CN110464745A

CN110464745A - 杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用

Info

Publication number: CN110464745A
Application number: CN201910850700.2A
Authority: CN
Inventors: 俞诗源; 张露露; 李重阳
Original assignee: Northwest Normal University
Current assignee: Northwest Normal University
Priority date: 2019-09-10
Filing date: 2019-09-10
Publication date: 2019-11-19

Abstract

本发明公开了杜仲的一种新用途——杜仲在抗海洛因肝组织损伤中应用。本发明研究发现，杜仲水提液能使小鼠体重、肾重增加，能降低血浆γ‑GT、AKP、AST及ALT活性，能提高肝组织TrxR酶活性，降低肝组织MPO活性和MDA含量，能降低肝细胞的脂质过氧化作用，能降低肝组织Caspase‑3和Survivin蛋白的阳性表达，能有效减轻海洛因引起的肝组织细胞损伤，减轻和修复海洛因造成的损害，对海洛因所致的肝组织损伤有良好的保护作用。且使用安全，无依赖性，无明显毒副作用。

Description

杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用

技术领域

本发明涉及杜仲的一种新用途，即杜仲在抗海洛因肝组织损伤中应用。

背景技术

阿片类物质滥用是当今世界最严重的社会问题和医学问题之一，海洛因即二乙酰吗啡，是阿片类药物中滥用最广泛、依赖性最强的药物，严重影响人的身体健康和心理健康。如果长期使用或使用不当，会产生心理与生理依赖，过度兴奋中枢神经系统，干扰机体抗氧化系统的平衡和相关特异蛋白的正常表达，严重影响机体神经、呼吸、免疫、循环等器官系统的结构与功能。目前，海洛因等兴奋剂滥用、乱用现象较普遍，不良反应事件屡有发生，严重影响人类健康和社会稳定。虽然美沙酮、可乐定等传统药物临床治疗海洛因等兴奋剂依赖者的焦虑、抑郁症状等有效，但这些药物本身存在着一定的成瘾性和耐药性问题。有研究显示目前还没有特殊疗效的抗海洛因肝组织损伤的中药物，因此选取毒副作用小、依赖性小及耐药性小的中草药，研究其对动物或人体的保护作用，研发对机体无毒副作用和抗药物损伤的中药制剂，对于减少或降低海洛因等兴奋性药物对机体组织器官造成的损伤具有重要价值，对于促进医学事业的发展和维护社会稳定都具有重要意义。

杜仲（学名Eucommia ulmoides Oliver）又名胶木，为杜仲科植物。杜仲游离氨基酸极少，含有的少量蛋白质，是和绝大多数食品类似的完全蛋白，即能够水解检出对人体必需的8种氨基酸。测定了杜仲所含的15种矿物元素，其中有锌、铜、铁等微量元素，及钙、磷、钾、镁等宏量元素。药用杜仲，即为杜仲科植物杜仲的干燥树皮，是中国名贵滋补药材。其味甘，性温，有补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎的功效。可治疗肾阳虚引起的腰腿痛或酸软无力，肝气虚引起的胞胎不固，阴囊湿痒等症。《神农本草经》谓其“主治腰膝痛，补中，益精气，坚筋骨，除阴下痒湿，小便余沥。久服，轻身耐老。”杜仲是中国特有药材，其药用历史悠久，在临床有着广泛的应用。然而，对于杜仲在抗海洛因肝组织损伤，保护组织细胞，促进组织细胞修复的功效目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种杜仲水提液的新用途——抗海洛因肝组织损伤，保护组织细胞，促进组织细胞的修复的应用。

一、杜仲水提液制备：取杜仲原药材100 g，加水1L浸泡1 h后煮沸30 min，滤过药汁，药渣再加水煎煮30 min滤过药汁，合并两次药液，再用旋转蒸发仪将该煎剂浓缩制成1g/mL的生药水煎液，再按人与小鼠用药比设置制成0.4 g/mL、0. 6 g/mL低、高两个剂量组。

