CN110432374A - 一种脉冲电场提高类pse鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法 - Google Patents

一种脉冲电场提高类pse鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，属于肉类食品深加工技术领域；该方法的步骤如下：a、类PSE鸡胸肉的筛选；b、肌原纤维蛋白的提取；c、脉冲电场处理。本发明的方法采用高压脉冲电场对制备出来的类PSE鸡胸肉的肌原纤维蛋白进行处理，处理条件温和、均匀、绿色、无害，操作简便且效率高，处理过程中耗能小、无环境污染，各项参数容易调整和控制；该方法能够通过脉冲放电的形式对类PSE鸡胸肉的肌原纤维蛋白进行改性，蛋白质改性能够改变蛋白质的聚集行为，即改变蛋白质的溶解度，通过提高鸡胸肉肌原纤维蛋白的理化特性，提高其凝胶品质和经济效益，从而对类PSE禽肉加以有效利用。

Description

一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法
技术领域
本发明涉及肉类食品深加工技术领域，具体地说是一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法。
背景技术
近年来分割产品与深加工产品在鸡肉生产、消费中所占比例不断升高，与产品质量密切相关的鸡肉品质和功能特性越来越为从业者和消费者重视。国内外学者的调查研究表明，禽肉生产过程中存在一些类似于PSE(pale,soft,exudative)猪肉的禽肉。类PSE禽肉颜色苍白，质地松软，汁液损失多，保水性差，并在禽肉工业中具有高发生率。近年来随着企业饲养管理技术的进步，类PSE禽肉的发生率有所下降，但发生率仍然比较高，而且这些特征给禽肉生产加工造成了严重的经济损失，尤其是作为深加工产品原料时其加工性能较差，其中蛋白质乳化、凝胶形成能力变弱以及保水性较差，导致产品熟制过程中质构损坏、出水出油现象严重。有研究表明，与正常肉相比，类PSE肉的蛋白质溶解性降低，变形程度增加会导致其功能特性发生缺陷。因此，随着禽肉屠宰加工业的快速发展以及生产加工模式的转变，开发应用新颖的改善类PSE禽肉特性的加工技术成为当前禽肉屠宰加工业亟需解决的问题。
目前，肉类科技工作者正在积极寻找加工技术措施以提升类PSE禽肉的特性。通过使用专门的加工工艺如注射、滚揉并添加磷酸盐等非肉成分来改善类PSE禽肉深加工制品的质构和保水性。另外，通过使用等电点沉淀(ISP)、糖基化等方法来提高蛋白质的功能特性从而改善深加工制品的质构。然而，针对类PSE禽肉的处理方法有限，对发生类PSE程度深的禽肉质构和保水性只能部分恢复，而且添加非肉成分以及各种盐来改善类PSE禽肉蛋白质功能特性不符合现代加工改善肉制品功能特性的发展趋势。
发明内容
本发明的目的是针对类PSE鸡肉的功能缺陷的问题，提供一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案解决的：
一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：该方法步骤为：
a、类PSE鸡胸肉的筛选：选择宰后24h测得的pH值低于5.7且L值高于53的类PSE鸡胸肉并绞碎成肉糜；
b、肌原纤维蛋白的提取：将处理后的类PSE鸡胸肉肉糜加入标准盐溶液中进行匀浆、过滤、离心获得沉淀；将获得的沉淀加入0.1mol/L的KCl溶液中再次进行匀浆、过滤、离心获得沉淀，此沉淀即为所要的肌原纤维蛋白；
c、脉冲电场处理：将获得的肌原纤维蛋白溶于预冷的磷酸盐缓冲溶液并调节肌原纤维蛋白溶液的浓度为一定值，将浓度为定值的肌原纤维蛋白溶液倒入平板处理室的脉冲电场中进行高压脉冲处理。
所述的步骤a和步骤b在0°～4°的低温操作环境下进行。
所述步骤a中的类PSE鸡胸肉筛选出来后，在低温操作环境下，去除类PSE鸡胸肉表面的结缔组织和脂肪，切成小块，用预冷的绞肉机绞碎成肉糜。
所述步骤b中的标准盐溶液为0.1mol/L的KCl、20mmol/L的K2HPO4/KH2PO4、2mmol/L的MgCl2、1mmol/L的EGTA构成的pH值为7.0的盐溶液。
所述步骤b中的肌原纤维蛋白的提取过程中，采用标准盐溶液的洗脱过程包括以下步骤：首先将搅碎的类PSE鸡胸肉肉糜按质量体积比加入4倍的标准盐溶液中，进行匀浆、过滤、离心获得一次沉淀；接着将获得的一次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液以及终浓度为0.5％的Triton X-100溶液，再次进行匀浆、过滤、离心获得二次沉淀；接着将获得的二次沉淀按照质量体积比再次加入4倍的标准盐溶液中，第三次进行匀浆、过滤、离心获得三次沉淀；加入标准盐溶液后至少需进行上述三次洗脱。
