CN110498863B - 薜荔叶多糖及其制备方法和在制备抗补体药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属中药领域，涉及薜荔叶中五个均一多糖及其制备方法和在制备抗补体药物中的用途。本发明从清热解毒中药薜荔叶中分离得到五个均一多糖BL‑PS1、BL‑PS3、BL‑PS4、BL‑PS5和BL‑PS6，经实验证实这些均一多糖对补体激活的经典途径和旁路途径均有显著的抑制作用，可进一步作为活性成分，制备新型抗补体药物。

Description

薜荔叶多糖及其制备方法和在制备抗补体药物中的用途
技术领域
本发明属中药领域，涉及多糖及其制备方法和制药中的用途；具体涉及薜荔叶中五个天然均一多糖及其制备方法和在制备抗补体药物中的用途。
背景技术
现有技术公开了补体系统是是人体免疫系统的重要组成部分，其正常激活在消灭外来微生物、清除机体内损伤或死亡的细胞和组织、维持机体的平衡中起着重要的作用。然而该系统的过度激活会引起人体免疫系统的过度反应，造成人体自身正常组织的损伤，如类风湿性关节炎、老年性痴呆、系统性红斑狼疮(SLE)以及器官移植后的排斥反应等；有研究显示，在多器官功能衰竭综合症，如缺血性再灌注、急性心肌梗死、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)等急性疾病中，补体的过度激活也起了重要作用。
目前临床上广泛使用的糖皮质激素、环磷酰胺、甲胺蝶吟等免疫抑制剂虽然对某些与补体过度激活相关的疾病有一定治疗作用，但由于该类药物并非专一的补体抑制剂，长期应用存在降低机体的防御机能，导致抗感染能力下降，易继发感染和使潜在病灶扩散，产生多种并发症和副作用等缺陷，因此临床上急需高效、低毒、专一的新型补体抑制剂。
自然界中广泛存在抗补体作用的活性成分，我国中药资源丰富,有许多中药对免疫系统有明显的调节作用,是寻找抗补体类药物前体的宝贵资源。据资料记载，在抗击SARS期间，中医药对SARS的防治取得显著效果，因此本申请的发明人试图加强对相关中药的抗补体活性成分的研究，为补体相关的疾病的治疗提供物质基础。
薜荔叶为被子植物门桑科榕属薜荔(Ficus pumila)的叶，记载于《本草拾遗》，具有祛风、利湿、活血、解毒的功效。常治风湿痹痛、泻痢、淋病、跌打损伤、痈肿疮疖等。薜荔叶粗多糖对于补体激活的经典、旁路途径都有明显的抑制作用，CH50和AP50分别为78±5μg/mL、110±9μg/mL，但迄今尚未见有对薜荔叶中抗补体活性均一多糖分离制备的报道。
发明内容
本发明的目的是提供天然药物中具有抗补体作用的活性成分，涉及薜荔叶多糖及其制备方法和在制药中的用途，尤其涉及五个薜荔叶均一多糖(BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6)及其制备方法和在制备补体抑制药物中的用途。
本发明对常用清热解毒中药薜荔叶的水提取物进行分离获得五个均一多糖(BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6)，经体外实验证实该五个多糖具有显著的补体抑制活性，可作为抗补体药物进行开发研制。
本发明中，所述的中药薜荔叶是榕属植物薜荔的叶。
本发明所述的薜荔叶多糖BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6的结构特征描述如下：
(1)BL-PS1是由两种单糖组成的多糖，分子量约为11.4KDa；总糖含量为98.01％；蛋白含量为1.07％；糖醛酸含量为1.53％；不含硫酸基。单糖摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖＝0.70:0.30。甲基化结果显示其结构中含1,3-连接阿拉伯糖、1,3,5-连接阿拉伯糖、末端连接阿拉伯糖、1,2,4-连接半乳糖、1,4-连接半乳糖，摩尔比为0.356:0.098:0.170:0.124:0.215。
(2)BL-PS3是由三种单糖组成的多糖，分子量约为20.69KDa；总糖含量为94.85％；蛋白含量为3.25％；糖醛酸含量为4.29％；不含硫酸基。单糖摩尔比为果糖:葡萄糖:半乳糖＝0.16:0.47:0.37。甲基化结果显示其结构中含：1,4-连接的半乳糖、1,4-连接葡萄糖、末端连接葡萄糖、1,2,6-连接果糖，摩尔比为0.34:0.32:0.17:0.17。
