CN110403972A - 一种狼牙果全株提取液的制备方法及其应用 - Google Patents

一种狼牙果全株提取液的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括：预处理、打浆、离心、过滤、回流提取、蒸馏、制备狼牙果植株提取液及合并的过程；将制备得到的狼牙果全株提取液应用于制备治疗消化系统疾病、血液系统疾病及泌尿系统疾病中，扩大了狼牙果全株的应用范围。

Description

一种狼牙果全株提取液的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及植物提取及应用技术领域，更具体地说是涉及一种狼牙果全株提取液的制备方法及其应用。
背景技术
狼牙果，又名奇瓦诺果、非洲蜜瓜、火星果、火天桃及爆炸果；为葫芦科黄瓜属一年生的蔓性草本植物，表皮非常坚硬、凹凸不平。肉质细腻多籽，像黄瓜一样呈凝胶状，口味清甜。狼牙果原产于喀拉哈里沙漠地区(南部非洲沙漠高原)，在原产地由于其根系能够达到地下含水层，因此它曾经是当地人重要的维生素和水的来源。
狼牙果的口味类似于黄瓜、西葫芦的混合味或者香蕉、黄瓜和柠檬的混合味，其果实提取液中富含钙、锌、铁、钾、维生素B4、维生素B2、维生素B6等营养元素，具有护肤美容、安神补脑，健心活血、抗菌消炎、促进消化、提高免疫力、改善睡眠、清理肠道等作用。
然而，市场上太过注重狼牙果果实的营养价值，而对于其植株的研究及应用几乎为空白，因此，其植株中的营养大多被忽略；同时，现有技术中，大多将狼牙果果实制成饮品，并未见直接对其果实及植株进行提取，并将提取液加以应用的报道。
因此，如何提供一种狼牙果全株提取液的制备方法并将其全株提取液加以利用是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种狼牙果全株提取液的制备方法及应用，将狼牙果全株进行营养物质的提取，将果实及植株中的钙、锌、铁、钾、维生素B4、维生素B2、维生素B6等营养元素充分提取出来，提高了狼牙果的利用率。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括下述步骤：
1)预处理：分别取狼牙果的果实及植株进行处理；
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝(2～5)∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液离心，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液3～5倍体积的提取剂，然后于50～80℃下加热回流1～3h，得初提液；
6)蒸馏：将步骤5)所得初提液进行一级分子蒸馏，1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
8)合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
以上技术方案达到的技术效果是：将狼牙果全株进行营养物质的提取，将果实及植株中的钙、锌、铁、钾、维生素B4、维生素B2、维生素B6等营养元素充分提取出来，提高了狼牙果的利用率。
作为本发明优选的技术方案，步骤1)中预处理的具体过程包括：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于50～70℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
作为本发明优选的技术方案，步骤3)中对狼牙果果实原液离心的条件为：4℃、12000～15000r/min、离心5～10min。
作为本发明优选的技术方案，步骤6)中一级分子蒸馏的条件为：进料温度50～60℃、蒸馏温度90～105℃，冷凝面温度40～50℃，空气残压0.8～1.5Pa，料液流速1～5mL/min。
作为本发明优选的技术方案，步骤7)中制备狼牙果植株提取液的方法为：
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加5～15mL提取剂的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡5～10h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在30～50℃下减压浓缩1～2h，得狼牙果植株提取液。
作为本发明优选的技术方案，步骤5)中及步骤71)中的提取剂均为无水乙醇。
一种由狼牙果全株提取液的制备方法制备得到的狼牙果全株提取液，所述狼牙果全株提取液在制备治疗消化系统疾病药物中的应用。
一种由狼牙果全株提取液的制备方法制备得到的狼牙果全株提取液，所述狼牙果全株提取液在制备治疗泌尿系统疾病药物中的应用。
一种由狼牙果全株提取液的制备方法制备得到的狼牙果全株提取液，所述狼牙果全株提取液在制备治疗血液系统疾病药物中的应用。
