CN111281898A - 一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111281898A
CN111281898A CN202010093354.0A CN202010093354A CN111281898A CN 111281898 A CN111281898 A CN 111281898A CN 202010093354 A CN202010093354 A CN 202010093354A CN 111281898 A CN111281898 A CN 111281898A
Authority
CN
China
Prior art keywords
saccharomyces cerevisiae
bacillus subtilis
days
lactobacillus acidophilus
composite
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010093354.0A
Other languages
English (en)
Inventor
莫艳华
姚康
马国华
黄海红
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Zhongke Wukang Culture Technology Co ltd
Original Assignee
Guangdong Zhongke Wukang Culture Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Zhongke Wukang Culture Technology Co ltd filed Critical Guangdong Zhongke Wukang Culture Technology Co ltd
Priority to CN202010093354.0A priority Critical patent/CN111281898A/zh
Publication of CN111281898A publication Critical patent/CN111281898A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于畜禽防疫领域，具体涉及一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用。本发明将嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的种子液按照质量比为5:5:4:3:3混合培养后，进一步发酵培养得到用于生猪防疫的复合微生态菌剂，该菌剂包含多种有益微生物构成的复合菌群，能抑制有害微生物繁殖，调节宿主体内微生态平衡，促进动物生长发育，提高免疫机能等作用，可用于生猪的疾病防控。