(3)BL-PS4是由两种单糖组成的多糖，分子量约为18.90KDa；总糖含量为98.64％；蛋白含量为2.26％；糖醛酸含量为2.44％；不含硫酸基。单糖摩尔比阿拉伯糖:半乳糖＝0.34:0.66。甲基化结果显示其结构中含：1,5-连接阿拉伯糖、末端连接阿拉伯糖、1,2-半乳糖和1,2,4-连接半乳糖，摩尔比为0.25:0.12:0.52:0.12。
(4)BL-PS5是由两种单糖组成的多糖，分子量约为12.79KDa；总糖含量为95.17％；蛋白含量为1.16％；糖醛酸含量为0.85％；不含硫酸基。单糖摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖＝0.24:0.76。甲基化结果显示其结构中含：1,5-连接阿拉伯糖、末端连接阿拉伯糖、1,2-连接半乳糖和1,2,4-连接半乳糖，摩尔比为0.21：0.20:0.34:0.25。
(5)BL-PS6是由五种单糖组成的多糖，分子量约为70.31KDa；总糖含量为95.49％；蛋白含量为1.03％；糖醛酸含量为23.43％；不含硫酸基。单糖摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:半乳糖醛酸:鼠李糖＝0:10:0.20:0.27:0.26:0.17。甲基化结果显示其结构中含：1,3-连接阿拉伯糖、1,4-连接半乳糖醛酸、1,4-连接葡萄糖、1,3-连接葡萄糖、1,2,4-连接鼠李糖，摩尔比为0.089:0.173:0.169:0.201:0.176。
本发明所述的薜荔叶多糖(BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6)通过下述方法制备：
薜荔叶以95％乙醇提取，滤过，残渣烘干后，用水溶液提取，提取液经滤过，浓缩，加入4倍体积的95％乙醇，静置，离心去上清，沉淀以水复溶，再以三氯醋酸去除蛋白，离心，上清液调至中性，浓缩，透析，冷冻干燥得粗多糖。粗多糖加蒸馏水溶解，用DEAE-cellulose色谱柱初步分离。以蒸馏水、0.1、0.4、0.8、1.6和2.0mol/L的NaCl溶液洗脱，收集各流份，浓缩，透析及冻干得6个次级组分：WATER-EP-BL、0.1M-EP-BL、0.4M-EP-BL、0.8M-EP-BL、1.6M-EP-BL及2.0M-EP-BL。
各个次级组分加入适量流动相溶解，离心，上清液用SephacrylTM S300(截留分子量2KDa-400KDa)凝胶色谱进行分离，收集各流份。隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值，合并流份，浓缩及冷冻干燥得到均一多糖。
经体外试验证实，薜荔叶多糖BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6对补体经典和旁路途径激活所引发的细胞溶血均有明显的抑制，即有明显的抗补体作用。
BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6的CH50值(经典途径50％抑制溶血所需供试品的浓度)分别为296±45μg/mL、247±22μg/mL、310±87μg/mL、197±22μg/mL和86±16μg/mL；AP50值(旁路途径50％抑制溶血所需供试品的浓度)分别为435±59μg/mL、428±35μg/mL、401±65μg/mL、383±87μg/mL和182±41μg/mL。
本发明对常用清热解毒中药薜荔叶的水提取物分离获得五个均一多糖(BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6)，经体外实验证实该五个薜荔叶多糖具有显著的补体抑制活性，可进一步制备抗补体药物。
附图说明
图1是BL-PS1(A)、BL-PS3(B)的HPGPC色谱图，
其中显示了，TSK-GEL GMPWXL凝胶柱(300×7.6mm)；洗脱液：0.1mol/L NaCl；流速：0.8ml/min。
图2是BL-PS4(A)、BL-PS5(B)和BL-PS6(C)的HPGPC色谱图，
其中显示了，TSK-GEL GMPWXL凝胶柱(300×7.6mm)；洗脱液：0.1mol/L NaCl；流速：0.8ml/min。