采用标准盐溶液的洗脱过程的详细步骤为：首先将搅碎的类PSE鸡胸肉肉糜按质量体积比加入4倍的标准盐溶液中，7000rpm匀浆1min、双层纱布过滤、2000×g离心10min进行一次洗脱获得一次沉淀；然后将获得的一次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液以及终浓度为0.5％的Triton X-100溶液，7000rpm匀浆1min、双层纱布过滤、2000×g离心10min进行二次洗脱获得二次沉淀；接着将获得的二次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液中，7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2000×g离心10min进行三次洗脱获得三次沉淀；加入标准盐溶液后重复循环上述的初次洗脱和二次洗脱过程且最后一次洗脱为三次洗脱的过程。
所述步骤b中的肌原纤维蛋白的提取过程中，采用0.1mol/L的KCl溶液的洗脱过程包括以下步骤：将标准盐溶液洗脱后获得的沉淀按照质量体积比加入4倍的0.1mol/L的KCl溶液，进行7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2500×g离心10min获得沉淀；然后将获得的沉淀按照质量体积比加入4倍的0.1mol/L的KCl溶液，进行7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2500×g离心10min获得沉淀，该沉淀即为所要的肌原纤维蛋白。
所述步骤c中的磷酸盐缓冲溶液为0.6mmol/L的KCl、20mmol/L的K2HPO4/KH2PO4构成的pH值为7.0的盐溶液。
所述步骤c中的平板处理室中的脉冲电场的两个电极板至间距为2.5cm，脉冲电场的脉冲频率为600Hz～1000Hz、脉冲电场强度为8kV/cm～28kV/cm。
所述步骤c中获得的经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液的溶解度测定过程如下：
d、标准蛋白曲线绘制：以牛血清蛋白为标准蛋白配制标准蛋白溶液、以双缩脲试剂起显色反应剂，记录540nm下的吸光值绘制标准蛋白曲线绘制，获得标准蛋白曲线方程；
e、溶解度测定：将步骤c中获得的经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液加入双缩脲试剂，记录540nm下的吸光值并带入标准蛋白曲线方程中，计算获得经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液离心前的浓度；再取经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液离心后的上清液加入双缩脲试剂，记录540nm下的吸光值并带入标准蛋白曲线方程中，计算获得经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液离心后的浓度；肌原纤维蛋白溶液离心后的浓度与肌原纤维蛋白溶液离心前的浓度的比值即为经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液的溶解度。
所述步骤d中的标准蛋白溶液的配制过程为：称取1g牛血清蛋白溶于100ml预冷的蒸馏水中配制浓度为10mg/ml的标准蛋白溶液；所述步骤d中的双缩脲试剂的配制过程为：称取1.5g五水硫酸铜及6g酒石酸钾钠，依次溶于500ml蒸馏水中，搅拌的同时加入300ml浓度为10％的氢氧化钠溶液，用蒸馏水定容至1L获得双缩脲试剂，且避光存放。
所述步骤e中的溶解度测定过程中，肌原纤维蛋白溶液离心的过程为：用磷酸盐缓冲溶液将经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液浓度稀释至步骤c中定值的一半，在0°～4°的低温操作环境下将稀释浓度的肌原纤维蛋白溶液放于离心管中10000×g离心10min获得上清液。
脉冲电场(pulsed electric fields,PEF)是利用电场强度很高持续时间很短的电压脉冲作用于两电极间的食品物料，使其在电场作用下发生变化，从而对食品进行改性与强化处理的一种新型非热加工技术。20世纪80年代，脉冲电场被开发并逐渐投入利用。电场技术最早是应用于牛奶的巴氏杀菌。PEF处理可以进行低温连续快速灭菌，其处理时间为毫秒级，能对食品物料进行快速杀菌。本发明中采用的脉冲电场系统主要包括高压电源、能量贮存和释放的电容、脉冲电极、处理室以及用于监测的示波器，皆为现有设备。脉冲电场处理工艺的有效性取决于脉冲的特性，比如电场强度/E、脉冲频率/f、脉冲占空比、脉冲波形等。脉冲电场常用的处理室按结构划分为平板型、同轴型和同场型，有研究表明，物料经平板处理室处理时所受电场更均匀，因此本发明采用的是平板处理室。
