CN102198144A - 壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法 - Google Patents

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张孟
吴庆生
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Abstract

本发明涉及壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，该方法是使用天然无毒的高分子物质壳聚糖加入市售头孢曲松钠中对其抑菌性能进行增效。与现有技术相比，本发明壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能取得了优异的协同增效抑菌，大大降低原有头孢曲松钠的使用剂量，实现使用较低的药物浓度而达到更好的抑菌效果。

Description

壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法。
背景技术
随着抗生素的应用日益广泛，细菌对一些常用的药物呈现不同程度的耐药性。对于那些应用时间越长，使用范围越广泛的药物，细菌的耐药性往往越严重。头孢曲松钠作为第三代头孢菌素类抗生素也面临同样的问题，在通常的解决方法是使用β-内酰胺酶抑制药，制成β-内酰胺类抗生素的复方制剂或者加大抗生素的剂量，但问题是无论加入何种有机成分或加大药物剂量，药物对人体的副作用也随之增加。同时会造成无法对药物的疗程进行正确的掌握，这样就给病人带来经济上、身体上以及精神上等多重负担。
至今为止，Au纳米单质已被报道协同β-内酰胺类抗菌素联合抗菌，研究表明具有较好的效果。有报道发现抗生素阿莫西林与纳米银粒子相互作用，在更低的抗生素剂量上能产生更好的抑菌效果。但是，纳米材料，重金属材料，其他药物有费用较高，无法控制用量，生物毒性不明确等缺点，在使用药物的过程中添加无生物毒性的天然材质，通过改变药物的吸收，运输，作用方式，实现使用较低的药物浓度而达到更好的抑菌效果成为一个有价值的研究方向。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种原料易得，成本低廉，操作简单，以期设备简单，适合于大规模工业生产的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，该方法是使用天然无毒的高分子物质壳聚糖加入市售头孢曲松钠中对其抑菌性能进行增效。
所述的方法的具体步骤如下：
(1)配制壳聚糖醋酸溶液：称取壳聚糖溶于醋酸溶液，加热搅拌至充分溶解，呈现无色透明的粘稠溶液，得到浓度为0.5-5mg/ml的壳聚糖醋酸溶液；
(2)配制头孢曲松钠溶液：将市售的注射用头孢曲松钠加入无菌水，配制成50-500mg/ml头孢曲松钠溶液待用；
(3)在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶(0.5-20)同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌10-60min使二者充分混合，即可对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效。
所述的壳聚糖为DD＞90％的壳聚糖，所述的头孢曲松钠为常规市售抑菌剂，为注射用针剂。
所述的醋酸溶液的体积浓度为2％。
步骤(1)所述的壳聚糖醋酸溶液的浓度优选1mg/ml。
步骤(2)所述的头孢曲松钠溶液的浓度优选100mg/ml。
步骤(2)所述的超声搅拌的时间优选30min。
与现有技术相比，本发明利用无毒害的天然物质壳聚糖对常规的市售药剂进行协同增效，为有效的提高药物的疗效，特别是如何对低效及失效药物进行优化改良提供了一种全新的思路。在只添加入少量壳聚糖的基础上，大大降低原有头孢曲松钠的使用剂量，实现使用较低的药物浓度而达到更好的抑菌效果。这为发展新的抑菌剂提供了一种新的经验方法。为未来研究多功能抑菌药物，减少临床诊断环节，减轻病人的负担及痛苦打下了坚实的基础。
本发明原料易得，成本低廉，操作简单，以期设备简单，适合于大规模工业生产。
附图说明
图1本发明实施例1中使用的平板对峙生长法和混菌法示意图；
其中：0为平板中心，药液分贝加入孔1，2，3，4，线段b的长度即为抑菌圈半径；
图2为本发明实施例1混菌法中单独使用醋酸和壳聚糖醋酸溶液对大肠杆菌的抑制作用；
其中：a为2％醋酸溶液，b为1mg/ml壳聚糖溶液2％醋酸溶液；
图3为本发明实施例1混菌法中不同浓度药液对大肠杆菌的抑制作用示意图；
其中：a为20mg/ml头孢曲松钠，b为10mg/ml头孢曲松钠和壳聚糖混合溶液，c为10mg/ml头孢曲松钠d为壳聚糖溶液；
图4为本发明实施例1平板对峙生长法中不同浓度药液对大肠杆菌的抑制作用示意图；
其中：a为2％醋酸溶液，b为1mg/ml壳聚糖溶液2％醋酸溶液，c为20mg/ml头孢曲松钠，d为0.5mg/ml头孢曲松钠，e为0.5mg/ml头孢曲松钠壳聚糖溶液。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
下面实施例以试验大肠杆菌为例，测试壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效性能，测试步骤方法如下：
(1)首先冷冻状态下大肠杆菌(BH21)必须进行激活以使其恢复活性，以1％的接种量将大肠杆菌菌种加入LB液体培养基，在恒温振荡水槽中以37.5℃的温度过夜培养复苏。将培养得到的大肠杆菌菌液用LB液体培养基进行稀释，使其达到浓度1.0×107cfu待用。
(2)采用平板对峙生长法进行试验。在距离LB固体培养基平板中央30mm的四角用孔径8mm的打孔器开孔，孔内注入100μl的药液(分别为1mg/ml壳聚糖溶液，2％醋酸溶液，不同浓度头孢曲松钠和壳聚糖混合溶液)，于37.5℃过夜，让药液完全进入培养基。将第二步制备的大肠杆菌取800μl均匀涂布在上步制备的培养基上。于37.5℃培养24小时，观察实验结果。
(3)采用混菌法进行试验。将药液(分别为1mg/ml壳聚糖溶液，2％醋酸溶液，不同浓度头孢曲松钠和壳聚糖混合溶液)400μl与第二步制备的大肠杆菌800μl混合均匀，并作用30分钟，然后取800μl混合液均匀涂布于平板上。于37.5℃培养24小时，观察实验结果。
实施例1
(1)配制壳聚糖醋酸溶液：称取0.01g壳聚糖溶于10ml2％醋酸溶液，加热搅拌至充分溶解，呈现无色透明的粘稠溶液，浓度为1mg/ml。将市售的注射用头孢曲松钠(1g)加入10ml无菌水，配制成100mg/ml药液待用。
