CN110494140A - 用于自闭症谱系障碍药物治疗的方法 - Google Patents

Abstract

本文公开了抗嘌呤能药物的组合物及其用于治疗有需要的患者中的认知发育障碍和自闭症谱系障碍(ASD)的方法。

Description

用于自闭症谱系障碍药物治疗的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年2月9日提交的美国临时申请号62/457,120的权益，其通过引用以其全文并入本文。

背景技术

尽管据CDC估计，在美国每68名儿童中就有1名患有自闭症谱系障碍(ASD)，但对于该疾病一直缺乏分子层面的认识和治疗。在100％携带突变的儿童中，并非单独的基因或拷贝数变异与ASD相关，非单独DNA突变占所有ASD的1-2％以上。虽然特定的环境因素也被证明会增加ASD的风险，但并无ASD患儿具有所有已知的遗传风险因素，或者暴露于所有相同的环境诱因。此外，尚未鉴定出存在于所有ASD患者中的单独的化学、解剖或生理学生物标志物。

发明内容

对于鉴定作为ASD症状基础的一般生物过程，以及在不考虑已知的遗传或环境风险因素的情况下有效治疗ASD患者病症的治疗剂类别存在需要。本公开内容通过治疗ASD和认知发育障碍的化合物和组合物弥补了这种缺陷。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，其量足以使所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约30μM的范围内维持21天或更久。在一个实施方案中，所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约25μM的范围内维持21天或更久。在一些实施方案中，所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持21天或更久。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持28天或更久。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持45天或更久。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物血浆水平维持在约5μM至约15μM的范围内。在一些实施方案中，所述施用发生两次或更多次。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物静脉内施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物口服、皮下、肌肉内、吸入、皮肤或经皮施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物不静脉内施用。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，其量足以使所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约30μM维持至少约21天，其中所述抗嘌呤能药物不静脉内施用。在一些实施方案中，所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约15μM的范围内维持21天或更久。在一些实施方案中，所述施用选自口服、皮下、肌肉内、直肠、吸入、雾化、皮肤和经皮的。在一些实施方案中，所述施用是皮下的。在一些实施方案中，所述施用是口服的。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物血浆水平维持在约5μM至约15μM。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，其量足以使所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约30μM维持至少约21天，其中所述抗嘌呤能药物以两个或更多个剂量施用。在一些实施方案中，所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约15μM的范围内维持21天或更久。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以三个或更多个剂量施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物血浆水平维持在约5μM至约15μM。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的剂量静脉内施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的剂量口服、皮下、肌肉内、吸入、皮肤或经皮施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的剂量不静脉内施用。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，在所述施用后的一个或多个时间点测试所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平，评价来自所述一个或多个时间点的所述抗嘌呤能药物血浆水平以确定针对所述受试者的治疗方案，其量足以实现约1μM至约30μM的抗嘌呤能药物血浆水平。在一些实施方案中，针对所述受试者的治疗方案的量足以实现约1μM至约15μM的抗嘌呤能药物血浆水平。在一些实施方案中，针对所述受试者的治疗方案的量足以实现约5μM至约15μM的抗嘌呤能药物血浆水平。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向受试者施用抗嘌呤能药物的一个或多个剂量，其量足以使血浆水平在约1μM至约30μM维持21天或更久。在一些实施方案中，向所述受试者施用所述抗嘌呤能药物的一个或多个剂量，其量足以使血浆水平在约1μM至约30μM维持40天或更久。在一些实施方案中，周期性地评价所述血浆水平，如每5天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括以第一剂量向所述受试者施用抗嘌呤能药物，然后进行10-40天的治疗假期，然后施用所述抗嘌呤能药物的第二剂量。在一些实施方案中，所述第一剂量在约10mg/kg至约30mg/kg的范围内。在一些实施方案中，所述第二剂量在约10mg/kg至约30mg/kg的范围内。在一些实施方案中，所述第一剂量在约400mg/m²至约600mg/m²的范围内。在一些实施方案中，所述第二剂量在约400mg/m²至约600mg/m²的范围内。在一些实施方案中，所述治疗假期在约12天至约20天的范围内。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在第二剂量后10-60天的治疗假期，然后是第三剂量。在一些实施方案中，所述第二剂量和所述第三剂量是相同的。在一些实施方案中，所述第三剂量小于所述第二剂量。在一些实施方案中，所述第三剂量小于所述第二剂量，并且在约10mg/kg至约30mg/kg的范围内。在一些实施方案中，所述第三剂量小于所述第二剂量，并且在约400mg/m²至约600mg/m²的范围内。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，其中所述治疗包括向所述受试者施用大于20mg/kg的抗嘌呤能药物的剂量。在一些实施方案中，向所述受试者施用约21mg/kg至约40mg/kg的抗嘌呤能药物的剂量。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以在施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.3mg/dL以下的量施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以在施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.0mg/dL以下的量施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以在施用后将所述受试者的血清转氨酶水平维持在40U/L以下的量施用。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，其中所述治疗包括向所述受试者施用大于300mg/m²的抗嘌呤能药物的剂量。在一些实施方案中，向所述受试者施用约350mg/m²至约600mg/m²的抗嘌呤能药物的剂量。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以在施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.3mg/dL以下的量施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以在施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.0mg/dL以下的量施用。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以在施用后将所述受试者的血清转氨酶水平维持在40U/L以下的量施用。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括以小于20mg/kg的第一剂量向所述受试者施用抗嘌呤能药物，然后是2-20天的治疗假期，然后施用抗嘌呤能药物的第二剂量。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的第一剂量选自约1mg/kg至约19mg/kg。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的第二剂量选自约1mg/kg至约19mg/kg。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以使受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约15μM的范围内维持21天至约50天的量施用。

在一些方面，本发明提供了治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括以小于350mg/m²的第一剂量向所述受试者施用抗嘌呤能药物，然后是2-20天的治疗假期，然后施用抗嘌呤能药物的第二剂量。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的第一剂量选自约50mg/m²至约300mg/m²。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物的第二剂量选自约50mg/m²至约600mg/m²。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物以足以使所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约25μM的范围内维持21天至约50天的量施用。

在一些方面，本发明提供了鉴定将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述自闭症谱系障碍不是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式。在一些实施方案中，所述方法进一步包括通过响应于所述鉴定步骤施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

在一些方面，本发明提供了鉴定将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中自闭症谱系障碍是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式。在一些实施方案中，所述方法进一步包括通过响应于所述鉴定步骤施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

在一些方面，本发明提供了鉴定将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述受试者具有胃肠疾病或病症的一种或多种症状。在一些实施方案中，所述方法进一步包括通过响应于所述鉴定步骤施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。在一些实施方案中，所述抗嘌呤能药物包括苏拉明、其盐或其前药。在一些实施方案中，所述受试者是儿童。在一些实施方案中，所述受试者为18岁或更小。在一些实施方案中，所述方法进一步包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者的步骤，其中所述自闭症谱系障碍是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式，其中所述步骤在施用之前进行。在一些实施方案中，所述施用响应于鉴定步骤。在一些实施方案中，所述方法进一步包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者的步骤，其中所述自闭症谱系障碍不是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式，其中所述步骤在施用之前进行。在一些实施方案中，响应于鉴定步骤治疗所述受试者。在一些实施方案中，所述自闭症谱系障碍包括选自沟通困难、与他人互动困难和重复行为的一种或多种症状。在一些实施方案中，治疗所述自闭症谱系障碍包括改善在施用之前与所述受试者的症状相关的一种或多种症状，其中所述症状选自沟通困难、与他人互动困难和重复行为。在一些实施方案中，治疗所述自闭症谱系障碍包括相对于施用前受试者的得分，改善选自ADOS、ABC、ATEC和CGI得分的所述受试者的评估得分。在一些实施方案中，相对于施用前受试者的得分，选自ADOS、ABC、ATEC和CGI得分的所述受试者的评估得分改善了10％或更多。在一些实施方案中，相对于施用前的得分，所述受试者的ADOS得分改善1.6或更多，或为类似测试的相应表现改善。在一些实施方案中，ADOS或类似测试的表现改善的p值为0.05或更小。在一些实施方案中，ADOS或类似测试的改善效应量为约1或更大。在一些实施方案中，所述效应量为约2.9或更大。在一些实施方案中，在施用后，AUC为约80μM*天至约400μM*天。

在一些方面，本发明提供了药物组合物，包含苏拉明的前药和药学上可接受的赋形剂。

在一些方面，本发明提供了适用于静脉内施用的药物组合物，其中所述组合物包含苏拉明或其盐以及选自抗微生物剂、聚乙二醇、稳定剂和抗氧化剂的一种或多种赋形剂。

在一些方面，本发明提供了药物组合物，包含苏拉明、增加苏拉明的口服吸收的递送系统和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述递送系统包括聚合物递送系统。在一些实施方案中，所述聚合物递送系统包括脂质体、纳米颗粒或微球。

援引并入

本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入。

附图说明

本发明的特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考以下对利用本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在这些附图中：

图1显示了自闭症谱系障碍中的苏拉明的SAT-1试验的患者选择设计。

图2描绘了SAT-1试验的患者的苏拉明剂量的安全性参数的监测。(A)显示游离皮质醇，(B)显示蛋白尿，(C)显示肌酐，以及(D)显示血红蛋白。通过双向ANOVA分析数据以测试治疗、时间和治疗x时间相互作用效应。P和F值反映治疗效果。这些量度未发现显著效果。

图3描绘了SAT-1试验的患者的苏拉明剂量的安全性参数的进一步监测。(A)显示白细胞(WBC)，(B)显示血小板，(C)显示天冬氨酸转氨酶(AST)，(D)显示皮疹——肘窝形态，以及(I)显示皮疹——胸部形态。通过双向ANOVA分析数据以测试治疗、时间和治疗x时间相互作用效应。P和F值反映治疗效果。苏拉明和安慰剂组之间仅有皮疹有显著差异。

图4描绘了6周时的总体ADOS得分效果和6周时苏拉明对ADOS子量度的效果。(A)显示通过双向ANOVA得到的苏拉明和盐水的6周ADOS比较得分，(B)显示接受苏拉明后6周ADOS比较得分改善，(C)显示接受苏拉明后6周ADOS社交影响得分改善，以及(D)显示接受苏拉明后6周ADOS限制和重复行为得分改善。

图5描绘了在2天时的总体ADOS得分效果和在6周时盐水(安慰剂)对ADOS子量度的效果。(A)显示2天ADOS比较得分无变化，(B)显示接受盐水安慰剂的受试者的6周ADOS得分无变化，(C)显示接受安慰剂的受试者的6周ADOS社交影响得分无变化，以及(D)显示接受安慰剂的受试者的6周ADOS限制和重复行为得分无变化。

图6描绘了SAT-1试验中测量的其他终点的影响。(A)显示6周表达性单词图片词汇得分无变化，(B)显示接受苏拉明后ABC刻板行为得分的7天的改善，(C)显示接受苏拉明后ABC刻板行为得分的6周的改善，(D)显示接受苏拉明后ATEC总得分的7天的改善。

图7描绘了SAT-1试验中对测量的更多替代终点的影响。(A)显示接受盐水后6周EOWPVT得分无变化，(B)显示接受盐水后7天ABC刻板行为得分无变化，(C)显示接受盐水后6周ABC刻板行为得分无变化，以及(D)显示接受盐水后7天ATEC总得分无变化。

图8描绘了在去除错过访视的患者后对ATEC终点和ADOS再分析的影响。(A)显示接受苏拉明后7天ATEC言语、语言和交流得分改善，(B)显示接受苏拉明后7天ATEC社交能力得分改善，(C)显示接受苏拉明后6周ATEC言语、语言和交流得分改善，以及(D)显示在丢弃错过6周访视的受试者(N＝4)后ADOS比较得分改善。

图9描绘了SAT-1试验中测量的对更多替代终点的影响。(A)显示接受盐水后7天ATEC言语、语言和交流无变化，(B)显示接受盐水后7天ATEC社交性无变化，(C)显示接受盐水后6周的6周ATEC言语、语言和交流得分无变化，以及(D)显示在丢弃错过6周访视的受试者(N＝4)后EOWPVT得分无变化。

图10描绘了SAT-1试验中测量的对更多替代终点的影响。(A)显示接受苏拉明后2天ADOS得分无变化，(B)显示接受苏拉明后6周RBQ总得分无变化，(C)显示接受苏拉明后6周ASD的核心症状和CGI的其他行为改善。P值：*＝0.05；**＝0.01；***＝0.001，以及(D)显示在6周CGI中由父母提出的变化最大的三种症状。