本发明相比现有技术有如下优点：
本发明的方法采用高压脉冲电场对制备出来的类PSE鸡胸肉的肌原纤维蛋白进行处理，处理条件温和、均匀、绿色、无害，操作简便且效率高，处理过程中耗能小、无环境污染，各项参数容易调整和控制；该方法能够通过脉冲放电的形式对类PSE鸡胸肉的肌原纤维蛋白进行改性，蛋白质改性能够改变蛋白质的聚集行为，即改变蛋白质的溶解度，通过提高鸡胸肉肌原纤维蛋白的理化特性，提高其凝胶品质和经济效益，从而对类PSE禽肉加以有效利用。
附图说明
附图1为本发明的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法及方法效果测定的组合流程图；
附图2为本发明的溶解度测定所采用的标准蛋白曲线图；
附图3为本发明的脉冲电场强度、脉冲频率对类PSE鸡胸肉的肌原纤维蛋白溶解度的影响关系图。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步的说明。
一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，步骤如下：a、类PSE鸡胸肉的筛选：选择宰后24h测得的pH值低于5.7且L值高于53的类PSE鸡胸肉并绞碎成肉糜；b、肌原纤维蛋白的提取：将处理后的类PSE鸡胸肉肉糜按照质量体积比加入至4倍的标准盐溶液中进行匀浆、双层纱布过滤、2000×g离心10min获得沉淀并至少重复两次；将获得的沉淀按质量体积比加入至4倍的0.1mol/L的KCl溶液中进行匀浆、双层纱布过滤、2000×g离心10min获得沉淀并重复至少两次，最终获得的沉淀即为所要的肌原纤维蛋白；c、脉冲电场处理：将获得的肌原纤维蛋白溶于预冷的磷酸盐缓冲溶液并调节肌原纤维蛋白溶液的浓度为一定值(一般为10mg/ml)，将浓度为定值的肌原纤维蛋白溶液倒入平板处理室的脉冲电场中进行高压脉冲处理，平板处理室中的脉冲电场的两个电极板至间距为2.5cm，当脉冲占空比为47％时，脉冲电场的脉冲频率为600Hz～1000Hz、脉冲电场强度为8kV/cm～28kV/cm。上述的步骤a和步骤b在0°～4°的低温操作环境下进行。
下面将本发明提供的一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法结合对获得的肌原纤维蛋白的溶解度的测定过程作为实施例对本发明作进一步的说明。
如图1所示：一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，具体操作步骤如下：
a、类PSE鸡胸肉的筛选：以宰后24h测得的pH值低于5.8且L值高于53作为判定类PSE肉的标准，筛选符合标准的类PSE鸡胸肉，将类PSE鸡胸肉表面的结缔组织和脂肪去除，切成小块并绞碎成肉糜，整个操作在4℃低温下进行。
b、肌原纤维蛋白的提取：称取100g搅碎的类PSE鸡胸肉，按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液(0.1mol/L的KCl、20mmol/L的K2HPO4/KH2PO4、2mmol/L的MgCl2、1mmol/L的EGTA构成的pH值为7.0的盐溶液400ml)，7000rpm匀浆1min、双层纱布过滤、2000×g离心10min(4℃)进行一次洗脱获得一次沉淀；然后将获得的一次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液(400ml)以及2ml的Triton X-100溶液(终浓度为0.5％)，7000rpm匀浆1min、双层纱布过滤、2000×g离心10min(4℃)进行二次洗脱获得二次沉淀；接着将二次洗脱后获得的二次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液(400ml)，7000rpm匀浆30s、2000×g离心10min(4℃)进行三次洗脱获得三次沉淀；将标准盐溶液三次洗脱所得沉淀按照质量体积比加入4倍的0.1mol/L KCl溶液(400ml)，7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2500×g离心10min(4℃)进行四次洗脱获得四次沉淀；然后将获得的沉淀按照质量体积比加入4倍的0.1mol/L KCl溶液(400ml)，7000rpm匀浆30s、2500×g离心10min(4℃)进行五次洗脱获得五次沉淀；五次沉淀即为最终所要的肌原纤维蛋白沉淀。
