CN110418798A - 具有抗癌活性的甾体皂苷 - Google Patents

Abstract

本发明涉及具有令人感兴趣之生物活性的新的一类甾体皂苷。特别地，本发明涉及一类甾体皂苷，其中糖部分已被选择性地官能化以引入包含以下任一种的部分：(i)氢离子供体，(ii)氢离子接纳体或(iii)其组合。发现这些新的水溶性化合物本身不仅具有强效抗癌性质，而且具有在对象中促进免疫应答的能力，并因此可作为用于癌症治疗中之T细胞活化的佐剂。

Description

具有抗癌活性的甾体皂苷

技术领域

本发明涉及具有令人感兴趣之生物活性的新的一类甾体皂苷(steroidsaponin)。特别地，本发明涉及一类甾体皂苷，其中糖部分(sugar moiety)已被选择性地官能化以引入包含以下任一种的部分：(i)氢离子供体(hydrogen ion donor)，(ii)氢离子接纳体(hydrogen ion acceptor)或(iii)其组合。发现这些新的水溶性化合物不仅本身具有强效抗癌性质，而且具有加强其他抗癌剂活性的能力。例如，该化合物具有促进对象中免疫应答的能力，并因此可作为用于癌症治疗中T细胞活化的佐剂。

背景技术

癌症是全世界死亡的首要原因，根据世界卫生组织(World HealthOrganisation)，据估计，仅在2012年中就诊断出1410万例癌症并且820万人死于癌症，预计到2030年将上升至1300万死亡。预期这些数字随着寿命预期的提高而升高，并且该病症的风险因素随着生活方式、饮食和/或环境因素随时间的变化而提高。

尽管癌症的诊断和治疗有了很大提高，但每年仍有许多人死于癌症，并且其死亡通常是由于对常规治疗存在抗性的转移和癌症。目前用于治疗先前用化学治疗进行治疗的晚期和/或转移性恶性肿瘤(即化学治疗难治性癌症)的方法从效力和安全性的观点来看是不充分的。因此，持续需要开发可用于治疗癌症的替代药剂。

该领域中的一个潜在候选物组是甾体皂苷。甾体皂苷是一类来源于多种植物物种和海洋物种的次生代谢物(secondary metabolite)，且由于其显著的生物活性而特别令人感兴趣地作为新的活性剂。已显示一些皂苷结合并穿过细胞膜，另一些皂苷已用作表面活性剂，还有另一些皂苷已用作疫苗中的佐剂。皂苷也已用于中药，并且正因如此已被推广为膳食补充剂。此外，已知一些甾体皂苷增强了许多化学治疗剂和抗癌剂的活性，最终抑制癌细胞的生长。已经示出另一些甾体皂苷能够在许多体内和离体模型系统中抑制血管生成。因此，甾体皂苷提供了一类具有不同生物活性的令人感兴趣的分子。

实际上，在共同拥有的国际申请PCT/AU2007/001091和PCT/AU2007/001092中，本申请人已描述了天然存在的一些甾体皂苷的有利治疗性应用、组合物及用途。

在先前报道的甾体皂苷中，化合物薯蓣皂苷基α-L-吡喃鼠李糖基-(1-＞2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物A)是已知的以痕量存在于许多稀有植物物种中的天然化合物。该化合物显示出作为用于治疗许多医学病症的药物活性剂的显著前景，并且基于该化合物所示出的活性谱(activity profile)正在进行该化合物的临床开发。

尽管该化合物作为治疗剂显示出显著的前景，但仍然保持对用于治疗所有致病性、缺乏性、遗传性和生理性疾病的新的化合物和治疗的极大的需要。特别是随着寿命预期的提高，非感染性的衰老相关疾病(例如如上所讨论的癌症)的发病率已显著提高。

遗憾的是，尽管许多甾体皂苷(包括化合物A)已显示出作为活性药用成分的显著前景，但它们尚未被容易地使用。这可以是由于这样的事实：通常来说它们在生理条件下微溶(sparingly soluble)或不溶于水，即使与可药用载体或赋形剂组合也是如此，并因此非常难以配制和施用。如本领域技术人员会理解的，潜在活性药剂(或药物)的水溶解性是制剂中显著的理化性质。在经口施用后，药物的溶解性和渗透性性质对药物从胃肠道进入到体循环(systemic circulation)中的最终吸收(即药物的生物利用度)具有最大影响，并因此影响其治疗有效性，并且其中全身性吸收是必需的。因此，在活性剂的天然或固有溶解性低的情况下，能够以使其在可接受的水平下具有生物可利用性的方式配制它是至关重要的。

因此，期望鉴定作为替代的水溶性甾体皂苷，其可被应用于治疗疾病(例如癌症)。作为他们研究的结果，本申请人已鉴定并设计了新的甾体皂苷家族，其与已知的天然存在的甾体皂苷相比表现出改善的性质。

发明简述

本发明提供了式(I)化合物：

其中：

R是包含以下任一种的部分：(1)至少一个氢离子供体，(2)至少一个氢离子接纳体或(3)其组合；并且

R¹是如下文中所限定的式E、F或G的基团；

或其可药用盐。

本申请人已经发现，在许多情况下，这种类型的化合物具有与已知化合物相比提高的效力，并且还可表现出改善的安全性(safety profile)。在本发明的化合物中，R不是H。

如上所讨论，本申请人已发现新的甾体皂苷可用于治疗癌症。因此，本发明还提供了在对象中治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的本发明化合物。

除了本身具有抗癌活性之外，本申请人还发现本发明化合物具有加强或促进其他抗癌治疗之活性的潜力。因此，在另一个方面中，本发明提供了在对象中促进抗癌治疗之活性的方法，该方法包括向有此需要的对象施用有效量的本发明化合物。

本申请人还发现本发明化合物具有充当佐剂的能力，由于它们表现出在对象中活化免疫应答的能力。因此，在另一个方面中，本发明提供了在对象中促进免疫应答的方法，该方法包括向有此需要的对象施用有效量的本发明化合物。

在另一个方面中，本发明提供了本发明化合物作为佐剂的用途。

附图简述

图1示出了关于本发明化合物之一充当佐剂之能力的研究结果。

发明详述

定义

本说明书中使用了许多术语，这些术语是技术人员公知的。然而，为了清楚起见，将定义许多术语。

本文中使用的与癌症有关的术语“治疗”意指抑制、降低、减低、阻止或稳定肿瘤或与癌症相关的其他特征，或者其一种或更多种症状。

因此，“治疗”可导致肿瘤或与癌症相关的其他特征的消退或根除；或者它可导致肿瘤尺寸的维持，以使其不增大，或者与标准治疗相比增大的量更少。

术语“有此需要的对象”意指患有或被诊断患有癌症、或者倾向于或易患癌症、或者处于发生癌症之风险中的人或动物。

术语“治疗有效量”或“有效量”意指足以实现有益或期望的临床结果(例如减轻、改善、稳定化、逆转、减缓或延迟癌症的进展)的量。有效量可以以一次或更多次施用来施用。

术语“可药用盐”是指保留上述经鉴定化合物的期望生物活性的盐，并且包括可药用酸加成盐和碱加成盐。式(I)化合物的合适的可药用酸加成盐可由无机酸或由有机酸制备。这种无机酸的一些实例是盐酸、硫酸和磷酸。合适的有机酸可选自：脂肪族、脂环族、芳香族、杂环羧酸和磺酸类的有机酸，其一些实例是甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、烷基磺酸、芳基磺酸。关于可药用盐的其他信息可见于P.H.Stahl和C.G.Wermuth Handbook of Pharmaceutical Salts，Properties，Selection，and Use，第2次修订版，Wiley-VCH 2011。在药剂是固体的情况下，本领域技术人员应理解，本发明的化合物、药剂和盐可以以不同的结晶或多晶形式存在，所有这些旨在本发明和指定的式的范围内。

本文中使用的术语“氢离子供体”意指在合适条件下可离子化以释放H⁺离子并产生带负电荷物质的基团。这种类型基团的一些实例包括针对不溶性盐的无机酸、磺酸、羧酸、阴离子氨基酸、羟基酸、脂肪酸，其由-CO₂H、-SO₃H和-PO₃H₂表示。

本文中使用的术语“氢离子接纳体”意指在合适条件下可与H+离子反应以形成带正电荷物质的基团。这种类型的基团的一些实例包括针对不溶性盐的有机胺、阳离子胺和碱。

贯穿本说明书中使用的术语“皂苷”应理解为意指包含一般通过苷元的C-3位与苷元连接的糖类(糖)的糖苷。

贯穿本说明书中使用的术语“甾体皂苷”应理解为意指包含一个或更多个与苷元连接的糖类单元(包含一个或更多个单糖、二糖或多糖单元)且不包含氮原子的糖苷。

就此而言，应理解，术语“甾体皂苷”在其范围内包括功能上等同的化合物的任何盐或任何其他衍生物，特别是对于治疗性活性剂而言。同样地，它们可以是可药用盐。此外，它们可以是天然存在的或合成的甾体皂苷。

贯穿本说明书中使用的术语“佐剂”是指这样的化合物或物质，其(i)在对象中增强或促进对于药剂的免疫应答或者(ii)在对象中促进或改变主要药剂的作用。

如上所述，本发明提供了式(I)化合物：

其中：

R是包含以下任一种的部分：(1)至少一个氢离子供体，(2)至少一个氢离子接纳体或(3)其组合；并且

R¹是式E、F或G的基团：

其中：

R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁶、R¹⁷、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵和R²⁷独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