图11描绘了SAT-1试验中对测量的最终终点的影响。(A)显示接受盐水后2天ADOS得分无变化，以及(B)显示接受盐水后6周RBQ总得分无变化。

图12描绘了苏拉明在试验患者群体中的药代动力学。在(A)中，苏拉明血液浓度的2隔室模型与浓度数据拟合。前48小时主要是分配阶段。超过90％的模型描述为消除阶段。在(B)中，描绘了消除阶段的血浆苏拉明浓度。在(C)中，对苏拉明血液浓度的2隔室模型进行拟合优度分析。2隔室模型与测量值相关性良好。(D)苏拉明的儿科PK参数(R2＝0.998)。

图13描绘了晚期时间点的苏拉明药物代谢组学。根据VIP得分显示6周时变化的代谢物和途径。

图14描绘了早期时间点的苏拉明药物代谢组学。根据VIP得分显示2天时变化的代谢物和途径。

图15描绘了维恩型图，其显示了本研究(人ASD)中上调的代谢物类别与使用母体免疫激活(MIA)和脆性X小鼠模型的先前研究中上调的代谢物类别之间的重叠。

图16描绘了SAT-1试验中施用的示例性临床总体印象问卷。

具体实施方式

在描述本发明的实施方案之前，应当理解这些实施方案仅以示例的方式提供，并且本文中所述的本发明实施方案的各种替代方案均可用于实践本发明。本领域技术人员在不脱离本发明的情况下现将想到多种变化、改变和替代。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可用于本发明的实践或测试，但合适的方法和材料描述如下。如有冲突，则以本发明说明书为准，包括定义在内。此外，材料、方法和示例仅仅是说明性的，而不意在限制。本领域技术人员在不脱离本发明的情况下现将想到多种变化、改变和替代。

本文描述了使用抗嘌呤能药物药理学地治疗自闭症谱系障碍的方法、组合物和技术。

1.一般术语

如本文所用，短语“肠胃外给药”和“肠胃外施用”是指除了肠内和局部给药以外的给药方式，通常是通过注射，并且包括但不限于，静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。

本文使用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适用于与人类和动物组织接触而无过度毒性、刺激、变态反应或者其他问题或并发症，与合理的获益/风险比相称的那些化合物、赋形剂、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用，短语“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。每种载体必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容，并且对患者无害。一些可用作药学上可接受载体的材料的实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末西黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)二醇类，如丙二醇；(11)多元醇类，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；(21)药物制剂中使用的其他无毒相容物质。

在一些实施方案中，与疾病或病症相关的术语“预防”或“防止”可以指化合物，其在统计样品中，相对于未治疗的对照样品减少了治疗样品中病症或病况的发生，或相对于未治疗的对照样品延迟了疾病或病况的一种或多种症状的发作或降低了其严重性。

如本文所用，术语“治疗”或“处理”可包括缓和、减轻或改善疾病或病况的症状，预防额外的症状、改善或预防症状的潜在原因、抑制疾病或病况(例如，阻止疾病或病况的发展)、缓解疾病或病况、引起疾病或病况的消退、缓解由疾病或病况引起的或者预防性和/或治疗性地停止疾病或病况的症状。

2.抗嘌呤能药物

在某些方面，本公开内容提供了抑制嘌呤能信号传导的化合物及其组合物和用途。本公开内容的化合物可称为抗嘌呤能药物。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是药理学剂，例如，能够调节(例如，抑制或对抗)由细菌或高等生物中的细胞外嘌呤核苷酸或核苷天然介导的信号传导过程的小分子或多肽。已知参与嘌呤能信号传导的示例性嘌呤核苷酸或核苷包括腺苷、ATP、ADP、UTP、UDP和UDP-葡萄糖。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是一种或多种细胞外嘌呤能受体的拮抗剂。细胞外嘌呤能受体的实例包括G蛋白偶联的P1和P2Y受体，以及配体门控离子通道P2X受体。在人类中，P1(也称为“腺苷”)受体家族包括四种单独编码的受体A₁、A_2A、A_2B和A₃(分别由基因ADORA1、ADORA2A、ADORA3B和ADORA3编码)，并且因为所有这些受体都对腺苷有应答而得名。P2Y受体家族包括12种单独编码的受体P2RY₁、P2RY₂、P2RY₄、P2RY₅/LPA₆、P2RY₆、P2RY₈、P2RY₉/LPAR₄/GDPR23、P2RY₁₀、P2RY₁₁、P2RY₁₂、P2RY₁₃和P2RY₁₄。P2X(离子通道)受体家族包括7种单独编码的受体P2X₁、P2X₂、P2X₃、P2X4、P2X₅、P2X₆和P2X₇。P2受体家族(P2X和P2Y)因为它们对ATP/ADP、UTP和UDP等核苷酸有应答而得名。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是将一种或多种嘌呤受体激活核苷转运穿过细胞膜的核苷转运蛋白的抑制剂。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物通过改变嘌呤能受体的内源性配体的细胞外浓度来抑制嘌呤能信号传导。核苷转运蛋白的实例包括浓度型核苷转运蛋白SLC28A1、SLC28A2和SLC28A3(其为Na+依赖性同向转运蛋白)和平衡型核苷转运蛋白ENT1、ENT2、ENT3和ENT4(其为Na+非依赖性被动转运蛋白)。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是胞外核苷酸酶的活化剂或抑制剂，该胞外核苷酸酶水解细胞外间隙中的一种或多种嘌呤受体激活核苷酸。胞外核苷酸酶的实例包括胞外核苷三磷酸二磷酸水解酶(E-NTPDase)、胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(E-NPP)和碱性磷酸酶(AP)。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是Pannexin-1通道(PANX1)的抑制剂，该Pannexin-1通道形成涉及ATP从细胞质向细胞外间隙的释放的半通道。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是已被鉴定为对嘌呤能信号传导系统的一种或多种组分具有拮抗或抑制活性的小分子。此类药剂包括但不限于苏拉明、AZD9056、吡哆醛磷酸-6-苯偶氮基-2′，4′-二磺酸、氯吡格雷、普拉格雷、噻氯匹定、替卡格雷、坎格雷洛和依诺格雷，或其任一种的盐。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物为苏拉明或其盐。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物由式：表示，或其盐，如苏拉明六钠盐。在某些实施方案中，抗嘌呤能药物为苏拉明的前药或其盐。在某些实施方案中，抗嘌呤能药物不是苏拉明、苏拉明的前药或其盐。

在一些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物例如苏拉明被一个或多个聚乙二醇(PEG)基团PEG化。在一些实施方案中，一个或多个PEG基团与本公开内容的化合物共价或非共价关联。在一些实施方案中，本公开内容的化合物被一个或多个PEG基团共价修饰。用一个或多个PEG基团共价修饰本公开内容的化合物可降低剂量频率、增加药物稳定性并增强对抗蛋白水解降解的保护。在一些实施方案中，本公开内容的化合物被一个或多个PEG基团非共价修饰，例如通过氢键相互作用。

PEG部分可以通过环氧乙烷的聚合制备，并且可商购获得300g/mol至10,000,000g/mol的较大范围的分子量。由于链长度影响，具有不同分子量的PEG可具有不同的物理性质，例如粘度。本公开内容的PEG可选自支链PEG，例如，具有从中央核心基团发散的三至十个PEG链的PEG；星状PEG，例如，具有从中央核心基团发出的10至100个PEG链的PEG；以及梳状PEG，例如，具有通常接枝到聚合物主链上的多个PEG链的PEG。

PEG基团可以与指示其平均分子量的数字相关联，例如，PEG400具有400道尔顿的分子量。许多PEG包括具有分子量分布的分子，即它们是多分散的。大小分布可以通过其重均分子量(Mw)及其数均分子量(Mn)在统计上表征，其比值称为多分散性指数(Mw/Mn)。MW和Mn可通过质谱法测量。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是通过嘌呤能受体测定发现的分子。这样的测定的示例性形式在组织培养中使用异位(ectopically)表达一种或多种嘌呤能受体的细胞。拮抗剂对这些受体表达细胞的活性通过拮抗剂竞争离开受体的放射性标记的配体的能力来监测，例如，在P1受体的情况下配体为5′-N-[腺嘌呤-2，8-3H]-乙基甲酰胺基腺苷，或者通过例如对于P2X受体使用钙成像试剂监测嘌呤能受体的下游信号传导或例如对于P2Y受体监测第二信使如cAMP的下游产生来监测。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物是通过细胞外核苷酸释放测定法发现的分子。可获得多种用于定量细胞外ATP的商业试剂；此类试剂的示例性类别是使用重组萤光素酶和萤光素试剂以将ATP浓度转换成发光信号来检测ATP的试剂(例如，可从Promega获得的Cell-titer-glo家族试剂)。此类测定可与来自各种不同组织背景的表达如上所述的各种类型或亚型的嘌呤能受体、胞外核苷酸酶、转运蛋白或通道的培养细胞组合使用。在一些实施方案中，修饰用于这些测定的细胞以异位表达嘌呤能信号传导的一种或多种上述组分。

本公开内容包括本文所述的抗嘌呤能药物的盐，特别是药学上可接受的盐。本公开内容的具有足够酸性、足够碱性或两种官能团的化合物可与若干无机碱、无机酸和有机酸中的任一种发生反应以形成盐。或者，具有固有电荷的化合物，如含有季氮的化合物，可与适当的反离子形成盐，例如卤化物，如溴化物、氯化物或氟化物，特别是溴化物。

在一些情况下，本文所述的化合物可以以非对映异构体、对映异构体或其他立体异构形式存在。本文提出的化合物包括所有非对映异构体、对映异构体和差向异构体形式以及其适当的混合物。立体异构体的分离可以通过色谱法进行，或通过形成非对映异构体并通过再结晶、色谱法或其任何组合进行分离来进行。(Jean Jacques、Andre Collet、Samuel H.Wilen，“Enantiomers，Racemates and Resolutions”，John Wiley And Sons，Inc.，1981，通过引用并入本公开内容)。立体异构体还可通过立体选择性合成获得。

本文所述的方法和组合物包括使用无定形形式和晶体形式(也称为多晶型物)。本文所述的化合物可以是药学上可接受的盐的形式。同样，具有相同类型的活性的这些化合物的活性代谢物也包括在本公开内容的范围内。此外，本文所述的化合物可以以非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。本文提出的化合物的溶剂化形式也被认为在本文公开。

在一些实施方案中，抗嘌呤能药物例如苏拉明可以是前药的形式，例如，其中母体化合物中的一个或多个酸性基团表现为酯。在一些实施方案中，苏拉明上的或更多磺酸部分被掩蔽作为前药，如酯基团。术语“前药”旨在包括在生理条件下转化为本公开内容的药物剂的化合物。用于制备前药的一种方法是包括在生理条件下水解以显示期望的分子的一个或多个选择的部分。在其他实施方案中，前药由宿主动物如宿主动物中的特定靶细胞的酶活性转化。例如，酯或碳酸酯(例如，酸性基团的酯或碳酸酯)是本公开内容的优选前药。

前药通常是有用的，因为在一些情况下，它们可能比母体药物更容易施用。例如，它们可以是通过口服给药能够生物利用的，而母体药物并非如此。前药可有助于增强化合物相对于母体药物的胃肠吸收。前药可相对于母体药物增加抗嘌呤能药物的亲脂性。在一些实施方案中，前药的设计增加了抗嘌呤能药物的有效水溶性。(参见，例如，Fedorak等人，Am.J.Physiol.，269：G210-218(1995)；McLoed等人，Gastroenterol，106：405-413(1994)；Hochhaus等人，Biomed.Chrom.，6：283-286(1992)；J.Larsen和H.Bundgaard，Int.J.Pharmaceutics，37，87(1987)；J.Larsen等人，Int.J.Pharmaceutics，47，103(1988)；Sinkula等人，J.Pharm.Sci.，64：181-210(1975)；T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，A.C.S.Symposium Series第14卷；以及EdwardB.Roche，Bioreversible Carriers in Drug Design，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987，所有这些的公开内容都并入本文)。

