CN110522791A

CN110522791A - 甘草根异戊烯基黄酮在预防和治疗肥胖症中的应用

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Publication number: CN110522791A
Application number: CN201910971278.6A
Authority: CN
Inventors: 南敏伦; 何忠梅; 赫玉芳; 王莲萍; 赵昱玮; 赵全成
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-10-14
Filing date: 2019-10-14
Publication date: 2019-12-03

Abstract

本发明涉及一种甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)或(Glycyrrhiza glabra L.)或(Glycyrrhiza inflate Bat.)根异戊烯基黄酮的分离纯化及其在预防和治疗高血脂和肥胖症保健品药品中的应用，本发明发现甘草根含有丰富的异戊烯基黄酮，并证明甘草根中的黄酮与甘草茎叶黄酮有本质的不同，甘草茎叶主要有以乔松素为代表的异黄酮，甘草根中黄酮结构特征主要是带有异戊烯基的黄酮，进一步研究发现甘草根异戊烯基黄酮具有抑制脂肪酶的作用，可用于制备预防治疗肥胖症和降血脂药物及保健品。

Description

甘草根异戊烯基黄酮在预防和治疗肥胖症中的应用

技术领域

本发明是关于甘草根异戊烯基黄酮的医药新用途，具体的说是甘草根异戊烯基黄酮具有抑制脂肪酶的作用，可以在制备预防和治疗肥胖症的药物中的应用，相比于合成药物奥利司他作用温和，活性较好，对胃肠道无刺激作用，适于长期服用。也涉及该药物的提取分离和药物制剂，本发明属于医药技术领域。

背景技术

肥胖是一种慢性疾病。肥胖会导致心血管疾病、糖尿病、高血压、高血脂的疾病的产生，且与诸多慢性疾病的产生有着密切的关系，严重威胁着人类的健康。寻找治疗肥胖的药物已成为各国医学界迫在眉睫的任务。脂肪酶在人类健康和疾病中发挥着重要作用，脂肪酶除了在消化、运输和加工食用脂类中发挥重要作用外，还在水解各种脂质底物以调节膜完整性、脂质信号以及脂筏的产生和动态中发挥着不可或缺的作用。胰脂肪酶是由胰腺合成并分泌，是水解膳食脂肪最主要的酶，它负责50％～70％膳食脂肪的分解和消化食物中的脂肪被水解为单酰甘油和游离脂肪酸后，在肠道被吸收，然后在体内重新合成脂肪，造成脂肪堆积，最终可导致肥胖。如果有有效物质阻断对脂肪的分解，机体对脂肪的吸收就会减少，从而可以预防肥胖或减轻肥胖患者体重。

奥利司他是较为常用的治疗肥胖症药物，为强效的全合成胃肠道脂肪酶抑制剂[Henness S,Perry C M.Orlistat:a review of itsuse in the management ofobesity.[J]. Drugs，2006，66(12):1625-56]，其常见不良反应主要为酶抑制作用较强导致的胃肠道紊乱，表现为油性斑点、胃肠排气增多、脂肪泻等，临床发生率约为26％，且与高脂饮食合用时，发生胃肠道反应概率会增加，少见的不良反应有严重的肝损伤、过敏、代谢和内分泌系统异常等。此外，奥利司他的服用也会减少脂溶性维生素包括维生素K的吸收[訾梅，李祥霞.奥利司他的不良反应及安全应用[J]. 药物不良反应杂志，2007，9(3)：182-185.]。目前，更为安全有效的治疗肥胖症药物或减肥功能性食品有待研究开发。

近年来，由于天然产物具有来源广、成本低、副作用小等特点，得到人们越来越多的关注。我国中药资源丰富，从中药中筛选具有抑制脂肪酶活性成分作为治疗肥胖的药物具有重要的理论意义和临床应用价值。

甘草中含有黄酮、三萜、香豆素、多糖等多种成分，其中黄酮类为主要成分之一，含有量达到4％。其中异戊烯基黄酮主要为黄酮类、二氢黄酮类、异黄酮类、二氢异黄酮类、黄烷类、查尔酮类、二氢查尔酮类。甘草中的异戊烯基类黄酮具有显著抗炎、抗肿瘤、抗微生物的作用。

本发明完成前，还未发现甘草根异戊烯基黄酮具有抑制脂肪酶的作用，也未发现本发明甘草根异戊烯基黄酮防治肥胖症的药品和保健品中的应用。

发明内容

发明目的是提供一种甘草根异戊烯基黄酮，用于预防和治疗肥胖症的作用。本发明对甘草根的有效成分进行了研究，寻找到了活性更强、实用性强的有效部位，用于肥胖症的预防和治疗。更进一步地，本发明的发明人通过进一步的研究发现，甘草根异戊烯基黄酮在抑制脂肪酶方面有很强的活性。是本发明人首次通过实验筛选得到，具有突出的贡献及显著的技术进步。