以上技术方案达到的技术效果是：将火龙果的果实本身具有美容及促进肠道消化吸收的作用，但是其植株的功效尚未进行研究，本发明将植株与果实的提取液混合，共同应用于制备治疗消化系统疾病、泌尿系统疾病的药物中，提高了疾病的治疗效果，同时，植株提取液与狼牙果果实提取液间具有协同增效作用，开设了狼牙果全株提取液在治疗各种疾病中的先河。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种狼牙果全株提取液的制备方法及狼牙果全株提取液的应用。本发明将狼牙果植株加以利用，提高了狼牙果全株的利用率；同时，本发明将狼牙果全株提取液应用于制备治疗消化系统、泌尿系统及血液系统疾病的药物中，提供了狼牙果果实及植株的新应用。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括下述步骤：
1)预处理：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于50℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝2∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液于4℃、12000r/min下离心5min，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液3倍体积的无水乙醇，然后于50℃下加热回流1h，得乙醇提取液；
6)蒸馏：将步骤5)所得乙醇提取液进行一级分子蒸馏，进料温度50℃、蒸馏温度90℃，冷凝面温度40℃，空气残压0.8Pa，料液流速1mL/min；1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加5mL无水乙醇的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡5h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在30℃下减压浓缩1h，得狼牙果植株提取液
8)合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
实施例2
一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括下述步骤：
1)预处理：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于55℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝3∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液于4℃、13000r/min下离心7min，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液4倍体积的无水乙醇，然后于60℃下加热回流1.5h，得乙醇提取液；
6)蒸馏：将步骤5)所得乙醇提取液进行一级分子蒸馏，进料温度52℃、蒸馏温度95℃，冷凝面温度42℃，空气残压1.0Pa，料液流速2mL/min；1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加7mL无水乙醇的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡7h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在35℃下减压浓缩1.2h，得狼牙果植株提取液
8)合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
实施例3
一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括下述步骤：
1)预处理：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于60℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝3.5∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液于4℃、13000r/min下离心8min，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液4倍体积的无水乙醇，然后于60℃下加热回流2h，得乙醇提取液；
6)蒸馏：将步骤5)所得乙醇提取液进行一级分子蒸馏，进料温度55℃、蒸馏温度95℃，冷凝面温度45℃，空气残压1.2Pa，料液流速3mL/min；1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加10mL无水乙醇的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡8h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在40℃下减压浓缩1.5h，得狼牙果植株提取液
8)合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
实施例4
一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括下述步骤：