根据另一个实施方案，本公开内容提供了产生本公开内容的化合物的方法。可以使用常规技术合成化合物。有利地，由易于获得的材料方便地合成这些化合物。可用于合成本文所述化合物的合成化学转化和方法是本领域已知的，并且包括例如，R.Larock，Comprehensive Organic Transformations(1989)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，2d.Ed.(1991)；L.Fieser和M.Fieser，Fieser andFieser′s Reagents for Organic Synthesis(1994)；以及L.Paquette编著，Encyclopediaof Reagents for Organic Synthesis(1995)中所述。

3.抗嘌呤能药物的组合物

在一些实施方案中，将本文所述的化合物配制成药物组合物。在具体实施方案中，使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制药物组合物，所述载体包括赋形剂和助剂，其有助于将活性化合物加工成可药用的制剂。适当的配置取决于所选择的给药途径。任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂均适用于配制本文所述的药物组合物：Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版(Easton，Pa.：MackPublishing Company，1995)；Hoover、John E.，Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania 1975；Liberman、H.A.和Lachman，L.，Eds.，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版(LippincottWilliams&Wilkins1999)。

药物组合物包括至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，以及至少一种抗嘌呤能药物，其在本文也称为活性成分。活性成分是游离酸或游离碱的形式，或者是药学上可接受的盐形式。此外，本文所述的方法和药物组合物包括使用N-氧化物、晶体形式(也称为多晶型物)以及具有相同类型的活性的这些化合物的活性代谢物。本文所述化合物的所有互变异构体均包括在本文提出的化合物的范围内。此外，本文所述的化合物包括非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式。本文提出的化合物的溶剂化形式也被认为在本文公开。此外，药物组合物任选地包括其他药用或药物剂、载体、佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐、缓冲液和/或其他具有治疗价值的物质。

用于制备包含本文所述的化合物的组合物的方法包括用一种或多种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体配制化合物，以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括但不限于粉末、片剂、分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂。液体组合物包括其中溶解有化合物的溶液、包含化合物的乳液或者包含含有本文所述化合物的脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液。半固体组合物包括但不限于凝胶、悬浮液和乳膏。本文所述的药物组合物的形式包括液体溶液或悬浮液，适于在使用前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或作为乳液。这些组合物还任选地含有少量无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等。

在一些实施方案中，包含至少一种抗嘌呤能药物的药物组合物示例性地采取液体的形式，其中所述药剂存在于溶液、悬浮液或两者中。在一些实施方案中，当组合物作为溶液或悬浮液施用时，第一部分药剂存在于溶液中，第二部分药剂以例如悬浮在液体基质中的颗粒形式存在。在一些实施方案中，液体组合物包括凝胶制剂。在其他实施方案中，液体组合物是水性的。

在一些实施方案中，本公开内容的水性悬浮液含有一种或多种聚合物作为悬浮剂。聚合物可选自水溶性聚合物，如纤维素聚合物，例如，羟丙基甲基纤维素，和水不溶性聚合物，如交联的含羧基聚合物。本文所述的某些药物组合物包含粘膜粘着聚合物，例如选自羧甲基纤维素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、海藻酸钠和葡聚糖。

药物组合物还任选地包括增溶剂，以帮助抗嘌呤能药物的溶解或促进其递送穿过组织屏障或细胞膜。术语“增溶剂”通常包括导致形成胶束溶液或药剂真溶液的试剂。可用于本公开内容的组合物的非离子表面活性剂包括例如，聚山梨醇酯80、乙二醇、聚乙二醇(例如，聚乙二醇400)和乙二醇醚。本公开内容的组合物中可使用的阴离子表面活性剂包括例如，烷基硫酸酯(如二辛基磺基琥珀酸酯)和烷基乙氧基硫酸酯。可用于本公开内容的组合物的阳离子表面活性剂包括例如基于吡啶的化合物，如十六烷基氯化吡啶鎓。可用于本公开内容的组合物的两性离子表面活性剂包括各种基于大豆和椰子的天然产物，如椰油酰胺丙基甜菜碱和卵磷脂。

药物组合物任选地包含一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲液，如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。此类酸、碱和缓冲液的量以使组合物的pH维持在可接受范围内所需的量包含在内。

此外，本公开内容的组合物还可包含一种或多种盐，其量为使组合物的重量摩尔渗透压浓度达到可接受范围内所需的量。这样的盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。

本公开内容的组合物还可包含一种或多种防腐剂，以抑制微生物活性。合适的防腐剂包括含汞物质，如苯汞(merfen)和硫柳汞；稳定的二氧化氯；以及季铵化合物，如苯扎氯铵、十六烷基三甲基溴化铵和十六烷基氯化吡啶鎓。

其他有用的组合物包含一种或多种表面活性剂，以增强物理稳定性或用于其他目的。合适的非离子表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如，聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；以及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚，例如，辛苯聚醇10、辛苯聚醇40。

其他有用的组合物包含一种或多种抗氧化剂，以在需要时增强化学稳定性。仅举例来说，合适的抗氧化剂包括抗坏血酸和焦亚硫酸钠。

在一些实施方案中，将水性悬浮液组合物包装在单剂量的不可再次盖紧的容器中。或者，使用多剂量的可再次盖紧的容器，在这种情况下，组合物中通常包含防腐剂。

在替代实施方案中，使用疏水性药物化合物的其他递送系统。脂质体、乳液和微乳液是本文有用的递送媒介物或载体的实例。在一些实施方案中，还使用有机溶剂，如N-甲基吡咯烷酮。在另外的实施方案中，使用持续释放系统，如含有治疗剂的固体疏水聚合物的半透性基质递送本文所述的化合物。各种持续释放材料在本文是有用的。在一些实施方案中，持续释放胶囊释放化合物达数周至超过100天。根据治疗剂的化学性质和生物稳定性，采用蛋白质稳定化的其他策略。

在一些实施方案中，本文所述的制剂包含选自抗氧化剂、金属螯合剂、含硫醇化合物和其他一般稳定剂的一种或多种赋形剂。此类稳定剂的实例包括但不限于：(a)约0.5％至约2％w/v的甘油，(b)约0.1％至约1％w/v的甲硫氨酸，(c)约0.1％至约2％w/v的硫代甘油，(d)约1mM至约10mM的EDTA，(e)约0.01％至约2％w/v的抗坏血酸，(f)0.003％至约0.02％w/v的聚山梨醇酯80，(g)0.001％至约0.05％w/v的聚山梨醇酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(1)戊聚糖多硫酸盐和其他类肝素，(m)二价阳离子如镁和锌；或(n)其组合。

为在本文所述的治疗应用中使用，还提供了药剂盒和制品。在一些实施方案中，此类药剂盒包含载具、包装或容器，其被区室化以接纳一个或多个容器如小瓶、管等，每个容器包含将在本文所述的方法中使用的一个单独元件。合适的容器包括例如，瓶子、小瓶、注射器和试管。容器由多种材料如玻璃或塑料制成。

本文提供的制品包含包装材料。用于包装药物产品的包装材料包括在例如美国专利号5,323,907、5,052,558和5,033,252中可见的材料。药物包装材料的实例包括但不限于泡罩包装、瓶子、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶子，以及任何适用于选定制剂以及预期给药和治疗模式的包装材料。例如，容器包含一种或多种本文所述的化合物，任选地为组合物形式或与本文所公开的另一种药剂组合。容器任选地具有无菌进入口(例如，容器是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。此类药剂盒任选地包含化合物以及关于其在本文所述方法中的应用的标识性描述或标签或说明书。

本公开内容的药剂盒可包括一个或多个额外的容器，每个容器具有从商业和用户的观点来看是使用本文所述化合物所期望的各种材料(例如试剂，任选地为浓缩形式，和/或装置)中的一种或多种。此类材料的非限制性实例包括但不限于缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器；载具、包装、容器、小瓶和/或列出内容物的管标签和/或使用说明，以及附有使用说明的包装插页。通常还会包括一组说明。标签任选地在容器上或与容器相关联。例如，当形成标签的字母、数字或其他字符附着、模塑或蚀刻到容器本身时，标签在容器上，当标签存在于也容纳容器的托座或载具内时，例如作为包装插页时，标签与容器相关联。此外，标签用于指示内容物将用于特定的治疗应用。此外，标签指示内容物的使用说明，如在本文描述的方法中。在一些实施方案中，药物组合物呈现在包装或分配器装置中，该装置包含一个或多个含有本文提供的化合物的单位剂型。例如，该包装包含金属或塑料箔，如泡罩包装。或者，包装或分配器装置附有给药说明。或者，包装或分配器附有与容器相关的通知，其形式由监管药品的制造、使用或销售的政府机构所规定，该通知反映了该机构批准该药物形式用于人类或兽医给药。例如，这样的通知是美国食品药品管理局对处方药批准的标签或批准的产品插页。在一些实施方案中，制备在相容的药物载体中配制的含有本文提供的化合物的组合物，将其置于合适的容器中，并标示出用于指定病况的治疗。

4.治疗方法

包含抗嘌呤能药物的组合物的合适给药途径包括但不限于口服、静脉内、直肠、气雾、肠胃外、眼、肺、经粘膜、经皮、耳、鼻和局部给药。此外，仅举例而言，肠胃外递送包括肌肉内、皮下、静脉内、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴内和鼻内注射。

在一些实施方案中，如本文所述的化合物以局部而非全身方式施用，例如，通过将化合物直接注射到器官中，通常以储库制剂或持续释放制剂的形式注射。在具体的实施方案中，长效制剂通过植入(例如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射施用。此外，在其他实施方案中，药物在靶向药物递送系统中例如涂覆有器官特异性抗体的脂质体中递送。在此类实施方案中，脂质体靶向于器官并被器官选择性地吸收。在其他实施方案中，本公开内容的化合物以快速释放制剂的形式、以延长释放制剂的形式或以中速释放制剂的形式提供。在其他实施方案中，局部施用本文所述的化合物。

在某些实施方案中，本公开内容的组合物还可作为微球递送，以在体内缓慢释放。例如，可以通过以下方式施用微球：皮内注射含有药物的微球，该微球在皮下缓慢释放(参见Rao，J.Biomater Sci.Polym.第7版：623-645，1995)；作为可生物降解和可注射的凝胶制剂(参见，例如，Gao Pharm.Res.12：857-863，1995)；或者作为用于口服给药的微球(参见，例如，Eyles，J.Pharm.Pharmacol.49：669-674，1997)。经皮和皮内途径提供数周或数月的持续递送。

在一些实施方案中，将药物组合物以适于肠胃外注射的形式配制成油性或水性媒介物中的无菌悬浮液、溶液或乳液。肠胃外注射制剂任选地含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。在具体的实施方案中，用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶形式的活性化合物的水溶液。在另外的实施方案中，活性化合物(例如，抗嘌呤能药物)的悬浮液被制备为油性注射悬浮液。用于在本文所述的药物组合物中使用的合适的亲脂性溶剂或媒介物仅举例而言包括脂肪油如芝麻油，或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。在一些实施方案中，水性注射悬浮液含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，悬浮液含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂，以允许制备高浓度溶液。在一些实施方案中，活性成分为粉末形式，以供使用前用合适的载体例如无菌无热原水构建。

在其他实施方案中，抗嘌呤能药物配制在直肠组合物中，如灌肠剂、直肠凝胶、直肠泡沫、直肠气雾剂、栓剂、胶冻栓剂或保留灌肠剂，该组合物含有常规栓剂基质如可可脂或其他甘油酯，以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等。在组合物的栓剂形式中，首先熔化低熔点蜡，诸如但不限于任选地与可可脂组合的脂肪酸甘油酯混合物。

在进一步的实施方案中，本文所述的抗嘌呤能药物可单独使用或与适当的添加剂组合使用，以制备口服片剂、粉末、颗粒或胶囊，并且在需要时与稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、着色剂和调味剂组合使用。药物制剂可以与缓冲剂一起配制以提供化合物免受胃环境的低pH的保护，和/或与肠溶包衣一起配制。包含在药物组合物中的药物剂可以例如在液体、固体或半固体制剂中与增味剂一起配制以供口服递送，和/或与肠溶包衣一起配制。

在一些实施方案中，通过将一种或多种固体赋形剂与一种或多种本文所述的化合物混合，任选地研磨所得混合物，并在根据需要添加合适的助剂后加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣丸核，从而获得用于口服使用的药物制剂。具体地，合适的赋形剂为填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或其他如聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。在某些实施方案中，任选地添加崩解剂。崩解剂仅举例而言包括交联的交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或者藻酸或其盐，如藻酸钠。

