CN110463632A - 一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂。本发明目的在现有蚂蟥养殖基础上提供一种显著提高蚂蟥免疫力，增强其抗热应激能力，促进其生长，增加经济效益的养殖方法。与现有室内高密度蚂蟥养殖技术相比，采用本发明蚂蟥热应激下存活率最高增加约40％，同时蚂蟥产量最高增加约65％。本发明在不扩大蚂蟥养殖面积的前提下，提高了蚂蟥养殖的经济效益。

Description

一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂
一、技术领域
本发明涉及一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，属于药用动物养殖领域。
二、背景技术
蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)是中药材水蛭的基原动物之一，具有破血通经，逐瘀消癥的功效，主治血瘀经闭，癥瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤等。近年来对蚂蟥生物学特性、生殖发育、消化生理和呼吸生理等方面做了大量的研究，在此基础上蚂蟥室外人工养殖获得成功。由于蚂蟥适宜生长温度在25℃左右，在养殖过程中发现，当水温超过30℃时蚂蟥出现食欲不振、生长缓慢的现象，尤其夏季突发高温时会造成大量死亡，导致人工养殖产量的不稳定，严重影响了其经济效益。因此如何在现有养殖基础上提高蚂蟥免疫力，促进其在高温下的存活率显得极为迫切。
黄芪多糖(APS)是豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus Bge.)干燥根的主要提取物之一，具有诱导产生干扰素，调节机体免疫功能，促进抗体形成的功能，主要用于治疗鸡传染性法氏囊等病毒性疾病。研究发现黄芪多糖具有增强动物抗氧化能力、抗炎抑菌、改善免疫性能、提高生产性能、改善肠道发育等作用，近年来被大量应用在鱼类、甲壳类和软体类水生动物的养殖上，但鲜见具有提高动物热应激能力的报道，同时也未见用于蚂蟥养殖上的研究报道。因此，本发明拟通过将黄芪多糖添加于蚂蟥养殖，研究黄芪多糖在提高蚂蟥免疫的同时是否可以增加其抗热应激能力，筛选适宜浓度黄芪多糖用于蚂蟥养殖，增加蚂蟥养殖的经济效益。
三、发明内容
本发明目的在现有蚂蟥养殖基础上，提供一种显著提高蚂蟥免疫力，增强其抗热应激能力，增加经济效益的天然添加剂。
本发明在蚂蟥养殖水体中添加黄芪多糖水溶液，使养殖水体中黄芪多糖浓度为0.01‰～0.09‰。养殖过程中3-5天换1次水同时清除残留物，换水时间固定。换水后投喂蚂蟥清洗后的新鲜螺蛳(梨形环棱螺)，养殖过程中及时清理死亡蚂蟥。
通过实验统计和比较发现，添加浓度为0.03‰～0.07‰黄芪多糖均能显著提高蚂蟥免疫力，其中添加0.07‰黄芪多糖的蚂蟥生长性能最好，非特异性免疫酶活性最高，热应激下存活率最高。与不添加黄芪多糖相比，采用本发明蚂蟥热应激下存活率最高增加约40％，同时蚂蟥产量最高增加约65％。本发明在不扩大蚂蟥养殖面积的前提下，提高了蚂蟥养殖的经济效益。
四、具体实施方式
1.材料
蚂蟥由南京农业大学中药材研究所提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥W.pigra。
Alpha-1506紫外可见分光光度计(上海谱光仪器有限公司)、5810R离心机(Eppendorf公司)、XHF-D匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)、FYL-YS-108L低温保存箱(北京福意电器有限公司)、FA 1104分析天平(上海精密科学仪器有限公司)、GXZ智能型光照培养箱(宁波江南仪器厂)等。
2方法
2.1实验设计
本实验分为两个阶段。第一阶段在室内进行，养殖容器为容积为2L的塑料瓶，实验蚂蟥体重为0.16±0.03g。设一个空白对照组和五个黄芪多糖浓度组，在蚂蟥养殖水体中添加黄芪多糖水溶液，使养殖水中黄芪多糖浓度分别为0‰，0.1‰，0.3‰，0.5‰，0.7‰，0.9‰。每个处理组设置10瓶，每瓶饲养10条蚂蟥，实验时间为60天，期间保持室温为27±1℃。实验开始前测量蚂蟥的体重，实验结束后测量蚂蟥的体重，计算出平均质量。实验结束后取样进行非特异性免疫酶活性的测定。第二阶段在光照培养箱内进行，养殖容器为容积为500mL的玻璃瓶。每个处理组设置20瓶，每瓶饲养1条蚂蟥，将第一阶段各处理组剩余蚂蟥单独饲养进行观察，期间保持温度为34±1℃。实验0h、6h、12h、24h、48h时观察并记录各组蚂蟥死亡数。由公式计算存活率(SR)、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)。式中W0为实验开始时蚂蟥的平均质量(g)，实验天数为t(d)，W1为实验结束时蚂蟥的平均质量(g)。
SR(％)＝100×(总条数-死亡条数)/总条数
SGR(％)＝100×(ln W1-ln W0)/t
WGR(％)＝100×(W1-W0)/W0
2.2非特异性免疫酶活性的测定
在第一阶段实验结束后，取各黄芪多糖浓度下蚂蟥组织匀浆。超氧化物歧化酶(SOD)活性采用邻苯三酚自氧化法；过氧化氢酶(CAT)活性采用比色法；碱性磷酸酶(AKP)活性采用比色法；定义每毫克可溶性酶蛋白所具有的酶活力单位数(U·mg-1)为1个酶比活力。
2.3统计方法