Description

一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于畜禽防疫领域，具体涉及一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用。
背景技术
养殖业发展离不开抗生素，养猪场的疫病防治主要还是使用疫苗和抗生素等传统手段，而长期的抗生素使用也带来明显的弊端，不仅养殖成本提高，而且带来生猪耐药性问题、以及因猪肉抗生素残留带来的对人们健康威胁问题。因此，在生猪养殖中不添加抗生素与激素类药物，使用微生态菌剂、中草药制剂与新型抗菌药物，即细胞因子制剂等，既安全、效果好、使用方便，又无药物残留，不产生耐药性，能保障动物性食品的安全，这是养殖业今后的用药方向。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂，该菌剂包含多种有益微生物构成的复合菌群，能抑制有害微生物繁殖，调节宿主体内微生态平衡，促进动物生长发育，提高免疫机能等作用，可用于生猪的疾病防控。
本发明的另一目的在于提供上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂，由嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和沼泽红假单胞菌(Rhodop seudanonaspalustris)的种子液按照质量比为5:5:4:3:3混合培养后，进一步发酵培养得到；
所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，包含如下步骤：
(1)菌种活化培养：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别进行多次活化，得到嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌活化菌种；
(2)液体菌种培养
①将步骤(1)制得的嗜酸乳杆菌活化菌种接种于液体培养基中，37℃兼性厌氧培养2～3天，得到嗜酸乳杆菌种子液；
②将步骤(1)制得的巴氏醋杆菌活化菌种接种于液体培养基中，摇床转速200r/min、温度30℃培养1～2天，得到巴氏醋杆菌种子液；
③将步骤(1)制得的酿酒酵母活化菌种接种于液体培养基中，摇床转速150r/min、温度28℃培养2天，得到酿酒酵母种子液；
④将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌活化菌种接种于液体培养基中，摇床转速200r/min、温度35℃培养1～2天，得到枯草芽孢杆菌种子液；
⑤将步骤(1)制得的沼泽红假单胞菌活化菌种接种至液体培养基中，60瓦乌丝灯光照30～35℃厌氧培养5～7天，得到沼泽红假单胞菌种子液；
(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的巴氏醋杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种至发酵培养基中，30℃摇床转速150～200r/min培养1～2天，然后再接种嗜酸乳杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液，30～35℃厌氧培养3～5天，得到复合菌种；其中，嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的质量比为5:5:4:3:3，总接种量为重量百分比10％；
(4)成品培养：将步骤(3)制得的复合菌种按重量百分比5～8％接种至发酵培养基中，28～30℃密闭发酵7～15天，得到用于生猪防疫的复合微生态菌剂，其中，该步骤发酵培养基不用灭菌；
步骤(1)中所述的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的菌株分别为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6088、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)CICC 20056、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC1251、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC24434和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonas palustris)CICC 23812；
步骤(1)中所述的多次活化的具体操作优选为：
将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别进行三次斜面活化，然后再进行平板纯化培养，最后进行斜面培养，得到嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌活化菌种；
所述的斜面活化、平板纯化培养或斜面培养的条件优选为：
嗜酸乳杆菌37℃厌氧培养2～3天；
巴氏醋杆菌30℃好氧培养1～2天
酿酒酵母28～30℃好氧培养2天；
枯草芽孢杆菌30℃好氧培养1～2天；
沼泽红假单胞菌60瓦乌丝灯光照30～35℃厌氧培养5～7天；
步骤(2)①所述的液体培养基(嗜酸乳杆菌)每一升包含如下组分：
蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温80 1mL、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、番茄汁20mL、土豆汁30mL、胡萝卜汁60mL、维生素C 2克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH6.8；
步骤(2)②所述的液体培养基(巴氏醋杆菌)每一升包含如下组分：
葡萄糖100.0克、酵母提取物10.0克、碳酸钙20.0克，弱碱性小分子还原水补至1000ml，pH6.8；
步骤(2)③所述的液体培养基(酿酒酵母)每一升包含如下组分：