具体实施方式
实施例1制备薜荔叶多糖BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6
薜荔叶药材3Kg粉碎，以95％乙醇提取，滤过，药渣用水溶液提取3次，浓缩，离心，上清液加入4倍体积的95％乙醇，静置，离心去上清，沉淀以水复溶，减压回收，除去乙醇；复溶液再以三氯醋酸去除游离蛋白，离心，上清液调至中性，透析，浓缩，冷冻干燥即得粗多糖。粗多糖100g加蒸馏水溶解，离心，上清液用DEAE-cellulose色谱柱进行初步分离。以蒸馏水、0.1、0.4、0.8、1.6和2.0mol/L的NaCl溶液洗脱，洗脱体积大于2倍柱体积(约3L)，流速为10mL/min，收集各流份，隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值。根据糖显色反应并结合紫外检测的结果，合并流分，浓缩，透析及冷冻干燥得6个次级组分：WATER-EP-BL、0.1M-EP-BL、0.4M-EP-BL、0.8M-EP-BL、1.6M-EP-BL及2.0M-EP-BL；
将WATER-EP-BL(2.0g)加蒸馏水溶解，离心，上清液分次用Sephacryl TMS300凝胶色谱(截留分子量2KDa-400KDa)分离。0.1mol/L NaCl溶液洗脱，流速为0.8mL/min，收集各流分。隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值，根据检测结果合并相同流分，浓缩、透析及冷冻干燥得均一多糖BL-PS1(70mg)；
将0.4M-EP-BL(2.7g)加蒸馏水溶解，离心，上清液分次用Sephacryl TM S300凝胶色谱分离。0.1mol/L NaCl溶液洗脱，流速为0.8mL/min，收集各流分。隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值，根据检测结果合并相同流分，浓缩、透析及冷冻干燥得均一多糖BL-PS3(90mg)；
将0.8M-EP-BL(1.1g)加蒸馏水溶解，离心，上清液分次用Sephacryl TM S300凝胶色谱分离。0.1mol/L NaCl溶液洗脱，流速为0.8mL/min，收集各流分。隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值，根据检测结果合并相同流分，浓缩、透析及冷冻干燥得均一多糖BL-PS4(50mg)；
将1.6M-EP-BL(1.5g)加蒸馏水溶解，离心，上清液分次用Sephacryl TM S300凝胶色谱分离。0.1mol/L NaCl溶液洗脱，流速为0.8mL/min，收集各流分。隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值，根据检测结果合并相同流分，浓缩、透析及冷冻干燥得均一多糖BL-PS5(60mg)；
将2.0M-EP-BL(1.4g)加蒸馏水溶解，离心，上清液分次用Sephacryl TM S300凝胶色谱分离。0.1mol/L NaCl溶液洗脱，流速为0.8mL/min，收集各流分。隔管检测490nm(硫酸-苯酚法显色后)下的吸光度值，根据检测结果合并相同流分，浓缩、透析及冷冻干燥得均一多糖BL-PS6(30mg)；
经高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)检测BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6均为均一成分。
实施例2薜荔叶多糖(BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6)的结构表征
(1)分子量的测定
采用18角度激光光散射凝胶色谱系统对分子量进行检测，基本原理是均一多糖通过凝胶渗透色谱，形成对称的色谱峰，经18角度激光照射后形成光散射，光散射信号直接与分子量大小相关。数据用Astar(version 5.3.1)软件进行计算直接给出分子量；
实验方法：准确称取均一多糖5.0mg，配置成10mg/ml的溶液，进样前过0.45微米的微孔滤膜。色谱条件：流速0.5mg/ml，进样量20μL，0.1％的NaCl溶液为流动相，柱温25℃，激光波长设置为685nm，折光率参数(dn/dc)确定为0.138cm3/g；