当C-5、C-6是单键时，R¹⁵是H；并且当C-5、C-6是双键时，R¹⁵不存在；

A是O同时B是CH₂；或B与O同时A是CH₂；

R^37A是H同时R^37B是CH₃；或R^37A是CH₃同时R^37B是H；

或其可药用盐；

其中：

R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁶、R¹⁷、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵和R²⁷独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

当C-5、C-6是单键时，R¹⁵是H；并且当C-5、C-6是双键时，R¹⁵不存在；

当C-20、C-22是单键时，R³²是羟基或烷氧基；或当C-20、C-22是双键时，R³²不存在；

R^37A是H同时R^37B是CH₃；或R^37A是CH₃同时R^37B是H；

R³⁸是H或糖类；或其可药用盐；

或其可药用盐；

其中：

R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁶、R¹⁷、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵和R²⁷各自独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

当C-5、C-6是单键时，R¹⁵是H；并且当C-5、C-6是双键时，R¹⁵不存在；

R³²和R³⁹各自独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

R^37A是H同时R^37B是CH₃，或R^37A是CH₃同时R^37B是H；

R³⁸是H或糖类；或其可药用盐。

或其可药用盐。

在一个实施方案中，选择基团R¹使得所述化合物具有如下所示的式II：

其中R如上所限定或其可药用盐。

如上所讨论，在本发明化合物中，基团R是包含以下任一种的部分：(1)至少一个氢离子供体，(2)至少一个氢离子接纳体或(3)其组合。不希望受理论的束缚，本申请人认为在该位置并入这种类型的基团导致分子的改善的药理学技术性质，导致改善的药动学谱。特别地，不希望受理论的束缚，这种类型的基团的并入可导致在施用化合物之后其吸收、分布、代谢或排泄的改善。

实质上，R基团可以是大量潜在的部分中的任一种，只要它可以可行地与氧原子连接并且包含以下任一种即可：(1)至少一个氢离子供体，(2)至少一个氢离子接纳体或(3)其组合。该基团可以是简单的有机取代基(例如包含合适取代基的烷基或芳基)，或者它可以是更复杂的取代基(例如氨基酸基团)。如上所述，R不是H。

在一个实施方案中，R基团是包含至少一个氢离子供体的部分。如上所讨论，氢离子供体是在合适的条件下可离子化以形成带负电荷物质和氢离子(H⁺)的基团。实质上，任何“酸性基团”或部分一般性地都具有这种能力。在一个实施方案中，R基团是包含氢离子供体取代基的C₁-C₆烷基。合适的氢离子供体的一些实例包括-CO₂H、-SO₃H和-PO₃H₂。

在一个实施方案中，R包含式-CO₂H的氢离子供体。在一个实施方案中，R包含式-SO₃H的氢离子供体。在一个实施方案中，R包含式和-PO₃H₂的氢离子供体。

在某些实施方案中，整个R部分可以是氢离子供体。在一个实施方案中，R是-SO₃H。在一个实施方案中，R是-PO₃H₂。

在一个实施方案中，基团R是包含至少一个氢离子接纳体的部分。如上所讨论，术语“氢离子接纳体”意指在合适条件下可与H+离子反应以形成带正电荷物质的基团。

存在本领域技术人员会充分理解的大范围的氢离子接纳体。在一个实施方案中，氢离子接纳体是式-NH₂的基团。在一个实施方案中，R是式(CH₃)₂CHCH(NH₂)C(＝O)-的基团。

在本发明的一个实施方案中，化合物是式(III)化合物：

或其可药用盐。

在本发明的一个实施方案中，化合物是式(IV)化合物：

或其可药用盐。

在一个实施方案中，化合物具有下式：

在一个实施方案中，化合物具有下式：

其中X是HO₂CCHCHCO₂-。

如上所述，化合物可以是可药用盐的形式。在R基团包含氢离子供体的情况下，可药用盐来源于碱。合适的盐的一些实例包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和锌盐。在一个实施方案中，盐是钾盐。在一个实施方案中，盐是钠盐。在一个实施方案中，盐是钙盐。在一个实施方案中，盐是镁盐。在一个实施方案中，盐是锌盐。

在R基团包含氢离子接纳体的情况下，盐通常来源于酸。合适的酸加成盐的一些实例包括：氢溴酸盐、盐酸盐硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐甲磺酸盐、乙磺酸盐、羟乙基磺酸盐、甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、苯磺酸盐、乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、富马酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、乙醇酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、油酸盐、硬脂酸盐双羟萘酸盐柠檬酸盐、以及马来酸盐。在一个实施方案中，盐是柠檬酸盐。在一个实施方案中，盐是马来酸盐。在一个实施方案中，盐是盐酸盐。

已发现本发明化合物在某些癌症的治疗中具有有益的应用。因此，本发明还提供了治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的本发明化合物。

该化合物可用于治疗广泛范围的癌症类型。其中癌症选自：上皮癌(carcinoma)；膀胱癌；骨癌；脑肿瘤；乳腺癌；宫颈癌；结直肠癌，其包括结肠癌、直肠癌、肛门癌和阑尾癌；食管癌；霍奇金病(Hodgkin’s disease)；肾癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌；淋巴瘤；黑素瘤；痣(mole)和发育不良痣(dysplastic nevi)；多发性骨髓瘤；肌癌(muscular cancer)；非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)；口腔癌(oral cancer)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；畸胎瘤；甲状腺癌，以及子宫癌。

可通过任何用于肠内施用(enteral administration)的可接受的方式(例如经口或经直肠)，或通过肠胃外施用(例如皮下、肌内、静脉内和皮内途径)，或通过吸入性化合物递送来向人施用式(I)内的化合物。注射可以是推注或通过恒速或间歇性输注。途径的一些实例包括表面施用、肠内施用(即通过肠，例如经口、胃管或经直肠)或肠胃外施用(例如注射，例如静脉内、肌内、皮下或腹膜内注射)。

活性化合物通常包含在可药用载体或稀释剂中，并且其量足以向患者递送治疗有效剂量。

在使用本发明化合物时，所述化合物可以以使该化合物具有生物可利用性的任何形式或方式施用。制备制剂领域的技术人员可根据所选择化合物的具体特征、待治疗的病症、待治疗病症的阶段和其他相关情况来容易地选择适当的施用形式和方式。关于进一步的信息，我们向读者推荐P.H.Stahl和C.G.Wermuth(Eds)，Handbook of PharmaceuticalSalts，Properties，Selection，and Use，第2次修订版，Wiley-VCH(2011)。

本发明化合物可单独施用或以与可药用载体、稀释剂或赋形剂组合的药物组合物的形式施用。尽管本发明化合物本身有效，但其通常以其可药用盐的形式被配制和施用，这是因为这些形式通常更稳定、更容易结晶并具有提高的水溶性。

然而，这些化合物通常以药物组合物的形式使用，所述药物组合物根据期望的施用方式配制。因此，在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含式(I)化合物和可药用载体、稀释剂或赋形剂。该组合物以本领域中公知的方式制备。

在另一些实施方案中，本发明提供药物包(pharmaceutical pack)或药盒，其包含一个或更多个装有本发明药物组合物的一种或更多种成分的容器。具有单位剂量的药剂的容器可见于这样的包或药盒中。所述药盒可包含含有有效药剂的组合物，所述药剂作为浓缩物(包含冻干组合物)，其可在使用之前进一步稀释，或者在所述小瓶可包含一种或更多种剂量的情况下，所述药剂可以以使用浓度提供。便利地，在药盒中，可在无菌小瓶中提供单一剂量以便医师可直接使用小瓶，其中小瓶将具有期望的药剂量和浓度。与这样的容器缔合的可以是多种书面材料(例如使用说明书)，或者是以由管理药物或生物制品的制造、使用或销售的政府机构所规定形式的通知书，该通知书反映了该机构对用于人施用的制造、使用或销售的批准。

本发明化合物可与一种或更多种用于治疗所述病症/疾病的其他药物组合使用或施用。组分可以以同一制剂或以分开的制剂施用。如果以分开的制剂施用，本发明化合物可与其他药物先后或同时施用。

实际上，在一个实施方案中，本发明的方法包括施用第二抗癌剂。广泛范围的第二抗癌剂可与本发明化合物组合使用。合适的第二抗癌剂的一些实例包括选自以下一种或更多种的第二抗癌剂：化学治疗剂；烷化剂，其包括BCNU(卡莫司汀(carmustine))、白消安(busulfan)、CCNU(洛莫司汀(lomustine))、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂、美法仑(melphalan)、丝裂霉素C和噻替派(thio-tepa)；抗有丝分裂剂，其包括泰素(taxol)(紫杉醇(paclitaxel))、多西他赛(docetaxel)、硫酸长春碱(vinblastine sulphate)和硫酸长春新碱(vincristine sulphate)；拓扑异构酶抑制剂，其包括多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、m-AMSA(安吖啶(amsacrine))、米托蒽醌(mitoxantrone)和VP-16(依托泊苷(etoposide))；RNA/DNA抗代谢物，其包括5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤(methotrexate)；DNA抗代谢物，其包括Ara-C(阿糖胞苷(cytarabine))、羟基脲(hydroxyurea)(羟基尿素(hydroxycarbamide))和硫鸟嘌呤(thioguanine)(硫代鸟嘌呤(tioguanine))；细胞过程靶向剂；甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)；曲妥珠单抗(trastuzumab)；以及吉非替尼(gefitinib)；抗(程序性细胞死亡1受体)PD-1治疗；派姆单抗(prembrozilab)和纳武单抗(nivomulab)。

