CN110538261A - 一种治疗肝损伤的滇重楼总皂苷肠溶缓释制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种以滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱为活性成分的肠溶缓释制剂，主要用于预防和治疗肝损伤疾病。该缓释口服固体制剂以滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱为药用活性成分，与药学上可接受的辅料制成。该组合物在肠道中溶解并延缓药品的释放速度，避免了胃酸对滇重楼总皂苷、多烯磷脂酰胆碱活性成份的影响，也避免了长期服药对胃粘膜造成刺激，减少服药引起的恶心、呕吐、腹痛、腹泻等不良反应。该组合物可以协同有效的发挥药物疗效，显著优于单用同剂量滇重楼总皂苷或多烯磷脂酰胆碱的效果，具有增强治疗效果、减少药品的服用次数、改善用药顺应性、减小滇重楼总皂苷细胞毒性等特点。

Description

一种治疗肝损伤的滇重楼总皂苷肠溶缓释制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种治疗肝损伤的滇重楼总皂苷肠溶缓释制剂及其制备方法。

背景技术

肝脏具有分泌、排泄、合成、生物转化及免疫等多种生理功能，是重要的人体器官。病毒、药物、酒精等都可以导致肝细胞损伤，严重肝损伤能导致肝功能衰竭。肝损伤是多种肝脏疾病共有一种病理状态，其长期存在往往是导致肝纤维化，甚至肝硬化、肝癌发生的最重要的始动因素。我国是乙肝大国，中国的慢性乙肝病人中，约25％-40％最终将死于肝硬化或合并肝癌。药物性肝病是指在药物的治疗量内，肝脏因受药物及其代谢产物作用而发生的功能和结构的损害，可发生于以往无肝病史的健康者或者原来就有严重疾病的患者。因此，肝损伤的预防与治疗对乙肝、结核、肝硬化、肝癌的预防和干预治疗有重要意义，有效控制并治疗肝细胞损伤，将会大大改善广大肝病患者的预后。

中药重楼是我国的传统中药，为百合科重楼属植物的泛称，最早载于《神农本草经》，名为蚤休，后《南本草》开始以重楼作为正式药名。具有清热解毒、凉肝定惊、消肿止痛等功效，主要用于痈疮、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症(中国药典.2010:243)。现代研究证实，重楼在杀伤和抑制癌细胞、调节机体免疫功能、阻遏癌症的发生和转移、诱导癌细胞分化、抑制肿瘤血管生成、逆转癌细胞的耐药性等方面都具有良好的活性(中国老年学杂志，2014，34(18):5303-5305)。但没有中药重楼治疗肝损伤的报道。

发明内容

本发明的目的提供一种以滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱为主要活性成分的药物组合物及制备方法，该药物组合物主要用于预防和治疗肝损伤疾病。

在第一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述组合物包括滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱。

在一个实施方案中，滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱的含量为：

滇重楼总皂苷10-50重量份；

多烯磷脂酰胆碱100-500重量份。

在一个实施方案中，所述药物组合物还包括抗氧化剂、缓释材料和肠溶材料。

在一个实施方案中，所述抗氧化剂选自以下物质中的一种或多种：亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素类抗氧剂、氨基酸类抗氧剂、硫代乙酸、叔丁基对羟基茴香醚、二丁甲苯酚、没食子酸丙酯或生育酚等。

在一个实施方案中，所述缓释材料选自以下物质中的一种或多种：羟丙基甲基纤维素、羟丙基乙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基纤维素、醋酸纤维素、聚羧乙烯类、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、山榆酸甘油酯、十六醇、十八醇、山萮酸甘油酯、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、巴西棕榈蜡等。

在一个实施方案中，所述肠溶材料，选自以下物质中的一种或多种：括醋酸纤维素酞酸酯(CAP)、聚乙烯醇酞酸酯(PVAP)、聚乙二醇、聚丙烯酸树脂、邻苯二甲酸醋酸纤维素、醋酸纤维素苯三酸酯(CAT)、羟丙甲纤维素酞酸酯(HPMCP)等。

在一个实施方案中，所述药物组合物中还可以含有其他药学可接受的其他药用辅料，所述药用辅料例如为以下物质中的一种或多种：致酸剂、粘合剂、填充剂、稀释剂、渗透压调节剂、吸附剂、色素、染料、崩解剂、分散剂、密封剂、助流剂、硬化剂、渗透增强剂、反乳化剂、稳定剂、润滑剂、增塑剂、增溶剂、致孔剂、润湿剂等。