1)预处理：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于65℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝4∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液于4℃、14000r/min下离心9min，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液5倍体积的无水乙醇，然后于70℃下加热回流2.5h，得乙醇提取液；
6)蒸馏：将步骤5)所得乙醇提取液进行一级分子蒸馏，进料温度58℃、蒸馏温度102℃，冷凝面温度47℃，空气残压1.3Pa，料液流速4mL/min；1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加12mL无水乙醇的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡9h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在45℃下减压浓缩2h，得狼牙果植株提取液
8)合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
实施例5
本发明实施例公开了一种狼牙果全株提取液的制备方法，包括下述步骤：
1)预处理：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于70℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝5∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液于4℃、15000r/min下离心10min，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液5倍体积的无水乙醇，然后于80℃下加热回流3h，得乙醇提取液；
6)蒸馏：将步骤5)所得乙醇提取液进行一级分子蒸馏，进料温度60℃、蒸馏温度105℃，冷凝面温度50℃，空气残压1.5Pa，料液流速5mL/min；1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加15mL无水乙醇的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡10h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在50℃下减压浓缩2h，得狼牙果植株提取液
8)合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
以实施例3中公开的狼牙果全株提取液的制备方法得到的狼牙果全株提取液进行如下试验：
实施例6验证狼牙果全株提取液对胃成纤维细胞生长的影响
胃成纤维细胞购自北京北纳创联生物技术研究院
实验方法：
取胃成纤维细胞，将其置于DMEM培养液中，配置成浓度为10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml、2000μg/ml的细胞培养液；分别向不同浓度的细胞培养液(100ml)中加入狼牙果全株提取液100ml作为试验组；对照组：不处理。
将试验组和对照组的细胞培养液置于30℃下进行培养，3天后，测定不同组别的细胞培养液在OD495nm下的吸光值，结果见表1；
表1
结果表明：狼牙果植株原液有显著促进胃成纤维细胞生长的效果。
实施例7验证狼牙果全株提取液对胃溃疡抑制率的影响
实验方法：
选择生长状况良好、体重在400-500g的大鼠10只进行试验，随机取其中6只大鼠，每2只大鼠作为一组，向每组大鼠的口腔中分别注射20ml、40ml、60ml的狼牙果原液；其余4只中有两只注射20ml生理盐水，2只不做处理；然后向每只大鼠口腔中注射无水乙醇20ml，12d后，将大鼠勒颈处死，对其解剖，观察其胃部溃疡率；具体分组如下，每组结果见表2；
胃部溃疡率＝100％×溃疡面积/胃部总面积
空白组：注射无水乙醇20ml
对照组：注射无水乙醇20ml+20ml生理盐水；
低剂量组：注射无水乙醇20ml+20ml狼牙果原液；
中剂量组：注射无水乙醇20ml+40ml狼牙果原液；
高剂量组：注射无水乙醇20ml+60ml狼牙果原液。
表2
空白组 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
胃部溃疡率％ 98.72 98.65 51.34 50.24 48.23
由表2可知，小、中、大剂量的狼牙果全株提取液均对胃溃疡有一定的抑制作用，说明，狼牙果全株原液可用于制备治疗消化系统疾病的药物。
实施例8验证狼牙果全株提取液对泌尿系统的作用
取豚鼠：400-500g，雄性40只，将其随机分成5组，分别为
对照组：无
阳性对照组：弗氏完全佐剂；
狼牙果全株提取液低剂量组：弗氏完全佐剂+20ml狼牙果全株提取液；
狼牙果全株提取液中剂量组：弗氏完全佐剂+40ml狼牙果全株提取液；
狼牙果全株提取液高剂量组：弗氏完全佐剂+60ml狼牙果全株提取液。
在每组大鼠的脊椎两侧靠近臀部的位置，各取3个点，每个点进行弗氏完全佐剂的注射，每个点注射0.1ml弗氏完全佐剂，10天后，按照本实施例的方法开始用药，连续20天。