实际上，不希望受理论束缚，认为本发明化合物具有促进对象中抗癌治疗之活性的能力。在另一个实施方案中，本发明提供了在对象中促进抗癌治疗之活性的方法，该方法包括向有此需要的对象施用有效量的本发明化合物。实际上，本申请人已经发现所述化合物具有佐剂活性，因为它们驱动T细胞活化并且其具有促进抗癌治疗之活性的净效应(neteffect)。

如上所述，本发明化合物可用作佐剂，由此它们在对象中促进对其他活性剂的免疫应答。当以这种方式使用时，本发明化合物可与其他药剂组合同时施用，或者与其他药剂组合先后施用(以任何顺序)。

除了能够与一种或更多种其他药物组合施用之外，本发明化合物可因此用于组合治疗。当如此进行时，所述化合物通常彼此组合施用。因此，本发明的一种或更多种化合物可同时(作为组合制剂)或先后施用，以便实现期望的作用。这在每种化合物的治疗谱不同的情况下是尤其期望的，使得两种药物的组合作用提供了改善的治疗结果。

用于肠胃外注射的本发明药物组合物包含可药用无菌水溶液或非水溶液、分散体、混悬剂或乳剂以及用于在临用前重建成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或载剂的一些实例包括水、乙醇、多元醇类(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，及其合适的混合物；植物油(例如橄榄油)；以及可注射的有机酯类(例如油酸乙酯)。例如，可通过使用包衣材料(例如卵磷脂)、通过在分散体的情况下保持所需粒度、以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。

适合于表面施用的组合物的一些实例包括乳膏剂、洗剂、滴眼剂、滴耳剂、喷雾剂、吸入剂、或作为包埋制剂或作为通过鼻腔、直肠、子宫、阴道、肺等的经黏膜制剂等。适合于肠内施用的组合物的一些实例包括片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、液体制剂、酏剂、混悬剂、薄片剂(wafer)、乳剂、糖浆剂、栓剂等。适合于肠胃外施用的组合物的一些实例包括注射剂或长效制剂(depot preparation)(例如可植入丸剂等)。

用于肠胃外注射的组合物包含可药用无菌水性或非水性溶液、分散体、混悬剂或乳剂以及用于在临用前重建成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或载剂的一些实例包括水、乙醇、多元醇类(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，及其合适的混合物；植物油(例如橄榄油)；以及可注射的有机酯类(例如油酸乙酯)。例如，可通过使用包衣材料(例如卵磷脂)、通过在分散体的情况下保持所需粒度、以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。

这些组合物还可包含赋形剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂、pH控制剂、等张剂和分散剂。可通过包含多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)来确保阻止对微生物的作用。还可期望包含等张剂，例如糖、氯化钠等。这些赋形剂是本领域技术人员公知的。

合适的防腐剂的一些实例是对羟基苯甲酸的苯甲酸酯、20苯酚、苯乙醇或苄醇。合适的缓冲剂的一些实例是磷酸钠盐、柠檬酸、酒石酸等。合适的稳定剂的一些实例是抗氧化剂(例如α-生育酚乙酸酯、α-硫甘油、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、乙酰半胱氨酸、8-羟基喹啉)和螯合剂(例如依地酸二钠)。合适的黏性增强剂、助悬剂、25增溶剂或分散剂的一些实例是经取代的纤维素醚类、经取代的纤维素酯类、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇类、卡波姆(carbomer)、聚氧化丙二醇、失水山梨糖醇单油酸酯、失水山梨糖醇倍半油酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油60。

合适的pH控制剂的一些实例包括盐酸、氢氧化钠、缓冲剂等。合适的等张剂的一些实例是葡萄糖、D-山梨糖醇或D-甘露糖醇、氯化钠。

通过包含延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝和明胶)，可实现可注射药物形式的延长吸收。这些药剂是本领域技术人员公知的。

如果期望的话，并且为了更有效地分布，可将化合物并入到缓释或靶向递送系统(例如聚合物基质、脂质体和微球)中。

例如可通过加热、辐照或者通过细菌保留式过滤器进行过滤，或者通过并入无菌固体组合物形式的杀菌剂来对可注射制剂进行杀菌，所述无菌固体组合物可在临用前溶解或分散在无菌水或无菌可注射介质中。

用于经口施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的可药用赋形剂或载体(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下混合：a)填充剂(filler)或增量剂(extender)，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；以及b)黏合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸类、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶(acacia)；c)保湿剂(例如甘油)；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠；e)溶液阻滞剂(例如石蜡)；f)吸收促进剂(例如季铵化合物)；g)润湿剂(例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯)；h)吸收剂(例如高岭土和膨润土)；以及i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇类、月桂基硫酸钠、及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。

具有类似类型的固体组合物还可用作使用例如乳糖或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇类等的赋形剂的软填充和硬填充明胶胶囊剂中的填充剂。

可用包衣和壳(例如肠溶包衣和药物配制领域中公知的其他包衣)来制备片剂、糖衣丸剂(dragee)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型。它们可任选地包含乳浊剂，并且还可具有仅在肠道的某一部分中释放或优先在其中释放活性成分(任选地以延迟方式)的组合物。可使用的包埋组合物的一些实例包括聚合物物质和蜡。

如果合适的话，活性化合物还可以是具有一种或更多种上述赋形剂的微胶囊化形式。

用于经口施用的液体剂型包括可药用乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性化合物之外，液体剂型可包含本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇类和山梨聚糖的脂肪酸酯、及其混合物。

除惰性稀释剂之外，经口组合物还可包含辅料，例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。

混悬剂除活性化合物之外可包含助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇类、聚氧乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯类、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminium metahydroxide)、膨润土、琼脂和西黄蓍胶、及其混合物。

用于经直肠或经阴道施用的组合物优选是栓剂，其可通过将本发明化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体混合来制备，所述赋形剂或载体例如可可豆脂(cocoa butter)、聚乙二醇或栓剂蜡，其在室温下为固体但是在体温下为液体，并因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。

用于表面施用(topical administration)本发明化合物的剂型包括散剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。活性化合物在无菌条件下与可需要的可药用载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。

合适的组合物可通过使用常规有机或无机添加剂(例如赋形剂)的常用方法来制备。此类赋形剂可选自：填充剂或稀释剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、防腐剂、稳定剂、助悬剂、分散剂、表面活性剂、抗氧化剂或增溶剂。

填充剂或稀释剂的一些实例包括蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙等。黏合剂的一些实例包括纤维素、羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶(gum arabic)、聚乙二醇或淀粉等。崩解剂的一些实例包括羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠等。润滑剂的一些实例包括硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或十二烷基硫酸钠等。矫味剂的一些实例包括柠檬酸或薄荷醇等。防腐剂的一些实例包括苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯等。稳定剂的一些实例包括柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸等。助悬剂的一些实例包括甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝等。分散剂的一些实例包括羟丙基甲基纤维素等。表面活性剂的一些实例包括月桂基硫酸钠、泊洛沙姆(poloxamer)、聚山梨酯等。抗氧化剂的一些实例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、丁羟甲苯(BHT)等。增溶剂的一些实例包括聚乙二醇类、等。

施用的化合物的量将优选治疗和降低或减轻病症。治疗有效量可由主治诊断医师通过使用常规技术和通过观察在类似情况下获得的结果来容易地确定。在确定治疗有效量时，待考虑的许多因素包括但不限于：动物物种、动物的尺寸、年龄和总体健康状况、所涉及的具体病症、病症的严重程度、患者对于治疗的应答、所施用的具体化合物、施用方式、所施用制剂的生物利用度、所选择的剂量方案、其他药物的使用及其他相关情况。

优选的剂量将为每千克体重每天约0.01至300mg。更优选的剂量将为每千克体重每天0.1至100mg，更优选每千克体重每天0.2至80mg，甚至更优选每千克体重每天0.2至50mg。合适的剂量可每天以多重子剂量施用。

本发明化合物的合成

可使用如下所述的反应途径和合成方案，使用本领域可获得的技术，使用可容易获得的原料来制备多个实施方案的化合物。在以下实施例中详细描述了一些实施方案的具体化合物的制备，但技术人员将认识到所描述的化学反应可容易地适用于制备多个实施方案的许多其他物质。例如，一些非示例性化合物的合成可通过对于本领域技术人员明显的修改(例如通过适当保护干扰基团、通过改变成本领域中已知的其他合适试剂、或者通过对反应条件进行常规修改)来成功地进行。有机合成中合适的保护基的列表可见于T.W.Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons，1991中。或者，本文中公开的或本领域已知的其他反应将被认为适用于制备多个实施方案的其他化合物。

现在将通过实施例来举例说明本发明；然而，这些实施例不应被解释为对其进行限制。可使用如本文中所描述的方法和合成方案或其适当的变化或修改来制备除了以下所描述的那些之外的其他化合物。

实施例

在以下所描述的实施例中，除非另有指明，否则以下描述中的所有温度均为摄氏度，并且除非另有说明，否则所有份数和百分比均按重量计。

除非另有指明，否则多种原料和其他试剂均购自商业供应商(例如AldrichChemical Company或Lancaster Synthesis Ltd.)，并且无需进一步纯化而使用。除非另有指明，否则所有溶剂均使用本领域中的标准方法来纯化。

在500MHZ下用Bruker Avance III-500记录1H NMR谱，并且在126MHZ下用BrukerAvance III-500记录13C-NMR谱。当报道峰的多重性时，使用以下缩写：s＝单；d＝双重；t＝三重；m＝多重；br＝加宽；dd＝双双重；dt＝双三重。当给出时，耦合常数以赫兹(Hertz)报道。