(2)在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶0.5同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌30min使二者充分混合来达到对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效。
(3)首先冷冻状态下大肠杆菌(BH21)必须进行激活以使其恢复活性，以1％的接种量将大肠杆菌菌种加入LB液体培养基，在恒温振荡水槽中以37.5℃的温度过夜培养复苏。将培养得到的大肠杆菌菌液用LB液体培养基进行稀释，使其达到浓度1.0×107cfu待用。
(4)采用平板对峙生长法进行试验。在距离LB固体培养基平板中央30mm的四角用孔径8mm的打孔器开孔，孔内注入100μl的药液，于37.5℃过夜，让药液完全进入培养基。将第二步制备的大肠杆菌取800μl均匀涂布在上步制备的培养基上。于37.5℃培养24小时，观察实验结果。
从图2，3中可以看出壳聚糖与头孢曲松钠混合溶液取得了很好的协同增效抑菌效应，远超过二者单独使用的效果。
(5)采用混菌法进行试验。将药液400μl与第二步制备的大肠杆菌800μl混合均匀，并作用30分钟，然后取800μl混合液均匀涂布于平板上。于37.5℃培养24小时，观察实验结果。
从图2，4中可以看出壳聚糖与头孢曲松钠混合溶液取得了很好的协同增效抑菌效应，远超过二者单独使用的效果。
实施例2
在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶2同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌30min使二者充分混合来达到对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效。从表1的抑菌圈直径变化可以看出同样取得较好的协同增效抑菌性能，超过二者单独使用的功效。
实施例3
在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶10同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌30min使二者充分混合来达到对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效。从表1的抑菌圈直径变化可以看出同样取得较好的协同增效抑菌性能，超过二者单独使用的功效。
实施例4
在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶20同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌30min使二者充分混合来达到对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效。从表1的抑菌圈直径变化可以看出同样取得较好的协同增效抑菌性能，超过二者单独使用的功效。
表1为本发明实施例1-4中头孢曲松钠溶液、壳聚糖溶液、以及头孢曲松钠和壳聚糖混合溶液同大肠杆菌作用的抑菌圈直径变化：
Figure GSA00000063148300051
实施例5
壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于使用天然无毒的高分子物质壳聚糖加入市售头孢曲松钠中对其抑菌性能进行增效，具体步骤如下：
(1)配制壳聚糖醋酸溶液：称取0.005g壳聚糖溶于10ml2％醋酸溶液，加热搅拌至充分溶解，呈现无色透明的粘稠溶液，得到浓度为0.5mg/ml的壳聚糖醋酸溶液；
(2)配制头孢曲松钠溶液：将市售的注射用头孢曲松钠0.5g加入10ml无菌水，配制成50mg/m头孢曲松钠溶液待用；
(3)在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶0.5同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌10min使二者充分混合来达到对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效，得到增效后的药液。
未检测协调效果，对采用上述方法得到的药液性能进行测试：
首先冷冻状态下大肠杆菌(BH21)必须进行激活以使其恢复活性，以1％的接种量将大肠杆菌菌种加入LB液体培养基，在恒温振荡水槽中以37.5℃的温度过夜培养复苏。将培养得到的大肠杆菌菌液用LB液体培养基进行稀释，使其达到浓度1.0×107cfu待用。采用平板对峙生长法进行试验。在距离LB固体培养基平板中央30mm的四角用孔径8mm的打孔器开孔，孔内注入100μl的药液，于37.5℃过夜，让药液完全进入培养基。将第二步制备的大肠杆菌取800μl均匀涂布在上步制备的培养基上。于37.5℃培养24小时，观察实验结果。从结果中可以看出壳聚糖与头孢曲松钠混合溶液取得了很好的协同增效抑菌效应，远超过二者单独使用的效果。
实施例5
壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于使用天然无毒的高分子物质壳聚糖加入市售头孢曲松钠中对其抑菌性能进行增效，具体步骤如下：
(1)配制壳聚糖醋酸溶液：称取0.05g壳聚糖溶于10ml2％醋酸溶液，加热搅拌至充分溶解，呈现无色透明的粘稠溶液，得到浓度为5mg/ml的壳聚糖醋酸溶液；
(2)配制头孢曲松钠溶液：将市售的注射用头孢曲松钠5g加入10ml无菌水，配制成500mg/m头孢曲松钠溶液待用；
(3)在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶20同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌60min使二者充分混合来达到对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效，得到增效后的药液。
未检测协调效果，对采用上述方法得到的药液性能进行测试：
采用混菌法进行试验。将药液400μl与第二步制备的大肠杆菌800μl混合均匀，并作用30分钟，然后取800μl混合液均匀涂布于平板上。于37.5℃培养24小时，观察实验结果。从结果中可以看出壳聚糖与头孢曲松钠混合溶液取得了很好的协同增效抑菌效应，远超过二者单独使用的效果。