在第二方面，本发明提供了本发明第一方面的药物组合物在制备治疗肝损伤的药物中的应用。

本发明的有益效果：(1)本发明解决了滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱二者性质差异大、难以协同合用的技术难点，开发出一种新的药物组合物；(2)本发明所述药物组合物以协同有效的发挥药物疗效，显著优于单用滇重楼总皂苷或多烯磷脂酰胆碱的效果，减少了滇重楼总皂苷的细胞毒性，缩短了用药周期；(3)本发明肠溶缓释技术，让该组合物在肠道中缓慢释放，减少了对肠道的刺激，避免了胃酸对滇重楼总皂苷、多烯磷脂酰胆碱活性成份的影响，也避免了长期服药对胃环境的影响而产生恶心、恶油、呕吐、上消化道和胃部不适等副作用，而且改变了普通口服制剂的吸收程序和状态，达到了肠部释放和集中吸收的目的，不仅能改善制剂的生物利用度，也可使食物对肠溶制剂药物效能的影响大大减小。(4)本发明所得药物制剂安全、可靠，副作用小。

具体实施方式

虽然不希望拘囿于任何理论，但发明人以为重楼对小鼠急性肝损伤起到保护作用；但过量重楼皂昔存在一定的细胞毒性，对肝线粒体细胞膜具有一定的破坏作用，可通过药物配伍的方式减小其细胞毒性，发挥其修复肝损伤的作用。多烯磷脂酰胆碱(PolyenePhosphatidyl choline)是从大豆中高度浓缩提取的一种磷脂，含有丰富易吸收利用的多种多价不饱和脂肪酸(亚油酸、亚麻酸和油酸)。多烯磷脂酰胆碱通过淋巴或血液途径最先到达肝脏，并渗入细胞和亚细胞膜内，以整个分子主动地和肝细胞膜及细胞器膜相结合，保护肝脏细胞结构及对磷脂有依赖的酶系统。多烯磷脂酰胆碱为肝脏提供了大量的高能量合成性重要磷脂，对已破坏的肝细胞膜进行生理性修复，提高细胞膜的流动性与稳定性，让肝功能和酶活力由损伤回复正常，并使肝脏的能量失调得以缓解，从而促进肝细胞的再生。多烯磷脂酰胆碱还可以从组成细胞骨架，减少氧应激与脂质过氧化，抑制肝细胞凋亡，降低炎症反应和抑制肝星状细胞活化等多个方面发挥对肝脏的保护作用，增加肝细胞膜对病毒、药物、毒物和自由基的防御能力。但是多烯磷脂酰胆碱易氧化，对光、热敏感，水溶液性质不稳定，作为注射剂时，一般不允许与其它注射液混合注射，作为普通胶囊剂时，需用足够量的液体送服，不能咀嚼，有时会使患者产生胃肠道紊乱、恶心、腹泻等不适。二者都具有促进肝损伤修复的作用，但检索现有技术结果显示目前尚无重楼皂苷与多烯磷脂酰胆碱以合适的方式组合而得的药物组合物，二者因为性质差异非常大，二者以何种方式组合、二者的组合是否具有较好的防治效果以及安全性等均难以预料，也未见相关研究。

在本发明中，本发明所述药物组合物可以制备成肠溶缓释制剂，例如制剂规格为100-1000mg。优选地，所述肠溶缓释制剂包括但不限于肠溶缓释片、肠溶缓释胶囊、肠溶缓释颗粒剂。

在本发明中，所述药物组合物例如按如下制备方法制备成缓释片(颗粒)剂或缓释肠溶胶囊：

(1)缓释片剂或缓释颗粒剂的制备方法包括如下步骤：将缓释材料作为缓释的骨架掺和到成型的其他辅料中按相应的制粒工艺制备，制粒后干燥、整粒成颗粒或进一步压片，再在制得的缓释颗粒或压制的缓释片上包上肠溶材料即得肠溶缓释片剂或肠溶缓释颗粒剂；

(2)缓释肠溶胶囊的制备方法包括如下步骤：将缓释材料作为缓释的骨架掺和到成型的其他辅料中按相应的制粒工艺制备，制粒后干燥、整粒成颗粒，填入到肠溶胶囊中即得。

在本发明中，为调节药物释放速度，可以选择不同的缓释辅料，添加或调整缓释药用辅料的组成及配比。

在本发明中，所述药物辅料用于调剂口感，外观及成型。

在本发明中，所述的粘合剂可以选自以下物质中的一种或多种：淀粉、明甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、乙基纤维素、胶、木糖、乳糖、合成胶、海藻酸钠、羟甲基纤维素、水、蜡、醇等。