(2)总糖、糖醛酸、蛋白及硫酸基含量测定
硫酸-苯酚法测定总糖含量：BL-PS1总糖含量为98.01％；BL-PS3总糖含量为94.85％；BL-PS4总糖含量为98.64％；BL-PS5总糖含量为95.17％；BL-PS6总糖含量为95.49％；
间羟联苯法测定检测糖醛酸含量：BL-PS1的糖醛酸含量为1.53％；BL-PS3的糖醛酸含量为4.29％；BL-PS4的糖醛酸含量为2.44％；BL-PS5的糖醛酸含量为0.85％；BL-PS6的糖醛酸含量为23.43％；
考马斯亮蓝法测定蛋白含量：BL-PS2的蛋白含量为1.07％；BL-PS3的蛋白含量为3.25％；BL-PS4的蛋白含量为2.26％；BL-PS5的蛋白含量为1.16％；BL-PS6的蛋白含量为1.03％；
BaCl2比浊法测定BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6均不含硫酸基；
(3)单糖组成分析
BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5和BL-PS6分别经2mol/L TFA于110℃全水解得到的产物，先后进行PMP衍生化后，进行液相分析；
BL-PS1是由两种单糖组成的多糖，单糖摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖＝0.70:0.30；
BL-PS3是由三种单糖组成的多糖，单糖摩尔比为果糖:葡萄糖:半乳糖＝0.16:0.47:0.37；
BL-PS4是由两种单糖组成的多糖，单糖摩尔比阿拉伯糖:半乳糖＝0.34:0.66。
BL-PS5是由两种单糖组成的多糖，单糖摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖＝0.24:0.76；
BL-PS6是由五种单糖组成的多糖，单糖摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:半乳糖醛酸:鼠李糖＝0:10:0.20:0.27:0.26:0.17；
(4)甲基化分析
参照文献方法(Needs PW,Selvendran RR.Avoiding oxidative degradationduring sodium hydroxyl/dimethyl-iodide mediated carbohydrate methylation indimethyl sulfoxide.Carbohydr Res.1993,245:1-10)分别对多糖进行甲基化，甲基化后的产物用90％甲酸解聚，2mol/L TFA全水解，NaBH4还原和醋酐乙酰化制成部分甲基化的阿尔迪醇乙酸酯衍生物，然后进行GC-MS分析；
结合标准图谱判断：
BL-PS1甲基化结果显示其结构中含1,3-连接阿拉伯糖、1,3,5-连接阿拉伯糖、末端连接阿拉伯糖、1,2,4-连接半乳糖、1,4-连接半乳糖，摩尔比为0.356:0.098:0.170:0.124:0.215；
BL-PS3甲基化结果显示其结构中含：1,4-连接的半乳糖、1,4-连接葡萄糖、末端连接葡萄糖、1,2,6-连接果糖，摩尔比为0.34:0.32:0.17:0.17；
BL-PS4甲基化结果显示其结构中含：1,5-连接阿拉伯糖、末端连接阿拉伯糖、1,2-半乳糖和1,2,4-连接半乳糖，摩尔比为0.25:0.12:0.52:0.12；
BL-PS5甲基化结果显示其结构中含：1,5-连接阿拉伯糖、末端连接阿拉伯糖、1,2-连接半乳糖和1,2,4-连接半乳糖，摩尔比为0.21:0.20:0.34:0.25；
BL-PS6甲基化结果显示其结构中含：1,3-连接阿拉伯糖、1,4-连接半乳糖醛酸、1,4-连接葡萄糖、1,3-连接葡萄糖、1,2,4-连接鼠李糖，摩尔比为0.089:0.173:0.169:0.201:0.176。
实施例3经典途径补体抑制试验