蔗糖40克、蛋白胨30克、磷酸二氢钾1克、氯化钠1克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH自然；
步骤(2)④所述的液体培养基(枯草芽孢杆菌)每一升包含如下组分：
牛肉膏4.0克、蛋白胨3.8克、氯化钠3.3g、葡萄糖4.0克、磷酸二氢钾3.4克、硫酸镁0.2克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0；
步骤(2)⑤所述的液体培养基(沼泽红假单胞菌)每一升包含如下组分：
酵母粉2克、氯化铵1克、磷酸氢二钾1克、碳酸氢钠3克、硫酸镁0.5克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0～7.2；
步骤(3)中所述的发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜5～8％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，弱碱性小分子还原水补足100％；
步骤(4)中所述的发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜10％、米酒10％、米醋10％、氯化铵0.1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％、弱碱性小分子还原水补足100％；
所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂在制备生猪防疫产品中的应用；
一种生猪防疫方法，包含如下步骤：
(1)在乳猪刚出生尚未开口吃奶前：上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂加10质量倍水稀释；将稀释液滴入乳猪口中，每天一次，连续三天；其中，第一天3毫升/头，第二天5毫升/头，第三天10毫升/头并连续一周；
(2)小猪(60斤以下)阶段：上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂用水稀释后每天早晚两餐拌料饲喂；每头生猪每天每餐用量为：20毫升复合微生态菌剂加20质量倍水稀释；
(3)中猪(60～120斤)阶段：上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂用水稀释后每天早晚两餐拌料饲喂；每头生猪每天每餐用量为：30毫升复合微生态菌剂加20质量倍水稀释；
(4)大猪(120斤以上)阶段：上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂用水稀释后每天早晚两餐拌料饲喂；每头生猪每天每餐用量为：50毫升复合微生态菌剂加20质量倍水稀释；
(5)无重大疫情时，上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂加50质量倍水稀释；采用稀释液对栏舍四围、地面和顶棚，带猪消毒(以地面湿透为准)，并对室外水沟，墙壁作同样处理，连续三天，每天一次，三天后每周一次；
(6)出现重大疫情：
除隔离或处理被感染猪外，对感染栏的处理：上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂加5质量倍水稀释后，对感染栏用稀释液进行高浓度(带猪)消毒，连续三天，每天两次；
对未感染栏的处理：上述用于生猪防疫的复合微生态菌剂加20质量倍水稀释后，对未感染栏用稀释液每天(带猪)消毒一次，疫情控制后，转入常规防疫方法；
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明在成品发酵过程中，发酵培养基不用灭菌，可直接用于复合微生物菌剂的培养,在培养过程中也不需要搅拌，可节省人力物力，从而提高经济效益。
(2)本发明提供的用于生猪防疫的复合微生态菌剂包含多种有益微生物构成的复合菌群，能抑制有害微生物繁殖，调节宿主体内微生态平衡，促进动物生长发育，提高免疫机能等作用，可用于生猪的疾病防控。
(3)将复合微生态菌剂添加至常规饲料中饲养生猪，能够提高饲料的转化率，减轻养殖场臭味，促进生猪体内菌群的生态平衡，并在养殖场周边形成一个以良性微生物为主的微环境，阻隔病菌传播，从而提高生猪抗病能力，取代生猪养殖过程中防疫性抗生素药物的使用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中涉及的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的菌株分别为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC 6088、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)CICC 20056、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC1251、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC 24434和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonas palustris)CICC 23812；
实施例中的酸性氧化电位水(简称酸化消毒水)是在水中加入0.1wt％以下的食盐(氯化钠)输入电解槽中电解，在电解槽的阳极处生成的pH2～3、氧化还原电位1100mV以上，活性氯50～70mg的水溶液，是一种高效、速效、广谱、无毒、无刺激、无残留、安全、环保的消毒剂。
实施例中步骤(1)菌种活化培养(斜面活化、平板纯化培养或斜面培养)过程中，各菌株的培养基为常规培养基；
实施例中步骤(2)液体菌种培养过程中，各菌株的培养基为：
步骤(2)①所述的液体培养基(嗜酸乳杆菌)每一升包含如下组分：
蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温80 1mL、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、番茄汁20mL、土豆汁30mL、胡萝卜汁60mL、维生素C 2克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH6.8；
步骤(2)②所述的液体培养基(巴氏醋杆菌)每一升包含如下组分：
葡萄糖100.0克、酵母提取物10.0克、碳酸钙20.0克，弱碱性小分子还原水补至1000ml，pH6.8；
步骤(2)③所述的液体培养基(酿酒酵母)每一升包含如下组分：
蔗糖40克、蛋白胨30克、磷酸二氢钾1克、氯化钠1克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH自然；
步骤(2)④所述的液体培养基(枯草芽孢杆菌)每一升包含如下组分：
牛肉膏4.0克、蛋白胨3.8克、氯化钠3.3克、葡萄糖4.0克、磷酸二氢钾3.4克、硫酸镁0.2克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0；
步骤(2)⑤所述的液体培养基(沼泽红假单胞菌)每一升包含如下组分：
酵母粉2克、氯化铵1克、磷酸氢二钾1克、碳酸氢钠3克、硫酸镁0.5克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0～7.2；
实施例中步骤(4)成品培养过程中，发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：
工业用废糖蜜10％、米酒10％、米醋10％、氯化铵0.1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％、弱碱性小分子还原水补足100％。
实施例1
(1)菌种活化培养
将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别在18x180mm试管斜面中活化，活化三次，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化培养，然后再分别在18x180mm试管斜面中培养得嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌活化菌种；其中，斜面活化、平板纯化培养或斜面培养的条件为：嗜酸乳杆菌37℃厌氧培养2.5天；巴氏醋杆菌30℃好氧培养1.5天、酿酒酵母29℃好氧培养2天；枯草芽孢杆菌30℃好氧培养1.5天；沼泽红假单胞菌60瓦乌丝灯光照32℃厌氧培养6天；
(2)液体菌种培养
①将嗜酸乳杆菌活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，装液量90mL/100mL；之后置于37℃下兼性厌氧培养2.5天，得到嗜酸乳杆菌种子液；
②将巴氏醋杆菌活化菌种接种后于已灭菌的液体培养基中，摇床转速200r/min、温度30℃、装液量30mL/250mL培养1天，得到巴氏醋杆菌种子液；
③将酿酒酵母活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，摇床转速150r/min、温度28℃、装液量25mL/250mL培养2天，得到酿酒酵母种子液；
④将枯草芽孢杆菌活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，摇床转速200r/min、温度35℃、装液量30mL/250mL培养1天，得到枯草芽孢杆菌种子液；
⑤沼泽红假单胞菌活化菌种接种至已灭菌的液体培养基中，装液量90mL/100mL；60瓦乌丝灯光照32℃厌氧培养6天，得到沼泽红假单胞菌种子液；
(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的巴氏醋杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种至已灭菌的发酵培养基中，30℃摇床转速180r/min装液量30mL/250mL培养2天，然后再接种嗜酸乳杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液，30～35℃厌氧培养3天，得到复合菌种；其中，嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的质量比为5:5:4:3:3，总接种量为重量百分比10％；发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜6％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，弱碱性小分子还原水补足100％；
(4)成品培养
①将培养容器、配制培养基相关的容器清洗干净并用酸性氧化电位水(简称酸化消毒水)消毒；
②按照配比称取发酵培养基的组分氯化铵、氯化钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸亚铁等加入容器1中，然后加入弱碱性小分子还原水，使其充分溶解；
③按照配比称取工业用废糖蜜加入容器2中，然后加入弱碱性小分子还原水，使其充分溶解；
④按照配比称取发酵培养基的组分米酒、米醋；
⑤将步骤②制得的溶液和步骤③制得的溶液加入到培养容器中，溶解培养基和糖蜜的容器用少量的弱碱性小分子还原水洗涤几次以保证各种成分都加进培养容器中，将步骤④称取的米酒、米醋加入到培养容器中，然后加弱碱性小分子还原水至培养基总体积的80％；
⑥将步骤(3)制得的复合微生物制剂菌种摇匀后，按重量百分比6％的接种量(相对于培养基总量)接种至培养容器中，量取菌种容器用少量的弱碱性小分子还原水洗涤几次以保证菌种全部加入培养容器中；
⑦接种后，在培养容器中加弱碱性小分子还原水至培养基总体积的100％，搅拌均匀后盖上盖子，29℃密闭发酵10天，得到用于生猪防疫的复合微生态菌剂。
实施例2
(1)菌种活化培养