在本发明中，所述的增溶剂可以选自以下物质中的一种或多种：酒石酸、聚乙二醇、柠檬酸等。

在本发明中，所述的润滑剂选自以下物质中的一种或多种：滑石粉、硬脂酸镁、氢化植物油、聚乙二醇、微分硅胶、硬脂酸钙、硬脂酸等。

在本发明中，所述的增塑剂选自以下物质中的一种或多种：丙二醇、邻苯二甲酸酯、蓖麻油、甘油、聚乙二醇、甘油三醋酸酯、乙酰单甘油酸酯等。

在本发明中，所述的致孔剂选自以下物质中的一种或多种：木糖、乳糖、甘露醇、淀粉、滑石粉、二氧化硅、水溶性盐类。

本发明提供了一种以滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱为主要活性成分的缓释药物组合物及制备方法，该药物组合物主要用于预防和治疗肝损伤疾病。本发明使用滇重楼总皂苷由湖南师范大学生命科学学院分离纯化，其他试剂皆为普通市售品。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

肠溶缓释片，成分为：

制成1000粒肠溶缓释片。制备方法为：将亚硫酸钠、羟丙基甲基纤维素、淀粉、微晶纤维素、硬脂酸镁分别过80目筛后备用，按上述量称取羟丙基甲基纤维素、淀粉、微晶纤维素置混合机中混匀后，再与上述量滇重楼总皂苷干粉和多烯磷脂酰胆碱按等量递增法混匀，加入适量的4％聚乙烯吡咯烷酮和75％乙醇溶液，制粒、整粒后于60℃干燥，干颗粒加入上述量的硬脂酸镁混匀，用摇摆式颗粒机过16目筛网整粒，对颗粒进行含量测定，并确定片重范围，压片得缓释片，用85％乙醇调配含肠溶材料醋酸纤维素酞酸酯的包衣粉备肠溶包衣液，再在所得缓释片上包上肠溶衣，检查合格后包装得到1000粒肠溶缓释片。

实施例2

肠溶缓释胶囊，成分为：

制成1000粒肠溶缓释胶囊。制备方法为：将亚硫酸钠、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、乳糖、硬脂酸镁分别过80目筛，按上述量称取羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、乳糖、硬脂酸镁置混合机中混合均匀后，再与上述量滇重楼总皂苷干粉和多烯磷脂酰胆碱按等量递增法混匀，加入适量的4％聚乙烯吡咯烷酮和85％乙醇溶液制软材，于颗粒机中制粒。将上述制得的颗粒于60℃干燥。再通过摇摆式颗粒机，用20目筛网整粒。对混合颗粒进行含量测定，并确定肠溶胶囊壳容量范围填充，检查合格后上胶囊填充机压制得到1000粒肠溶缓释胶囊。

实施例3

肠溶缓释颗粒剂，成分为：

制成1000袋肠溶缓释颗粒剂。制备方法：将亚硫酸钠、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、淀粉、硬脂酸镁分别过80目筛，按上述量称取羟丙基乙基纤维素、乙基纤维素、淀粉、硬脂酸镁置混合机中混合均匀后，再与上述量滇重楼总皂苷干粉和多烯磷脂酰胆碱按等量递增法混匀，适量30％聚乙烯吡咯烷酮90％乙醇溶液制软材，于颗粒机中制粒。将上述制得的颗粒于60℃干燥。再通过摇摆式颗粒机，用20目筛网整粒得缓释颗粒。用85％乙醇调配含肠溶材料醋酸纤维素酞酸酯的包衣粉备肠溶包衣液，再在所得缓释颗粒上包上肠溶衣。对颗粒进行含量测定，检查合格后包装制成1000袋肠溶缓释颗粒剂。

实施例4

滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱减轻小鼠肝损伤的药效学实验。

(一)、实验动物

ConA(刀豆蛋白A)诱导的小鼠肝损伤模型是T淋巴细胞介导的肝脏特异性损伤，较好的模拟人类病毒性肝炎和自身免疫性肝病等病理过程，是深入研究肝损伤机制的理想动物模型。选用6～8周龄，体重20～24g的SPF级健康C57BL/6雄性小鼠。在恒温、安静、相对避光的环境中饲养3天，按随机数字表法将小鼠随机均分为8组：正常对照组、损伤模型组、实验组1(口服实施例1中肠溶缓释片)、实验组2(口服实施例2中肠溶缓释胶囊)、实验组3(口服实施例3中肠溶缓释颗粒剂)、滇重楼总皂苷组、多烯磷脂酰胆碱组、阳性药物对照组(DDB，联笨双酯)，每组10只。

