CN110522765A - 一种抗白色假丝酵母菌的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能抑制和杀灭白色假丝酵母菌的组合物,所述组合物包括双氧水和纳米酶。本发明联合Fe3O4纳米酶和双氧水后抗菌效果明显,并且可以产生协同效果,在常规使用时对人体无害,环境友好,生态友好,易于控制,价格便宜,是高效低毒的抗菌材料。
Description
技术领域
本发明属于纳米材料及生物医学纳米技术领域,具体涉及一种抗白色假丝酵母菌的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
自1993年以来,纳米材料类酶催化现象偶有报道,但是由于缺乏深入研究而没有引起广泛关注。直到2007年,中国科学家打破传统学科界限,通过生物、化学、材料、物理、医学等领域研究人员的多年精诚合作,首次从酶学角度系统地研究了无机纳米材料的酶学特性(包括催化的分子机制和效率,以及酶促反应动力学),建立了一套测量纳米酶催化活性的标准方法,并将其作为酶的替代品应用于疾病的诊断。随后,国内外许多实验室也陆续报道了其他纳米材料的酶学特性。2013年,汪尔康院士和魏辉教授以纳米酶(nanozyme)为题发表长篇综述文章。从此,纳米酶(nanozyme)这一新概念引起了学术界广泛关注。目前,全球至少已有22个国家130个实验室从事纳米酶研究,50多种不同材料和结构的纳米酶被陆续报道,纳米酶的应用研究也已经拓展到了生物、农业、医学、环境治理和国防安全等多个领域,逐渐形成了纳米酶研究新领域。
纳米酶可以抑制各种细菌的生长,包括大肠杆菌,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和变形链球菌。我们前期的工作也发现,四氧化三铁纳米酶具有一种内在的过氧化物类活性,可以分解过氧化氢生成自由基,在酸性条件下,通过诱导高水平的活性氧(reactiveoxygen species ROS),杀死细菌,破坏生物膜的形成。
外阴阴道假丝酵母菌病(Vulvovaginitis candidiasis,VVC),是一种常见的阴道炎症,严重影响女性生殖健康,其病原菌以白色假丝酵母菌(Candidaalbicans)居多(90.4%),常规治疗后,患者中有5%-10%的人复发。目前,外阴阴道假丝酵母菌临床治疗,以唑类药物如:氟康唑、硝酸咪康唑等为主,伴随唑类药物的滥用和不规范使用,出现白色假丝酵母菌耐药比例升高和药物毒副作用增加。
本发明提供了一种抗白色假丝酵母菌的组合物,其以四氧化三铁纳米酶联合双氧水对白色假丝酵母菌可以起到良好的杀菌作用,为假丝酵母菌的治疗和预防复发开辟新途径,为临床交替用药,减少耐药,防止复发提供新的选择。
发明内容
一方面,本发明提供了一种抗白色假丝酵母菌的组合物,所述组合物包括Fe3O4纳米酶和H2O2。
在一个实施方式中,所述组合物中,Fe3O4纳米酶的浓度为0.1-5mg/ml,优选,0.2-2mg/ml,更优选,0.3-1mg/ml,例如,0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml。所述组合物中,H2O2的体积浓度为0.01-10%,优选,0.02-5%,更优选,0.05-2%,例如,0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.12%、0.15%、0.18%。
进一步的,所述Fe3O4纳米酶的颗粒大小为10-300nm,优选,20-250nm,更优选,30-200nm,更优选,50-150nm,更优选,60-120nm。
本发明所述的Fe3O4纳米酶可以通过水热法、非水溶剂热法、共沉淀法、微乳液法、微波等离子法等本领域常规的方法即可制备得到,优选水热法和/或溶剂热法。
在一个实施方式中,所述Fe3O4纳米酶的制备方法包括如下步骤:(1)将铁源与溶剂按比例溶解,得反应液A;(2)向反应液A中加入碱性溶液,得反应液B;(3)将反应液B置于反应釜中,加热得到Fe3O4纳米酶。