c、脉冲电场处理：处理参数设计如下：脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min，脉冲频率为600Hz、800Hz、1000Hz，脉冲电场强度为8kV/cm、18kV/cm、28kV/cm；称取100g类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白，溶于900ml的磷酸盐缓冲溶液中，获得稀释10倍的肌原纤维蛋白溶液，分别进行以下9组处理：
脉冲处理组1：脉冲场强为8kV/cm，脉冲频率为600Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组2：脉冲场强为18kV/cm，脉冲频率为600Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组3：脉冲场强为28kV/cm，脉冲频率为600Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组4：脉冲场强为8kV/cm，脉冲频率为800Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组5：脉冲场强为18kV/cm，脉冲频率为800Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组6：脉冲场强为28kV/cm，脉冲频率为800Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组7：脉冲场强为8kV/cm，脉冲频率为1000Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组8：脉冲场强为18kV/cm，脉冲频率为1000Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
脉冲处理组9：脉冲场强为28kV/cm，脉冲频率为1000Hz，脉冲占空比为47％，脉冲处理时间为3min；
另加设一组空白组为第10组。
其中脉冲处理组1的具体操作如下：首先将平板处理室中的脉冲电场的两电极板的间距调整至2.5cm，量取100ml稀释10倍的肌原纤维蛋白溶液，倒入脉冲电场处理室的两极板间；接通电源，打开开关，调整脉冲电压至20kV、脉冲频率为600Hz、脉冲占空比为47％，计时3min；计时结束后，将脉冲电压、脉冲频率及脉冲占空比调节至0，关闭开关及电源；待放电结束后，用注射器取出已处理的蛋白溶液。脉冲处理组2-脉冲处理组9的操作步骤同脉冲处理组1。
d、标准蛋白曲线绘制：以牛血清蛋白为标准蛋白配制标准蛋白溶液，称取1g牛血清白蛋白(BSA)并溶于100ml预冷的蒸馏水中，配制出10mg/ml的标准蛋白溶液(BSA)；称取1.5g五水硫酸铜及6g酒石酸钾钠，依次溶于500ml蒸馏水中，搅拌的同时加入300ml的10％氢氧化钠溶液，用蒸馏水定容至1L配制出双缩脲试剂，避光存放；取6支10ml离心管分别配制标准蛋白浓度为0mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、6mg/ml、8mg/ml、10mg/ml的标准蛋白溶液，所需试剂包括10mg/ml的BSA溶液和蒸馏水，标准蛋白溶液配置好后分别向上述6支10ml离心管加入4ml的双缩脲试剂组成标准蛋白曲线绘制试剂，所需试剂用量如表1的标准蛋白曲线绘制试剂配制表所示。
表1标准蛋白曲线绘制试剂配制表
将上述6支10ml离心管中的混合溶液用涡旋仪搅拌均匀后，分别移取200μl不同浓度的标准蛋白曲线绘制试剂于酶标孔板中，37℃下孵育30min，用酶标仪在540nm下进行扫描，记录吸光值，作标准蛋白曲线(如图2所示)，并获得标准蛋白曲线方程；
e、溶解度测定：移取1ml经步骤c中的脉冲电场处理后的各脉冲处理组和空白组的肌原纤维蛋白溶液于10ml离心管中，分别加入4ml双缩脲试剂，将5ml混合溶液涡旋均匀后移取200μl溶液于酶标孔板中，37℃下孵育30min，用酶标仪在540nm下进行扫描，记录吸光值，代入标准蛋白曲线方程中，计算得各脉冲处理组和空白组的肌原纤维蛋白溶液离心前的浓度。