将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别在18x180mm试管斜面中活化，活化三次，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化培养，然后再分别在18x180mm试管斜面中培养得嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌活化菌种；其中，斜面活化、平板纯化培养或斜面培养的条件为：嗜酸乳杆菌37℃厌氧培养2天；巴氏醋杆菌30℃好氧培养2天、酿酒酵母28℃好氧培养2天；枯草芽孢杆菌30℃好氧培养2天；沼泽红假单胞菌60瓦乌丝灯光照30℃厌氧培养7天；
(2)液体菌种培养
①将嗜酸乳杆菌活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，装液量90mL/100mL；之后置于37℃下兼性厌氧培养3天，得到嗜酸乳杆菌种子液；
②将巴氏醋杆菌活化菌种接种后于已灭菌的液体培养基中，摇床转速200r/min、温度30℃、装液量30mL/250mL培养2天，得到巴氏醋杆菌种子液；
③将酿酒酵母活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，摇床转速150r/min、温度28℃、装液量25mL/250mL培养2天，得到酿酒酵母种子液；
④将枯草芽孢杆菌活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，摇床转速200r/min、温度35℃、装液量30mL/250mL培养2天，得到枯草芽孢杆菌种子液；
⑤沼泽红假单胞菌活化菌种接种至已灭菌的液体培养基中，装液量90mL/100mL；60瓦乌丝灯光照35℃厌氧培养5天，得到沼泽红假单胞菌种子液；
(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的巴氏醋杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种至已灭菌的发酵培养基中，30℃摇床转速200r/min装液量30mL/250mL培养2天，然后再接种嗜酸乳杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液，35℃厌氧培养5天，得到复合菌种；其中，嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的质量比为5:5:4:3:3，总接种量为重量百分比10％；发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，弱碱性小分子还原水补足100％；
(4)成品培养
①将培养容器、配制培养基相关的容器清洗干净并用酸性氧化电位水(简称酸化消毒水)消毒；
②按照配比称取发酵培养基的组分氯化铵、氯化钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸亚铁等加入容器1中，然后加入弱碱性小分子还原水，使其充分溶解；
③按照配比称取工业用废糖蜜加入容器2中，然后加入弱碱性小分子还原水，使其充分溶解；
④按照配比称取发酵培养基的组分米酒、米醋；
⑤将步骤②制得的溶液和步骤③制得的溶液加入到培养容器中，溶解培养基和糖蜜的容器用少量的弱碱性小分子还原水洗涤几次以保证各种成分都加进培养容器中，将步骤④称取的米酒、米醋加入到培养容器中，然后加弱碱性小分子还原水至培养基总体积的80％；
⑥将步骤(3)制得的复合微生物制剂菌种摇匀后，按重量百分比8％的接种量(相对于培养基总量)接种至培养容器中，量取菌种容器用少量的弱碱性小分子还原水洗涤几次以保证菌种全部加入培养容器中；
⑦接种后，在培养容器中加弱碱性小分子还原水至培养基总体积的100％，搅拌均匀后盖上盖子，28℃密闭发酵15天，得到用于生猪防疫的复合微生态菌剂。
实施例3
(1)菌种活化培养
将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别在18x180mm试管斜面中活化，活化三次，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化培养，然后再分别在18x180mm试管斜面中培养得嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌活化菌种；其中，斜面活化、平板纯化培养或斜面培养的条件为：嗜酸乳杆菌37℃厌氧培养3天；巴氏醋杆菌30℃好氧培养2天、酿酒酵母30℃好氧培养2天；枯草芽孢杆菌30℃好氧培养2天；沼泽红假单胞菌60瓦乌丝灯光照35℃厌氧培养5天；
(2)液体菌种培养
①将嗜酸乳杆菌活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，装液量90mL/100mL；之后置于37℃下兼性厌氧培养2天，得到嗜酸乳杆菌种子液；
②将巴氏醋杆菌活化菌种接种后于已灭菌的液体培养基中，摇床转速200r/min、温度30℃、装液量30mL/250mL培养1.5天，得到巴氏醋杆菌种子液；
③将酿酒酵母活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，摇床转速150r/min、温度28℃、装液量25mL/250mL培养2天，得到酿酒酵母种子液；
④将枯草芽孢杆菌活化菌种接种于已灭菌的液体培养基中，摇床转速200r/min、温度35℃、装液量30mL/250mL培养1.5天，得到枯草芽孢杆菌种子液；
⑤沼泽红假单胞菌活化菌种接种至已灭菌的液体培养基中，装液量90mL/100mL；60瓦乌丝灯光照30℃厌氧培养7天，得到沼泽红假单胞菌种子液；
(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的巴氏醋杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种至已灭菌的发酵培养基中，30℃摇床转速150r/min装液量30mL/250mL培养2天，然后再接种嗜酸乳杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液，30℃厌氧培养3天，得到复合菌种；其中，嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的质量比为5:5:4:3:3，总接种量为重量百分比10％；发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜8％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，弱碱性小分子还原水补足100％；