取3个月龄豚鼠的血清，以VBS2+缓冲液(巴比妥缓冲液，pH＝7.4，含0.5mMMg2+和0.15mM Ca2+)稀释为1:100，作为本次经典途径的补体来源；将兔抗羊红细胞的抗体以VBS2+缓冲液稀释为1:1000作为溶血素；保存于Alsever液中的羊红细胞(SRBC)配置成2％SRBC。精密称量多糖3mg，加入VBS2+缓冲液溶解，对倍稀释成8个浓度，不同浓度的多糖溶液200μL与已经稀释到1:100的补体200μL在37℃预孵育10min后，依次加入100μL溶血素(1:1000)和100μL 2％SRBC，在37℃水浴30min后放入低温高速离心机，在5000rpm、4℃条件下离心10min。每管取200μL上清于96孔板中，在405nm测定吸光度；实验同时设置多糖对照组(200μL相应浓度的多糖加400μL VBS2+缓冲液)、补体对照组(以200μL VBS2+缓冲液代替多糖)和全溶血组(100μL 2％SRBC溶于500μL三蒸水中)，将各浓度的多糖组吸光度值扣除相应多糖对照组吸光度值后计算溶血抑制率；以多糖浓度的对数作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图，得到的拟合曲线计算50％抑制溶血所需供试品的浓度(CH50值)；以肝素作为阳性对照药，结果显示五个均一多糖对补体经典途径激活都有显著的抑制活性(如表1所示)。
实施例4旁路途径补体抑制试验
取健康成年男性志愿者血清，以VBS-Mg-EGTA缓冲液(巴比妥缓冲液，pH＝7.4，含5mM Mg2+和8mM EGTA)稀释为1:8，作为旁路途径的补体来源；保存于3.8％枸橼酸钠溶液的兔红细胞以VBS-Mg-EGTA缓冲液配置成0.5％兔红细胞；精密称量多糖约3mg，加入VBS-Mg-EGTA缓冲液，对倍稀释成8个浓度，不同浓度的多糖溶液150μL与1:8的补体150μL在37℃预孵育10min后，加入200μL 0.5％兔红细胞，在37℃水浴30min后放入低温高速离心机，在5000rpm、4℃条件下离心10min。每管取200μL上清于96孔板中，在405nm测定吸光度。实验同时设置多糖对照组(150μL相应浓度的多糖溶液加350μL VBS-Mg-EGTA缓冲液)、补体对照组(以150μL VBS-Mg-EGTA缓冲液代替多糖溶液)和全溶血组(200μL 0.5％兔红细胞溶于300μL三蒸水中)，将各浓度的多糖组吸光度值扣除相应多糖对照组吸光度值后计算溶血抑制率；以多糖浓度的对数作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图，得到的拟合曲线计算50％抑制溶血所需供试品的浓度(AP50值)；以肝素作为阳性对照药，结果显示五个均一多糖均有较好抑制补体旁路途径激活所导致的细胞溶血(如表1所示)。
表1五种薜荔叶多糖对补体激活的抑制作用
Figure BDA0001664093210000081
CH50和AP50值表达为：平均值±SD(n＝3)。

Claims (2)

1.薜荔叶多糖在制备补体抑制药物中的用途：所述的薜荔叶多糖是BL-PS1、BL-PS3、BL-PS4、BL-PS5或BL-PS6，分别具有下述结构特征：
（1）BL-PS1是由两种单糖组成的多糖，分子量为11.4 KDa；总糖含量为98.01%；蛋白含量为1.07 %；糖醛酸含量为1.53 %；不含硫酸基，单糖摩尔比为阿拉伯糖：半乳糖= 0.70:0.30；
（2）BL-PS3是由三种单糖组成的多糖，分子量为20.69 KDa；总糖含量为94.85%；蛋白含量为3.25 %；糖醛酸含量为4.29 %；不含硫酸基，单糖摩尔比为果糖：葡萄糖：半乳糖=0.16:0.47:0.37；
（3）BL-PS4是由两种单糖组成的多糖，分子量为18.90 KDa；总糖含量为98.64 %；蛋白含量为2.26 %；糖醛酸含量为2.44%；不含硫酸基，单糖摩尔比为 阿拉伯糖：半乳糖=0.34:0.66；
（4）BL-PS5是由两种单糖组成的多糖，分子量为12.79 KDa；总糖含量为95.17%；蛋白含量为1.16 %；糖醛酸含量为0.85 %；不含硫酸基，单糖摩尔比为阿拉伯糖：半乳糖=0.24:0.76；
（5）BL-PS6是由五种单糖组成的多糖，分子量为70.31 KDa；总糖含量为95.49 %；蛋白含量为1.03 %；糖醛酸含量为23.43%；不含硫酸基；单糖摩尔比为阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖：半乳糖醛酸：鼠李糖=0:10:0.20:0.27:0.26:0.17。