已知各脉冲处理组和空白组的肌原纤维蛋白溶液的浓度，用磷酸盐缓冲溶液将肌原纤维蛋白溶液浓度稀释至5mg/mL，取浓度为5mg/mL的肌原纤维蛋白溶液5mL于10mL离心管，10000×g离心10min(4℃)，分别取1ml离心后的肌原纤维蛋白溶液的上清液于对应的10ml离心管中，分别加入4ml双缩脲试剂，涡旋均匀后分别移取200μl溶液于酶标孔板中，37℃下孵育30min，用酶标仪在540nm下进行扫描，记录吸光值，代入标准蛋白曲线方程中，计算得各脉冲处理组和空白组的肌原纤维蛋白溶液离心后的浓度。肌原纤维蛋白溶液离心后的浓度与肌原纤维蛋白溶液离心前的浓度的比值即为经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液的溶解度，所有测定均重复3次，三次测定的平均值画出的脉冲电场强度、脉冲频率对类PSE鸡胸肉的肌原纤维蛋白溶解度的影响关系图如图3所示。
图3中的数字分别代表了空白组以及不同脉冲处理组中的肌原纤维蛋白的溶解度大小。其中空白组的蛋白溶解度为0.8982；脉冲频率在600Hz时，场强为8kV/cm的蛋白溶解度为0.8995、场强为18kV/cm的蛋白溶解度为0.9246、场强为28kV/cm的蛋白溶解度为0.9033；脉冲频率在800Hz时，场强为8kV/cm的蛋白溶解度为0.918、场强为18kV/cm的蛋白溶解度为0.9501、场强为28kV/cm的蛋白溶解度为0.9251；脉冲频率在1000Hz时，场强为8kV/cm的蛋白溶解度为0.9078、场强为18kV/cm的蛋白溶解度为0.9214、场强为28kV/cm的蛋白溶解度为0.9369。
由图3的数据可知，当脉冲频率为600Hz时，与空白组相比，脉冲场强在8kV/cm、18kV/cm、28kV/cm条件下的溶解度均提高，且脉冲场强为18kV/cm时，溶解度显著提高；当脉冲频率为800Hz时，与空白组相比，随脉冲场强不断增大，溶解度呈先高后低的趋势；当脉冲频率为1000Hz时，与空白组相比，溶解度随脉冲场强的增加显著升高。经过脉冲电场处理后，类PSE蛋蛋白的溶解度得到提升，脉冲场强在18kV/cm时尤为显著。由此可见，本发明提供的方法通过应用脉冲电场技术可显著提高PSE肉蛋白的溶解度，从而提高禽肉屠宰加工业的经济效益。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。

Claims (12)

1.一种脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：该方法步骤为：
a、类PSE鸡胸肉的筛选：选择宰后24h测得的pH值低于5.7且L值高于53的类PSE鸡胸肉并绞碎成肉糜；
b、肌原纤维蛋白的提取：将处理后的类PSE鸡胸肉肉糜加入标准盐溶液中进行匀浆、过滤、离心获得沉淀；将获得的沉淀加入0.1mol/L的KCl溶液中再次进行匀浆、过滤、离心获得沉淀，此沉淀即为所要的肌原纤维蛋白；
c、脉冲电场处理：将获得的肌原纤维蛋白溶于预冷的磷酸盐缓冲溶液并调节肌原纤维蛋白溶液的浓度为一定值，将浓度为定值的肌原纤维蛋白溶液倒入平板处理室的脉冲电场中进行高压脉冲处理。
2.根据权利要求1所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述的步骤a和步骤b在0°～4°的低温操作环境下进行。
3.根据权利要求1或2所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤a中的类PSE鸡胸肉筛选出来后，在低温操作环境下，去除类PSE鸡胸肉表面的结缔组织和脂肪，切成小块，用预冷的绞肉机绞碎成肉糜。
4.根据权利要求1或2所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤b中的标准盐溶液为0.1mol/L的KCl、20mmol/L的K2HPO4/KH2PO4、2mmol/L的MgCl2、1mmol/L的EGTA构成的pH值为7.0的盐溶液。
5.根据权利要求4所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤b中的肌原纤维蛋白的提取过程中，采用标准盐溶液的洗脱过程包括以下步骤：首先将搅碎的类PSE鸡胸肉肉糜按质量体积比加入4倍的标准盐溶液中，进行匀浆、过滤、离心获得一次沉淀；接着将获得的一次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液以及终浓度为0.5 %的Triton X-100 溶液，再次进行匀浆、过滤、离心获得二次沉淀；接着将获得的二次沉淀按照质量体积比再次加入4倍的标准盐溶液中，第三次进行匀浆、过滤、离心获得三次沉淀；加入标准盐溶液后至少需进行上述三次洗脱。
