CN110479390A - 一种基于微线框模板的样品制作方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于微线框模板的样品制作方法，包括：根据样品本身的结构，制作对应的微线框模板；将所述微线框模板置于承载面上，浇注；待浇注料液部分固化或者完全固化后，移去承载面；将微线框模板与部分固化或者完全固化后的样品分离，得到部分固化的中间样品或者完全固化的目标样品。本发明的基于微线框模板的样品制作方法，通过对传统模具浇注制作方式的思维转变，直接通过设计与样品结构直接相关的微线框模板，实现对样品结构的定模，剔除了传统模具的整体结构，通过现有的承载面，同时配合简单的限位组件即可实现对样品料液的浇注，通过微线框模板，实现对样品结构的构建。

Description

一种基于微线框模板的样品制作方法及应用

技术领域

本发明涉及微纳制造领域，尤其涉及一种基于微线框模板的样品制作 方法及应用。

背景技术

水凝胶等软脆性材料由于其优异的，可调控的物化性能，在生物医药， 组织工程，柔性电子以及微制动器等领域得到了广泛的应用。然而，对这 些软脆性材料进行微纳加工长期以来都是一个难题。尽管以光刻技术为代 表的传统IC制造工艺已经成熟，但是其主要基于半导体材料，无法直接 迁移到其他材料的制造。

目前常用的且较通用的方法为浇注脱模法，先利用传统IC工艺制造 模具，然后浇注材料预聚物并且固化，最后可在材料表面形成预设图案。 然而这种方式也有诸多缺点：1.传统IC工艺制造模具为整体式模具，脱模 时模具与材料为面接触，接触面积很大导致形成的脱模应力也很大，从而 使得脱模结束后会产生很多缺陷。尤其当脱膜材料软而脆，且制造结构复 杂，深宽比高时，传统方式的破坏会更大。2.传统方式在制造模具时成本 高昂，效率低下；特别是对于结构复杂的样品，开发模具困难较大；且模 具一旦制作完成，就没办法改变模具结构，仅仅适合批量化生产。

发明内容

本发明提供了一种基于微线框模板的样品制作方法，该方法突破传统 的模具加工方式，利用微线框模板实现对样品结构的定型，可以实现无损 脱模，能够实现在各种软脆性材料上进行各种图案的微纳尺度制造。且模 具耗材大大降低，模具制作过程大大简化，制作成本大幅度降低。

本发明还提供了一种由上述方法制作微流控芯片或者血管芯片的应 用。

一种基于微线框模板的样品制作方法，包括：

根据样品本身的结构，制作对应的微线框模板；

将所述微线框模板置于承载面上，进行料液的浇注；

待料液部分固化或者完全固化后，移去承载面；

将微线框模板与部分固化或者完全固化后的样品分离，得到部分固化 的中间样品或者完全固化的目标样品。

作为一种优选的实施方案，包括如下步骤：

(1)根据代加工样品的结构，利用各种制造方法在承载面上沉积微 线框制作微线框模板；

(2)配制浇注材料预聚物；

(3)在限位组件的配合下，将预聚物溶液浇注在打印好的微线框模 板上；

(4)根据预聚物性质，选择固化方式，实现固化或部分固化；

(5)将部分固化或者完全固化的材料连同微线框模板与承载面分离；

(6)将微线框模板抽离部分固化或者完全固化的材料表面，获得预 设形状的流道，实现无损脱模。

所述样品的结构，主要是那些具有特定功能的流道结构，即可以是封 闭的流道结构，也可以是开放的流道结构，比如沟槽等。本发明直接根据 样品本身的流道或沟槽结构，制作对应的微线框模板，微线框模板的结构 直接与所述流道或沟槽结构对应，与其余结构无关，这样就克服了传统模 具，体积大，制作复杂，制作材料要求具有特定机械强度和材质的要求。

本发明的材料部分固化或者完全固化后之后会与微线框模板结合，随 后可将微线框模板上的微线框模板连同部分固化或者完全固化材料一同 从承载面上分离。本发明的承载面可以是各种易于与微线框模板及样品材 料分离的同时能够起到支撑作用固定面结构或者材料。包括但不限于玻璃 板等。