2.权利要求1所述的用途，其特征是，所述的薜荔叶多糖通过以下步骤制备：
薜荔叶以乙醇提取，滤过，药渣以热水提取，滤过，浓缩，离心，上清液加入适量乙醇，乙醇终浓度70 %~80 %，静置，离心去上清，沉淀以水复溶，去游离蛋白，得粗多糖；粗多糖加水溶解，用DEAE-cellulose色谱柱进行初步分离，依次以蒸馏水、0.1、0.4、0.8、1.6和2.0mol/L的NaCl溶液洗脱，根据糖显色反应和紫外检测结果合并相同的多糖组分，其中的蒸馏水、0.4、0.8、1.6和2.0 mol/L的NaCl溶液洗脱组分，加蒸馏水溶解，分别经截留分子量2KDa-400 KDa的凝胶色谱分离，以0.1 mol/L的NaCl溶液洗脱，根据糖显色反应和紫外检测结果合并相同的组分，并进行抗补体活性检测，最终得到所述的薜荔叶多糖，该薜荔叶多糖为抗补体活性均一多糖。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6390505A (ja) * 1986-10-03 1988-04-21 Tsumura & Co 新規な多糖体
CN101240038A (zh) * 2008-01-21 2008-08-13 南昌大学 采用水萃取法从薜荔籽中提取优质低酯果胶的方法
CN102653568A (zh) * 2012-05-28 2012-09-05 上海中医药大学 一种蒲公英均一多糖及其制备方法和用途
CN103626880A (zh) * 2012-08-24 2014-03-12 复旦大学 夏枯草多糖及其制备方法和用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6390505A (ja) * 1986-10-03 1988-04-21 Tsumura & Co 新規な多糖体
CN101240038A (zh) * 2008-01-21 2008-08-13 南昌大学 采用水萃取法从薜荔籽中提取优质低酯果胶的方法
CN102653568A (zh) * 2012-05-28 2012-09-05 上海中医药大学 一种蒲公英均一多糖及其制备方法和用途
CN103626880A (zh) * 2012-08-24 2014-03-12 复旦大学 夏枯草多糖及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Beneficial effects of Houttuynia cordata polysaccharides on "two-hit" acute lung injury and endotoxic fever in rats associated with anti-complementary activities";Yan Lu等;《Acta Pharmaceutica Sinica B》;20171208;第8卷(第2期);第218-227页 *
"Hypoglycemic effect and mechanism of a pectic polysaccharide with hexenuronic acid from the fruits of Ficus pumila L.in C57BL/KsJdb/db mice";Jianjun Wu等;《Carbohydrate Polymers》;20170914;第178卷;第209-220页 *
"天然产物中的抗补体活性成分";徐晗 等;《中国天然药物》;20070920;第5卷(第5期);第322-332页 *
"薜荔多糖的提取方法及含量测定";李彩君 等;《中国医药导报》;20080325(第9期);第39-40页 *
"薜荔果多糖对小白鼠免疫功能影响的探讨";鄂少廷 等;《武汉医学院学报》;19800828(第4期);第13-17页 *
"薜荔果多糖抗肿瘤作用的实验研究";空军汉口医院肿瘤防治小组 等;《新医学》;19780630;第9卷(第6期);第261-263页 *
"补体抑制活性马勃多糖的纯化及结构研究";夏龙;《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》;20160815(第8期);第E057-134页 *

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