二、杜仲水提液对海洛因肝组织损伤的保护作用

选出生1周龄昆明小鼠120只（兰州大学医学动物中心），实验前适应性饲养1周，然后随机分为（空白）对照组、海洛因（实验对照）组和杜仲（海洛因+杜仲）1、2组，海洛因（实验对照）组和杜仲1、2组在l-5、6-10、11-15 d用递增剂量（2、3、4 g/L）连续腹腔注射海洛因溶液15 d，每次注射0.2 mL，每天两次（9:00 am，16:00 pm），注射海洛因半小时后杜仲1、2组分别灌胃0.4 g/mL、0. 6 g/mL（0.2 ml/10 g体重）的杜仲水提液，海洛因组灌胃等量的生理盐水，空白对照组腹腔注射和灌胃等量的生理盐水；在实验5 d、10 d和15 d时，处死各组小鼠，用电子天平称量小鼠体重和肝重的变化，用比色法和V-5000可见分光光度计检测血浆γ-GT、AKP、AST及ALT活性与肝组织MPO、TrxR活性和MDA含量的变化，用石蜡包埋法和HE染色法观察小鼠肝组织结构的病理变化，用免疫组织化学法检测肝组织Caspase-3和Survivin表达量的变化，用Image-proplus 6.0图像分析软件检测Caspase-3和Survivin蛋白在肝组织中阳性反应产物的平均光密度，实验数据用 SPSS 17.0进行统计分析，结果以平均值±标准差（Mean±SD）表示，研究杜仲水提液对海洛因致肝组织损伤的影响。

研究发现，实验对照（海洛因）组小鼠体重、肝重均降低（P＜0.05）；血浆γ-GT、AKP、AST及ALT活性显著升高（P＜0.01）；肝组织TrxR活性显著降低（P＜0.01）、MPO活性和MDA含量明显升高（P＜0.05，P＜0.01）。实验对照（海洛因）组肝组织病理性损伤明显，肝血窦明显增大，内皮细胞脱落，肝细胞出现肿胀、细胞核固缩、肝细胞空泡化、变性、坏死等，肝组织Casepase-3和Survivin蛋白的阳性表达显著增加（p<0.05），阳性细胞数量多而密集，染色深。而杜仲（海洛因+杜仲）1、2组小鼠体重、肝重又增加（P＜0.05）（见表1）；血浆γ-GT、AKP、AST及ALT活性均又降低（P＜0.05，P＜0.01）（见表2）；肝组织TrxR活性又显著升高（P＜0.05，P＜0.01），肝组织MPO活性和MDA含量又降低（P＜0.01）（见表3）。杜仲组小鼠肝组织损伤明显改善，肝细胞排列较为整齐、紧密，肝血窦扩张程度明显减小，肝细胞核固缩和肝细胞空泡化现象减少，小鼠肝组织Caspase-3和Survivin蛋白的阳性表达均明显减少，阳性细胞数量较少，染色较浅（P<0.05）（见表4）。

图1 小鼠肝脏组织结构变化。A．对照组5 d小鼠肝组织结构；B．海洛因组15 d小鼠肝组织结构；C．杜仲1组15 d小鼠肝组织结构；D．杜仲2组15 d小鼠肝组织结构。其中，H．肝细胞；HS．肝血窦；CV．中央静脉；↑.肝血窦扩张；△.肝细胞空泡化；▲.内皮细胞脱落；HE染色，标尺=20μm。由图1可以看出，对照组小鼠肝组织结构完整，染色均匀，肝细胞形态清晰可见，而海洛因组小鼠肝组织出现明显的病理变化，肝血窦明显增大，内皮细胞脱落，肝细胞出现肿胀、细胞核固缩、肝细胞空泡化、变性、坏死等，杜仲组小鼠肝组织损伤明显有所改善，肝细胞排列较为整齐、紧密，肝血窦扩张程度明显减小，肝细胞核固缩和肝细胞空泡化现象减少。

