035 1040

Leu Ala Gly Glu Asp Pro Pro Ala Tyr Gln Ala Arg Leu Leu Gln Lys

1045 1050 1055

Leu Thr Glu Glu Val Pro Leu Gly Gln Ser Ile Pro Arg Arg Arg Lys

1060 1065 1070

Claims (5)

1.RNF31基因和/或RNF31基因的表达产物在非诊断目的的食管癌细胞系迁移表型判断中的应用，所述RNF31基因的序列如SEQ ID NO.5。

2.检测RNF31基因和/或RNF31基因的表达产物的试剂在制备用于检测食管癌细胞系迁移能力的试剂盒中的应用，所述RNF31基因的序列如SEQ ID NO.5。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述检测食管癌细胞系的试剂盒包括RT-PCR检测试剂盒或实时定量PCR检测试剂盒或蛋白免疫检测试剂盒。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述RT-PCR检测试剂盒和/或实时定量PCR检测试剂盒包括如SEQ ID NO.1- SEQ ID NO.2所示的扩增RNF31基因的引物。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述蛋白免疫检测试剂盒包括与RNF31蛋白特异性结合的抗体。

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