使用具有电喷雾电离的Waters Q-TOF Premier^TM串级质谱仪获得质谱。

本发明化合物通常由在或共同拥有的作为WO2013/173862公开的PCT/AU2013/000416中合成的化合物来合成。

实施例(1)：用于合成原料1的前体1的合成。

薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-吡喃葡萄糖苷(前体1)的制备

方案1：

中间体1：2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖(中间体1)的制备

将2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖苷三氯亚氨逐乙酸酯(50.3g，67.9mmol)和薯蓣皂苷配基(26.0g，63mmol)溶解在二氯甲烷(无水，11mL)和甲苯(无水，314mL)的混合物中，并将溶液在40℃下通过旋转蒸发进行干燥。将产物溶解在二氯甲烷(无水，222mL)中并在干燥氮气下冷却至0℃。添加TMSOTf(0.250mL，1.38mmol)并将溶液温热至环境温度并搅拌1h。然后用N-甲基吗啉(0.343mL，3.1mmol)淬灭反应。添加另外的DCM(20mL)并通过缓慢添加甲醇(450mL)并随后缓慢添加甲醇与水的混合物(200mL的3∶1甲醇∶水)使产物沉淀。通过过滤收集产物，用甲醇与水的混合物(450mL的4∶1甲醇∶水)洗涤，并在真空下干燥以得到薯蓣皂苷基2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖(中间体1)。

¹H NMR 500MHz(CDCl₃)δ7.81-8.03(m，8H)，7.23-7.56(m，12H)，5.89(t，1H，J＝9.7Hz)，5.62(t，1H，J＝9.7Hz)，5.49(dd，1H，J＝7.9，9.7Hz)，5.22(m，1H)，4.94(d，1H，J＝7.9Hz)，4.60(dd，1H，J＝3.4，12.0Hz)，4.52(dd，1H，J＝5.9，12.0Hz)，4.37-4.43(m，1H)，4.12-4.18(m，1H)，3.34-3.56(3H，M)，0.74-2.20(m，36H).

ES-MS m/z C₆₁H₆₈O₁₂Na计算值：1015.4608；实测值：1015.4604。

中间体2：薯蓣皂苷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体2)的制备

在氮气下，将薯蓣皂苷基2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖(中间体1)(59g，59.4mmol)溶解在二氯甲烷(无水，400mL)和甲醇(无水，400mL)中。添加甲醇钠(30％于甲醇中，1.9mL，10.1mmol)，并将溶液搅拌过夜。如果在此期间pH跌至低于9，则添加另外的甲醇钠。用经洗涤的酸性离子交换树脂(Amberjet 1200H)中和包含产物的溶液。通过过滤除去树脂，并用N-甲基吗啉淬灭任何残留的酸度。通过旋转蒸发将产物干燥成糖浆状物(syrup)，将糖浆状物混悬在甲醇(275mL)中以得到可过滤的固体，然后将所述固体通过过滤进行收集。用甲醇(165mL)和乙酸乙酯(165mL)洗涤固体。在30℃下，将产物进行真空干燥，以得到作为倍半水合物的薯蓣皂苷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体2)(23.4g，68％)。

将滤液合并，添加乙酸乙酯(330mL)，并将混合物浓缩至约190mL。通过过滤收集第二批产物，并用乙酸乙酯(100mL)洗涤。通过柱色谱法(洗脱剂1∶9甲醇∶二氯甲烷)进一步纯化第二批产物，以提供更多的薯蓣皂苷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体2)(5.21g，15.2％)(总产率＝28.6g，83.4％)。

¹H NMR(500MHz，3∶1 CDCl₃/CD₃OD)：δ5.37(dd，J＝2.1，3.1Hz，1H)，4.42(q，J＝7.4Hz，1H)，4.40(d，J＝7.8Hz，1H)，3.84(dd，J＝2.9，12.0Hz，1H)，3.83(dd，J＝4.7，12.0Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.47(ddd，J＝2.1，4.2，11.6Hz，1H)，3.45-3.20(m，5H)，2.41(ddd，J＝2.1，4.7，13.2Hz，1H)，2.27(m，1H)，2.05-0.92(m，23H)，1.03(s，3H)，0.97(d，J＝6.9Hz，3H)，0.80(d，J＝6.3Hz，3H)，0.80(s，3H)；¹³C NMR(126MHz，3∶1 CDCl₃/CD₃OD)：δ141.78，123.08，110.95，102.51，82.36，80.39，77.87，77.25，74.94，71.60，68.22，63.38，63.18，57.85，51.49，42.99，41.63，41.08，40.00，38.57，38.19，33.39，33.02，32.78，32.64，31.54，30.89，30.00，22.18，20.56，18.25，17.50，15.60.

ES-MS m/z C₃₃H₅₂O₈Na计算值：599.3560；实测值：599.3554。

前体1：薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(前体1)的制备

向薯蓣皂苷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(35.95g，62.3mmol)在DMF(270mL)中的溶液添加茴香醛二甲基缩醛(42.5mL，249mmol)和5滴pH约2.5的浓H₂SO₄。在60℃、室内真空下，将溶液加热8h以除去甲醇。将反应物冷却并转移至具有乙酸乙酯(400mL)的分液漏斗中，其中用H₂O(3×300mL)、0.5M HCl水溶液(2×200mL)并且随后用饱和NaHCO₃水溶液(200mL)反复洗涤，这在有机层与水层的界面处引起灰色物质的沉淀。

该灰色物质被鉴定为被少量DMF污染的期望产物，并将其溶解在乙酸乙酯中并用己烷沉淀出来，以得到灰色粉末(13.89g，32％)。

将乙酸乙酯层在减压下蒸发，以得到在静置时固化的橙色油状物。将该橙色固体溶解在乙酸乙酯中并用己烷进行沉淀以得到灰色粉末(13.47g，31％)。

由于作为溶剂的4-甲氧基苯甲醛的含量高，因此橙色滤出物不能被诱导以沉淀出更多的产物而是产生油析物(oiling-out)，因此被吸收到硅藻土(Celite)上并通过短二氧化硅塞用3∶1至2∶1 PE/EA梯度，然后3∶1至1∶1甲苯/EA梯度洗脱进行过柱，以得到另外部分的黄色固体(12.62g，29％；累积39.98g，92％)。

实施例2：原料1的合成

薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-a-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料1)的制备

方案2：

中间体3：步骤(i)

对前体1进行选择性苯甲酰化以提供薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体3)

向溶解在冷却至-78℃的吡啶(42.8mL)和二氯甲烷(68.0mL)中的薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(18.37g，26.4mmol)和DMAP(0.161g，1.322mmol)的溶液逐滴添加苯甲酰氯(3.38mL，29.1mmol，1.1当量)(在搅拌到反应体积中之前瞬时形成块状固体，其可以是Pyr.HCl)。在搅拌过夜下，使溶液温热至室温。

通过添加MeOH(10mL)淬灭反应，用200mL的DCM进行稀释，并用0.5N HCl(4×250mL)、NaHCO₃(200mL)、盐水(200mL)洗涤，并用MgSO₄进行干燥。将粗制物质吸收到硅藻土上，用50mL的甲苯进行蒸发以除去残留的DCM。将其作为甲苯(200mL)中的浆料加载到二氧化硅柱的顶部，并用2％EA/甲苯(diBz洗脱)、5％EA/甲苯(中间体)、并且随后用10％EA/甲苯(monoBz)的分级式梯度(stepwise gradient)进行洗脱。

将所收集的级分合并以得到薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体3)(13.11，62％)。还分离出薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-2，3-二苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(3.17g，13.3％)。

中间体5：步骤(ii)

与鼠李糖部分偶联以提供薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体5)

向在-78℃下搅拌的薯蓣皂苷基-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(中间体3)(18.4g，23.03mmol)、2，3，4-三-O-苯甲酰基-α/β-L-吡喃鼠李糖苷三氯亚氨逐乙酸酯(17.87g，28.8mmol，1.25当量)和MS筛(sieve)(2g/g接纳体(acceptor)；37g)在DCM(450mL)中的溶液逐滴添加三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.104mL，0.576mmol)，立即形成亮黄色溶液。在搅拌下使反应物在冷浴(用箔隔热)中温热室温下过夜。

用1滴NEt₃(-黄色消失的)淬灭并将蒸发的小等分试样通过¹H NMR显示出完全消耗了原料。

用添加NEt₃(2mL)淬灭反应，并通过硅藻土床过滤以将筛分离。用DCM(2×50mL)洗涤固体支持物。使有机溶液蒸发，得到白色泡沫状物。将泡沫状物用Et₂O(约200mL)进行浆化，过滤，并用冷Et₂O(2×50mL)洗涤，以得到作为白色粉末、具有优异纯度的薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(22.75g，79％)。

确定黄色滤液包含分解的鼠李糖供体和少量的期望产物。将其吸收至硅藻土上并通过二氧化硅用EA/甲苯(2％、4％、然后6％)梯度洗脱进行洗脱，得到另外3.07g(10.6％)产物(累积产率25.82g，90％)。

原料1：步骤(iii)

对中间体5进行去保护以提供原料1；薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料1)

将薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(20g，15.91mmol)溶解在二氯甲烷(125mL，1943mmol)和水(45mL)中。随着在0℃下添加三氟乙酸(15.91mL)，搅拌双相混合物，形成亮黄色/绿色荧光着色的溶液。

使反应搅拌3.5小时。通过用水(2×150mL)、NaHCO₃(2×200mL)、盐水(200mL)洗涤淬灭反应，用MgSO₄进行干燥，并蒸发以得到白色泡沫状物。