本发明在实际制作时，为了便于料液的定型，需要采用围框或者围板 结构的限位组件进行辅助。在料液浇注时，可以通过限位组件对未固化或 者未完成固化的料液起到限位作用。使用完成后，直接将限位组件拆除。 比如可以在完成与承载面的分离后，将限位组件拆除，也可以在脱除微线 框模板后将限位组件拆除。作为一种实施方式，所述限位组件为组成常见 几何结构的多个围板组成，多个围板之间，可以通过简单的可拆卸固定件 实现相邻两个围板之间的固定，拆卸时，通过固定件可以实现对围板的拆 卸，进一步实现对限位组件的拆卸，当然，也可以直接将限位组件整体拆 卸。

对于带有沟槽结构的样品，其制作的微线框模板与其流道或者沟槽结 构对应。对于带有流道(或者微流道)结构的样品，可以采用多次固化的 形式进行制作，比如可以加工两片带有沟槽(一半流道结构)的部分固化 (或部分固化)样品，然后将两片部分固化样品贴合后，两个样品的沟槽 结构对正，形成完成的封闭流道结构，最终固化后即可得到所述的带有封 闭流道结构的样品。具体包括：对于具有封闭流道结构的样品，利用一次 固化条件分别得到两个具有对应沟槽结构的部分固化中间样品，将两个部 分固化中间样品的沟槽对正贴合，利用二次固化条件，最终得到完全固化 的目标样品。

本发明中，多次固化一般采用二次固化，其中一次固化条件和二次固 化条件可以是仅仅时间的不同，例如，本发明可以选用交联速度较为缓慢 的单一凝胶体系，可通过控制交联条件实现一次部分交联固化，此时一次 交联固化条件可以为某一特定的时间段，该时间段的长度根据实际水凝胶 的性质决定。在二次固化时，通过延长交联时间实现最终的固化，完成最 终的交联。当然，一次交联和二次交联也可以是温度的不同。或者是时间 和温度的匹配不同等。

本发明所述的一次固化条件和二次固化条件也可以完全不同的交联 条件，比如可以是通过温度控制，或者离子扩散或光固化实现交联等。作 为优选，所述一次固化条件与所述二次固化条件可分别独立的选择温度控 制、离子扩散或光固化。作为进一步优选，一次固化条件有两种：冷凝或 者离子交联。二次固化条件有两种：离子交联，光固化。

也就是说，对于仅带有沟槽结构的样品，可以直接通过本发明的方法， 一次固化完成样品的制作。对于带有封闭流道结构的样品，利用本发明的 方法，进行二次固化，即可完成对最终样品的制作。

所述料液为预聚物溶液，所述材料预聚物溶液为适应范围广泛的可温 度固化的PDMS(聚二甲基硅氧烷)或硅胶，或者为水凝胶(自明胶、海 藻酸钠、GelMA(甲基丙烯酰化明胶)中的任意一种或两种)，以及其他通过 各种物理化学方式交联的材料。

对于需要二次固化的样品，可以选择述两种不同交联体系的水凝胶， 比如可以是选自明胶、海藻酸钠、GelMA(甲基丙烯酰化明胶)中的任意两 种。作为优选，所述水凝胶为具有冷凝特性的明胶成分和具有光固化特性 的GelMA成分或者为明胶-海藻酸钠，海藻酸钠-GelMA的组合。作为优 选：所述水凝胶为具有冷凝特性的明胶成分和具有光固化特性的GelMA 成分，所述一次固化交联条件为4摄氏度恒温条件；所述二次固化交联条 件为405nm紫外光照射，LAP光引发剂浓度0.5％-1％。

本发明的微线框模板可以由各种现有的方法制作得到，比如可以包含 各种3D打印方式(例如熔融沉积3D打印(FDM)，电流体力学(EHD) 打印，光固化打印等等)，浇注成型法以及其他可以制作这种分离式微线 框模板的方法。

作为进一步优选，所述微线框模板有近场直写3D打印得到，近场直 写3D打印采用的打印材料为聚己内酯。进一步优选为分子量80000g/mol， 熔点60摄氏度的聚己内酯材料。

