CN110476896A - 昆虫病原格式线虫的培养方法及培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种昆虫病原格式线虫的培养方法及培养基，所述培养基由以下原料制备而成：豆粉2800‑3200g；面粉800‑1200g；酵母提取物80‑120g；鸡蛋黄粉180‑220g；黄粉虫干粉40‑80g；蝇蛆干粉40‑80g；玉米油800‑1200g；水3200‑3800ml；海绵1800‑2200g。该培养基及培养方法针对昆虫病原线虫S.glaseri品系的习性及生长特点提出，该培养方法能够大幅增加线虫产量的同时大幅缩短生产周期，有效解决昆虫病原线虫S.glaseri品系培养周期长、产量低以及培养成本高的问题，为实现昆虫病原线虫S.glaseri品系的大规模应用提供了有利条件。
Description
技术领域
本发明涉及昆虫病原线虫人工培育领域，具体为针对昆虫病原格式线虫的培养方法及培养基。
背景技术
昆虫病原线虫是国际上一种活的生物杀虫剂。与其它生物杀虫剂相比，这类线虫具有广泛的寄主；对寄主具主动搜索能力，特别对土栖性及钻蛀性害虫；对人畜、植物及有益生物安全，在欧美的一些国家可以豁免注册使用；易于大量培养；使用方便；在环境中可循环利用；能与多种化学和生物杀虫剂混用；并可用传统药械或灌溉设施来施用等优点。
蛴螬是一种重要的地下害虫，可危害花生、土豆、草坪等，可造成农作物大量死亡或减产，严重危害农作的产量和质量。
昆虫病原格式线虫即昆虫病原线虫S.glaseri品系是国际上通用的防治蛴螬的昆虫病原线虫品系，防治效果可达90%以上。目前传统昆虫病原线虫S.glaseri品系培养技术存在培养周期（约28天）长、产量低的缺陷，从而导致昆虫病原线虫S.glaseri品系培养成本高、无法大规模应用。
发明内容
本发明的目的是提供昆虫病原格式线虫的培养方法及培养基，以解决昆虫病原线虫S.glaseri品系培养周期长、产量低、培养成本高的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供一种培养昆虫病原格式线虫的培养基，其中，所述培养基由以下原料制备而成：
豆粉2800-3200g；
面粉800-1200g；
酵母提取物80-120g；
鸡蛋黄粉180-220g；
黄粉虫干粉40-80g；
蝇蛆干粉40-80g；
玉米油800-1200g；
水3200-3800ml；
海绵1800-2200g。
所述的培养昆虫病原格式线虫的培养基，其中，所述培养基由以下原料制备而成：
豆粉3000g；
面粉1000g；
酵母提取物100g；
鸡蛋黄粉200g；
黄粉虫干粉60g；
蝇蛆干粉60g；
玉米油1000g；
水3500ml；
海绵2000g。
所述的培养昆虫病原格式线虫的培养基，其中，制备培养基原料黄粉虫干粉和蝇蛆干粉分别过18目筛。
所述的培养昆虫病原格式线虫的培养基，其中，所述海绵由若干直径小于5cm的圆球状海绵或边长小于5cm的正方体海绵组成，其中，海绵密度为20-28kg/立方米。
所述的培养基实现培养昆虫病原格式线虫的培养方法，其中，所述方法包括以下步骤：
（1）称取豆粉、面粉、酵母提取物、鸡蛋黄粉、黄粉虫干粉、蝇蛆干粉、玉米油、水和海绵，之后将所称取原料混匀后装入铝质透气盒中；
（2）将装有培养基的铝质透气盒放入高压灭菌锅中灭菌，其中，铝质透气盒大小规格为40cm×50cm×20cm；
（3）将灭菌后的培养基接入昆虫病原线虫S.glaseri品系共生细菌；
（4）接入共生细菌2天后，再接入30-50万条S.glaseri品系线虫种虫；
（5）在25±1℃下，培养12-18天即可获得S.glaseri品系线虫。
所述的昆虫病原格式线虫的培养方法，其中，高压灭菌锅设定的灭菌条件为：灭菌温度为121℃，灭菌时间为24h。
所述的昆虫病原格式线虫的培养方法，其中，在25±1℃下，培养15天获得S.glaseri品系线虫。
有益效果：本发明针对昆虫病原线虫S.glaseri品系的习性及生长特点提出针对性的培养基和培养方法，该培养方法能够大幅增加线虫产量的同时大幅缩短生产周期，有效解决昆虫病原线虫S.glaseri品系培养周期长、产量低以及培养成本高的问题，为实现昆虫病原线虫S.glaseri品系的大规模应用提供了有利条件。
附图说明
图1为本发明具体实施例中昆虫病原线虫S.glaseri品系培养结果情况。