将粗制物质溶解在最少量的热EA(约30mL)中并逐滴添加至PE(500mL)，产生作为“黏稠的”物质的白色固体的沉淀。使溶液在搅拌下过夜，导致凝胶的形成。过滤得到白色固体，将其用冷的10％EA/PE(18.202g，100％)洗涤。

或者，使薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-(4，6-O-(4-甲氧基亚苄基)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.76g，1.43mmol)和1200H(8.8g)在100mL圆底烧瓶中的甲醇(24mL)和四氢呋喃(12mL)中进行浆化。将反应物加热至回流持续15h。然后用三乙胺(0.2mL)淬灭反应。通过过滤除去树脂，并使溶剂在减压下蒸发。将粗制产物溶解在甲醇(25mL)中，并逐滴添加水(15mL)，得到白色固体的结晶。通过过滤分离固体产物，并将饼状物用1∶1甲醇/水(2×15mL)洗涤，随后用石油醚60-80(2×15mL)洗涤。在45℃、真空下，将产物进行干燥过夜，以得到薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料1)(1.33g，81％)。

¹H NMR 500MHz(CDCl₃)δ8.03(d，2H)，7.90(d，2H)，7.77(d，2H)，7.74(d，2H)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H)，7.53(t，J＝7.5Hz，1H)，7.41(m，3H)，7.33(m，3H)，7.28(t，J＝7.5Hz，2H)，7.23(t，J＝7.5Hz，2H)，5.74(dd，J＝3.6，10.0Hz，1H)，5.48-5.57(m，3H)，5.44(dd，J＝1.6，3.6Hz，1H)，5.16(d，J＝1.3Hz，1H)，4.82(d，J＝7.9Hz，1H)，4.77(m，1H)，4.45(q，1H)，3.73-3.95(m，6H)，3.47-3.54(m，2H)，3.38-3.41(m，2H)，2.64(app ddd，1H)，2.45(t，1H)，2.03(m，3H)，1.09-1.93(m，20H)，1.34(d，J＝6.4Hz，3H)，0.99(d，J＝6.4Hz，3H)，0.95(s，3H)，0.81(d，J＝6.4Hz，3H)，0.80(s，3H).¹³C NMR 126MHz(CDCl₃，MeOD 3∶1)δ166.3，165.8，165.3，164.7，139.9，133.24，133.17，133.0，132.9，129.61，129.55，129.5，129.3，129.0，128.9，128.23，128.17，128.1122.0，109.4，99.4，97.6，80.8，79.0，78.4，75.9，75.5，71.8，70.2，69.6，68.7，66.7，66.6，61.9，61.4，56.3，49.9，41.4，40.1，39.5，38.6，37.0，36.7，32.0，31.6，31.3，31.1，30.0，29.7，28.5，20.6，19.0，17.1，16.8，16.0.

ES-MS m/z C₆₇H₇₈O₁₆Na计算值：1161.5188；实测值：1161.5186。

实施例(3)：原料2的制备

原料2；薯蓣皂苷基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料2)的制备

可以看出，原料2可由原料1制备。因此，合成中的前三个步骤涉及与实施例2中相同的步骤。

对原料1进行去保护以提供原料2薯蓣皂苷基-α-L-鼠李糖基吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料2)

向薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料1)(16.542g，14.52mmol)在MeOH(125mL)中的溶液添加30滴的NaOMe(MeOH中的5.4M)并检查pH为约10。通过TLC监测混合物指示反应在90分钟内完成。通过添加DOWEX50W-X 400淬灭反应直至pH为约7，导致DOWEX从奶油色变为浅黄色。用MeOH洗涤树脂，并且随后用1∶1 MeOH/CHCl₃洗涤。

使滤液蒸发以得到干燥的白色固体，将其用EA(9.58g，91％)洗涤。将粗制物质在用10％MeOH/DCM然后用20％MeOH/DCM洗脱的二氧化硅上过柱，以得到原料2(8.67g，通过HPLC为94％纯)。

或者，将薯蓣皂苷基-(2，3，4-三苯甲酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-3-苯甲酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(原料1)(9.3g，8.2mmol)溶解在无水甲醇(74mL)中。在环境温度、氩气下，添加甲醇钠(0.1mL，甲醇中的30％溶液)并将反应混合物搅拌22小时。添加四氢呋喃(74mL)并使用1200H树脂将反应混合物调节至pH 7。通过过滤除去树脂，并用四氢呋喃(2×30mL)洗涤。将所得溶液在真空中浓缩，并再溶解在甲醇(74mL)中。在环境温度下，产物在搅拌后结晶，并将浆料用水(15mL)稀释。通过过滤分离固体产物，用甲醇中的20％水(2×30mL)、水(30mL)和乙酸乙酯(3×30mL)洗涤。在35℃下，将固体产物在真空下干燥16h，以得到作为白色固体的薯蓣皂苷基-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4.65g，79％产率)。

¹H NMR(500MHz，3∶1 CDCl3/CD3OD)：δ5.35(dd，J＝1.9，3.2Hz，1H)，5.19(d，J＝1.5Hz，1H)，4.46(d，J＝7.6Hz，1H)，4.41(q，J＝7.6Hz，1H)，4.08(m，1H)，3.94(dd，J＝1.5，3.3Hz，1H)，3.83(dd，J＝3.0，12.0Hz，1H)，3.73(dd，J＝4.7，12.0Hz，1H)，3.69(dd，J＝3.5，9.5Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.49(m，2H)，3.38(m，4H)，3.25(m，1H)，2.41(ddd，J＝1.9，4.7，13.4Hz，1H)，2.28(m，1H)，2.00(m，2H)，1.94-0.91(m，21H)，1.27(d，J＝6.2Hz，3H)，1.02(s，3H)，0.97(d，J＝7.3Hz，3H)，0.80(d，J＝6.1Hz，3H)，0.79(s，3H)；13C NMR(126MHz，3∶1CDCl3/CD3OD)：δ141.80，123.05，110.94，101.93，100.92，82.35，79.97，79.09，76.97，74.19，72.66，71.93，71.80，69.69，68.23，63.38，63.19，57.86，51.53，42.99，41.63，41.09，39.71，38.60，38.21，33.40，33.03，32.78，32.65，31.54，30.89，30.01，22.17，20.47，18.55，18.28，17.51，15.62；

HRMS(TOF ES+)m/z：C₃₉H₆₂O₁₂Na计算值：745.4139；实测值：745.4141。

实施例4化合物B和化合物B盐的合成

本发明的化合物B在3个步骤中由原料2制备。

N-FMOC-缬氨酸酯类似物11的制备

将来自实施例3的原料2(750mg，1.05mmol)、N-FMOC-缬氨酸(389mg，1.16mmol，1.1当量)和N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP，30mg，0.23mmol，0.2当量)溶解在无水THF(80mL至85mL)中，并将混合物在冰/水浴(保持在Ar气氛下)中冷却至0℃。添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI.HCl；218mg，1.16mmol，1.1当量)，并将混合物在冰上搅拌2小时，并且随后在室温下搅拌过夜(约16个小时)。

通过用乙酸乙酯(200至300mL)和盐水(100mL)稀释淬灭反应。用乙酸乙酯的另外的等分样品(200至400mL)萃取经分离的盐水层，并且随后将合并的有机层进行干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，以得到作为灰白色易碎泡沫状物的粗制品2加上副产物(对于750mg反应，约1.4g；并且对于1.8g反应，为3.25g)。最初，通过Biotage色谱系统(100g SNAP KP-Sil柱体(cartridge))和用包含DCM/甲醇作为洗脱剂的梯度系统(初始甲醇含量＝3％；最终甲醇含量＝30％)分别进行对每个经优化反应批次的进一步纯化。仅将包含期望单-FMOC-缬氨酸加合物(TLC交叉检查)的那些级分合并并浓缩。在750mg规模下，可分离的2的量为470至542mg(43％至50％)。

对(11)进行去保护以得到缬氨酸酯“游离碱”12(化合物B)

对于热介导的去保护反应的典型程序如下：将中间体11溶解在无水DMSO(每0.1mmol底物1mL；敞口烧瓶)中并在搅拌样品下在120℃下加热(内部探针示出烧瓶反应温度为98℃至110℃)。在0.5、1、2和3小时时取出反应混合物的小等分试样，并用乙酸乙酯稀释，用于通过TLC(5∶1 DCM/MeOH)监测进程。所有中间体11经过3h 10分钟被消耗。将反应混合物冷却至室温并添加水(在搅拌下)，以得到白色黏性沉淀物，通过用移液管小心地除去液体物质将白色黏性沉淀物与液体物质分离。

然后用乙酸乙酯和己烷处理上述黏性物质，以得到吸湿性固体，将吸湿性固体在烧结玻璃器皿上进行分离(关于母液所获得的NMR和TLC显示该物质几乎唯一包含来源于裂解FMOC部分的二苯并富烯片段)。然后将吸湿性固体溶解在甲醇中，浓缩并再溶解在异丙醇中。向异丙醇溶液添加己烷，得到沉淀物；通过冷却溶液(冷冻)数小时进一步优化所产生的量。然后将所沉淀的物质收集在烧结玻璃器皿上，以得到吸湿性固体。通过将固体溶解在甲醇中，随后在减压下浓缩以得到玻璃状白色泡沫状物制备空气稳定形式的物质。该物质具有足够的纯度(NMR，TLC)以用于下一步骤。