作为优选，近场直写3D打印的参数范围如下时：喷嘴-承载面距离 1mm-2mm，挤出压力7.5KPa-25KPa，打印速度10mm/min-2500mm/min， 电压值3.3kv-4.7kv，加热器温度：65摄氏度-75摄氏度。可以打印出比较 均匀的，直径在3um-100um的微线框。作为进一步优选，喷嘴-基板距离 1mm，挤出压力7.5kpa，打印速度20mm/min-100mm/min，电压值3.3kv 时，加热器温度75摄氏度，可以按照预先设定的拓扑结构，打印出复杂 图案微线框模板。

作为优选，利用手工剥离微线框模板或者溶剂溶解微线框模板的方式 将微线框模板与部分固化或者完全固化后的样品分离。进行手工剥离时， 当把柔性微线框从固化材料上抽离时，微线框同材料之间始终保持接触面 积很小的局部接触，脱模过程中产生的粘附力以及摩擦力也相应很小，从 而使得产生应力十分微小，实现无损脱模。作为优选，在进行手工无损脱 模时，需使用镊子夹住柔性微线框的一角，然后缓慢剥离，保证抽离时， 微线框与水凝胶始终是局部接触。

本发明中，料液的固化方式取决于所用材料的性质，包含温度固化， 光固化等等各种物理化学的交联方式。

一种微流控芯片，由上述任一项技术方案所述的方法制作得到。

一种具有内部血管网络的血管芯，利用上述任一项技术方案所述的方 法制作得到具有封闭流道结构的血管芯片，将血管内皮细胞均匀种植于流 道内壁，得到具有内部血管网络的血管芯。

所述血管芯片包括：包含动脉、毛细血管、静脉的完整的多级血管网 络；螺旋血管；血管狭窄；动脉粥样硬化病理模型等。

所述血管芯片可以用于构建血管化组织器官模型、血管生理功能的研 究、血管疾病机制的研究、肿瘤转移机制的研究等。

内皮细胞种植过程包括：细胞悬液配制、细胞悬液灌注、静置细胞贴 壁、翻转细胞贴壁、静态培养等。所述血管内皮细胞为人脐静脉内皮细胞。

本发明还提供了一种血管化的肿瘤组织模型，包括内皮血管网络以及 三维肿瘤组织。

作为优选，所述血管化的肿瘤组织模型内血管网络选用三级结构。

本发明还提供了一种用于肿瘤转移研究以及肿瘤药物筛选的肿瘤-血 管芯片，包括内皮细胞流道以及平行流道内的三维肿瘤组织。

作为优选，所述肿瘤-血管芯片选用5％猪皮明胶以及猪皮明胶制备的 5％0.2MGelMA复合水凝胶材料。

作为优选，所述肿瘤-血管芯片流道内径为400微米，平行流道间距 为500微米。

作为优选，所述肿瘤-血管芯片内内皮细胞的接种密度为10M个细胞 每毫升，肿瘤细胞的接种密度为20M个细胞每毫升。

作为优选，所述肿瘤-血管芯片选用7.5％0.2MGelMA包裹肿瘤细胞实 现肿瘤细胞的三维培养。

作为优选，所述肿瘤-血管芯片选用405nm蓝光，0.5％LAP光引发剂， 光照时间10秒。

本发明的基于微线框模板的样品制作方法，不同于传统的一体式模具， 该微线框模板的特点为微线框模板与承载面之间是可分离的。利用该种微 线框模板进行传统的浇注脱模过程时，仅会产生极小脱模应力从而实现无 损脱模。不同于传统的一次性整体面脱模，无损脱模首先会将固化材料或 部分固化材料同微线框一同与承载面分离，然后再将微线框模板剥离，通 过降低接触面积降低脱模应力。利用该制作方法，可以对一些软而脆的水 凝胶，聚合物等材料进行微纳制造，解决传统浇注脱模方法瓶颈。所述微 线框模板可以通过各种3D打印方式或者浇注成型方式形成，操作简单成 本低廉。所述无损脱模方法大大缩减传统脱模制造过程中的脱模应力，可 实现对软脆型水凝胶等材料的微纳制造。

通过本发明的制作方法，通过手工或者溶解的脱模方式，可是快速简 单的实现样品与模板的分类。可以用于制作微米级甚至纳米级的流道或者 沟槽结构。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1.利用两种模式的近场直写3D打印方法，可以实现复杂拓扑结构， 高精度的微线框模板制造。