在一些实施方案中，剂型如糖衣丸核和片剂提供有一种或多种合适的包衣。在具体的实施方案中，使用浓缩的糖溶液来对剂型进行包衣。糖溶液任选地含有附加的组分，仅举例而言如阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料和/或色素也任选地添加至包衣以用于识别目的。此外，染料和/或色素任选地用于表征活性化合物剂量的不同组合。

在一些实施方案中，本文所述的至少一种化合物的治疗有效量被配制为其他口服剂型。口服剂型包括由明胶制成的推入式胶囊，以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊。在具体的实施方案中，推入式胶囊含有活性成分掺和一种或多种填充剂。仅举例而言，填充剂包括乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁，以及任选地稳定剂。在其他实施方案中，软胶囊含有溶解或悬浮在合适液体中的一种或多种活性化合物。仅举例而言，合适的液体包括一种或多种脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外，任选地添加稳定剂。

在一些实施方案中，包含药物制剂的药物组合被物配制用于经皮、皮内或局部给药。组合物可以使用注射器、绷带、经皮贴剂、插入物或类似注射器的施加器，作为粉末/滑石或其他固体、液体、喷雾剂、气雾剂、软膏、泡沫、乳膏、凝胶、糊剂给药。这优选为局部施用或者通过例如皮内或皮下直接注射到待治疗区域的附近或待治疗区域内的皮肤的控释制剂或持续释放制剂的形式。活性组合物还可通过离子电渗递送。防腐剂可用于防止真菌和其他微生物的生长。合适的防腐剂包括但不限于苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、丙酸钠、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、十六烷基氯化吡啶鎓、氯丁醇、苯酚、苯乙醇、硫柳汞及其组合。

插入物、经皮贴剂、绷带或制品可包含聚合物混合物或聚合物包衣，该聚合物提供在延长的时间段内以恒定速率释放药物剂。在一些实施方案中，制品、经皮贴剂或插入物包含水溶性成孔剂，如聚乙二醇(PEG)，其可与水不溶性聚合物混合，以增加插入物的持久性并延长活性成分的释放。

经皮装置(插入物、贴剂、绷带)还可包水性不溶性聚合物。速率控制聚合物可用于施用于pH值变化可用于影响释放的部位。这些速率控制聚合物可以在喷雾和与活性化合物一起干燥的过程中使用连续包衣膜来施加。在一个实施方案中，包衣制剂用于包覆包含活性成分的丸粒，所述活性成分被压缩形成固体、可生物降解的插入物。

在某些实施方案中，本文所述的至少一种化合物例如苏拉明的治疗有效量通过经皮离子电渗或声学微空化方法施用。离子电渗是通过在皮肤上使用电压梯度进行经皮药物递送的过程。分子(如抗嘌呤能药物，例如苏拉明)可以通过电泳和电渗运输穿过角质层，并且电场也可以增加皮肤的渗透性，并在细胞中产生瞬态孔。

在声学微空化中，使用微泡作为媒介物来包封治疗剂，该方法与诊断超声的结合允许治疗剂的局部靶向和释放。已显示微泡的运动增加了个体细胞膜和内皮的渗透性，从而增强了治疗吸收。在某些实施方案中，本公开内容的嘌呤能药物例如苏拉明可以通过声学微空化施用。

在进一步的方面，本公开内容提供了通过施用本公开内容的化合物例如抗嘌呤能药物来治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法。

在一些实施方案中，根据本发明的方法进行治疗的状况或障碍包括符合官方《心理障碍诊断与统计手册》第5版(DSM-5，2013)的自闭症谱系标准的患者的任何神经发育障碍。DSM-5描述了这类障碍，其特征在于，例如：a)在多种环境下的社会互动中的持续缺陷，例如，社会-情感互惠方面的缺陷、非语言交际行为方面的缺陷，或者发展、维持或理解关系方面的缺陷；b)有限的、重复的行为、兴趣或活动模式；c)发育早期的症状表现；d)症状导致的社会或职业功能的显著受损；以及e)社会交流水平低于患者总体发育水平的预期。

在一些实施方案中，本公开内容的方法可用于治疗除自闭症谱系障碍之外的状况或障碍。在一些实施方案中，本公开的方法可用于治疗认知发育迟缓。认知发育迟缓可以广泛地定义为与标准的重要事件相比，儿童认知发展的显著滞后。认知迟缓的类型包括语言或言语、视力、移动/运动技能、社交和情感技能以及思维方面的问题。在一些实施方案中，认知发育迟缓可能是由于遗传缺陷，如唐氏综合症、胎儿酒精综合征(由母亲在怀孕期间饮酒造成)、脆性X综合征(一种遗传型认知受损，是在分娩不久后发生的严重医学问题，通常伴有早产)或其他未知原因。

在一些实施方案中，本公开内容的方法可用于治疗智力发育障碍、语言障碍、语音障碍、社交(语用)交流障碍、刻板运动障碍、图雷特症、持续性(慢性)运动或发声抽动障碍、其他指定或未指定的神经发育障碍。

在一些实施方案中，自闭症谱系障碍包括自闭症、阿斯伯格综合征、未分类的广泛性发育障碍(PDD-NOS)和童年瓦解性障碍等先前使用的DSM-IV-TR诊断类别中的一种或多种。

在一些实施方案中，患有自闭症谱系障碍的患者附加地具有与自闭症谱系障碍相关的已知遗传病变。此类遗传病变包括在细胞遗传学上可见的染色体异常、拷贝数变异(CNV)和DNA突变。在一些实施方案中，遗传病变与另一种已命名的神经发育障碍相关，如普拉德-威利综合征(Prader-Willi syndrome)、安吉尔曼综合征(Angelman syndrome)、唐氏综合症和特纳综合征。上述遗传病变可通过各种公知的技术在患者中鉴定，该技术包括显微核型分析、荧光原位杂交(FISH)或阵列比较基因组杂交(aCGH)。已经构建了在自闭症中报道的染色体异常的收录数据库，参见例如，Marshall等人Am J Hum Genet 2008；82：477-488。

在一些实施方案中，本文所述治疗方法的受试者不具有与自闭症谱系障碍相关的已知遗传病变。例如，本文所述治疗方法的受试者可选自不具有在细胞遗传学上可见的染色体异常、拷贝数变化(CNV)或DNA突变的受试者。

在某些实施方案中，患有本文所述治疗方法的自闭症谱系障碍的受试者具有胃肠疾病或病症。在某些实施方案中，本文所述治疗方法的受试者具有慢性便秘、腹泻、胃食管反流病或肠易激综合征。在某些实施方案中，患有本文所述治疗方法的自闭症谱系障碍的受试者具有微生物组不平衡。在某些实施方案中，本公开内容提供了用于选择将受益于本文所述的自闭症谱系障碍疗法的受试者的方法。具体地，受试者可选自患有自闭症谱系障碍的受试者，其中受试者患有与胃肠疾病或病症相关的一种或多种症状。

根据本发明方法需要治疗自闭症谱系障碍的患者可以是处于成年前神经发育阶段的具有自闭症谱系障碍的任何患者。在一些实施方案中，需要治疗自闭症谱系障碍的患者小于21岁。在一些实施方案中，需要治疗自闭症谱系障碍的患者小于18岁。在一些实施方案中，需要治疗自闭症谱系障碍的患者小于16岁。在其他实施方案中，需要治疗自闭症谱系障碍的患者是儿童。在其他实施方案中，需要治疗自闭症谱系障碍的患者是婴儿。在一些实施方案中，需要治疗自闭症谱系障碍的患者在14个月龄至16岁之间。

在一些实施方案中，本公开内容提供了评价治疗功效和在适当时调节治疗方案的方法。多种标准化评估方案可用于监测患有自闭症谱系障碍或疑似有自闭症谱系障碍的风险的患者的病程、严重程度和功能受损谱。此类方案还可用于评估自闭症症状随时间或响应于治疗的演变。其中，自闭症诊断观察量表(ADOS-2，处于最新的迭代，描述于Gotham等人J Autism Dev Disord.2007年4月；37(4)：613-27)对于广泛年龄范围的患者特别有用，因为其具有考虑到患者的发育水平和年龄的多种模块。其包括由检查者引入的交互式活动的标准化管理，被设计用于引发社会互动、沟通和重复行为，以便诊断自闭症谱系障碍，该程序针对从小于48个月至成年期的患者进行了优化。还对于评价自闭症谱系障碍中的交流受损有用的是表达性单词图片词汇测试(EOWPVT)，其评估言语表达以及称呼和说出单词的能力(描述于Chapman等人Early Hum Dev.2015年6月；91(6)：373-379)。可用于测量ASD患者的改善的其他度量包括看护者施用的异常行为检查表(ABC，参见例如，Kaat等人J AutismDev Disord.2014年5月；44(5)：1103-16。)和自闭症治疗评估检查表(ATEC，参见例如，Geier等人Mental Health Research in Intellectual Disabilities 2013；6：255-67)。此外，临床总体印象量表(参见例如图16)的修订版可用于判断患者进展。

通常可使用适合于所治疗的状况的测定和方法来监测受试者的治疗效果，所述测定将会是本领域普通技术人员所熟知的并且描述于本文。施用于受试者的药物剂或其一种或多种代谢物的药代动力学可以通过测定生物流体(例如，血液、血液部分如血清和/或尿液)和/或来自受试者的其他生物样品或生物组织中的药物制剂或代谢物的水平来监测。本领域实践和在本文描述的用于检测药剂的任何方法可用于在治疗过程中测量药物剂或代谢物的水平。

在一些实施方案中，使用跟踪作为治疗功效的生物标志物的患者血清、痰、血液或尿液中的一种或多种非药物代谢物的浓度的测定来监测受试者的治疗效果。此类代谢物可以通过多种技术进行浓度测定，包括但不限于如实施例4中所示的LC-MS/MS分析。所追踪的代谢物可以是表7中鉴定的治疗功效的早期(～2d)生物标志物，或者可以参与表6中鉴定的途径。在特定实施方案中，作为治疗功效的生物标志物追踪的代谢物是来自表7的一种或多种化学实体。在特定实施方案中，作为治疗功效的生物标志物追踪的代谢物是来自表6的5种或更多种、10种或更多种或者15种或更多种化学实体。追踪的代谢物可以是表8中鉴定的治疗功效的晚期(～45d)生物标志物，或者可以参与表5中鉴定的途径。在特定实施方案中，作为治疗功效的生物标志物追踪的代谢物是来自表8的5种或更多种、10种或更多种或者15种或更多种化学实体。

在一些实施方案中，治疗自闭症谱系障碍包括在所述给药之前改善与所述受试者的症状相关的一种或多种症状，其中症状选自沟通困难、与他人互动困难和重复行为。在一些实施方案中，治疗自闭症谱系障碍包括相对于所述给药前的得分改善选自ADOS、ABC、ATEC和CGI得分的所述受试者的评估得分。在一些实施方案中，相对于治疗前的评估得分，受试者的评估得分改善约5％或更多，约10％或更多，如约15％或更多，如约20％或更多，如约25％或更多，如约30％或更多，如约35％或更多，如约40％或更多，如约45％或更多，如约50％或更多，如约55％或更多，如约60％或更多，如约65％或更多，如约70％或更多，如约75％或更多，如约80％或更多，如约85％或更多，或甚至约90％或更多。

在一些实施方案中，自闭症谱系障碍的治疗可以通过美国专利号9,443,205中描述的任何方法进行评价，其全部内容通过引用并入本文。

在一些实施方案中，本文所述的用于治疗自闭症谱系障碍的方法包括相对于所述给药前受试者的得分，使受试者的ADOS得分改善约1.0或更多、约1.1或更多、约1.2或更多、约1.3或更多、约1.4或更多、约1.5或更多、约1.6或更多、约1.7或更多、约1.8或更多、约1.9或更多、或约2.0或更多。

在一些实施方案中，评估得分如ADOS、ABC、ATEC和CGI的改善的p值为0.05或更小、约0.04或更小、约0.03或更小、或约0.02或更小。在一些实施方案中，此处描述的治疗方法的效应量为约1或更大、约1.5或更大、约2或更大、约2.5或更大、约2.6或更大、约2.7或更大、约2.8或更大、约2.9或更大或约3.0或更大。

可以施用含有本文所述的抗嘌呤能药物的组合物以供预防性和/或治疗性治疗。在治疗性应用中，将组合物以足以治愈或至少部分阻止疾病或病况的症状的量施用于已患有疾病或病况的患者。对该用途有效的量将取决于疾病或病况的严重程度和病程、先前疗法、患者的健康状态、体重和对药物的反应，以及治疗医师的判断。