化合物B盐的制备

典型程序如下：将中间体3(270至320mg)溶解在甲醇中并进行过滤或倾析以除去痕量的任何未溶解物质。在搅拌下，将溶液在冰-水浴中冷却，并且随后用单独制备的马来酸的甲醇溶液(相对于3的0.5mol当量，通常在2mL中的22mg)处理。然后将合并的均相溶液用乙醚(20mL)处理，但未观察到沉淀物。将混合物进行浓缩，并且随后再溶解在甲醇(或甲醇/丙酮，约2mL)中，随后用乙醚处理直至正好混浊。然后将混合物放置在冰箱(refrigerator)中以使结晶发生。然后将结晶物质收集在烧结的玻璃器皿上。

实施例5化合物C和化合物C盐的合成

按照下面概述的方案，由原料1制备化合物C。在该合成中，使用庞大的甲硅烷基保护原料1的主要的C-6’位置，并将其余的羟基进行苯甲酰化。对主要的甲硅烷基进行选择性裂解得到游离醇，随后将游离醇进行磷酸化。将P-氯化物进行水解，随后使用甲醇钠进行全面去保护，得到作为二钠盐的化合物C。

步骤1对原料1进行甲硅烷基化以产生13

在0℃下，将叔-丁基二甲基甲硅烷基氯(1.37g，9.00mmol)添加至DCM(90mL)中的原料1(8.9g，7.8mmol)和咪唑(2.69g，39.5mmol)并搅拌30分钟，然后在rt下过夜。将反应混合物用DCM(90mL)稀释，然后用7％碳酸氢钠(200mL)洗涤，将其用DCM(100mL)进行反萃取。将合并的有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，并在降低的真空(reduced vacuum)下蒸发溶剂，以得到作为灰白色固体的化合物1(10g，定量)，将其用于下一步骤而无需进一步纯化。

1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.05-8.02(m，2H)，7.90(dd，J＝8.4，1.3Hz，2H)，7.79-7.75(m，2H)，7.75-7.71(m，2H)，7.54(ddt，J＝8.7，7.7，1.3Hz，1H)，7.51-7.47(m，1H)，7.42-7.24(m，8H)，7.23-7.19(m，2H)，5.74(dd，J＝10.1，3.5Hz，1H)，5.57(t，J＝10.0Hz，1H)，5.50-5.44(m，2H)，5.43(dd，J＝3.5，1.7Hz，1H)，5.23(d，J＝1.7Hz，1H)，4.76-4.71(m，2H)，4.43(td，J＝7.7，6.3Hz，1H)，3.96-3.89(m，3H)，3.79-3.66(m，2H)，3.54(dt，J＝10.0，5.3Hz，1H)，3.48(dd，J＝9.3，4.4Hz，1H)，3.39(t，J＝10.9Hz，1H)，3.31(d，J＝3.2Hz，1H)，2.59(ddd，J＝13.2，4.8，2.3Hz，1H)，2.42(t，J＝12.5Hz，1H)，2.02(dt，J＝12.4，6.1Hz，2H)，1.91-1.81(m，2H)，1.81-1.69(m，2H)，1.70-1.38(m，10H)，1.37-1.25(m，4H)，1.24-1.05(m，3H)，1.02-0.85(m，16H)，0.81-0.77(m，7H)，0.12-0.08(m，6H)ppm；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ166.94，165.69，165.23，164.59，140.18，133.12，132.92，129.99，129.78，129.75，129.65，129.38，129.29，128.33，128.27，128.22，128.15，122.10，109.28，99.79，97.78，80.82，79.34，75.22，74.99，71.99，71.95，70.48，69.63，66.88，66.79，64.45，62.19，56.49，50.10，41.66，40.31，39.76，38.82，37.23，36.89，32.18，31.94，31.55，31.46，30.34，29.92，28.86，25.89，25.66，20.84，19.28，18.33，17.39，17.15，16.28，14.54，5.40ppm；

HRMS(ESI-pos)：C73H92O16SiNa[M+Na]+m/z计算值：1275.6052；m/z实测值：1275.6062。

对13进行苯甲酰化

在0℃下，将苯甲酰氯(1.9mL，16mmol)添加至DCM(60mL)和吡啶(20mL，247mmol)中的粗制13(9.8g，7.8mmol)并搅拌30分钟然后在rt下过夜。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，用DCM(80mL)稀释，用氯化铵(100mL)洗涤，将其用DCM(50mL)进行反萃取。将合并的有机层用7％碳酸氢钠(200mL)洗涤，将其用DCM(50mL)进行反萃取。将这些合并的有机层用无水硫酸镁进行干燥，过滤并蒸发溶剂。将所得残余物再溶解在DCM中并再次进行蒸发，以得到作为灰白色固体的化合物2(10.5g，定量)，将其用于下一步骤而无需进一步纯化。

1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.62(dt，J＝4.3，1.8Hz，2H)，8.19-8.14(m，1H)，7.95-7.86(m，6H)，7.79-7.74(m，4H)，7.70-7.64(m，2H)，7.59-7.47(m，5H)，7.41-7.14(m，6H)，5.83(t，J＝9.5Hz，1H)，5.78(dd，J＝10.1，3.6Hz，1H)，5.57(t，J＝10.0Hz，1H)，5.48(dt，J＝5.0，1.8Hz，1H)，5.44(dd，J＝3.6，1.7Hz，1H)，5.32(t，J＝9.5Hz，1H)，5.13(d，J＝1.7Hz，1H)，4.84(d，J＝7.7Hz，1H)，4.77(dq，J＝9.9，6.2Hz，1H)，4.44(ddd，J＝8.7，7.5，6.4Hz，1H)，4.04(dd，J＝9.4，7.7Hz，1H)，3.83-3.71(m，3H)，3.48(ddd，J＝10.9，4.4，2.0Hz，1H)，3.39(t，J＝10.9Hz，1H)，2.62(ddd，J＝13.2，4.8，2.2Hz，1H)，2.50-2.40(m，1H)，2.12-1.98(m，3H)，1.92-1.83(m，2H)，1.83-1.56(m，9H)，1.56-1.40(m，2H)，1.34(d，J＝6.2Hz，3H)，1.26-1.06(m，3H)，1.06-0.89(m，8H)，0.86(s，9H)，0.82-0.77(m，7H)，0.02(d，J＝1.2Hz，6H)ppm；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ165.67，165.51，165.43，165.26，164.60，149.88，140.14，135.89，134.51，133.21，133.17，133.09，132.92，132.84，130.57，129.86，129.83，129.79，129.74，129.71，129.66，129.40，129.30，129.19，129.14，128.96，128.88，128.40，128.36，128.33，128.26，128.16，128.06，123.70，122.12，109.27，99.83，97.64，80.82，79.35，75.65，75.61，75.23，71.96，70.47，69.93，69.65，66.87，66.76，63.04，62.20，56.48，50.11，41.66，40.31，39.75，38.82，37.24，36.90，32.18，31.94，31.57，31.46，30.33，29.91，28.86，25.83，20.84，19.27，18.30，17.37，17.15，16.29，14.54，5.35，5.39ppm；

HRMS(ESI-pos)：C80H96O17SiNa[M+Na]+m/z计算值：1379.6315；m/z实测值：1379.6313。

对14进行脱甲硅烷基化

在0℃下，将乙酰氯(5.3mL，74mmol)添加至DCM(100mL)和甲醇(50mL)中的粗制14(10.0g，7.4mmol)，并在0℃下搅拌90分钟。然后将反应混合物用7％碳酸氢钠(150mL)淬灭。将水层用DCM(100mL)进行反萃取，并合并有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤并蒸发溶剂。将粗制残余物溶解在DCM中，并通过柱色谱法(二氧化硅，乙酸乙酯/庚烷，1∶6至2∶5)进行纯化，以得到作为白色泡沫状物的化合物3(8.3g，90％)。

1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.97-7.88(m，6H)，7.78-7.72(m，4H)，7.55-7.46(m，3H)，7.41-7.35(m，5H)，7.35-7.16(m，6H)，5.92(t，J＝9.6Hz，1H)，5.77(dd，J＝10.1，3.5Hz，1H)，5.57(t，J＝10.1Hz，1H)，5.46(ddd，J＝17.0，3.5，1.8Hz，2H)，5.35(t，J＝9.6Hz，1H)，5.16(d，J＝1.7Hz，1H)，4.89(d，J＝7.7Hz，1H)，4.76(dq，J＝9.9，6.3Hz，1H)，4.43(ddd，J＝8.6，7.6，6.4Hz，1H)，4.08(dd，J＝9.5，7.7Hz，1H)，3.86-3.67(m，4H)，3.48(ddd，J＝10.8，4.5，1.9Hz，1H)，3.39(t，J＝11.0Hz，1H)，2.62(ddd，J＝13.2，4.9，2.3Hz，1H)，2.53(dd，J＝8.9，5.1Hz，1H)，2.50-2.42(m，1H)，2.10-1.98(m，2H)，1.92-1.84(m，2H)，1.82-1.38(m，10H)，1.37-1.08(m，9H)，1.04-0.93(m，7H)，0.91-0.86(m，2H)，0.80(d，J＝6.5Hz，6H)ppm；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ166.37，165.68，165.45，165.29，164.61，140.06，133.64，133.21，133.14，132.98，130.01，129.85，129.79，129.72，129.67，129.37，129.25，129.02，128.61，128.51，128.34，128.27，128.18，128.14，122.29，109.28，99.92，97.69，80.82，79.48，75.30，75.08，74.43，71.88，70.44，69.68，69.61，66.87，62.18，61.45，56.48，50.07，41.66，40.31，39.73，38.79，37.18，36.91，32.18，31.94，31.89，31.54，31.46，30.33，29.95，29.02，28.85，22.69，20.84，19.29，12.37，17.15，16.28，14.54，14.11ppm；