本发明突出贡献在于：从甘草根中富集黄酮，得到异戊烯基黄酮，具有治疗肥胖症的作用。提供一种新药用资源及新医药用途，这是本发明最突出的贡献及最显著的创新性。

本发明目的之二是提供了甘草根异戊烯基黄酮提取分离方法，药用部位先用水浸提，除去多糖、水溶性黄酮及酸类成分，然后利用乙醇提取，提取液直接通过大孔树脂吸附纯化，除去色素等脂溶性杂质后，提取液及洗脱液经过浓缩，得到异戊烯基黄酮黄酮化合物；本发明制备方法没有用有机试剂，可操作性强，又是本发明的创新点之一。

本发明的另一目的是提供一种从甘草中提取的甘草根异戊烯基黄酮的制备方法，其特征在于：将甘草根药材饮片，用6-12倍量040-60℃热水浸提两次，浸提时间为6-12小时，滤过，滤液弃去；取水浸提后的甘草根用70-90％乙醇回流提取1-3次，提取时间为1-3小时，滤过，合并滤液，加入药液体积0.5-2％的药用活性炭，搅拌，滤过，收集滤液，将滤液通过预先用70-90％乙醇处理好的 D101或AB-8大孔树脂柱，收集通过大孔树脂的乙醇溶液，减压回收乙醇，干燥，得甘草根异戊烯基黄酮。

优选最佳制备工艺：将甘草根药材饮片，用8倍量40-60℃热水浸提两次，浸提时间为10小时，滤过，滤液弃去；取水浸提后的甘草根用85％乙醇回流提取2次，提取时间为2小时，滤过，合并滤液，加入药液体积1.0％的药用活性炭，搅拌，滤过，收集滤液，将滤液通过预先用70-90％乙醇处理好的AB-8大孔树脂柱，收集通过大孔树脂的乙醇溶液，减压回收乙醇，干燥，得甘草根异戊烯基黄酮。

本发明的另一突出贡献在于，提供一种具有抑制脂肪酶活性的甘草根异戊烯基黄酮，其特征在于：组合物中总黄酮含量不低于80％。

为实现以上技术方案，甘草根异戊烯基黄酮总黄酮含量通过以下方法测定：

对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品10mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取黄酮粉末，精密称定50mg，至50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min，取出，放置室温，加甲醇定容至刻度，摇匀，取2ml 至25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度即得。

测定法分别取对照品溶液、供试品溶液、随行空白。照分光光度法(《中国药典》2015年版通则)，在波长340nm处分别测定吸收度，计算。

由于本发明首次公开了甘草根异戊烯基黄酮具有抑制脂肪酶的作用，具有在制备防治肥胖症的药物中的应用。因此，将甘草根异戊烯基黄酮单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，只要是该药剂用于预防和治疗肥胖症的作用，均属于本发明的保护范围。本发明的组合物在制成任何一种剂型时，均具有预防和治疗肥胖症的作用。

甘草根异戊烯基黄酮对脂肪酶的抑制作用，具有防治肥胖症的作用，这些药理作用，通过以下药效学试验例得到证实。

1、甘草根异戊烯基黄酮对脂肪酶抑制作用

1.1脂肪酶抑制活性的测定

在100mL锥形瓶中加入5mL0.025mol/L磷酸缓冲液(pH＝7.4)和4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯底物乳化液(0.229g/mL)，置于37℃水浴保温10min，然后加入1mL酶液(2mg/mL)，之后再反应15min，加95％乙醇15mL终止酶反应。加酚酞2滴，用0.025mol/L NaOH标准溶液滴定至微红色。空白实验的酶液在反应终止后加入。

1.2阳性对照药奥利司他对脂肪酶抑制作用

在100mL锥形瓶中加入5mL0.025mol/L磷酸缓冲液(pH＝7.4)和4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯底物乳化液(0.229g/mL)，分别加入浓度为5.0，2.5，1.0，0.5， 0.25，0.1，0.05mg/ml的阳性对照药1mL，置于37℃水浴保温10min，然后加入 1mL酶液(2mg/mL)，之后再反应15min，加95％乙醇15mL终止酶反应。加酚酞2滴，用0.025mol/LNaOH标准溶液滴定至微红色。

1.3甘草根异戊烯基黄酮对脂肪酶抑制作用

在100mL锥形瓶中加入5mL0.025mol/L磷酸缓冲液(pH＝7.4)和4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯底物乳化液(0.229g/mL)，分别加入浓度为5.0，2.5，1.0，0.5， 0.25，0.1，0.05mg/ml的甘草根异戊烯基黄酮1mL，置于37℃水浴保温10min，然后加入1mL酶液(2mg/mL)，之后再反应15min，加95％乙醇15mL终止酶反应。加酚酞2滴，用0.025mol/LNaOH标准溶液滴定至微红色。实验结果见表1。

表1甘草根异戊烯基黄酮对脂肪酶的抑制作用

结果表明，奥利司他对脂肪酶的抑制作用具有良好的量效关系。甘草根异戊烯基黄酮在浓度为5.0，2.5，1.0，0.5，0.25，0.1，0.05，条件下，对脂肪酶的抑制作用存在良好的量效关系，甘草根异戊烯基黄酮对脂肪酶活性的抑制作用较阳性药奥利司他弱。