在预防性应用中，将含有本文所述化合物的组合物施用于易患或在其他方面对特定疾病、病症或病况有风险的患者。这样的量被定义为“预防有效量或剂量”。在该用途中，精确的量也取决于患者的健康状态、体重等。当在患者中使用时，该用途的有效量将取决于疾病、病症或病况的严重程度和病程、先前疗法、患者的健康状态和对药物的反应，以及治疗医师的判断。

在患者的状况没有改善的情况下，根据医生的判断，化合物的给药可以慢性施用，即持续延长的一段时间，包括在患者的整个生命期，以缓解或以其他方式控制或限制患者的疾病或病况的症状。

在患者的状态得到改善的情况下，根据医生的判断，可以连续给予化合物；或者，可以暂时减少或暂时中止施用的药物剂量。在一些实施方案中，暂时中止使用本公开内容的药剂被称为“治疗假期”。在治疗假期期间，本公开内容的药剂不施用于受试者，然而，在假期的整个长度或其一部分，药物可能仍然存在并在受试者的血流中可检测。在一些实施方案中，治疗假期的长度可以在2天与1年之间变化，仅举例而言，包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天或100天。在一些实施方案中，向患者施用至少两剂量的本公开内容的抗嘌呤能药物，其中在所述剂量之间存在约1天至约90天的治疗假期，如约1天至约60天，如约1天至约30天，如约1天至约40天，如约5天至约30天。在一些实施方案中，向患者施用至少三剂量的本公开内容的抗嘌呤能药物，其中在第二剂量与第三剂量之间存在约10天至约90天的治疗假期，如约10天至约60天，如约10天至约30天，如约10天至约40天。在一些实施方案中，第三剂量小于第二剂量。在一些实施方案中，第二剂量与第三剂量之间的治疗假期比第一剂量与第二剂量之间的治疗假期更长。

在一些实施方案中，一旦患者的状况发生改善，在必要时可以施用维持剂量。对于维持剂量，可以根据症状相对于初始治疗方案将给药的剂量或频率或两者降低至改善的疾病、病症或病况得以保持的水平。然而，在症状有任何复发时，患者可能需要长期的间歇治疗。

根据本发明的化合物可以按选自约0.01mg/kg至100mg/kg的剂量施用。例如，本公开内容的抗嘌呤能药物可以按约10-30mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物的剂量选自约5-50mg/kg、约5-45mg/kg、约5-40mg/kg、约5-35mg/kg、约5-30mg/kg、约5-25mg/kg、约5-20mg/kg、约10-50mg/kg、约10-45mg/kg、约10-40mg/kg、约10-35mg/kg、约10-30mg/kg、约10-25mg/kg、约10-20mg/kg、约20-50mg/kg、约20-45mg/kg、约20-40mg/kg、约20-35mg/kg、约20-30mg/kg、约21-50mg/kg、约21-45mg/kg、约21-40mg/kg和约21-35mg/kg。

在一些实施方案中，用于在本文所述方法中使用的抗嘌呤能药物的剂量为大于约20mg/kg、大于约21mg/kg、大于约22mg/kg、大于约23mg/kg、大于约24mg/kg、大于约25mg/kg、大于约26mg/kg、大于约27mg/kg、大于约28mg/kg、大于约29mg/kg、大于约30mg/kg或大于约40mg/kg。在一些实施方案中，用于在本文所述方法中使用的剂量为小于约80mg/kg、小于约70mg/kg、小于约60mg/kg、小于约50mg/kg、小于约40mg/kg或小于约30mg/kg。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物的剂量选自前一部分中所述的任何下限和上限的组合。示例性剂量为约500mg(对于25kg的受试者)。确切的剂量可取决于给药途径、化合物的施用形式、待治疗的受试者、待治疗的受试者的体重和主治医师的经验。

本公开内容的化合物可以按选自约100mg/m²至约700mg/m²的剂量施用。例如，本公开内容的抗嘌呤能药物可以按约200mg/m²至约600mg/m²的剂量施用。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物的剂量选自约250mg/m²至约600mg/m²、约150mg/m²至约250mg/m²、约250mg/m²至约350mg/m²、约350mg/m²至约450mg/m²、约450mg/m²至约550mg/m²、约550mg/m²至约650mg/m²和约650mg/m²至约750mg/m²。

在一些实施方案中，用于在本文所述方法中使用的抗嘌呤能药物的剂量为大于约100mg/m²、大于约150mg/m²、大于约200mg/m²、大于约250mg/m²、大于约300mg/m²、大于约350mg/m²、大于约400mg/m²或甚至大于约450mg/m²。在一些实施方案中，用于在本文所述方法中使用的剂量为小于约800mg/m²、小于约750mg/m²、小于约700mg/m²、小于约650mg/m²、小于约600mg/m²、小于约550mg/m²、小于约500mg/m²、小于约450mg/m²、小于约400mg/m²或小于约300mg/m²。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物的剂量选自本段落所述的任何下限和上限的组合。示例性的剂量为约300mg/m²、约400mg/m²或约500mg/m²。确切的剂量可取决于给药途径、化合物的施用形式、待治疗的受试者、待治疗的受试者的体表面积和主治医师的经验。

在一些实施方案中，选择根据本公开内容的化合物的剂量以实现期望的连续稳态血浆浓度或稳态血浆浓度范围。在确定化合物的标准药代动力学参数如半衰期和分布体积(通过在给药后的不同时间点测量化合物的血清浓度来确定)后，可以容易地选择此类剂量。然后将药代动力学参数和剂量参数输入药代动力学模型，并求解该模型得到剂量。例如，多种这样的模型描述于例如Remington Essentials of Pharmaceutics(2013)中，特别是在第705-725页，其通过引用并入。

在一些实施方案中，通过首先施用抗嘌呤能药物(例如苏拉明或其盐或前药)的负荷剂量，然后以大致相当于抗嘌呤能药物的半衰期的间隔(例如，抗嘌呤能药物的半衰期可以在单剂量实验如图12所述的实验中预先确定)施用小于负荷剂量的维持剂量(例如负荷剂量的50-80％)来实现稳态血浆浓度。仅举例而言，抗嘌呤能药物的维持剂量可以每14天(大致是通过图12的单次剂量确定的半衰期)施用一次。在一些情况下，抗嘌呤能药物的半衰期在施用超过一剂量时是不同的(例如更长)，其中可以确定多剂量的半衰期，并且维持剂量之间的间隔可能比初始患者初始确定的药物半衰期更长(例如，大于14天)。

静脉内施用的本内容的治疗剂(例如，苏拉明)的血浆水平通常在给药后，例如在所述治疗剂给药后2天内达到峰值，并且该峰值可能落在期望的连续稳态血浆浓度之外。在某些实施方案中，在确定治疗剂的连续稳态血浆浓度时，给药(例如，静脉内给药)后的第一天、前两天或前三天的测量被排除在连续稳态评价之外。例如，将抗嘌呤能药物以多剂量静脉内递送至受试者，其量足以使所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持100天或更久。对于施用药剂当天和每一剂量后的第一天，抗嘌呤能药物血浆水平达到峰值并超过15μM，但该初始峰值被排除在连续稳态血浆浓度计算之外。

在特定实施方案中，施用根据本公开内容的抗嘌呤能药物，例如苏拉明或其盐，以使所述抗嘌呤能药物的血浆水平在约1μM至约100μM的目标范围内维持一段时间，例如，约2天至约100天、约20天至约180天或约20天至约365天。在一些实施方案中，施用根据本公开内容的化合物将约2μM至约50μM的血浆水平维持一段时间，例如，约2天至约100天。在其他实施方案中，施用根据本公开内容的抗嘌呤能药物以将所述药剂的血浆水平维持在约1μM至约40μM、约1μM至约35μM、约1μM至约30μM、约1μM至约25μM、约4μM至约25μM、约5μM至约25μM、约1μM至约20μM、约1μM至约15μM、约2μM至约15μM、约3μM至约15μM、约4μM至约15μM、约5μM至约15μM、约6μM至约15μM、约7μM至约15μM、约8μM至约15μM、约9μM至约15μM，如约1μM至约15μM。在一些实施方案中，施用根据本公开内容的化合物以使血浆水平在约3μM至约10μM维持约10天至约100天、约15天至约100天、约20天至约100天、约25天至约100天、约30天至约100天、约35天至约100天或约40天至约100天。在一些实施方案中，施用根据本公开内容的化合物以使血浆水平在约5μM至约25μM维持约10天至约100天、约15天至约100天、约20天至约100天、约25天至约100天、约30天至约100天、约35天至约100天或约40天至约100天。在某些实施方案中，血浆水平维持一段时间在非连续天数内测量，例如，排除施用剂量后紧挨的血浆水平达到峰值时的一天或两天。例如，在第1天给予剂量1，在第30天给予剂量2，在第60天给予剂量3，并且血浆水平在约5μM至约25μM维持100天，其排除第1天和第2天、第30天和第31天以及第60天和第61天的血浆水平。

在一些实施方案中，施用根据本公开内容的抗嘌呤能药物以将所述药剂的血浆水平维持在大于约1μM、大于约2μM、大于约3μM、大于约4μM、大于约5μM、大于约6μM、大于约7μM、大于约8μM、大于约9μM、约10μM、约5μM至约15μM，其中任何前述血浆水平维持约10天至约100天、约15天至约100天、约20天至约100天、约25天至约100天、约30天至约100天、约35天至约100天或约40天至约100天。在一些实施方案中，施用根据本公开内容的抗嘌呤能药物以将所述药剂的血浆水平维持在小于约30μM、小于约25μM、小于约20μM、小于约15μM、小于约14μM、小于约13μM、小于约12μM、小于约11μM、小于约10μM或小于约9μM，其中任何前述血浆水平维持约10天至约100天、约15天至约100天、约20天至约100天、约25天至约100天、约30天至约100天、约35天至约100天或约40天至约100天。在一些实施方案中，本公开内容包括将血浆浓度维持在由本文所述的任何下限和上限形成的范围内。

在一些实施方案中，施用根据本公开内容的抗嘌呤能药物以使前述部分中讨论的血浆范围的任一种在血浆浓度范围内维持一段时间，如前述部分中所述，维持约2天或更久、约3天或更久、约4天或更久、约5天或更久、约7天或更久、约10天或更久、约14天或更久、约15天或更久、约20天或更久、约21天或更久、约25天或更久、约28天或更久、约30天或更久、约35天或更久、约40天或更久、约42天或更久、约50天或更久、约55天或更久、约60天或更久、约70天或更久、约80天或更久、约90天或更久或甚至约100天或更久。在一些实施方案中，根据本公开内容的抗嘌呤能药物以使如前述部分中所述的血浆抗嘌呤能药物范围维持约2天至约100天的方式施用，如约10天至约100天，如约20天至约100天，如约25天至约100天，如约30天至约100天。在一些实施方案中，血浆中抗嘌呤能药物的水平可以基于已知因素计算，如抗嘌呤能药物的特性、患者特性、由患者的先前给药测量的血浆水平等。在一些实施方案中，在治疗过程中，可以一次或多次测量施用治疗的患者的血浆中抗嘌呤能药物的水平。

在一些实施方案中，以这样的量施用苏拉明或其盐，使得在给药后，AUC为约80μM*天至约400μM*天。在某些实施方案中，以这样的量施用苏拉明或其盐，使得在给药后，AUC在第1至6个月为300μM*天至1700μM*天。在某些实施方案中，施用苏拉明使得治疗180天的AUC为约900μM*天至约1700μM*天、约900μM*天至约1200μM*天、约1300μM*天至约1700μM*天或约1400μM*天至约1600μM*天。在某些实施方案中，在180天的治疗周期中，施用苏拉明3至7次，如4至6次，如5次。在某些实施方案中，在180天的治疗周期中，苏拉明每25至40天施用一次，如每24至35天施用一次。在某些实施方案中，施用苏拉明使得持续365天治疗的AUC为约1500μM*天至约4000μM*天。在某些实施方案中，在365天的治疗周期中，施用苏拉明6至14次，如8至12次，如10次。在某些实施方案中，在365天的治疗周期中，苏拉明每25至40天施用一次，如每24至35天施用一次。

在一些实施方案中，苏拉明或其盐以多剂量施用，使得所述药剂的血浆水平相当于单次静脉内给药约10mg/kg至约30mg/kg。在一些实施方案中，苏拉明或其盐以多剂量施用，使得所述药剂的血浆水平相当于单次静脉内给药约400mg/m²至约700mg/m²。