2.相较于传统模具制造方法，效率高，成本低。

3.微线框模板不同于传统整体式模具，为可拆分式，为进一步实现无 损脱模打下基础。

4.无损脱模方式用抽离微线框的线脱模方式取代传统面脱模方式，大 大降低接触面积，从而大比例减小脱模应力。可以在一些软脆性材料上进 行传统脱模方法无法完成的，复杂图案的微纳制造。

5.相较于目前很多的微纳3d打印方式，该本发明可以轻易切换于多种 软脆性材料，适应性强。

6.本发明利用多尺度直写系统可以灵活打印具有任意尺度和结构的 仿生血管模板；模板的剥离和水凝胶片的键合依靠材料本身交联特性，无 需其他物质的引入，且交联条件温和，细胞损伤小，生物相容性好，可应 用于载细胞材料；复合材料可以扩展到其他具有不同交联体系的生物材料 组合；载细胞过程灵活方便，通过模板的构建和剥离可以预留空间用于后 续细胞的沉积；可以定制模型用于个性化和精准医疗；可用于研究肿瘤组 织和血管的相互作用以及肿瘤药物的跨血管传送。本发明的血管芯片形式 多样，功能多样，应用范围广。

总之，本发明的基于微线框模板的样品制作方法，通过对传统模具浇 注制作方式的思维转变，直接通过设计与样品结构直接相关的微线框模板， 实现对样品结构的定模，剔除了传统模具的整体结构，通过现有的承载面， 同时配合简单的限位组件即可实现对样品料液的浇注，通过微线框模板， 实现对样品结构的构建。大大减少了制模材料，降低了制模难度，使得各 种复杂结构以及微结构的样品的制作变为现实。

附图说明

图1为本发明中3D打印系统的示意图。

图2为本发明中打印制作微线框模板过程。

图3为本发明中浇注材料预聚物并且固化的示意图。

图4为本发明中微线框同水凝胶一同脱离基底的示意图。

图5为本发明中无损脱模方法的示意图。

图6为本发明中微线框模板构成的示意图。

图7图8为本发明中熔体近场直写3D打印工艺参数。

图9为本发明中所制做出水凝胶流道电镜图

图10为利用本发明中的制造方法制造出的复杂图案微线框模板电镜 图。

图11为本发明中制作出的复杂图案水凝胶微流道荧光共聚焦图。

图12为实施例2中得到的细胞芯片模板图。

图13为本发明实施例2中浇筑的示意图。

图14为本发明实施例2中部分交联的水凝胶片的示意图。

图15为本发明实施例2中完全交联的血管芯片的示意图。

图16为本发明中细胞接种沉积位置及状态的示意图。

图17为本发明所述方法制得的多尺度血管芯片的荧光共聚焦图。

图18(a)示出了所述血管芯片的轴向细胞电镜图。(b)示出了所述 血管芯片的径向细胞电镜图。

图19为本发明肿瘤转移模型的示意图。

图20为本发明所制得的肿瘤细胞迁移模型的细胞骨架共聚焦图。

图21为本发明所制得的肿瘤药物筛选模型的细胞活死共聚焦图。

图22为本发明所制得的肿瘤药物筛选模型的细胞活死数据柱状图。

具体实施方式

实施例1：以一块带有直径为50μm直线流道的水凝胶的构造为例， 对本发明所提及的制造工艺进一步说明。

最终构造流道类似图9所示，利用CAD技术设计出预想的直线流道 图案。

利用如图1所示近场直写3D打印系统，通过调控喷嘴-基板距离、挤 出压力、打印速度，电压值大小，加热器温度等参数，在承载面(本实施 例中，承载面采用玻璃板)上沉积直线型微线框，制作微线框模板。近场 直写3D打印系统的工艺参数如图7、图8所示，CDAS指最终流道的直 径，Fiber为打印出微线框直径，NSD为喷嘴-基板距离，NSD为1mm时， 电压值调为3.3kv，NSD为2mm时，电压值调为4.7kv。此处所需流道直 径为50μm，根据图7，可选工艺参数：NSD＝1mm,电压值＝3.3kv，打印速 度＝40mm/min，压力为15kPa。打印得到微线框模板，如图2所示。