图2为小鼠肝脏中Caspase-3蛋白的表达。免疫组织化学染色，标尺=20μm。E．对照组5 d小鼠肝组织Caspase-3蛋白的表达；F．海洛因组15 d小鼠肝组织Caspase-3蛋白的表达；G．杜仲1组15 d小鼠肝组织Caspase-3蛋白的表达；H．杜仲2组15 d小鼠肝组织Caspase-3蛋白的表达。由图2可以看出，对照组小鼠肝组织Caspase-3蛋白阳性细胞数量少，染色浅，与对照组相比，海洛因组小鼠肝组织Caspase-3蛋白的阳性表达显著增加（P<0.05），阳性细胞数量多而密集，染色深，而杜仲组与海洛因组相比，小鼠肝组织Caspase-3蛋白的阳性表达均明显减少，阳性细胞数量较少，染色较浅，差异显著（P<0.05）。

图3为小鼠肝脏中Survivin蛋白的表达。免疫组织化学染色，标尺=20 μm。I．对照组5 d小鼠肝组织中Survivin蛋白的表达； J．海洛因组10 d小鼠肝组织中Survivin蛋白的表达；K．杜仲1组5 d小鼠肝组织中Survivin蛋白的表达； L．杜仲2组15 d小鼠肝组织中Survivin蛋白的表达。由图3可以看出，对照组小鼠肝组织Survivin蛋白阳性细胞数量少，染色浅，与对照组相比，海洛因组小鼠肝组织Survivin蛋白的阳性表达显著增加（P<0.05），阳性细胞数量多而密集，染色深，而杜仲组与海洛因组相比，小鼠肝组织Survivin蛋白的阳性表达均明显减少，阳性细胞数量较少，染色较浅，差异显著（P<0.05）。

上述研究发现，杜仲水提液能使小鼠体重、肾重增加，能降低血浆γ-GT、AKP、AST及ALT活性，能提高肝组织TrxR酶活性，降低肝组织MPO活性和MDA含量，能降低肝细胞的脂质过氧化作用，能降低肝组织Caspase-3和Survivin蛋白的阳性表达，能有效减轻海洛因引起的肝组织细胞损伤，减轻和修复海洛因造成的损害，对海洛因所致的肝组织损伤有良好的保护作用。且使用安全，无依赖性，无明显毒副作用。

本发明的杜仲水提液，生产制备工艺简单，无污染，投资少，药物价廉，取材方便，具有疗效高，无毒副作用，服用方便等特点，适宜疗养院、医院及家庭使用。

附图说明

图1 为小鼠肝脏组织结构变化。

图2为小鼠肝脏中Caspase-3蛋白的表达。

图3为小鼠肝脏中Survivin蛋白的表达。

具体实施方式

杜仲水提液制备：取杜仲原药材100 g，加水1L浸泡1 h后煮沸30 min，滤过药汁，药渣再加水煎煮30 min滤过药汁，合并两次药液，再用旋转蒸发仪将该煎剂浓缩制成1g/mL（生药含量）的水提液。

以杜仲水提液为活性成分，按药剂学的常规工艺制备成内服制剂。

Claims

1.杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用。

2.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：杜仲水提液能使小鼠体重、肝重增加。

3.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：杜仲水提液能降低血浆γ-GT、AKP、AST及ALT活性。

4.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：杜仲水提液能提高肝组织TrxR酶活性，降低肝组织MPO活性和MDA含量。

5.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：杜仲水提液能降低肝细胞的脂质过氧化作用。

6.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：杜仲水提液能降低肝组织Caspase-3和Survivin蛋白的阳性表达。

7.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：杜仲水提液能有效减轻海洛因引起的肝组织细胞损伤，减轻和修复海洛因造成的损害。

8.如权利要求1所述杜仲在抗海洛因肝组织损伤中的应用，其特征在于：以杜仲水提液为活性成分，按药剂学的常规工艺制备成内服制剂。