CN110507600A - 一种含细胞提取液的护肤精华液及该细胞提取液的制备方法 - Google Patents

一种含细胞提取液的护肤精华液及该细胞提取液的制备方法 Download PDF

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巩俊廷
孟丹丹
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Abstract

本发明公开了一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油、1,3‑丁二醇、山梨醇、汉生胶、卡波姆、银耳多糖、芦荟提取物、三乙醇胺、维生素E、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、细胞提取液、纯水；本发明还公开了护肤精华液中细胞提取液的制备方法；本发明制作生产的含细胞提取液的护肤精华液，相比传统的化学精华液更具有亲肤性，护肤精华液中细胞提取液可以保持皮肤自身的状态,使肌肤正常的代谢,对肌肤温和,无刺激性，细胞提取液中的细胞因子、细胞信号分子等可激活皮肤细胞各种信号通路，促使机体自身细胞的更新、生长，短期内就可达到淡化细纹，收缩毛孔，提亮肤色的效果。

Description

一种含细胞提取液的护肤精华液及该细胞提取液的制备方法
技术领域
本发明涉及护肤领域，具体是一种含细胞提取液的护肤精华液及该细胞提取液的制备方法。
背景技术
精华液是用于脸部的护肤品中的一种，含有较珍贵的功效成分，如植物提取物、神经酰胺、角鲨烷，它具有防衰老、抗皱、保湿、美白、去斑的功效。
但是现在大多数细胞类护肤精华液的生产，为了简化生产过程，降低成本，大多采用酶解的方式获得蛋白水解物，蛋白被降解，失去原本的生物活性，只能做为基础营养物质而无法充分发挥其引导肌肤自主更新的目的，基于此，我们提出一种含细胞提取液的护肤精华液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含细胞提取液的护肤精华液及该细胞提取液的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油2-11％、1,3-丁二醇2-11％、山梨醇2-11％、汉生胶0.01-0.1％、卡波姆0.05-0.5％、银耳多糖1-5％、芦荟提取物1-11％、三乙醇胺0.01-0.5％、维生素E 0.01-0.5％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1-0.5％、细胞提取液10-20％、纯水60-75％。
作为本发明进一步的方案：包括以下按照质量百分比的原料：甘油3-10％、1,3-丁二醇3-10％、山梨醇3-10％、汉生胶0.02-0.05％、卡波姆0.1-0.2％、银耳多糖1.5-4％、芦荟提取物2-10％、三乙醇胺0.1-0.4％、维生素E 0.1-0.4％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15-0.4％、细胞提取液12-18％、纯水65-70％。
作为本发明再进一步的方案：包括以下按照质量百分比的原料：甘油5％、1,3-丁二醇5％、山梨醇4％、汉生胶0.05％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物2％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15％、细胞提取液15％、纯水67％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
作为本发明再进一步的方案：步骤3)中，所述一次离心处理的转速为1000-2000r/min。
作为本发明再进一步的方案：步骤3)中，所述一次离心处理的时间为2-8min。
作为本发明再进一步的方案：步骤7)中，所述二次离心处理的转速为3000-5000r/min。
作为本发明再进一步的方案：步骤7)中，所述二次离心处理的时间为2-8min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明制作生产的含细胞提取液的护肤精华液，相比传统的化学精华液更具有亲肤性，经过处理得到的细胞提取液是是人工能够生产出的不需要活体动物的最接近于细胞生长环境的溶液，可以保持皮肤自身的状态,使肌肤正常的代谢,对肌肤温和,无刺激性，由于细胞提取液中成分复杂，各种细胞因子、氨基酸、寡肽、细胞信号因子，细胞因子、细胞信号分子等可激活皮肤细胞各种信号通路，促使机体自身细胞的更新、生长，短期内就可达到淡化细纹，收缩毛孔，提亮肤色的效果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油5％、1,3-丁二醇5％、山梨醇4％、汉生胶0.05％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物2％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15％、细胞提取液15％、纯水67％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例2
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油2％、1,3-丁二醇2％、山梨醇2％、汉生胶0.1％、卡波姆0.5％、银耳多糖5％、芦荟提取物11％、三乙醇胺0.5％、维生素E 0.5％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.5％、细胞提取液10％、纯水65.9％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1000rpm/2min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行3000rpm/2min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例3
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油11％、1,3-丁二醇11％、山梨醇3％、汉生胶0.02％、卡波姆0.05％、银耳多糖1％、芦荟提取物1％、三乙醇胺0.4％、维生素E 0.4％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％、细胞提取液12％、纯水60.03％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行2000rpm/8min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行5000rpm/8min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例4
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油10％、1,3-丁二醇3％、山梨醇3％、汉生胶0.01％、卡波姆0.2％、银耳多糖4％、芦荟提取物1％、三乙醇胺0.01％、维生素E 0.01％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.4％、细胞提取液18％、纯水60.37％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例5
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3％、1,3-丁二醇10％、山梨醇3％、汉生胶0.1％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物1％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％、细胞提取液20％、纯水61％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例6
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3％、1,3-丁二醇5％、山梨醇10％、汉生胶0.1％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物10％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％、细胞提取液10％、纯水60％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例7
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3％、1,3-丁二醇7％、山梨醇11％、汉生胶0.1％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物2％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％、细胞提取液10％、纯水65％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例8
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3％、1,3-丁二醇2％、山梨醇10％、汉生胶0.1％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物3％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％、细胞提取液10％、纯水70％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实施例9
一种含细胞提取液的护肤精华液，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3％、1,3-丁二醇2％、山梨醇5％、汉生胶0.1％、卡波姆0.1％、银耳多糖1.5％、芦荟提取物3％、三乙醇胺0.1％、维生素E 0.1％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1％、细胞提取液10％、纯水75％。
所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，步骤如下：
1)在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2)将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液(PBS)+0.25％胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2％的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3)组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行1500rpm/5min的一次离心处理；
4)收集的细胞用RPM1640+10％金源康胎牛血清(FBS)重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5)选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6)细胞消化后用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬、计数，洗涤一至二次；
7)取准备好的磷酸盐缓冲液(PBS)+20％甘油，按照1～5*107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行4000rpm/5min的二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
实验数据
本实验数据采用多探头皮肤测试系统测得实验数据，该测试6人在使用产品前后测得的水分含量和皮肤弹性均有不同程度的提升，进一步紧致皮肤细化纹理。
本发明制作生产的含细胞提取液的护肤精华液，相比传统的化学精华液更具有亲肤性，经过处理得到的细胞提取液是是人工能够生产出的不需要活体动物的最接近于细胞生长环境的溶液，可以保持皮肤自身的状态,使肌肤正常的代谢,对肌肤温和,无刺激性，由于细胞提取液中成分复杂，各种细胞因子、氨基酸、寡肽、细胞信号因子，细胞因子、细胞信号分子等可激活皮肤细胞各种信号通路，促使机体自身细胞的更新、生长，短期内就可达到淡化细纹，收缩毛孔，提亮肤色的效果。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (8)