在一些实施方案中，本公开内容提供了治疗有此要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，其中所述治疗包括向所述受试者施用大于20mg/kg的抗嘌呤能药物的剂量。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物以大于20mg/kg的剂量施用，并且其量足以在所述给药后使所述受试者的血清肌酐水平维持在低于约2.0mg/dL、低于约1.9mg/dL、低于约1.8mg/dL、低于约1.7mg/dL、低于约1.6mg/dL、低于约1.5mg/dL、低于约1.4mg/dL、低于约1.3mg/dL、低于约1.2mg/dL、低于约1.1mg/dL或低于约1.0mg/dL。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物以大于20mg/kg、大于约25mg/kg或大于约30mg/kg的剂量施用，其中所述量足以使所述受试者的血清肌酐水平维持在低于约1.3mg/dL，如低于约1.0mg/dL。

在一些实施方案中，本公开内容提供了治疗有需要的受试者的自闭症谱系障碍的方法，其中所述治疗包括向所述受试者施用大于500mg/m²的抗嘌呤能药物的剂量。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物以大于500mg/m²的剂量施用，并且其量足以在所述给药后使所述受试者的血清肌酐水平维持在低于约2.0mg/dL、低于约1.9mg/dL、低于约1.8mg/dL、低于约1.7mg/dL、低于约1.6mg/dL、低于约1.5mg/dL、低于约1.4mg/dL、低于约1.3mg/dL、低于约1.2mg/dL、低于约1.1mg/dL或低于约1.0mg/dL。在一些实施方案中，抗嘌呤能药物以大于500mg/m²、大于约550mg/m²或大于约600mg/m²的剂量施用，其中所述量足以使所述受试者的血清肌酐水平维持在低于约1.3mg/dL，如低于约1.0 mg/dL。

在一些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物以大于20mg/kg的剂量施用，并且其量足以在所述给药后使所述受试者的血清转氨酶水平维持在低于约60U/L、低于约55U/L、低于约50U/L、低于约45U/L、低于约40U/L、低于约35U/L、低于约30U/L、低于约25U/L或低于约20U/L。在一些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物以大于20mg/kg、大于约25mg/kg或大于约30mg/kg的剂量施用，其中所述量足以使所述受试者的血清转氨酶水平维持在低于约40U/L。

在一些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物以大于500mg/m²的剂量施用，并且其量足以在所述给药后使所述受试者的血清转氨酶水平维持在低于约60U/L、低于约55U/L、低于约50U/L、低于约45U/L、低于约40U/L、低于约35U/L、低于约30U/L、低于约25U/L或低于约20U/L。在一些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物以大于500mg/m²、大于约550mg/m²或大于约600mg/m²的剂量施用，其中所述量足以使所述受试者的血清转氨酶水平维持在低于约40U/L。

在一些实施方案中，本公开内容提供了治疗将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述自闭症谱系障碍不是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式。在一些实施方案中，该方法进一步包括通过响应于所述鉴定施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

在一些实施方案中，本公开内容提供了治疗将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述自闭症谱系障碍是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式。在一些实施方案中，该方法进一步包括通过响应于所述鉴定施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

在一些实施方案中，施用本公开内容的抗嘌呤能药物以使血浆浓度维持一段时间，这可能需要多剂量的化合物。在一些实施方案中，每天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次或每八周一次施用本公开内容的抗嘌呤能药物。

在某些实施方案中，每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次或甚至每六周一次施用(例如，静脉内施用)本公开内容的抗嘌呤能药物。在某些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物在三个月或更久的时间内每25至40天施用一次。例如，本公开内容的抗嘌呤能药物可以以单独选择的量每25至40天施用一次，每剂量为250mg/m²至约700mg/m²。在某些实施方案中，本公开内容的抗嘌呤能药物可以每25至40天施用一次，如每25至35天施用一次。在某些实施方案中，抗嘌呤能药物的剂量在给药过程中减少。例如，对受试者施用的第一剂量选自450mg/m²至约550mg/m²，并且25至40天后施用选自约350mg/m²至约450mg/m²的较小量的第二剂量。在某些实施方案中，每月剂量可以对于一个或多个月相同。例如，前述实例的第三剂量可以是与第二较小剂量相等的量，例如，第一剂量：500mg/m²，第二剂量：400mg/m²，第三剂量：400mg/m²。

在某些实施方案中，根据本发明的化合物通过非静脉内途径施用，以最大限度提高患者依从性或家庭环境中看护者给药的便利性。多项研究记录了自闭症谱系障碍受试者的药物依从性的挑战。对于治疗自闭症患者特别方便的特定给药途径是口服、皮下和直肠给药。对于看护者给药的其他给药途径包括肌肉内、阴道、吸入、雾化、皮肤和经皮给药。

实施例

以下说明性实施例代表本文所述的方法的实施方案，而不意味着以任何方式加以限制。

一般方法：

标准化测试和问卷

临床医生在3个时间点进行两次观察性检查：基线(56±8天；平均值±SEM；输注前)、输注后2天和输注后6周。两项基于检查者的度量是自闭症诊断观察量表，第2版(ADOS-2)，其使用在3台摄像机上录制的视频和音频文件，以及表达性单词图片词汇测试(EOWPVT)。这两种观察度量均由经过训练和证明合格的检查者使用批准的测试材料进行施用。三份标准化问卷由父母在3个时间点完成：基线、输注后7天和输注后6周。由父母完成的三份标准化问卷是58个问题的异常行为检查表(ABC)，75个项目的自闭症治疗评估检查表(ATEC)和33个项目的重复行为问卷(RBQ)。要求父母根据他们的孩子在过去7天表现如何来完成这三种量表。在六周结束时，我们加入了24个问题的临床总体印象(CGI)问卷(图16)。此外，要求父母列出他们观察到的在过去6周内变化最大的3种行为或症状。为尽量减少对症状的自然日常变化的曲解，要求父母只有在症状持续至少1周的情况下在6周CGI中将症状标记为变化。

数据完整性和誊写准确性的验证

从来自原始硬拷贝形式和来自电子医疗记录的电子表格汇编标准化问卷响应以及ADOS-2和EOWPVT得分(5,490个数据单元)。在5,490个结果得分中，共有87个单元(1.6％)被保留空白，由于被问及不适用的症状或是缺失。由于日程安排困难，一名参与者错过了6周的ADOS和EOWPVT评估。使用他的2天结果来估计他的6周得分。当该受试者从分析中剔除时，ADOS得分仍然显著(图8D)。EOWPVT结果也无变化(图9D)。还收集并审查了4,210个实验室和生命体征数据单元。当发现特定数据单元缺失时，通过检查原始问卷、实验室结果和临床数据表手动确认。编写随机生成程序，随机选择5％的数据。然后通过审查硬拷贝响应和Red Cap电子医疗记录来手动检查这些随机选择的数据单元的誊写准确性。

临床总体印象(CGI)

我们开发了24个问题的临床总体印象(CGI)量表，旨在评估自闭症谱系障碍的核心症状和一些最常见的共病特征(图16)。CGI量表评分系统是传统的7分制CGI改进量表。参见例如，Busner和Targum.Psychiatry.2007(4)：28-37。在该量表中，如果症状“从未成为问题”，历史给出的得分为0，1表示“改善极大”，4表示“无变化”，7表示“恶化极大”。除了24个结构化问题之外，我们还要求父母写下苏拉明输注后6周内变化最大的3种症状或行为。这种结构化和开放式响应的混合设计允许我们捕获与单剂量苏拉明治疗相关的大量临床结果。

实施例1：自闭症谱系障碍中苏拉明的I/II期SAT-1试验

入选/排除标准：

所有儿童均符合自闭症谱系障碍的DSM-5诊断标准，并接受自闭症诊断观察量表，第2版(ADOS-2)检查进行的证实性检测。入选标准包括男性，4至17岁，居住在加利福尼亚地区圣地亚哥，确诊患有ASD。

排除标准包括儿童的体重低于该年龄的第5百分位数，服用处方药，或具有肝、肾、心脏或肾上腺异常的实验室证据。居住在距离加州拉霍亚测试地点超过90分钟车程的儿童被排除在外，以消除因长时间汽车旅行而导致的异常行为的可能性。在第一项研究中排除了具有由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的ASD的已知综合征形式的儿童。要求家庭在整个研究期间不改变他们孩子的治疗(例如，补充剂、言语和行为疗法)或饮食。在随机化前，从所有参与者的父母那里获得签署的知情同意书，并另外同意拍摄视频和静态图像。

研究设计：

该研究从2015年5月27日(第一名儿童入选的日期)至2016年3月3日(最后一名儿童完成研究的日期)进行。

筛选了20名患有ASD的男性。16名符合入选标准。10名参与者可以通过年龄、非言语IQ和ADOS得分匹配为5对。随机化顺序由生物统计团队以电子方式生成。根据预先确定的随机化顺序，将每对中的受试者分配为接受苏拉明或盐水。随机化顺序对临床研究小组保密，并且由UCSD研究药房实施，该药房制备药物和安慰剂以供输注。设计是双盲的。直到所有受试者完成研究并且收集所有临床数据后，才停止遮掩。表1总结了研究的每组中包括的患者特性，图1总结了患者选择。

通过首先施用测试剂量，然后在确认无即时副作用后进行更长时间的输注来执行药理学治疗。紧邻输注前，记录身高和体重，测量生命体征和毛细血管氧饱和度(脉搏血氧定量法)，进行身体和神经检查，并收集尿液和血液用于安全监测、药理学和代谢组学。

对于测试剂量，通过在3分钟缓慢静脉内(IV)推注给予50mg苏拉明六钠(BayerPharmaceuticals，Inc.)的5mL盐水溶液(实验组，5名患者)，或仅5mL盐水(对照组，5名患者)，然后用10mL盐水冲洗。在测试剂量后1小时，重复测量生命体征并在30分钟给予单次输注苏拉明(20mg/kg，减去50mg测试剂量，50mL，至多1g)或盐水(50mL IV)，然后用10mL盐水冲洗。

通过在基线(输注前32±6天；平均值±SEM)、紧邻输注前、输注后1小时、输注后2天和输注后45天收集的生物样品(血液和尿液)进行毒性、药代动力学和安全性监测。在每个这些时间点，监测18种生命体征和人体测量特征、19种全血细胞计数(CBC)参数、20种血液化学量度、3种甲状腺和皮质醇量度以及5种脂质量度(参见图2和图3对该数据的概述)。在紧邻输注前和输注后的4个时间点通过血清分离评估苏拉明药代动力学。此外，在4个时间测量24种尿液分析特征：基线、输注前、输注后2天和输注后45天。记录发生的意外和不良事件，并根据美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准4.03版(CTCAE)量表按严重程度分级。另外的药物警戒监测包括第一周的每日脚本化电话，然后是每周4次电话，直到第6周离开检查。

治疗的行为和神经影响主要通过基于检查者的ADOS-2方案得分和标准化词汇测试(表达性单词图片词汇测试，EOWPVT)来评估，次要评估是通过基于父母的评估(异常行为检查表(ABC)得分、自闭症治疗评估检查表(ATEC)得分、改善的临床总体印象(CGI)得分和重复行为问卷(RBQ)得分)。有关行为测试施用的信息，请参见一般方法。在研究前，通过ADOS-2比较得分≥7确认每名入选参与者的诊断，并通过Leiter-3检查测试非言语IQ。在输注后2天和6周评估基于检查者的结果(ADOS和EOWPVT)。在输注后7天和6周评估基于父母的结果(ABC、ATEC、CGI和RBQ)。为使自然行为变异的影响最小化，要求父母只有在行为持续改变至少1周时才将其标记为改变。

该研究得到了美国食品药品监督管理局(IND#118212)和加利福尼亚大学圣地亚哥分校(UCSD)机构审查委员会(IRB项目#150134)的批准。该研究符合世界医学会《赫尔辛基宣言》——涉及人类受试者的医学研究的伦理原则，以及国际协调会议(ICH)E6药品临床试验管理规范(GCP)。该试验已在clinical trials.gov中注册。(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02508259)。SAT-1试验的完成和报告符合CONSORT2010指南。

表1：各研究组患者的分组特性

*Mosteller方法.缩写：BSA：体表面积；HC；头围；GI：胃肠；IVF：体外受精；ASD：自闭症谱系障碍。¹针对连续数据为学生t检验；针对分类数据为Fisher精确检验。²服用处方药的患者被排除在研究之外。这包括抗惊厥药物。