(二)、肝损伤模型的建立及各组给药方法

(1)正常对照组：小鼠尾静脉注射0.9％生理盐水。

(2)损伤模型组：ConA溶于0.9％生理盐水，以15mg/kg剂量尾静脉注射造模。

(3)实验组1、2、3(滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱保护组)：按体表面积换算成小鼠的等效剂量为滇重楼总皂苷6mg/kg，多烯磷脂酰胆碱40mg/kg，连续5天口服给药。

(4)滇重楼总皂苷组：仅含滇重楼总皂苷的肠溶缓释胶囊(滇重楼总皂苷剂量为6mg/kg)，连续5天口服给药。

(5)多烯磷脂酰胆碱组：仅含多烯磷脂酰胆碱的肠溶缓释胶囊(多烯磷脂酰胆碱剂量为40mg/kg)，连续5天口服给药。

(6)阳性对照组(DDB，联笨双酯)：以200mg/kg剂量连续5天尾静脉注射给药。

(三)、标本收集及检测

除正常对照组以外各组末次给药3小时后以15mg/kg剂量尾静脉注射ConA。12小时后取血分离获得血清，使用丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒检测血清ALT指标，结果见下表1。

表1各组小鼠血清中ALT含量(n＝10，)

(四)、实验结果分析

损伤模型组小鼠血清ALT含量相比正常对照组水平急剧上升，表明造模成功。经过实验组药物和阳性药物联笨双酯干预后，肝损伤小鼠血清ALT水平则显著降低(P<0.05)。结果表明，本发明的滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱为活性成分的药物组合对肝损伤有显著治疗效果。其中各实施例实验组药物(滇重楼总皂苷6mg/kg，多烯磷脂酰胆碱40mg/kg)相比单独的多烯磷脂酰胆碱组(40mg/kg)与滇重楼总皂苷组(6mg/kg)能显著的降低肝损伤小鼠血清ALT水平，各实施例实验组药物(滇重楼总皂苷6mg/kg，多烯磷脂酰胆碱40mg/kg)对比单独的多烯磷脂酰胆碱组(40mg/kg)与滇重楼总皂苷组(6mg/kg)治疗效果差异均有统计学意义(P<0.05)。说明滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱的药用组合物，能够预防和治疗肝损伤疾病，相对于单用起到显著效果。该组合物可以协同有效的发挥药物疗效，显著优于单用同剂量滇重楼总皂苷或多烯磷脂酰胆碱的效果，对肝损伤具有更好的保护作用。

实施例5

通过细胞实验证明本发明对肝细胞损伤的保护作用的有益效果。

人肝细胞株L-02在37℃，5％CO₂条件下用DMEM培养液(补加10％胎牛血清、2mmol/mL谷氨酰胺和100μg/mL青霉素和100μg/mL链霉素)培养，2d换液传代1次。取对数生长的细胞,台盼蓝染色后在显微镜下检查，细胞活力>95％可进行实验。取生长状态良好的L-02细胞以5x10⁶/mL密度接种24孔培养板上培养至对数生长期。共分为8个实验组：空白组(仅加培养基)、正常组(未做任何处理的单独L-02细胞)、损伤组、不同浓度滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱保护组(3组)、多烯磷脂酰胆碱组、滇重楼总皂苷组，每组实验设3个复孔。对数生长期的细胞更换500ul的DMEM培养液，其中滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱保护组分别加入滇重楼总皂苷终浓度为5ug/mL(保护组1)、10ug/mL(保护组2)、20ug/mL(保护组3)的DMEM培养液500ul(其中含多烯磷脂酰胆碱浓度为1mg/mL)，多烯磷脂酰胆碱组加入含多烯磷脂酰胆碱浓度为1mg/mL的DMEM培养液500ul，滇重楼总皂苷组加入滇重楼总皂苷终浓度为20ug/mL的DMEM培养液500ul。各组保护作用12小时后使用无血清DMEM洗两遍，然后加四氯化碳(CCl₄)损伤(损伤浓度为6umol/ml)。损伤4小时后收集各组细胞，以反复冻融法获得细胞裂解液。按照丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒操作步骤检测细胞上清液中ALT指标，结果见下表2。

表2各组小鼠血清中ALT含量(n＝3，)