打印好微线框模板之后，先放置在一旁，准备浇注所需材料。此处所 用浇注材料为浓度10％(w/v)的GelMa水凝胶。首先用去离子水和LAP (光引发剂Lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate)粉末配制 1％w/v的LAP溶液，称取一定质量GelMa材料，用LAP溶液通过涡旋振 荡溶解GelMA，得到10％w/v的GelMA前体溶液，后续固化时，该材料采用405nm紫外光交联。

如图3所示，准备好微线框模板和浇注所需材料之后，需要用一个限 位组件(本实施例中，限位组件为长方形的围框)将微线框模板图案围住， 再进行进一步浇注。浇注完毕此处用405nm紫外光照射材料半分钟至完全 固化。

图4～5为模拟示意图。

如图4所示，待材料固化完全，将完全固化的水凝胶同微线框模板一 同脱离玻璃板。此处在脱离前可将微线框模板和完全固化的水凝胶在4摄 氏度环境下静置10分钟左右，效果更佳。

最终如图5和图6所示，利用镊子将微线框纤维(即微线框模板)缓 慢剥离，确保剥离过程中微线框模板同水凝胶始终为局部接触，应力较小， 最终获得所需直径的直线型流道。

根据上述方法，还可以制作出图案更佳复杂的微线框模板如图10所 示，进而制作出带有复杂图案的水凝胶流道结构，如图11所示。

实施例2

以一个具有动脉、毛细血管、静脉完整血管网络的血管芯片的构造为 例，对本发明所提及的制造工艺进一步说明。

(1)制作微线框血管模板：仿照体内血管系统设计多尺度的多级血 管网络模型，选用PCL材料，利用FDM和EHD多尺度直写系统，实时 调控高压电源通断、喷嘴距离、挤出压力、打印速度等一系列打印参数， 打印出血管模型，即得到本发明的微线框结构的血管模板(即微线框模板)， 消毒待用。图12为制作的微线框模板。

(2)配制制作的微线框模板：用基本培养基和LAP粉末配制1％w/v 的LAP溶液，称取一定量的GelMA材料，用LAP溶液通过涡旋振荡溶 解GelMA，得到10％w/v的GelMA前体溶液，通过220nm过滤器过滤； 称取一定量的明胶颗粒，用去离子水通过37℃恒温磁力搅拌溶解明胶，得 到10％w/v的明胶前体溶液；将两种前体溶液混合，吹打均匀，得到复合 水凝胶预聚物溶液，放置于37度水浴待用。

(3)浇筑和一次固化：将所配制的复合水凝胶预聚物溶液浇筑于打 印好的血管模板上。图13示出了所述浇筑过程的示意图。放置于4℃环境 中，10分钟后取出。将血管模板从冷凝的水凝胶片上剥离下来，得到带有 表面血管网络形状凹槽的水凝胶片。图14示出了所述水凝胶片的示意图。

(4)二次固化：将这样两片水凝胶片贴合对齐，用用405nm波长的 蓝光手电筒，分别从上下两个面照5秒，得到具有封闭血管网络的血管芯 片。

将内皮细胞用胰酶消化制得每毫升10M个细胞的细胞悬液，并注入 上述制造得到的血管芯片的流道内，在3小时内每隔15分钟翻转90度， 之后在37℃恒温培养箱中静态培养，得到具有完整内部血管网络的血管芯 片。图16所示为细胞接种沉积位置及状态的示意图。图17示出了所构造 的多尺度血管芯片的荧光共聚焦图(转变成灰度图后，荧光部分变为灰白 色)。图18(a)示出了所述血管芯片的轴向细胞电镜图。图18(b)示出 了所述血管芯片的径向细胞电镜图。

可以看出，本方法制得的血管芯片在构造各种生理以及病理模型方面 具有很好的潜力。

实施例3：

以一个具有内皮流道以及平行肿瘤组织的筛药模型及肿瘤转移模型 的构造为例，对本发明所提及的制造工艺进一步说明。

选用PCL材料，利用多尺度直写系统，打印出一个具有两条平行流 道的血管模板，消毒待用。

用基本培养基和LAP粉末配制1％w/v的LAP溶液，称取一定量的 GelMA材料，用LAP溶液通过涡旋振荡溶解GelMA，得到10％w/v的 GelMA前体溶液，通过220nm过滤器过滤；称取一定量的明胶颗粒，用 去离子水通过37度恒温磁力搅拌溶解明胶，得到10％w/v的明胶前体溶 液；将两种前体溶液混合，吹打均匀，放置于37度水浴待用。