具体实施方式
本发明所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
实验组：采用昆虫病原线虫S.glaseri品系的培养基，所述培养基由以下原料混合制备而成：豆粉3000g，面粉1000g，酵母提取物100g，鸡蛋黄粉200g，黄粉虫干粉60g，蝇蛆干粉60g，玉米油1000g，水3500ml，海绵2000g。
对照组：采用原培养基，该原培养基包括原料豆粉3000g，面粉1000g，酵母提取物200g，鸡蛋黄粉240g，玉米油1000g，水3500ml，海绵2000g
利用实验组培养基进行昆虫病原线虫S.glaseri品系的培养实验，具体实验方法包括以下步骤：
（1）将实验组培养基装入铝质透气盒中；
（2）将装有实验组培养基的铝质透气盒放入高压灭菌锅中在121℃温度下灭菌24h；
（3）将灭菌后的实验组培养基接入昆虫病原线虫S.glaseri品系共生细菌；
（4）接入共生细菌2天后，再接入30-50万条S.glaseri品系线虫种虫并在25±1℃下培养。
对照组的的灭菌、培养方法为
（1）将对照组培养基装入铝质透气盒中；
（2）将装有实验组培养基的铝质透气盒放入高压灭菌锅中在121℃温度下灭菌24h；
（3）将灭菌后的实验组培养基接入昆虫病原线虫S.glaseri品系共生细菌；
（4）接入共生细菌2天后，再接入30-50万条S.glaseri品系线虫种虫并在25±1℃下培养。
分别在15天和28天对对照组和实验组培养的线虫产量进行计数统计，结果如图1所示，通过产量统计和数据分析，可以得出结论：本发明培养基配方比原培养基配方最高产量高47.5%，同时最高产量条件下，新的培养基配方比原培养基配方培养周期缩短46.4%，并且在重复3次同样配比步骤下，依旧是相同的数据，可见优化后的新培养基配方有利于减少线虫的培养周期，提高产量。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
Claims (8)
1.一种培养昆虫病原格式线虫的培养基，其特征在于，所述培养基由以下原料制备而成：
豆粉2800-3200g；
面粉800-1200g；
酵母提取物80-120g；
鸡蛋黄粉180-220g；
黄粉虫干粉40-80g；
蝇蛆干粉40-80g；
玉米油800-1200g；
水3200-3800ml；
海绵1800-2200g。
2.根据权利要求1所述的培养昆虫病原格式线虫的培养基，其特征在于，所述培养基由以下原料制备而成：
豆粉3000g；
面粉1000g；
酵母提取物100g；
鸡蛋黄粉200g；
黄粉虫干粉60g；
蝇蛆干粉60g；
玉米油1000g；
水3500ml；
海绵2000g。
3.根据权利要求1所述的培养昆虫病原格式线虫的培养基，其特征在于，制备培养基原料黄粉虫干粉和蝇蛆干粉分别过18目筛。
4.根据权利要求1所述的培养昆虫病原格式线虫的培养基，其特征在于，所述海绵由若干直径小于5cm的圆球状海绵或边长小于5cm的正方体海绵组成，其中，海绵密度为20-28kg/立方米。
5.利用如权利要求1-4任一项所述的培养基实现的昆虫病原格式线虫的培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）称取豆粉、面粉、酵母提取物、鸡蛋黄粉、黄粉虫干粉、蝇蛆干粉、玉米油、水和海绵，之后将所称取原料混匀后装入铝质透气盒中；
（2）将装有培养基的铝质透气盒放入高压灭菌锅中灭菌；
（3）将灭菌后的培养基接入昆虫病原线虫S.glaseri品系专性共生细菌，其中，所用共生细菌由S.glaseri品系线虫侵染大蜡螟后收集所得；
（4）接入共生细菌2天后，再接入30-50万条S.glaseri品系线虫种虫；
（5）在25±1℃下，培养12-18天即可获得侵染期S.glaseri品系昆虫病原线虫。
6.根据权利要求5所述的昆虫病原格式线虫的培养方法，其特征在于，高压灭菌锅设定的灭菌条件为：灭菌温度为121℃，灭菌时间为24h。
7.根据权利要求5所述的昆虫病原格式线虫的培养方法，其特征在于，在25±1℃下，培养15天获得S.glaseri品系线虫。
8.根据权利要求5所述的昆虫病原格式线虫的培养方法，其特征在于，铝质透气盒大小规格为40cm×50cm×20cm。
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