停药后，采集静脉血测定血常规和尿素氮；并处死动物，取肾脏肉眼观察；
结果：肉眼观察：对照组肾脏表面光滑，颜色淡红，未见肿胀及瘀斑；
阳性对照组：肾脏明显水肿，表面有小瘀斑；
两用药组：肾脏未见明显肿胀及瘀斑。
血化验检查：各受试药组的BUN均明显低于阳性对照组，且P均＜0.01；
尿常规检查：各用药组尿液蛋白定性常为--，高倍视野下偶见白细胞及颗粒管型。
实施例9狼牙果全株提取液对血液系统的作用
将人急性早幼粒白血病NK4细胞，慢性粒细胞白血病K562细胞，维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞分别接种于RPMI-1640培养液中，于37℃含5％CO2的培养箱内培养传代，接种于96孔培养板，接种时按组别加入2μl狼牙果全株提取液，48h后MTT还原反应测定肿瘤生长抑制率，试验数据用Excel系统进行统计学分析，具体试验结果参见表3；试验分组如下：
空白对照组：等体积的生理盐水
给药组：2μl狼牙果全株提取液
表3
NK4细胞抑制率 K562细胞抑制率 MR-2细胞抑制率
空白对照组 0.65±0.11 0.42±0.12 0.76±0.14
给药组 59.32±3.46 52.79±5.64 64.73±4.37
由表3可知，狼牙果全株提取液可有效抑制人急性早幼粒白血病NK4细胞和慢性粒细胞白血病K562细胞的生长，还可以抑制维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞的生长，这对白血病的治疗提供了新的前景。
实施例10验证狼牙果植株提取液的功效
取实施例3得到的狼牙果植株提取液，按照实施例7-9的试验方法进行验证，结果见表4-表5；
表4狼牙果植株提取液对胃溃疡抑制率的影响
空白组 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
胃部溃疡率％ 98.71 98.66 60.37 56.34 52.79
表5狼牙果植株提取液对血液系统疾病的影响
NK4细胞抑制率 K562细胞抑制率 MR-2细胞抑制率
空白对照组 0.64±0.12 0.42±0.11 0.75±0.14
给药组 40.44±2.64 40.31±6.47 52.18±7.62
结果表明，狼牙果植株提取液对治疗消化系统及血液系统疾病具有显著的疗效。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (9)

1.一种狼牙果全株提取液的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
1)预处理：分别取狼牙果的果实及植株进行处理；
2)打浆：先按照水∶狼牙果果实(m/m)＝(2～5)∶1的比例混合，得到混合体系；再将混合体系置于打浆机中进行打浆，得到狼牙果果实原液；
3)离心：将步骤2)得到的狼牙果果实原液离心，取上清，得到果实原液上清液；
4)过滤：将步骤3)得到的果实原液上清液过滤，得果实滤液；
5)回流提取：向步骤4)得到的果实滤液中加入滤液3～5倍体积的提取剂，于50～80℃下加热回流1～3h，得初提取液；
6)蒸馏：将步骤5)所得初提取液进行一级分子蒸馏，1h后，取蒸馏余物，即得狼牙果果实提取液；
7)制备狼牙果植株提取液；
8)合并：合并狼牙果果实提取液及狼牙果植株提取液，得狼牙果全株提取液。
2.根据权利要求1所述的一种狼牙果全株提取液的制备方法，其特征在于，步骤1)中预处理的具体过程包括：
(11)对狼牙果的果实、根、茎、叶进行清洗；
(12)将步骤(11)中清洗过的根、茎、叶混合，并置于50～70℃烘箱中烘干，得到狼牙果植株原料，备用。
3.根据权利要求2所述的一种狼牙果全株提取液的制备方法，其特征在于，步骤3)中对狼牙果果实原液离心的条件为：4℃、12000～15000r/min、离心5～10min。
4.根据权利要求3所述的一种狼牙果全株提取液的制备方法，其特征在于，步骤6)中一级分子蒸馏的条件为：进料温度50～60℃、蒸馏温度90～105℃，冷凝面温度40～50℃，空气残压0.8～1.5Pa，料液流速1～5mL/min。
5.根据权利要求4所述的一种狼牙果全株提取液的制备方法，其特征在于，步骤7)中制备狼牙果植株提取液的方法为：
(71)提取：以每克狼牙果植株原料加5～15mL提取剂的用量将狼牙果植株原料置于容器内浸泡5～10h，得到狼牙果植株原液；
(72)过滤；将步骤(71)中得到的狼牙果植株原液过滤，得狼牙果植株滤液；
(73)将步骤(72)中的狼牙果植株滤液在30～50℃下减压浓缩1～2h，得狼牙果植株提取液。
6.根据权利要求5所述的一种狼牙果全株提取液的制备方法，其特征在于，步骤5)中及步骤71)中的提取剂均为无水乙醇。
7.根据权利要求1-6任一所述的一种由狼牙果全株提取液的制备方法制备得到的狼牙果全株提取液在制备治疗消化系统疾病药物中的应用。
8.根据权利要求1-6任意所述的一种由狼牙果全株提取液的制备方法制备得到的狼牙果全株提取液在制备治疗泌尿系统疾病药物中的应用。
9.根据权利要求1-6任一所述的一种由狼牙果全株提取液的制备方法制备得到的狼牙果全株提取液在制备治疗血液系统疾病药物中的应用。
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