HRMS(ESI-pos)：C74H82O17Na[M+Na]+m/z计算值：1265.5450；m/z实测值：1265.5442。

对15进行磷酸化

在水浴中，将磷酰氯(1.2g，7.8mmol)逐滴添加至无水DCM(80mL)中的15(8.0g，6.4rnrnol)和N-甲基吗啉(1.2g，12mrnol)，并在rt下搅拌过夜。然后将混合物用庚烷(240mL)稀释。在0℃下搅拌10分钟之后，通过脱脂棉滤出黄色沉淀物并用3∶1庚烷/DCM洗涤。用冰冷的0.1M HCl(200mL)萃取有机溶液，然后用冰冷的水萃取两次(每次200mL)。将有机相用无水硫酸镁进行干燥，过滤，并在降低的真空下蒸发溶剂，以得到作为灰白色固体的化合物4(8.3g，94％)，将其用于下一步骤而无需进一步纯化。

1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.94-7.86(m，6H)，7.78-7.73(m，4H)，7.56-7.46(m，3H)，7.41-7.35(m，5H)，7.35-7.16(m，7H)，5.88(t，J＝9.5Hz，1H)，5.76(dd，J＝10.1，3.5Hz，1H)，5.58(t，J＝10.0Hz，1H)，5.46(ddd，J＝21.9，3.7，1.8Hz，2H)，5.33(t，J＝9.8Hz，1H)，5.16(d，J＝1.7Hz，1H)，4.90(d，J＝7.7Hz，1H)，4.74(dq，J＝9.9，6.2Hz，1H)，4.55-4.38(m，3H)，4.13-4.03(m，2H)，3.76(tt，J＝11.3，4.7Hz，1H)，3.48(ddd，J＝10.9，4.4，2.0Hz，1H)，3.39(t，J＝10.9Hz，1H)，2.61(ddd，J＝13.2，4.8，2.3Hz，1H)，2.51-2.40(m，1H)，2.04(dddd，J＝24.7，13.1，6.1，4.0Hz，3H)，1.94-1.82(m，2H)，1.82-1.57(m，6H)，1.57-1.38(m，3H)，1.38-1.09(m，9H)，1.05-0.92(m，6H)，0.88(t，J＝7.0Hz，2H)，0.80(d，J＝5.9Hz，6H)ppm；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ165.65，165.58，165.36，165.29，164.63，139.97，133.73，133.23，133.17，133.09，132.99，129.95，129.87，129.78，129.71，129.66，129.34，129.23，129.20，128.82，128.55，128.38，128.35，128.29，128.19，128.16，122.34，109.27，100.19，97.71，80.82，80.14，75.15，74.81，72.22，72.14，71.81，70.38，69.81，69.74，69.57，69.32，66.93，66.87，62.17，56.46，50.00，41.66，40.31，39.71，38.88，37.14，36.87，32.17，31.94，31.89，31.55，31.46，30.33，29.93，29.01，28.86，22.69，20.83，19.27，17.37，17.15，16.28，14.54，14.10ppm；31P-NMR(202MHz，CDCl3)7.8ppm；

HRMS(ESI-pos)：C74H81O18C12PNa[M+Na]+m/z计算值：1381.4435；m/z实测值：1381.4441。

对16进行溶剂解(Solvolysis)

在30℃下，将碳酸氢钠(75mL，7％溶液)添加至DCM(75mL)中的16(8.0g，5.9mmol)，并将该双相混合物剧烈搅拌超过三夜(通过MS监测反应)。分离DCM层，并将水层用DCM(75mL)进行反萃取，并合并有机相，用无水硫酸镁进行干燥，过滤，蒸发溶剂以得到16的有机磷酸酯(定量)。HRMS(ESI neg)：C74H82O20P[M-H]-m/z计算值：1321.5137；m/z实测值：1321.5134。

将该物质的一半(4.1g，3.1mmol)溶解在THF(170mL)中。向该溶液添加甲醇中的甲醇钠(1.2mL，5.4M，6.5mmol)，并将所得混悬液在rt下搅拌过夜。用水(50mL)淬灭反应物，形成澄清溶液，并在减压下小心地除去THF。用水将白色混悬液稀释至250mL并以3g离心2分钟。将上清液进行倾析并通过由HPLC引导的柱色谱(C18二氧化硅，乙腈/水，1∶3)进行纯化，以在冻干之后得到作为白色固体的ORIL019(1.1g，43％)。

1HNMR(500MHz，MeOH-d4，pH 7，13ma/mL)δ5.38(dt，J＝4.2，2.0Hz，1H)，5.23(d，J＝1.8Hz，1H)，4.46(d，J＝7.8Hz，1H)，4.44-4.36(m，1H)，4.21-4.08(m，2H)，3.99-3.89(m，2H)，3.70-3.59(m，2H)，3.59-3.47(m，2H)，3.47-3.36(m，3H)，3.31(p，J＝1.6Hz，8H)，3.24(dt，J＝9.5，2.8Hz，1H)，2.43(ddd，J＝13.3，4.8，2.2Hz，1H)，2.34-2.24(m，1H)，1.99(dddd，J＝17.0，13.2，6.1，4.3Hz，2H)，1.94-1.82(m，3H)，1.79-1.72(m，2H)，1.72-1.37(m，8H)，1.34-1.11(m，6H)，1.04(s，4H)，0.96(d，J＝6.9Hz，4H)，0.86-0.73(m，6H)ppm；13C NMR(126MHz；MeOH-d4，pH 7，13mg/mL)δ141.97，122.64，110.61，102.17，100.95，82.26，79.41，78.59，77.38，74.05，72.43，72.28，70.91，69.74，67.90，64.34，63.81，57.85，51.76，42.97，41.47，40.98，39.61，38.63，38.09，33.23，32.87，32.80，32.49，31.49，30.78，29.95，22.04，19.89，18.04，17.52，16.81，14.91ppm；31P-NMR(202MHz，MeOH-d4，pH 7，13mg/mL)δ6.0ppm；

HRMS(ESI-pos)：C39H63O15PNa[M+2H-Na]+m/z计算值：825.3802；m/z实测值：825.3806；HRMS(ESI-neg)：C39H62O15P[M+H-2Na]-m/z计算值：801.3826；m/z实测值：801.3820。

实施例6生物学测试-溶血测定

溶血是临床病症，其中红细胞膜被不可逆地损伤，导致其血红蛋白内容物的释放。体外溶血测定是用于确定受试物质对分离的且经洗涤的红细胞的溶血潜力的简单测试。

在该实施例中，使用经洗涤的人红细胞测试鉴定为化合物A、化合物C二钠盐和化合物B1/2马来酸盐的三种化合物和来自皂树树皮(Quillaja bark)之皂苷(S4521)的溶血潜力。在最大浓度为100pg/mL和最低浓度为0.781pg/mL的剂量曲线上测试化合物。浓度范围是100至0.781μg/mL。

1.血液准备

简言之，将来自单一志愿者的全血(40mL)收集到多个EDT真空采血管(vacutainertube)中。洗涤红细胞(RBC)并通过在等张的0.9％氯化钠中以3000rpm离心5分钟持续3次而从血浆组分中分离红细胞(RBC)。在最后一次洗涤之后，向每个处理管中添加0.1mL体积的红细胞。

2.受试溶液的制备

最初将受试化合物化合物A、化合物C二钠盐和化合物B1/2马来酸盐与参照制品(皂苷S4521)配制成在适当的稀释剂(对于化合物：DMSO；对于皂苷S4521：0.9％NaCl)中的10mg/mL的浓度的100×储备溶液。然后将这些储备溶液在0.9％NaCl中进一步1∶100稀释，以制备1％DMSO/NaCl中的最高浓度(100pg/mL)。将最高浓度溶液在1％DMSO/NaCl中进一步1∶2连续稀释，以获得较低浓度的50、25、12.5、6.25、3.125、1.562和0.781pg/ml的活性组分。

3.对照制品制剂

通过称量2.92g NaCl来配制10mL MilliQ水中的阳性对照制品(511/1NaCl的高张溶液)。通过将0.09g NaCl溶解在10mL MilliQ水中，在使用当天配制阴性对照制品(0.154MNaCl的等张溶液)。将用于稀释受试制品的载剂(1％DMSO/NaCl)用作测定中的试剂空白。

4.方法

将包含细胞和处理物的管在37℃下在温和搅拌下在轨道混合器中孵育3小时。在孵育完成时，将管以3000rpm离心5分钟，并将来自每个管的上清液的200ptL等分样品转移至96孔微板用于测量535nm处的吸光度。对于96孔微板的布局见于附录1中。将不存在血液的1％DMSO/NaCl载剂用作测定中的试剂空白。

5.数据收集和分析

确定阴性(0.154M NaCl)、阳性(5M NaCl)和空白一式三份孔的平均值。然后根据下式将这些用于计算每个样品的溶血％：

通过在用于Mac OS X的GraphPad Prism(版本5.Oc，GraphPad软件，California，USA)上的使用log(激动剂)相对于标准化的响应变量斜率曲线拟合的非线性回归分析进行50％溶血剂量(50％haemolytic dose，HD50)的计算。

6.结果

将平均OD 535值分别为3.442(板1)或3.472(板2)和0.100(板1)或0.126(板2)的阳性对照(5M NaCl)处理和阴性对照(0.154M NaCl)处理鉴定为100％和0％的溶血值。