Claims (7)

1.壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，该方法是使用天然无毒的高分子物质壳聚糖加入市售头孢曲松钠中对其抑菌性能进行增效。
2.根据权利要求1所述的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，所述的方法的具体步骤如下：
(1)配制壳聚糖醋酸溶液：称取壳聚糖溶于醋酸溶液，加热搅拌至充分溶解，呈现无色透明的粘稠溶液，得到浓度为0.5-5mg/ml的壳聚糖醋酸溶液；
(2)配制头孢曲松钠溶液：将市售的注射用头孢曲松钠加入无菌水，配制成50-500mg/ml头孢曲松钠溶液待用；
(3)在超声搅拌条件下，将壳聚糖醋酸溶液按照质量比1∶(0.5-20)同市售注射用头孢曲松钠溶液进行混合，搅拌10-60min使二者充分混合，即可对头孢曲松钠抑菌性能进行壳聚糖协同增效。
3.根据权利要求2所述的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，所述的壳聚糖为DD＞90％的壳聚糖，所述的头孢曲松钠为常规市售抑菌剂，为注射用针剂。
4.根据权利要求2所述的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，所述的醋酸溶液的体积浓度为2％。
5.根据权利要求2所述的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，步骤(1)所述的壳聚糖醋酸溶液的浓度优选1mg/ml。
6.根据权利要求2所述的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，步骤(2)所述的头孢曲松钠溶液的浓度优选100mg/ml。
7.根据权利要求2所述的壳聚糖对头孢曲松钠抑菌性能的协同增效方法，其特征在于，步骤(2)所述的超声搅拌的时间优选30min。
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