(4)成品培养
①将培养容器、配制培养基相关的容器清洗干净并用酸性氧化电位水(简称酸化消毒水)消毒；
②按照配比称取发酵培养基的组分氯化铵、氯化钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌、硫酸亚铁等加入容器1中，然后加入弱碱性小分子还原水，使其充分溶解；
③按照配比称取工业用废糖蜜加入容器2中，然后加入弱碱性小分子还原水，使其充分溶解；
④按照配比称取发酵培养基的组分米酒、米醋；
⑤将步骤②制得的溶液和步骤③制得的溶液加入到培养容器中，溶解培养基和糖蜜的容器用少量的弱碱性小分子还原水洗涤几次以保证各种成分都加进培养容器中，将步骤④称取的米酒、米醋加入到培养容器中，然后加弱碱性小分子还原水至培养基总体积的80％；
⑥将步骤(3)制得的复合微生物制剂菌种摇匀后，按重量百分比5％的接种量(相对于培养基总量)接种至培养容器中，量取菌种容器用少量的弱碱性小分子还原水洗涤几次以保证菌种全部加入培养容器中；
⑦接种后，在培养容器中加弱碱性小分子还原水至培养基总体积的100％，搅拌均匀后盖上盖子，30℃密闭发酵7天，得到用于生猪防疫的复合微生态菌剂。
效果实施例
试验在江西省赣州市安远县八戒王国进行，试验生猪选用体重30kg左右的杜、大、长三元杂交猪180头，随机分成试验组和对照组，试验组在乳猪刚出生尚未开口吃奶前，用实施例1制得的用于生猪防疫的复合微生态菌剂兑纯净水10倍稀释，将稀释液滴入乳猪口中，每天一次，连续三天，其中，第一天3毫升/头，第二天5毫升/头，第三天10毫升/头并连续一周；之后早晚两餐各用20毫升复合微生态菌剂兑水20质量倍拌料饲喂；同时在栏舍内部用复合微生态菌剂稀释液(微生态菌剂兑水50质量倍)对栏舍四围、地面和顶棚，带猪消毒(以地面湿透为准)，并对室外水沟，墙壁作同样处理，连续三天，每天一次，三天后每周一次。对照组按常规药物防治。
结果表明：实验组的生猪死亡率为7.9％，生猪发病率为3.5％；而对照组的生猪死亡率为11.9％，生猪发病率为10.3％。由此可见，复合微生态菌剂能够提高生猪的抵抗力，减少生猪的死亡率和发病率，具有明显的防疫效果。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂，其特征在于由嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和沼泽红假单胞菌(Rhodop seudanonaspalustris)的种子液按照质量比为5:5:4:3:3混合培养后，进一步发酵培养得到。
2.权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)菌种活化培养：将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别进行多次活化，得到嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌活化菌种；
(2)液体菌种培养
①将步骤(1)制得的嗜酸乳杆菌活化菌种接种于液体培养基中，37℃兼性厌氧培养2～3天，得到嗜酸乳杆菌种子液；
②将步骤(1)制得的巴氏醋杆菌活化菌种接种于液体培养基中，摇床转速200r/min、温度30℃培养1-2天，得到巴氏醋杆菌种子液；
③将步骤(1)制得的酿酒酵母活化菌种接种于液体培养基中，摇床转速150r/min、温度28℃培养2天，得到酿酒酵母种子液；
④将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌活化菌种接种于液体培养基中，摇床转速200r/min、温度35℃培养1～2天，得到枯草芽孢杆菌种子液；
⑤将步骤(1)制得的沼泽红假单胞菌活化菌种接种至液体培养基中，60瓦乌丝灯光照30～35℃厌氧培养5～7天，得到沼泽红假单胞菌种子液；
(3)复合菌种培养：将步骤(2)制得的巴氏醋杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种至发酵培养基中，30℃摇床转速150～200r/min培养1～2天，然后再接种嗜酸乳杆菌种子液和沼泽红假单胞菌种子液，30～35℃厌氧培养3～5天，得到复合菌种；其中，嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的质量比为5:5:4:3:3，总接种量为重量百分比10％；
(4)成品培养：将步骤(3)制得的复合菌种按重量百分比5～8％接种至发酵培养基中，28～30℃密闭发酵7～15天，得到用于生猪防疫的复合微生态菌剂，其中，该步骤发酵培养基不用灭菌。
3.根据权利要求2所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌的菌株分别为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6088、巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)CICC 20056、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC1251、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC24434和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonas palustris)CICC 23812。
4.根据权利要求2所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的多次活化的具体操作为：