1.一种含细胞提取液的护肤精华液，其特征在于，包括以下按照质量百分比的原料：甘油2-11%、1,3-丁二醇2-11%、山梨醇2-11%、汉生胶0.01-0.1%、卡波姆0.05-0.5%、银耳多糖1-5%、芦荟提取物1-11%、三乙醇胺0.01-0.5%、维生素E 0.01-0.5%、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.1-0.5%、细胞提取液10-20%、纯水60-75%。
2.根据权利要求1所述的含细胞提取液的护肤精华液，其特征在于，包括以下按照质量百分比的原料：甘油3-10%、1,3-丁二醇3-10%、山梨醇3-10%、汉生胶0.02-0.05%、卡波姆0.1-0.2%、银耳多糖1.5-4%、芦荟提取物2-10%、三乙醇胺0.1-0.4%、维生素E 0.1-0.4%、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15-0.4%、细胞提取液12-18%、纯水65-70%。
3.根据权利要求2所述的含细胞提取液的护肤精华液，其特征在于，包括以下按照质量百分比的原料：甘油5%、1,3-丁二醇5%、山梨醇4%、汉生胶0.05%、卡波姆0.1%、银耳多糖1.5%、芦荟提取物2%、三乙醇胺0.1%、维生素E 0.1%、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15%、细胞提取液15%、纯水67%。
4.一种如权利要求1-3任一所述含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤如下：
1）在无菌环境下将去除血管和包膜组织的新鲜动物器官用手术剪将剩余组织剪碎；
2）将剪碎的组织块放入离心管中，用体积两倍的37℃预温的磷酸盐缓冲液+0.25% 胰蛋白酶进行消化2min，液体浑浊时将组织消化液吸出转入另一离心管，加入2%的血清和胰蛋白酶中；未消化完成的组织块继续加入胰蛋白酶消化液进行消化，直至组织块全部消化成组织消化液；
3）组织消化液经细胞筛过滤去除大块细胞团，然后进行一次离心处理；
4）收集的细胞用RPM1640+10% 金源康胎牛血清重悬、计数，转入细胞瓶培养；
5）选取可以传代的细胞进行扩大培养，达到一定数量后用胰蛋白酶消化、收集细胞，开始细胞质提取操作；
6）细胞消化后用磷酸盐缓冲液重悬、计数，洗涤一至二次；
7）取准备好的磷酸盐缓冲液+20%甘油，按照1~5 *107cells/ml的浓度对细胞进行重悬，并放入-80℃冰箱快速冷冻，1h后取出融化，重复三次后，进行二次离心处理，取上清，得细胞精华，即为细胞提取液。
5.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述一次离心处理的转速为1000-2000r/min。
6.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述一次离心处理的时间为2-8min。
7.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤7）中，所述二次离心处理的转速为3000-5000r/min。
8.根据权利要求4所述的含细胞提取液的护肤精华液中的细胞提取液的制备方法，其特征在于，步骤7）中，所述二次离心处理的时间为2-8min。
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