6.根据权利要求5所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：采用标准盐溶液的洗脱过程的详细步骤为：首先将搅碎的类PSE鸡胸肉肉糜按质量体积比加入4倍的标准盐溶液中，7000rpm匀浆1min、双层纱布过滤、2000×g离心10min进行一次洗脱获得一次沉淀；然后将获得的一次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液以及终浓度为0.5 %的Triton X-100 溶液，7000rpm匀浆1min、双层纱布过滤、2000×g离心10min进行二次洗脱获得二次沉淀；接着将获得的二次沉淀按照质量体积比加入4倍的标准盐溶液中，7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2000×g离心10min进行三次洗脱获得三次沉淀；加入标准盐溶液后重复循环上述的初次洗脱和二次洗脱过程且最后一次洗脱为三次洗脱的过程。
7.根据权利要求1或2所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤b中的肌原纤维蛋白的提取过程中，采用0.1mol/L的KCl溶液的洗脱过程包括以下步骤：将标准盐溶液洗脱后获得的沉淀按照质量体积比加入4倍的0.1mol/L的KCl溶液，进行7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2500×g离心10min获得沉淀；然后将获得的沉淀按照质量体积比加入4倍的0.1mol/L的KCl溶液，进行7000rpm匀浆30s、双层纱布过滤、2500×g离心10min获得沉淀，该沉淀即为所要的肌原纤维蛋白。
8.根据权利要求1所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤c中的磷酸盐缓冲溶液为0.6mmol/L的KCl、20mmol/L的K2HPO4/KH2PO4构成的pH值为7.0的盐溶液。
9.根据权利要求1所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤c中的平板处理室中的脉冲电场的两个电极板至间距为2.5cm，脉冲电场的脉冲频率为600Hz～1000Hz、脉冲电场强度为8kV/cm～28kV/cm。
10.根据权利要求1所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤c中获得的经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液的溶解度测定过程如下：
d、标准蛋白曲线绘制：以牛血清蛋白为标准蛋白配制标准蛋白溶液、以双缩脲试剂起显色反应剂，记录540nm下的吸光值绘制标准蛋白曲线绘制，获得标准蛋白曲线方程；
e、溶解度测定：将步骤c中获得的经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液加入双缩脲试剂，记录540nm下的吸光值并带入标准蛋白曲线方程中，计算获得经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液离心前的浓度；再取经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液离心后的上清液加入双缩脲试剂，记录540nm下的吸光值并带入标准蛋白曲线方程中，计算获得经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液离心后的浓度；肌原纤维蛋白溶液离心后的浓度与肌原纤维蛋白溶液离心前的浓度的比值即为经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液的溶解度。
11.根据权利要求10所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤d中的标准蛋白溶液的配制过程为：称取1 g牛血清蛋白溶于100ml预冷的蒸馏水中配制浓度为10mg/ml的标准蛋白溶液；所述步骤d中的双缩脲试剂的配制过程为：称取1.5g五水硫酸铜及6g酒石酸钾钠，依次溶于500ml蒸馏水中，搅拌的同时加入300ml浓度为10 %的氢氧化钠溶液，用蒸馏水定容至1L获得双缩脲试剂，且避光存放。
12.根据权利要求10所述的脉冲电场提高类PSE鸡胸肉肌原纤维蛋白溶解度的方法，其特征在于：所述步骤d中的溶解度测定过程中，肌原纤维蛋白溶液离心的过程为：用磷酸盐缓冲溶液将经脉冲电场处理的肌原纤维蛋白溶液浓度稀释至步骤c中定值的一半，在0°～4°的低温操作环境下将稀释浓度的肌原纤维蛋白溶液放于离心管中10000×g离心10min获得上清液。
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