试验所得数据先用Microsoft Excel作初步处理，然后采用SPSS 20.0软件包(One-Way ANOVE，LSD)进行分析，P＜0.05为差异显著。数据以表示。
3结果与分析
3.1黄芪多糖对蚂蟥生长性能的影响
不同浓度黄芪多糖对蚂蟥体重、特定生长率、存活率等生长性能的影响见表1。由表1可知，各黄芪多糖浓度组最终体重、增重率和特定生长率均高于空白组，且随浓度的增加呈先升高后降低趋势，0.07‰组最高；0.03‰、0.05‰、0.07‰组之间无显著性差异，但显著高于其他组别(P＜0.05)；存活率与上述趋势相同，0.07‰组最高，但各组间均无显著差异(P＞0.05)。
表1黄芪多糖对蚂蟥生长性能的影响(n＝10)
Tab 1 The effects of APS on growth status of Whitmania pigra Whitman(n＝10)
注：同一列中不同字母表示组间存在显著性差异(P＜0.05)。下表同。
Note：Different letters in the same column mean significant differenceat 5％level.Same as below.
3.2黄芪多糖对蚂蟥非特异性免疫酶的影响
不同浓度黄芪多糖对蚂蟥非特异性免疫酶活性的影响见表2。由表2可知，黄芪多糖组SOD、CAT和AKP活性均高于空白组，且随浓度的增加呈先升后降的趋势，0.07‰组最高；0.07‰组CAT和AKP活性显著高于其它组别(P＜0.05)，SOD活性与0.05‰组无显著性差异，但显著高于其他组别(P＜0.05)。
表2黄芪多糖对蚂蟥非特异性免疫酶的影响(n＝3)
Tab 2 The effects of APS on anti-reverse enzyme of Whitmania pigraWhitman(n＝3)
3.3黄芪多糖对热应激下蚂蟥存活率的影响
在热应激处理过程中，不同浓度黄芪多糖对蚂蟥存活率的影响见表3。由表3可知，蚂蟥存活率与热应激处理时间呈负相关；黄芪多糖组存活率均高于空白组，且随浓度的增加呈先升后降的趋势，0.07‰组最高；48小时后，0.07‰组存活率为70％，其它组别存活率均低于60％，空白组仅有30％。
表3黄芪多糖对热应激处理下蚂蟥存活率的影响
Tab 3 The effects of APS on survival rate of Whitmania pigra Whitman
3.4综合评判
本实验结果显示，采用浓度为0.07‰的黄芪多糖蚂蟥生长性能最好，非特异性免疫酶活性最高，热应激下存活率最高。与现有蚂蟥室内养殖相比，采用本发明蚂蟥热应激下存活率最高增加约40％，同时蚂蟥产量最高增加约65％。本发明在不扩大蚂蟥养殖面积的前提下，提高了蚂蟥养殖的经济效益。
具体实施例1：
选取体重为0.16±0.03g的蚂蟥放置在容积为2L的塑料瓶中养殖60天，每瓶10条，共60天，保持室温为27±1℃。实施地点在南京农业大学中药材研究所。添加为黄芪多糖水溶液，使养殖水体中黄芪多糖浓度为0.07‰。3天换1次水，使用曝气24h的自来水，换水时间为上午9:00左右，每次换水100％并清除残留螺蛳。换水后投喂清洗后在自来水中暂养3天的新鲜梨形环棱螺。养殖过程中发现有死亡蚂蟥及时清理。与现有室内高密度蚂蟥养殖技术相比(密度每亩50万，水温27±1℃，其他养殖条件相同)，应用本发明养殖1月龄蚂蟥60天，每亩可增加蚂蟥干重约64.46公斤，按目前市场价1000元/kg计，每亩增加经济效益约6.45万元。
本发明阐述的实施例及权利要求并不是对本发明的限定，任何本领域技术人员根据常规手段可以预见或者微调的变化均落入本发明保护范围内。

Claims (6)

1.一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，其特征在于：在现有蚂蟥养殖基础上，添加黄芪多糖来提高蚂蟥的免疫力。
2.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，其特征在于：养殖蚂蟥为宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman。
3.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，其特征在于：添加的黄芪多糖(APS)是豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalus membranaceus Bge.)的提取物。
4.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，其特征在于：添加的黄芪多糖(APS)为棕黄色粉末，味微甜，分子式为C10H7ClN2O2S，分子量为254.69300，质量为253.99200。
5.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，其特征在于：在蚂蟥养殖水体中添加黄芪多糖，使养殖水体中黄芪多糖浓度为0.03‰～0.07‰。
6.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥抗热应激能力的天然添加剂，其特征在于：投喂的螺蛳为清洗后的新鲜梨形环棱螺Bellamya purificata Heude。
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