用每种受试化合物处理导致溶血的剂量依赖性提高。来自皂树树皮的皂苷(S4521)显示出最高的溶血活性，50％溶血剂量(HD50)值为7.35μg/ml。在受试化合物中，A显示出最高的溶血活性，HD50值为31.57μg/ml。在该测定中，C二钠盐和B半马来酸盐显示出较低的溶血活性，HD50值分别为145.70μg/ml和73.55μg/ml。

溶血概述

处理	HD<sub>50</sub>(μg/ml)
		A	31.57
B半马米酸盐	73.55
		C二钠盐	145.70
皂苷(S4521)	7.35

对于所有样品的溶血百分比的完整结果如下：

实施例7生物学测试-细胞生长抑制测定

使用细胞生存力测定进行重复的实验，以确定化合物A、化合物B和化合物C针对每种细胞系的IC50值。使用实施例6中描述的用于制备受试制品的一般方法。首先将受试化合物化合物A、化合物C二钠盐和化合物B1/2马来酸盐配制成在适当的稀释剂(对于化合物：DMSO)中的10mg/mL的浓度的100×储备溶液。然后将这些储备溶液在细胞培养基中进一步稀释，以获得较低浓度的100、50、25、12.5、6.25以及3.125、1.563、0.781、0.390和0.195μM的活性组分。具体的癌细胞是A549、HCT 116、MCF-7和MIA PaCa-2。

细胞系

人癌细胞类型为：HTC-116(结肠)；A549(肺)；HT29(结肠)；MCF-7；Mia PaCa-2(胰腺)

(i)细胞培养和细胞生长测定

将细胞以3,000至4,000个每微量滴定孔在50μl的细胞培养基中进行一式两份接种。在24小时之后，向每个孔添加50μL的在培养基中以2×所需浓度制备的受试制品或载剂对照。使癌细胞在药物存在下培养48小时，然后用细胞生存力测定确定相对于未处理对照孔的细胞生长。

IC₅₀值的计算

使用用于Mac OS X的Prism 6，使用非线性回归(log(抑制剂)相对于响应--变量斜率(四参数)计算IC50值

表示为IC₅₀值的细胞抑制生长的结果如下。

细胞系		化合物A	化合物B	化合物c
						实验1	4.74	9.86	2.46
A549	实验2	3.60	10.47	1.53
						平均数±SEM	4.17±0.57	10.17±0.31	2.00±0.47
	实验1	5.17	11.68	4.08
					HCT 116	实验2	5.02	13.11	1.99
	平均数±SEM	5.10±0.08	12.40±0.72	3.04±1.05
						实验1	7.91	14.65	5.45
MCF-7	实验2	7.38	15.28	2.88
						平均数±SEM	7.65±0.27	14.97±0.32	4.17±1.29
	实验1	6.17	11.16	3.52
					MIA PaCa-2	实验2	5.08	7.62	2.55
	平均数±SFM	5.63±0.55	9.39±1.77	3.04±0.49
						实验1	6.42	12.36	4.32
PC-3	实验2	5.85	10.96	2.18
						平均数±SEM	6.14±0.29	11.66±0.70	3.25±1.07

实施例8生物学测试-免疫应答活性

将选自以下的磷酸缓冲盐水(phosphate buffered saline，PBS)溶液的体系(regime)注射到四只C57雌性小鼠组的两个胁部(flank)中：(i)100μg的卵清蛋白(OVA)(ii)与20μg皂苷组合的100μg的卵清蛋白(OVA)或(iii)与20μg化合物C二钠盐组合的100μg的卵清蛋白(OVA)(每种情况下最终体积为200μl)。在免疫接种之后5天，用卡尺测量两耳的厚度，并随后用磷酸缓冲盐水(PBS，20μl)中的15μg OVA攻击(注射)右耳，并用作为阴性对照的单独的PBS攻击(注射)左耳。在攻击之后一天和两天评估右耳和左耳的厚度，以获得由于接触性超敏反应引起的肿胀的证据。

通过参照图1可看出，与不具有统计学显著作用的磷酸缓冲盐水相比，化合物C二钠盐具有与已知的免疫应答调剂剂(皂苷)类似的引发免疫应答的能力。

最后，应当理解，在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本文中所述的本发明的方法和组合物的多种修改和变化对于本领域技术人员而言将是显然的。尽管已结合一些具体的优选实施方案描述了本发明，但是应该理解，要求保护的本发明不应该过度地受限于这些具体实施方案。实际上，对于本领域技术人员明显的用于实施本发明的所描述方式的多种修改旨在落入本发明的范围内。

Claims (21)

1.式(I)化合物：

其中：

R是包含以下任一种的部分：(1)至少一个氢离子供体，(2)至少一个氢离子接纳体或(3)其组合；并且

R¹是式E、F或G的基团：

其中：

R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁶、R¹⁷、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵和R²⁷独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

当C-5、C-6是单键时，R¹⁵是H；并且当C-5、C-6是双键时，R¹⁵不存在；

A是O同时B是CH₂；或B是O同时A是CH₂；

R^37A是H同时R^37B是CH₃；或R^37A是CH₃同时R^37B是H；

或其可药用盐；

其中：

R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁶、R¹⁷、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵和R²⁷独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

当C-5、C-6是单键时，R¹⁵是H；并且当C-5、C-6是双键时，R¹⁵不存在；

当C-20、C-22是单键时，R³²是羟基或烷氧基；或当C-20、C-22是双键时，R³²不存在；

R^37A是H同时R^37B是CH₃；或R^37A是CH₃同时R^37B是H；

R³⁸是H或糖类；或其可药用盐；

或其可药用盐；

其中：

R¹¹、R¹²、R¹⁴、R¹⁶、R¹⁷、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵和R²⁷各自独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

当C-5、C-6是单键时，R¹⁵是H；并且当C-5、C-6是双键时，R¹⁵不存在；

R³²和R³⁹各自独立地是H、OH、＝O、药理学上可接受的酯基团或药理学上可接受的醚基团；

R^37A是H同时R^37B是CH₃；或R^37A是CH₃同时R^37B是H；

R³⁸是H或糖类；或其可药用盐；

或其可药用盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：

其中R如权利要求1中所限定；

或其可药用盐。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中R是包含(1)至少一个氢离子供体的部分。

4.根据权利要求3所述的化合物，其中所述至少一种氢离子供体选自-CO₂H、-SO₃H和-PO₃H₂。

5.根据权利要求3所述的化合物，其中R是-PO₃H₂。

6.根据权利要求1所述的化合物，其中R是包含至少一个氢离子接纳体的部分。

7.根据权利要求6所述的化合物，其中所述氢离子接纳体是-NH₂。

8.根据权利要求6所述的化合物，其中R是(CH₃)₂CHCH(NH₂)C(＝O)-。

9.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：

和

或其可药用盐。

10.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：

11.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式：

其中X是HO₂CCHCHCO₂ ^-。

12.药物组合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或其可药用盐，以及可药用稀释剂、赋形剂或载体。

13.在对象中治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌症选自：上皮癌；膀胱癌；骨癌；脑肿瘤；乳腺癌；宫颈癌；结直肠癌，其包括结肠癌、直肠癌、肛门癌和阑尾癌；食管癌；霍奇金病；肾癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌；淋巴瘤；黑素瘤；痣和发育不良痣；多发性骨髓瘤；肌癌；非霍奇金淋巴瘤；口腔癌；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；畸胎瘤；甲状腺癌；以及子宫癌。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其还包括施用第二抗癌剂。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述第二抗癌剂选自以下一种或更多种：化学治疗剂；烷化剂，其包括BCNU(卡莫司汀)、白消安、CCNU(洛莫司汀)、苯丁酸氮芥、顺铂、美法仑、丝裂霉素C和噻替派；抗有丝分裂剂，其包括泰素(紫杉醇)、多西他赛、硫酸长春碱和硫酸长春新碱；拓扑异构酶抑制剂，其包括多柔比星、柔红霉素、m-AMSA(安吖啶)、米托蒽醌和VP-16(依托泊苷)；RNA/DNA抗代谢物，其包括5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤；DNA抗代谢物，其包括Ara-C(阿糖胞苷)、羟基脲(羟基尿素)和硫鸟嘌呤(硫代鸟嘌呤)；细胞过程靶向剂；甲磺酸伊马替尼；曲妥珠单抗；以及吉非替尼和抗(程序性细胞死亡1受体)PD-1治疗；派姆单抗和纳武单抗。

17.在对象中促进抗癌治疗之活性的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述抗癌治疗涉及施用选自以下的一种或更多种抗癌剂：化学治疗剂；烷化剂，其包括BCNU(卡莫司汀)、白消安、CCNU(洛莫司汀)、苯丁酸氮芥、顺铂、美法仑、丝裂霉素C和噻替派；抗有丝分裂剂，其包括泰素(紫杉醇)、多西他赛、硫酸长春碱和硫酸长春新碱；拓扑异构酶抑制剂，其包括多柔比星、柔红霉素、m-AMSA(安吖啶)、米托蒽醌和VP-16(依托泊苷)；RNA/DNA抗代谢物，其包括5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤；DNA抗代谢物，其包括Ara-C(阿糖胞苷)、羟基脲(羟基尿素)和硫鸟嘌呤(硫代鸟嘌呤)；细胞过程靶向剂；甲磺酸伊马替尼；曲妥珠单抗；以及吉非替尼。

19.在对象中促进免疫应答的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。

20.在对象中促进对药剂之免疫应答的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。

21.根据权利要求20所述的方法，其中根据权利要求1至11中任一项所述的化合物与所述药剂同时施用。