2、甘草根异戊烯基黄酮海德捷宁胶囊预防性给药对实验性高脂血症大鼠血脂含量的影响

动物购入后，先饲养观察，使其适应环境1周。然后，每只动物剪尾取血，测TC；TG；HDL–cho和LDL–cho含量，根据血脂水平随机分为：正常对照组；高脂模型组；阳性药血脂康胶囊对照组；甘草根异戊烯基黄酮600mg/kg、300mg/kg和150mg/kg组；每组12只。除第1组动物饲以常规饲料，作为正常对照外；其余2～6组动物均饲以高胆固醇饲料(在87.8％基础饲料基础上，加入2％胆固醇、10％猪油和0.2％丙基硫氧嘧啶)，投食量为：25g/鼠/天。各组动物每天ig给药一次，ig体积为10ml/kg；正常对照和高脂模型组动物每天ig等容量蒸馏水；连续给药4周。于最后1次给药后，将所有动物禁食(不禁水)16 小时，剪尾取血，分离血清，测定血清总胆固醇(TC)；甘油三脂(TG)；高密度脂蛋白胆固醇(HDL–cho)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL–cho)含量。比较各组间血脂水平有无差异，所列数据以均数加减标准差表示；统计学处理方法采用组间t-检验。

表2甘草根异戊烯基黄酮预防性给药前各组大鼠血脂含量检测结果

注：给药前各组动物血脂四项指标均衡一致，组间比较均为P>0.05。

表3甘草根异戊烯基黄酮预防性给药4周对实验性高脂血症大鼠血脂含量的影响

注：与模型组比较^*P<0.05；^**P<0.01；^***P<0.001。与血脂康胶囊组比较^★ P<0.05。

从表2、表3所列数据可以看出，实验前，各组动物的血脂水平比较均匀，组间分布无明显差异。在连续饲以高脂饲料4周后，模型组动物的血清总胆固醇含量，低密度脂蛋白胆固醇含量较正常对照组明显升高(均为P<0.001)。说明此时高脂血症(高胆固醇和高低密度脂蛋白)的动物模型已经形成。但各组动物的血清甘油三脂含量和高密度脂蛋白胆固醇含量变化不明显(与正常对照组比较P>0.05)。甘草根异戊烯基黄酮所设的三个给药剂量组中，600mg/kg和300mg/kg 两个剂量组动物的血清总胆固醇含量和低密度脂蛋白含量均明显低于高脂模型组(分别为P<0.001和P<0.05)。而且600mg/kg甘草根异戊烯基黄酮给药剂量组，对高脂模型动物血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量的降低作用明显优于阳性对照药血脂康(与血脂康胶囊组比较P<0.05)。上述实验结果表明，甘草根异戊烯基黄酮预防性给药4周，可明显抑制实验性大鼠高脂血症的形成，主要能明显降低血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量。使血清总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇含量的比值(TC/HDL-cho)也随之降低。

具体实施方式

本发明是通过如下的实施例得以实现(证实)，但本发明技术方案不限于此。

实施例1甘草根异戊烯基黄酮的制备

将甘草根药材饮片50kg，用8倍量40-60℃热水浸提两次，浸提时间为10 小时，滤过，滤液弃去；取水浸提后的甘草根用85％乙醇回流提取2次，提取时间为2小时，滤过，合并滤液，加入药液体积1.0％的药用活性炭，搅拌，滤过，收集滤液，将滤液通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，收集通过大孔树脂的乙醇溶液，减压回收乙醇，干燥，得甘草根异戊烯基黄酮1058g，总黄酮含量为 86.8％。

实施例2胶囊剂的制备

取甘草根异戊烯基黄酮250g，加入适量淀粉50g，用90％乙醇制粒，干燥，装胶囊，制成1000粒。

实施例3片剂的制备

取甘草根异戊烯基黄酮250g，加入适量淀粉50g，用90％乙醇制粒，干燥，压片，制成1000片。

Claims

1.甘草根异戊烯基黄酮在制备预防及治疗肥胖症的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的甘草根异戊烯基黄酮制备方法为：将甘草根药材饮片，用6-12倍量40-60℃热水浸提两次，浸提时间为6-12小时，滤过，滤液弃去；取水浸提后的甘草根用70-90％乙醇回流提取1-3次，提取时间为1-3小时，滤过，合并滤液，加入药液体积0.5-2％的药用活性炭，搅拌，滤过，收集滤液，将滤液通过预先用70-90％乙醇处理好的D101或AB-8大孔树脂柱，收集通过大孔树脂的乙醇溶液，减压回收乙醇，干燥，得甘草根异戊烯基黄酮。

3.根据权利要求1、2所述的甘草根异戊烯基黄酮应用其特征在于：含有有效治疗剂量的甘草异戊烯基黄酮及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与甘草异戊烯基黄酮的其它药物制成的制剂。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于优选含有1％-99％的甘草异戊烯基黄酮与99％-1％的药用赋形剂或其它可组方的药物制成口服制剂的剂型。

5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的任何一种。