将冷冻保藏的嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌分别进行三次斜面活化，然后再进行平板纯化培养，最后进行斜面培养，得到嗜酸乳杆菌、巴氏醋杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌活化菌种。
5.根据权利要求2所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于：
步骤(2)①所述的液体培养基每一升包含如下组分：
蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801mL、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、番茄汁20mL、土豆汁30mL、胡萝卜汁60mL、维生素C 2克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH6.8；
步骤(2)②所述的液体培养基每一升包含如下组分：
葡萄糖100.0克、酵母提取物10.0克、碳酸钙20.0克，弱碱性小分子还原水补至1000ml，pH6.8；
步骤(2)③所述的液体培养基每一升包含如下组分：
蔗糖40克、蛋白胨30克、磷酸二氢钾1克、氯化钠1克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH自然；
步骤(2)④所述的液体培养基每一升包含如下组分：
牛肉膏4.0克、蛋白胨3.8克、氯化钠3.3克、葡萄糖4.0克、磷酸二氢钾3.4克、硫酸镁0.2克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0；
步骤(2)⑤所述的液体培养基每一升包含如下组分：
酵母粉2克、氯化铵1克、磷酸氢二钾1克、碳酸氢钠3克、硫酸镁0.5克，弱碱性小分子还原水补至1000mL，pH7.0～7.2。
6.根据权利要求2所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于：
步骤(3)中所述的发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜5～8％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，弱碱性小分子还原水补足100％。
7.根据权利要求2所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂的制备方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的发酵培养基包含如下按质量百分比计的组分：工业用废糖蜜10％、米酒10％、米醋10％、氯化铵0.1％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％、弱碱性小分子还原水补足100％。
8.权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂在制备生猪防疫产品中的应用。
9.一种生猪防疫方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)在乳猪刚出生尚未开口吃奶前：权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂加10质量倍水稀释；将稀释液滴入乳猪口中，每天一次，连续三天；其中，第一天3毫升/头，第二天5毫升/头，第三天10毫升/头并连续一周；
(2)小猪(60斤以下)阶段：权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂用水稀释后每天早晚两餐拌料饲喂；每头生猪每天每餐用量为：20毫升复合微生态菌剂加20质量倍水稀释；
(3)中猪(60～120斤)阶段：权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂用水稀释后每天早晚两餐拌料饲喂；每头生猪每天每餐用量为：30毫升复合微生态菌剂加20质量倍水稀释；
(4)大猪(120斤以上)阶段：权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂用水稀释后每天早晚两餐拌料饲喂；每头生猪每天每餐用量为：50毫升复合微生态菌剂加20质量倍水稀释；
(5)无重大疫情时，权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂加50质量倍水稀释；采用稀释液对栏舍四围、地面和顶棚，带猪消毒，并对室外水沟，墙壁作同样处理，连续三天，每天一次，三天后每周一次；
(6)出现重大疫情：
除隔离或处理被感染猪外，对感染栏的处理：权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂加5质量倍水稀释后，对感染栏用稀释液进行高浓度带猪消毒，连续三天，每天两次；
对未感染栏的处理：权利要求1所述的用于生猪防疫的复合微生态菌剂加20质量倍水稀释后，对未感染栏用稀释液每天带猪消毒一次，疫情控制后，转入常规防疫方法。
CN202010093354.0A 2020-02-14 2020-02-14 一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用 Pending CN111281898A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010093354.0A CN111281898A (zh) 2020-02-14 2020-02-14 一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010093354.0A CN111281898A (zh) 2020-02-14 2020-02-14 一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111281898A true CN111281898A (zh) 2020-06-16