ALT是肝细胞受损最敏感的指标之一，当肝细胞受损后细胞膜通透性增加，胞浆中的ALT释放出胞，该指标的高低与肝细胞的受损呈正比关系。与正常对照组相比CCl₄损伤组的ALT值显著增高，经过不同浓度实验组药物(滇重楼总皂苷终浓度为5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL，多烯磷脂酰胆碱浓度为1mg/mL)干预后，L-02细胞上清ALT水平则显著降低，且与滇重楼总皂苷终浓度成相关性(P<0.05)。表明滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱的药物组合物具有保护肝细胞膜、对抗肝损伤的作用。其中保护组药物(滇重楼总皂苷20ug/mL、多烯磷脂酰胆碱1mg/mL)相比单独的多烯磷脂酰胆碱组(1mg/mL)与滇重楼总皂苷组(20ug/mL)能显著的降低L-02细胞上清ALT水平，保护组药物(滇重楼总皂苷20ug/mL、多烯磷脂酰胆碱1mg/mL)相比单独的多烯磷脂酰胆碱组(1mg/mL)与滇重楼总皂苷组(20ug/mL)降低L-02细胞上清ALT数据差异均有统计学意义(P<0.05)。说明滇重楼总皂苷与多烯磷脂酰胆碱的药用组合物，能够预防和治疗肝损伤疾病，相对于单用起到显著效果。

Claims (9)

1.一种药物组合物，其特征在于，含有滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，滇重楼总皂苷和多烯磷脂酰胆碱的含量为：滇重楼总皂苷10-50份和多烯磷脂酰胆碱100-500份，优选滇重楼总皂苷30份和多烯磷脂酰胆碱300份。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，含有抗氧化剂、缓释材料和肠溶材料。

4.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物制备成肠溶缓释制剂。

5.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述抗氧化剂选自以下物质中的一种或多种：亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、硫脲、维生素类抗氧剂、氨基酸类抗氧剂、硫代乙酸、叔丁基对羟基茴香醚、二丁甲苯酚、没食子酸丙酯或生育酚；

所述缓释材料选自以下物质中的一种或多种：羟丙基甲基纤维素、羟丙基乙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基纤维素、醋酸纤维素、聚羧乙烯类、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、山榆酸甘油酯、十六醇、十八醇、山萮酸甘油酯、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、巴西棕榈蜡；

所述肠溶材料选自以下物质中的一种或多种：括醋酸纤维素酞酸酯(CAP)、聚乙烯醇酞酸酯(PVAP)、聚乙二醇、聚丙烯酸树脂、邻苯二甲酸醋酸纤维素、醋酸纤维素苯三酸酯(CAT)、羟丙甲纤维素酞酸酯(HPMCP)。

6.按照权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，还含有其他药学可接受的药学辅料，所述药学辅料为致酸剂、粘合剂、填充剂、稀释剂、渗透压调节剂、吸附剂、色素、染料、崩解剂、分散剂、密封剂、助流剂、硬化剂、渗透增强剂、反乳化剂、稳定剂、润滑剂、增塑剂、增溶剂、致孔剂、润湿剂中的一种或多种。

7.按照权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述粘合剂选自以下物质中的一种或多种：淀粉、明甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、乙基纤维素、胶、木糖、乳糖、合成胶、海藻酸钠、羟甲基纤维素、水、蜡、醇；

所述增溶剂选自以下物质中的一种或多种：酒石酸、聚乙二醇、柠檬酸；

所述润滑剂选自以下物质中的一种或多种：滑石粉、硬脂酸镁、氢化植物油、聚乙二醇、微分硅胶、硬脂酸钙、硬脂酸；

所述增塑剂选自以下物质中的一种或多种：丙二醇、邻苯二甲酸酯、蓖麻油、甘油、聚乙二醇、甘油三醋酸酯、乙酰单甘油酸酯；

所述致孔剂选用以下物质中的一种或多种：木糖、乳糖、甘露醇、淀粉、滑石粉、二氧化硅、水溶性盐类。

8.权利要求2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：

(1)缓释片剂或缓释颗粒剂的制备方法包括如下步骤：

将缓释材料作为缓释的骨架掺和到成型的其他辅料中按相应的制粒工艺制备，制粒后干燥、整粒成颗粒或进一步压片，再在制得的缓释颗粒或压制的缓释片上包上肠溶材料即得肠溶缓释片剂或肠溶缓释颗粒剂；

(2)缓释肠溶胶囊的制备方法包括如下步骤：

将缓释材料作为缓释的骨架掺和到成型的其他辅料中按相应的制粒工艺制备，制粒后干燥、整粒成颗粒，填入到肠溶胶囊中即得。

9.权利要求1-7任一项所述的药物组合物的用途，其特征在于，所述药物组合物在制备治疗肝损伤药物中的应用。