将所配制的复合水凝胶预聚物溶液浇筑于打印好的血管模板上。

将其放置于4℃环境，10分钟后取出。

将血管模板从冷凝的水凝胶片上剥离下来，得到带有表面血管网络形 状凹槽的水凝胶片。

将这样两片水凝胶片贴合对齐，用405nm波长的蓝光手电筒，分别从 上下两个面照5秒，得到具有封闭血管网络的血管芯片，其中形成两个独 立的流道。

将内皮细胞用胰酶消化制得每毫升10M个细胞的细胞悬液，并注入 其中一条流道内，在3小时内每隔15分钟翻转90度，之后在37度恒温 培养箱中静态培养，得到一条完整的内皮血管流道。参见图20。

用基本培养基和LAP粉末配制1％w/v的LAP溶液，称取一定量的 GelMA材料，用LAP溶液通过涡旋振荡溶解GelMA，得到10％w/v的 GelMA前体溶液，通过220nm过滤器过滤。

将肿瘤细胞用胰酶消化制得每毫升20M个细胞的细胞-GelMA悬液， 注入另一条流道内，立即用405nm波长的蓝光手电筒，分别从上下两个面 照5秒，得到三维肿瘤组织。参见图19。最终得到肿瘤-血管芯片。其细 胞骨架共聚焦图如图20所示。

利用本实验所述方法制得的肿瘤-血管芯片进行药物筛选实验。将不 同浓度的抗肿瘤药物-紫杉醇施加于内皮流道，通过渗透作用于相邻流道 内的肿瘤组织。图21示出了所制得的肿瘤药物筛选模型的细胞活死共聚 焦图。图22为示出了所制得的肿瘤药物筛选模型的细胞活死数据柱状图。

利用本实验所述方法制得的肿瘤-血管芯片进行肿瘤转移过程模拟和 研究。可以看出，本发明方法在构建肿瘤模型研究肿瘤发展机制以及测试 抗肿瘤药物方面具有巨大潜力。

Claims (9)

1.一种基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于：包括：

根据样品本身的结构，制作对应的微线框模板；

将所述微线框模板置于承载面上，浇注；

待浇注料液部分固化或者完全固化后，移去承载面；

将微线框模板与部分固化或者完全固化后的样品分离，得到部分固化的中间样品或者完全固化的目标样品。

2.根据权利要求1所述的基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于，对于具有封闭流道结构的样品，利用一次固化条件分别得到两个具有对应沟槽结构的部分固化中间样品，将两个部分固化中间样品的沟槽对正贴合，利用二次固化条件，最终得到完全固化的目标样品。

3.根据权利要求1所述的基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于，所述微线框模板由熔融沉积3D打印、电流体力学打印、光固化打印或者上述几种打印方法的联合作业制作得到。

4.根据权利要求3所述的基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于，所述微线框模板由近场直写3D打印得到，近场直写3D打印采用的打印材料为聚己内酯。

5.根据权利要求4所述的基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于，近场直写3D打印的参数范围如下：喷嘴-承载面距离1mm-2mm，挤出压力7.5KPa-25KPa，打印速度10mm/min-2500mm/min，电压值3.3kv-4.7kv，加热器温度：65摄氏度-75摄氏度。

6.根据权利要求1所述的基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于，利用手工剥离微线框模板或者溶剂溶解微线框模板的方式将微线框模板与部分固化或者完全固化后的样品分离。

7.根据权利要求1所述的基于微线框模板的样品制作方法，其特征在于，所述料液为可温度固化的PDMS或硅胶，或者为可光固化的水凝胶以及其他通过物理或者化学方式交联的材料。

8.一种微流控芯片，其特征在于，由权利要求1～7任一项所述的方法制作得到。

9.一种具有内部血管网络的血管芯，其特征在于，利用权利要求1～7任一项所述的方法制作得到具有封闭流道结构的血管芯片，将血管内皮细胞均匀种植于流道内壁，得到具有内部血管网络的血管芯。