Family

ID=71025654

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010093354.0A Pending CN111281898A (zh) 2020-02-14 2020-02-14 一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111281898A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114381376A (zh) * 2021-11-19 2022-04-22 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种藻菌共培的培养基及其共培养方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102461735A (zh) * 2010-11-15 2012-05-23 黑龙江省农业科学院畜牧研究所 活性益生菌饲料添加剂
CN103444784A (zh) * 2013-08-23 2013-12-18 福州大用生物应用科技有限公司 一种用于生猪辅助防疫的复合微生态制剂

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102461735A (zh) * 2010-11-15 2012-05-23 黑龙江省农业科学院畜牧研究所 活性益生菌饲料添加剂
CN103444784A (zh) * 2013-08-23 2013-12-18 福州大用生物应用科技有限公司 一种用于生猪辅助防疫的复合微生态制剂

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114381376A (zh) * 2021-11-19 2022-04-22 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 一种藻菌共培的培养基及其共培养方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109251874B (zh) 一种益生菌制剂及其制备方法和应用
CN103484288B (zh) 提高药酒药效的方法及益生菌组合物
KR101029346B1 (ko) 악취가스 감소 및 항균효과를 갖는 복합미생물 발효액 및 그의 사용방법
CN101869184B (zh) 一种微生物饲料添加剂及其制备方法
CN102277325B (zh) 一株饲用粪肠球菌及其应用
CN102067941B (zh) 一种饲用复合微生物制剂的生产方法
CN111172077A (zh) 一种调节生猪肠道菌群的微生物制剂及制备方法
CN101857469B (zh) 三次连续发酵生产高尔夫球场草坪缓释生物有机肥制备工艺
CN1057563C (zh) 一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用
CN109182177A (zh) 一种复合益生菌除臭剂及其制备方法与应用
CN110982753A (zh) 凝结芽孢杆菌mes847、菌剂、鸡饲料、制备方法及应用
CN111802514A (zh) 一种微生物改良剂及其制备方法与应用
CN110881577A (zh) 一种防控非洲猪瘟的生物饲料及其制备方法
CN108103128A (zh) 一种用于治疗仔猪腹泻的乳酸菌素的制备方法
CN102356815A (zh) 一种以米糠为主要原料固态发酵生产微生态饲料的方法
CN114451486B (zh) 一种菌酶复合型饲料添加剂及其制备方法和应用
CN101836688B (zh) 一种不含抗生素的微生物发酵饲料的制备方法
CN103875922B (zh) 一种复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法
CN114874949A (zh) 一种丁酸梭菌、其发酵物、包含其的菌剂及动物饲料添加剂
CN102334602B (zh) 畜禽使用的生物活性复合高效饲料营养液制备方法
CN111281898A (zh) 一种用于生猪防疫的复合微生态菌剂及其制备方法与应用
CN111084155A (zh) 一种有效防控猪瘟的健康养殖方法
CN107373024A (zh) 动物饲料添加剂及其制备方法和应用
CN104920791B (zh) 一种高消化率发酵鱼粉及其制备方法
CN103190449B (zh) 一种枯草芽孢杆菌畜禽场用微生物空气消毒剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 510700 Room 101, No.3 workshop, No.9 Lanyu 4th Street, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province

Applicant after: Guangdong Zhongke Wukang Ecological Technology Co.,Ltd.

Address before: 510700 Room 101, No.3 workshop, No.9 Lanyu 4th Street, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province

Applicant before: Guangdong Zhongke Wukang Culture Technology Co.,Ltd.

CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Mo Yanhua

Inventor after: Huang Haihong

Inventor after: Yao Kang

Inventor after: Ma Guohua

Inventor before: Mo Yanhua

Inventor before: Yao Kang

Inventor before: Ma Guohua

Inventor before: Huang Haihong

RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200616