实施例2：自闭症的苏拉明治疗的安全性/功效分析

在实施例1的用于ADOS、EOWPVT、ABC、ATEC、RBQ分析的配对t检验设计(图4-图11显示个体分析)以及血液和尿液安全性数据(图2和图3显示个体分析)中，使用每名儿童作为他自己的对照以检查治疗之前和之后的功效。配对非参数分析通过Wilcoxon符号秩和检验进行。通过Fisher精确检验分析分类数据，如是否存在不良事件或历史症状。使用经Sidak事后校正的双向ANOVA(治疗x时间)分析由ADOS、CGI和另外的血液和尿液安全性分析捕获的6周总结。使用Cohen’s d——计算为治疗前后成对的受试者内得分的平均差异除以差异的标准偏差——作为疗效大小的估计。

广泛的监测显示无严重的毒性(CTCAE等级3-5)。神经检查显示无周围神经病变(表2)。游离皮质醇、血红蛋白、白细胞计数(WBC)、血小板、肝转氨酶、肌酐和尿蛋白的分析显示接受苏拉明和安慰剂的儿童无差异(图2和图3)。接受苏拉明治疗的5名儿童的身体的1％-20％形成了自限性、易消散、无症状、细黄斑、斑块状、麻疹样的皮疹(图3D/图3E)。这在输注后1天达到峰值，并在2-4天内自行消失。皮疹并未隆起且不发痒。其不是荨麻疹的。孩子们似乎没有注意到。在第2天的评估中，任何残留的皮疹都被衣物覆盖，且在暴露的皮肤上不可见。父母被告知不要与神经心理学小组讨论该皮疹，以减少检查员偏见的可能性。ADOS测试的摄像机记录确认不存在任何可见皮疹。皮疹是苏拉明治疗的已知风险，在知情同意文件中有描述。独立数据安全监测委员会(DSMB)审查了该信息，以及该研究的临床安全性和毒性数据以及IRB通信，未发现任何安全性问题。

苏拉明的单次20mg/kg静脉内剂量与通过ADOS、ABC、ATEC和CGI得分测量的语言、社会互动和减少限制或重复行为的得分改善相关联(表3)。在接受安慰剂的5名儿童中未发生这些改善。

主要结果量度是ADOS-2和表达性单词图片词汇(EOWPVT)得分(表3)。父母报告在苏拉明治疗后，语言、社交、行为和发育变化的比率持续增加3周，然后在接下来的3周内逐渐下降至基线。在第6周时，苏拉明治疗组中的ADOS-2比较得分平均提高-1.6±0.55分(平均值±标准偏差；n＝5；95％CI＝-2.3至-0.9；Cohen’s d＝2.9；p＝0.0028)，而在盐水组无变化。为保守起见，我们通过参数和非参数方法计算了p值(表3)。该组的平均ADOS比较得分在基线时为8.6±0.4，在苏拉明治疗后6周时为7.0±0.3。在基线和第6周测量的苏拉明组和安慰剂组的ADOS得分的双向ANOVA也是显著的(治疗x时间相互作用F(1，8)＝12.0；p＝0.0085；图4A)。盐水治疗组的ADOS得分无变化(表3)。EOWPVT得分无变化(表3)。

几种次要结果量度也显示出改善。这包括ABC、ATEC和CGI得分的改善(表3)。重复行为问卷(RBQ)得分未发现变化。CGI涵盖的24种症状中有4种是显著的(图10C)。还要求父母指出输注后6周的三种最常见、改变最多的行为作为CGI的非结构化组分。提出了五种达到了统计上显著结果的症状。这些症状是社会交流和玩耍、言语和语言、冷静和专注、刺激或刻板行为以及应对技巧(图10C)。

表2：不良或意外事件总结

¹CTCAE：通用不良反应术语标准v4.03。轻度至中度＝1-2级；严重＝3-5级。²Fisher精确检验。³URI：上呼吸道感染，感冒。该研究于10月至3月进行。⁴7岁儿童，在打完青年联赛篮球后食用披萨和slushee后。⁵6岁儿童，在乘车后。⁶在5岁和14岁的儿童中，在第一周(14岁)或前3周(5岁)中混有冷静的专注时段。⁷输注后6周，经过几天的感冒和午餐前禁食。低血糖是无症状的，并在正常午餐后得到纠正。⁸白细胞增多症(12.2k WBC)发生在输注盐水当天，并在之后发生URI ⁹7岁儿童，在感冒时短暂发生了几天。这些事件均无需医疗干预。本研究未发生严重不良事件(SAE)。

表3：苏拉明或安慰剂治疗的行为结果

¹按照惯例，正Cohen’s d反映了改善。在这项小型研究中，基于治疗前后发现的较大平均差异和较小的标准偏差，Cohen’s d可能会高估实际治疗效果。²使用参数配对t检验分析的P值。³使用非参数配对Wilcoxon符号秩和分析的P值。缩写ADOS-2：自闲症诊断观察量表，第2版。EOWPVT：表达性单词图片词汇测试。ABC：异常行为检查表。ATEC：自闭症治疗评估检查表。CGI：临床总体改善印象调查。RBQ：重复行为问卷。Restr/Rep：限制或重复行为。整体ASD Sx：整体ASD症状。E.语言：表现性语言。社会Inter：社会互动。分析。使用每名受试者作为其自身的对照，在治疗前后通过配对分析来分析ADOS、EOWPVT、ABC、ATEC和RBQ得分。通过双向ANOVA(治疗前后的症状x时间)和事后校正分析CGI。未计算非参数p值(n/a)。解释ADOS、ABC、ATEC、CGI和RBQ是严重程度得分；与基线的负差异反映了严重程度降低，即改善。EOWPVT是表现得分；负差异反映了降低。

实施例3：儿科患者的苏拉明药代动力学

通过高效液相色谱和串联质谱(LC-MS/MS)测量在实施例1所述的研究的输注前、输注后1小时、2天和45天时收集的血浆样品的苏拉明浓度。

制备90μl肝素化血浆用于LC-MS/MS分析。添加十(10)μl的50μM台盼蓝储液，以达到5μM的内标浓度。将其在室温下温育10min，以允许代谢物与结合蛋白质相互作用，然后用4体积(400μl)预冷的甲醇-乙腈(50∶50)提取，以产生40∶40∶20(甲醇∶乙腈∶H2O)的最终浓度，并在冰上沉淀10分钟。使样品脱蛋白质，并且通过在碎冰上沉淀10min来去除大分子。

将混合物在4℃下以16,000g离心10min，并将上清液转移到新管，并保持在-80℃下以供进一步LC-MS/MS分析。

在配备有Turbo V电喷雾电离(ESI)源、Shimadzu LC-20A UHPLC系统和PAL CTC自动取样器的AB SCIEX QTRAP 5500三级四极杆质谱仪上检测制备的样品中的苏拉明。将10微升提取物注射到Kinetix F5柱(100×2.1mm，2.6μM；Phenomenex，CA)，保持在30℃下以供色谱分离。流动相A是含有20mM乙酸铵(NH4OAC)的水(pH 7)，流动相B是含有20mM NH4OAC的甲醇(pH 7)。使用以下梯度进行洗脱：0-1.5min-0％B，1.6-3min-15％B，3.1-7min-60％B，7.1-13min-100％B，14min-0％B，18min-0％B，18.1min-结束。流速为400μl/min。所有样品在分析期间保持在4℃下。使用MRM扫描模式检测苏拉明和台盼蓝，停留时间为180ms。苏拉明的双电荷形式的MRM转变对于(Q1)前体为647.0m/z，对于(Q3)产物为382.0m/z。台盼蓝的MRM转变为435.2(Q1)和185.0(Q3)。使用在血浆中制备的标准曲线确定苏拉明的绝对浓度以解释基体效应，以及苏拉明与内标台盼蓝的峰面积比。苏拉明的去簇电压(DP)、碰撞能(CE)、入口电压(EP)和碰撞出口电压(CXP)为-104、-9.5、-32和-16.9，而台盼蓝为-144.58、-7、-57.8和-20.94。ESI源参数设置如下：源温度500℃；气帘气30；离子源气体1，35；离子源气体2，35；喷雾电压-4500V。使用Analyst v1.6进行数据采集和分析。

每名受试者的PK样品的数目较少，因此无法对个体受试者进行标准非隔室分析。使用群体PK方法借助个体受试者中PK参数的事后经验贝叶斯估计分析苏拉明药物浓度。使用计算机程序NONMEM(ICON，Dublin，Ireland)将PK数据拟合至两隔室模型。PK参数按比例缩放，体积项按比例缩放至线性体重(kg1.0)，清除项按比例缩放至体重(kg0.75)。使用缩放的成人苏拉明的分布和清除的隔室体积参数作为初始参数估计，并仅在清除(CL)和外围分布体积(Vd)方面估计受试者间变异性。

两隔室药代动力学模型允许在输注后1小时至6周准确预测血浆药物水平。药代动力学分析显示，在静脉内输注20mg/kg(558±41mg/m2；平均值±标准偏差；参见表4)后1小时，苏拉明浓度为104±11.6μM(图12A)。α(分布)相半衰期为7.4±0.55小时。在所有受试者中，在第2天之前苏拉明水平迅速降至100μM以下并进入目标范围，第2天苏拉明的平均血浆水平为12.0±1.5μM(图12B)。1.5-15μM的目标浓度在给药后2天至5-6周之间得以维持(图11)。稳态分布体积为0.83±0.014L/kg(22.7±2.6L/m2)。清除为1.95±0.21mL/hr/kg(0.056±0.011L/hr/m2)。终末消除期半衰期(t1/2)为14.7±1.4天(图12CD)。药代动力学参数的低变异性与第2天浓度的低变异性一致(CV＝12％)。

这些数据是关于苏拉明在儿科群体中的药代动力学的公开文献中的首次发现。

表4：单剂量苏拉明药代动力学

*Mosteller方法

实施例4：儿科患者中苏拉明生物效应的代谢组学分析

通过高效液相色谱和串联质谱(LC-MS/MS)对从实施例1中的患者收集的样品进行来自63条生化途径的610种代谢物的靶向、广谱、血浆代谢组学分析。是在上午8点至下午5点之间在最后进食后至少3小时将静脉血收集至锂-肝素真空管(BD#367884)。在收集后1小时内，通过在室温下以900g×10分钟离心来分离血浆。将所得新鲜锂-肝素血浆转移至标记的1.2m1或2.0m1外螺纹冻存管，其具有最小顶空气隙以在-80℃下储存以供分析。在配备有Turbo V电喷雾电离(ESI)源、Shimadzu LC-20A UHPLC系统和PAL CTC自动取样器的ABSCIEX QTRAP5500三级四极杆质谱仪上分析样品。通常，将90μl血浆在冰上解冻，并转移至1.7ml的Eppendorf管。添加五(5.0)μl含有25-35商业稳定同位素内标的混合物，并添加5.0μl通过用13C-葡萄糖和13C-碳酸氢盐代谢标记，在大肠杆菌(E.coli)NCM3722、秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)N2和巴斯德毕赤酵母(Komagataella phaffii)(ATCC76273；旧称Pichia pastoris)中定制合成的57种稳定同位素内标，混合，并在20℃下温育10min以允许内标中的小分子和维生素与血浆结合蛋白相关联。大分子(蛋白质、DNA、RNA、聚糖等)通过用4体积(400μl)的冷(-20℃)乙腈∶甲醇(50∶50)(LCMS级，目录号LC015-2.5和GC230-4，Burdick&Jackson，Honeywell)提取沉淀，剧烈涡旋，在碎冰上温育10min，然后通过在4℃下以16,000g x 10min离心来去除。将所得乙腈∶甲醇∶水的40∶40∶20的溶剂混合物中含有提取的代谢物和内标的上清液转移至标记的冻存管，并储存在-80℃下以供LCMS/MS分析。