进一步的,所述步骤(1)中,铁源与溶剂搅拌完全溶解。
进一步的,所述步骤(2)中,加入碱性溶液,搅拌,形成均匀悬浊液。
进一步的,所述步骤(3)中,加热的温度为100-500℃,优选150-300℃加热的时间为1-72h,优选5-40h。
可选的,在步骤(3)之后还包括醇洗的步骤。
所述铁源选自二价铁和/或三价铁,优选氯化铁和/或硫酸亚铁。
所述溶剂为醇类溶剂、醚类溶剂、酮类溶剂、烃类溶剂、酯类溶剂中的一种或多种;优选,醇类溶剂;更优选,乙二醇、丙三醇、乙醇、聚乙二醇中的一种或多种。在优选的实施方式中,所述溶剂包括乙二醇和聚乙二醇,所述溶剂中乙二醇和聚乙二醇的体积比例为1:(1-10),优选,1:(2-8),更优选,1:(3-5)。
所述铁源与溶剂的摩尔比为1:1-1000。
所述碱性溶液选自醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、NH4 +中的一种或多种,优选醋酸钠、柠檬酸钠和/或碳酸氢钠;所述碱性溶液的终浓度为0.01-1mol/L。
另一方面,本发明还提供了上述抗白色假丝酵母菌的组合物在制备抗白色假丝酵母菌的试剂中的应用。
另一方面,本发明还提供了上述抗白色假丝酵母菌的组合物在制备治疗由白色假丝酵母菌引起的疾病的药物中的用途。
本发明中的试剂和药物可以制备成不同的剂型,包括为液体制剂、固体制剂、半固体制剂或气体制剂;优选的,所述剂型为所述液体制剂,包括溶液剂、注射剂、洗剂、搽剂等。
本发明中,由白色假丝酵母菌引起的疾病包括由于由白色假丝酵母菌的感染所导致的疾病,优选的,所述疾病为阴道炎。
另一方面,本发明还提供了一种制备上述抗白色假丝酵母菌的组合物的方法,所述方法包括将各配方进行混合的步骤。
本发明联合Fe3O4纳米酶和双氧水后抗菌效果明显,并且可以产生协同效果,在常规使用时对人体无害,环境友好,生态友好,易于控制,价格便宜,是高效低毒的抗菌材料。
附图说明
图1.电镜下纳米酶的颗粒形态。
图2.对纳米酶进行XRD成分检测。
图3.白色假丝酵母生长曲线图。
图4.不同处理组对于白色假丝酵母的杀菌效果。
图5.不同处理组对于白色假丝酵母的杀菌率。
实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明,以下所述,仅是对本发明的较佳实施例而已,并非对本发明做其他形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容,依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化,均落在本发明的保护范围内。
实施例1:Fe3O4纳米酶的制备
0.82g的无水氯化铁通过磁力搅拌完全溶于40ml的乙二醇和聚乙二醇溶液中,其中,乙二醇和聚乙二醇的体积比例为1:3,形成澄清的溶液。接着,缓慢加入3.6g的三水醋酸钠,快速搅拌,形成均匀悬浊液,超声10min,使上述溶液充分的混合均匀。然后,将溶液转移至50ml聚四氟乙烯反应釜中。最后,将反应釜置于200℃下加热12h。待反应釜自然冷却到室温后,得到黑色沉淀物。然后,用乙醇和水分别洗涤产物三次。最终,将得到的黑色沉淀物60℃干燥3h,密闭常温放置待用。如图1所示,电镜下观察所得到的Fe3O4纳米酶,可以得到大量单分散的纳米酶颗粒,粒径均匀,呈圆形,粒径在120nm左右。XRD分析结果显示,纳米酶的成分为Fe3O4,如图2所示。
实施例2:白色假丝酵母抑菌试验
对白色假丝酵母进行培养:挑取白色假丝酵母菌单克隆接种于5ml沙氏培养液。恒温摇床震荡培养培养过夜。1:100转接,每隔2h检测吸光度(600nm),绘制假丝酵母菌生长曲线。,如图3所示,白色假丝酵母菌前22小时处于生长的稳定期,大约培养22小时进入对数生长期,36小时进入稳定期。