在Analyst v1.6.2软件控制的编程的多反应监测(sMRM)以快速极性切换(50ms)在负模式和正模式下进行LC-MS/MS分析。使用氮气用于气帘气(设置为30)、碰撞气(设置为高)、离子源气体1和2(设置为35)。源温度为500℃。喷雾电压在负模式下设置为-4500V，在正模式下设置为5500V。确定每种代谢物的Q1和Q3质荷比(m/z)、去簇电压(DP)、入口电压(EP)、碰撞能(CE)和碰撞出口电压(CXP)的值，并针对每种代谢物的MRM进行优化。采用PALCTC自动进样器通过10微升不锈钢环将10μl提取物注入250mm×2.0mm，4μM基于聚合物的NH2 HPLC柱(Asahipak NH2P-40 2E，Showa Denko America，Inc.，NY)，该柱保持在25℃以供进行色谱分离。流动相为溶剂A：95％水与20mM(NH4)2CO3(Sigma，Fluka目录号74415-250G-F)、5％乙腈和38mM NH4OH(Sigma，Fluka目录号17837-100ML)，最终pH 9.75；溶剂B：100％乙腈。使用以下梯度实现分离：0-3.5min：95％B，3.6-8min：85％B，8.1-13min：75％B，13.5-35min：0％B，36-46min：95％B，46.1min：结束。流速为200μl/min。在梯度过程中，泵压力范围为920-2600psi。将所有样品在分析期间保持在4℃下。使用MultiQuant(v3.0，Sciex)鉴定色谱峰，通过人工检查确认，并积分峰面积。

通过对照标准偏差对代谢组学数据进行对数转换，并通过多变量偏最小二乘判别分析(PLSDA)进行分析，并使用MetaboAnalyst36中的Fisher最小显著差异方法或Benjamini和Hochberg的错误发现率(FDR)方法进行成对比较和事后校正用于多重假设检验。具有由PLSDA确定的变量重要性投影(VIP)得分大于1.5的代谢物被认为是显著的。Spearman非参数相关方法在Stata(Stata/SE12.1，StataCorp，College Station，TX)、Prism(Prism 6，GraphPad Software，La Jolla，CA)或R中采用。显著的代谢物被分组到途径中，并将其VIP得数相加，以确定每种生化途径的等级排序显著性。

该试验中受试者的较小数目阻止进行常规治疗组分析，因为在仅有5名受试者的组中，与测量610种代谢物相关的错误发现率很高。然而，通过在输注前和输注后结果的配对分析中使用每名儿童作为他们自己的对照，可以表征苏拉明的药物代谢组学作用(图13)。苏拉明治疗后6周48种显著代谢物中前35种的等级顺序如图13A所示。然后根据生化途径组织最显著改变的代谢物(表5)。苏拉明改变的大多数途径是细胞危险响应的已知特征。

代谢组学研究证实了细胞危险响应(CDR)和嘌呤能信号传导的重要性；因为苏拉明的代谢作用导致细胞危险响应减少，并恢复更正常的新陈代谢。嘌呤代谢是一种改变最多的途径。苏拉明增加了健康的嘌呤，如AICAR，其为主代谢调节因子AMP激酶的激活剂。1-甲基腺嘌呤(1-MA)也有增加。1-MA衍生自1-甲基腺苷，其为最近公认的新蛋白质合成和细胞生长的标志物。苏拉明减少了血浆中的其他嘌呤，如cAMP和dGDP(图13，表6-表8)。

虽然在输注后第2天无显著的行为结果，但我们发现苏拉明在输注后第2天改变了28种生化途径(表6)。其中22种(79％)在第6周时间点仍然有变化(表5)。代谢物的等级排序在第2天发生最大变化，其相关的代谢途径在图14中示出。由苏拉明显著改变的第2天时的61种代谢物和第6周时的48种代谢物的完整列表见表7-表8。

表5：苏拉明药物代谢组学：6周时改变的生化途径

表6：苏拉明药物代谢组学。2天时改变的途径

表7：苏拉明药物代谢组学。2天时改变的代谢物

表8：苏拉明药物代谢组学。6周时改变的代谢物

尽管本文已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员将会显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不脱离本发明的情况下现将想到多种变化、改变和替代。应当理解，本文中所述的本发明实施方案的各种替代方案均可用于实施本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。

Claims (80)

1.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，其量足以使所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约30μM的范围内维持21天或更久。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约25μM的范围内维持21天或更久。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持21天或更久。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持28天或更久。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物血浆水平在约3μM至约15μM的范围内维持45天或更久。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物血浆水平维持在约5μM至约15μM的范围内。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述施用发生两次或更多次。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物静脉内施用。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物口服、皮下、肌肉内、吸入、皮肤或经皮施用。

10.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物不静脉内施用。

11.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，其量足以使所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约30μM维持至少约21天，其中所述抗嘌呤能药物不静脉内施用。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约15μM的范围内维持21天或更久。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述施用选自口服、皮下、肌肉内、直肠、吸入、雾化、皮肤和经皮的。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述施用是皮下的。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述施用是口服的。

16.根据权利要求11至15中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物血浆水平维持在约5μM至约15μM。

17.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，其量足以使所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约30μM维持至少约21天，其中所述抗嘌呤能药物以两个或更多个剂量施用。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约15μM的范围内维持21天或更久。

19.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以三个或更多个剂量施用。

20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物血浆水平维持在约5μM至约15μM。

21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的剂量静脉内施用。

22.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的剂量口服、皮下、肌肉内、吸入、皮肤或经皮施用。

23.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的剂量不静脉内施用。

24.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括向所述受试者施用抗嘌呤能药物，在所述施用后的一个或多个时间点测试所述受试者的抗嘌呤能药物血浆水平，评价来自所述一个或多个时间点的所述抗嘌呤能药物血浆水平以确定针对所述受试者的治疗方案，其量足以实现约1μM至约30μM的抗嘌呤能药物血浆水平。

25.根据权利要求24所述的方法，其中针对所述受试者的所述治疗方案的量足以实现约1μM至约15μM的抗嘌呤能药物血浆水平。

26.根据权利要求20所述的方法，其中针对所述受试者的所述治疗方案的量足以实现约5μM至约15μM的抗嘌呤能药物血浆水平。

27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，进一步包括向所述受试者施用所述抗嘌呤能药物的一个或多个剂量，其量足以使血浆水平在约1μM至约30μM维持21天或更久。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述向所述受试者施用所述抗嘌呤能药物的一个或多个剂量，其量足以使血浆水平在约1μM至约30μM维持40天或更久。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中周期性地评价血浆水平，如每5天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。

30.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括以第一剂量向所述受试者施用抗嘌呤能药物，然后进行10-40天的治疗假期，然后施用所述抗嘌呤能药物的第二剂量。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述第一剂量在约10mg/kg至约30mg/kg的范围内。

32.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述第二剂量在约10mg/kg至约30mg/kg的范围内。

33.根据权利要求30所述的方法，其中所述第一剂量在约400mg/m²至约600mg/m²的范围内。

34.根据权利要求30或33所述的方法，其中所述第二剂量在约400mg/m²至约600mg/m²的范围内。

35.根据权利要求30至34中任一项所述的方法，其中所述治疗假期在约12天至约20天的范围内。

36.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，其中所述治疗包括向所述受试者施用大于20mg/kg的抗嘌呤能药物的剂量。

37.根据权利要求36所述的方法，其中向所述受试者施用约21mg/kg至约40mg/kg的抗嘌呤能药物的剂量。

38.根据权利要求37所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以在所述施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.3mg/dL以下的量施用。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以在所述施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.0mg/dL以下的量施用。

40.根据权利要求36至39中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以在所述施用后将所述受试者的血清转氨酶水平维持在40U/L以下的量施用。

41.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，其中所述治疗包括向所述受试者施用大于300mg/m²的抗嘌呤能药物的剂量。

42.根据权利要求41所述的方法，其中向所述受试者施用约350mg/m²至约600mg/m²的抗嘌呤能药物的剂量。

43.根据权利要求42所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以在所述施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.3mg/dL以下的量施用。

44.根据权利要求43所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以在所述施用后将所述受试者的血清肌酐水平维持在1.0mg/dL以下的量施用。

45.根据权利要求41至44中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以在所述施用后将所述受试者的血清转氨酶水平维持在40U/L以下的量施用。

46.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括以小于20mg/kg的第一剂量向所述受试者施用抗嘌呤能药物，然后是2-20天的治疗假期，然后施用所述抗嘌呤能药物的第二剂量。

47.根据权利要求46所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的第一剂量选自约1mg/kg至约19mg/kg。

48.根据权利要求46或47所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的第二剂量选自约1mg/kg至约19mg/kg。

49.根据权利要求46至48中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以使所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约15μM的范围内维持21天至约50天的量施用。

50.一种治疗有需要的受试者中的自闭症谱系障碍的方法，包括以小于350mg/m²的第一剂量向所述受试者施用抗嘌呤能药物，然后是2-20天的治疗假期，然后施用所述抗嘌呤能药物的第二剂量。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的第一剂量选自约50mg/m²至约300mg/m²。

52.根据权利要求50或51所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物的第二剂量选自约50mg/m²至约600mg/m²。

53.根据权利要求50至52中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物以足以使所述受试者的所述抗嘌呤能药物血浆水平在约1μM至约25μM的范围内维持21天至约50天的量施用。

54.一种鉴定将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述自闭症谱系障碍不是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式。

55.根据权利要求54所述的方法，其中所述方法进一步包括通过响应于所述鉴定步骤施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

56.一种鉴定将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述自闭症谱系障碍是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式。

57.根据权利要求56所述的方法，其中所述方法进一步包括通过响应于所述鉴定步骤施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

58.一种鉴定将受益于抗嘌呤能药物治疗的受试者的方法，包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者，其中所述受试者具有胃肠疾病或病症的一种或多种症状。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述方法进一步包括通过响应于所述鉴定步骤施用抗嘌呤能药物来治疗所述受试者。

60.根据权利要求1至59中任一项所述的方法，其中所述抗嘌呤能药物包括苏拉明、其盐或其前药。

61.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中所述受试者是儿童。

62.根据权利要求1至60中任一项所述的方法，其中所述受试者为18岁或更小。

63.根据权利要求1至53中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者的步骤，其中所述自闭症谱系障碍是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式，其中所述步骤在所述施用之前进行。

64.根据权利要求63所述的方法，其中所述施用响应于所述鉴定步骤。

65.根据权利要求1至53中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括鉴定患有自闭症谱系障碍的受试者的步骤，其中所述自闭症谱系障碍不是由DNA突变或染色体拷贝数变异(CNV)引起的自闭症谱系障碍的已知综合征形式，其中所述步骤在所述施用之前进行。

66.根据权利要求65所述的方法，其中响应于所述鉴定步骤治疗所述受试者。

67.根据权利要求1至66中任一项所述的方法，其中所述自闭症谱系障碍包括选自沟通困难、与他人互动困难和重复行为的一种或多种症状。

68.根据权利要求1至67中任一项所述的方法，其中治疗所述自闭症谱系障碍包括改善在所述施用之前与所述受试者的症状相关的一种或多种症状，其中所述一种或多种症状选自沟通困难、与他人互动困难和重复行为。

69.根据权利要求1至68中任一项所述的方法，其中治疗所述自闭症谱系障碍包括相对于所述施用前的所述受试者的得分，改善选自ADOS、ABC、ATEC和CGI得分的所述受试者的评估得分。

70.根据权利要求69所述的方法，其中相对于所述施用前所述受试者的得分，选自ADOS、ABC、ATEC和CGI得分的所述受试者的评估得分改善了10％或更多。

71.根据权利要求70所述的方法，其中相对于所述施用前的得分，所述受试者的ADOS得分改善1.6或更多，或为类似测试的相应表现改善。

72.根据权利要求68或71所述的方法，其中所述ADOS得分或类似测试的表现改善的p值为0.05或更小。

73.根据权利要求68至72中任一项所述的方法，其中所述ADOS得分或类似测试的改善的效应量为约1或更大。

74.根据权利要求73所述的方法，其中所述ADOS得分或类似测试的改善的效应量为约2.9或更大。

75.根据权利要求1至74中任一项所述的方法，其中在所述施用后，AUC为约80μM*天至约400μM*天。

76.一种药物组合物，包含苏拉明的前药和药学上可接受的赋形剂。

77.一种适用于静脉内施用的药物组合物，其中所述组合物包含苏拉明或其盐以及选自抗微生物剂、聚乙二醇、稳定剂和抗氧化剂的一种或多种赋形剂。

78.一种药物组合物，包含苏拉明、增加苏拉明的口服吸收的递送系统和药学上可接受的赋形剂。

79.根据权利要求78所述的药物组合物，其中所述递送系统包括聚合物递送系统。

80.根据权利要求79所述的药物组合物，其中所述聚合物递送系统包括脂质体、纳米颗粒或微球。