采用双氧水以及实施例1制备得到的Fe3O4纳米酶(MNPs)对白色假丝酵母进行处理:吸取白色假丝酵母菌菌液50μl至4950μl沙氏液体培养基中,37℃震荡培养24h以扩大培养。用沙氏液体培养基进行稀释,调整菌液浓度为106cfu/ml,作为标准菌悬液备用。采用0.5mg/ml的纳米酶,0.1%的H2O2,分成对照组、H2O2组、纳米酶组(MNPs)和联合组(0.1%H2O2-0.5mg/mlMNPs)共四组。单独使用双氧水的浓度为0.1%;单独使用MNPs的浓度为0.5mg/ml;双氧水和MNPs配合使用时,保证双氧水的浓度为0.1%,MNPs的浓度为0.5mg/ml。取4只1.5ml无菌EP管,分别加入相应处理物,将菌液和相应材料混匀反应1小时,依次10倍稀释,混匀后涂平板,36℃培养48h,观察菌落形成情况并计数,实验重复三次。
采用不同处理检测对白色假丝酵母菌的生长影响,如表1和图4所示,与对照组相比,单用0.1%H2O2,或者单用0.5mg/mlMNPs对白色假丝酵母菌抑制效果均无统计学意义,联合组联合处理抑制效果明显,有显著意义(P=0.0009)。
表1各组假丝酵母菌菌落计数(*103)
(★P>0.05,无统计学意义;▲P<0.05,有统计学意义)
如图5所示,体外抗菌试验证明,0.1%H2O2-0.5mg/mlMNPs联合使用对白色假丝酵母菌的杀菌率为75.70%。单用0.1%H2O2的杀菌率为30.84%,单用0.5mg/mlMNPs的杀菌率26.57%;0.1%H2O2-0.5mg/mlMNPs联合处理组抑制效果明显,0.1%H2O2和0.5mg/mlMNPs配合使用可以产生协同效果。
Claims (10)
1.一种抗白色假丝酵母菌的组合物,其特征在于,所述组合物包括Fe3O4纳米酶和H2O2;
所述组合物中,Fe3O4纳米酶的浓度为0.1-5mg/ml,优选,0.2-2mg/ml,更优选,0.3-1mg/ml;
所述组合物中,H2O2的体积浓度为0.01-10%,优选,0.02-5%,更优选,0.05-2%。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述Fe3O4纳米酶的颗粒大小为10-300nm,优选,20-250nm,更优选,30-200nm,更优选,50-150nm,更优选,60-120nm。
3.根据权利要求1或2所述的组合物,其特征在于,所述Fe3O4纳米酶采用以下方法制备得到:(1)将铁源与溶剂按比例溶解,得反应液A;(2)向反应液A中加入碱性溶液,得反应液B;(3)将反应液B置于反应釜中,加热得到Fe3O4纳米酶。
4.根据权利要求3所述的组合物,其特征在于,所述铁源选自二价铁和/或三价铁,优选氯化铁和/或硫酸亚铁。
5.根据权利要求3所述的组合物,其特征在于,所述溶剂为醇类溶剂、醚类溶剂、酮类溶剂、烃类溶剂、酯类溶剂中的一种或多种;优选,醇类溶剂;更优选,乙二醇、丙三醇、乙醇、聚乙二醇中的一种或多种;
更优选的,所述溶剂包括乙二醇和聚乙二醇;
更优选的,所述溶剂中乙二醇和聚乙二醇的体积比例为1:(1-10),优选,1:(2-8),更优选,1:(3-5)。
6.根据权利要求3所述的组合物,其特征在于,所述步骤(3)中,加热的温度为100-500℃,优选150-300℃加热的时间为1-72h,优选5-40h。
7.权利要求1-6任一所述的组合物在制备抗白色假丝酵母菌的试剂中的应用。
8.权利要求1-6任一所述的组合物在制备治疗由白色假丝酵母菌引起的疾病的药物中的应用;优选的,所述疾病为阴道炎。
9.根据权利要求7或8所述的应用,其特征在于,所述试剂或所述药物的剂型包括液体制剂、固体制剂、半固体制剂或气体制剂;优选的,所述剂型为液体制剂;优选的,所述液体制剂包括溶液剂、注射剂、洗剂或搽剂。
10.一种制备权利要求1-6任一所述的组合物的方法,其特征在于,所述方法包括将各成分进行混合的步骤。
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