CN110396553A - 一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子标记及区分方法与应用 - Google Patents

一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子标记及区分方法与应用 Download PDF

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Abstract

一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子标记及区分方法与应用，本发明属于植物分子标记育种领域，具体涉及到一种芥菜紫色叶片紧密连锁的分子标记的开发和利用。本发明首先对控制紫叶芥菜叶色的基因片段进行扩增并与绿叶芥菜中的基因序列进行序列比对（其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1到NO:2所示），分别在基因序列保守和绿叶芥菜中特异插入的核苷酸序列设计引物，开发用于区分紫叶芥菜和绿叶芥菜特异的SCAR分子标记。利用紫叶芥菜和绿叶芥菜自交系对这两对SCAR标记进行验证。本发明设计和开发了芥菜不同叶色特异的SCAR标记，在芥菜杂交育种中其应用不但可以鉴定不同芥菜叶色材料的基因型。还能用于鉴定种子纯度，提高育种效率。

Description

一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子标记及区分方法与 应用
技术领域
本发明属于芥菜分子育种技术领域，具体涉及到一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记、及区分方法与应用。
背景技术
芥菜起源于中国，属于十字花科芸薹属作物。芥菜（B. juncea）主要作为鲜食蔬菜和腌菜食用，其富含多种维生素、抗坏血酸盐，具有提神醒脑、解除疲劳、解毒消肿等作用。中国芥菜种质资源丰富，在全国各地均有栽培，其主产区主要分布在西南、华南、华中、华东地区等。作为特色栽培蔬菜，芥菜主要包括叶用芥菜、茎用芥菜、根用芥菜以及薹用芥菜等。目前，我国芥菜类蔬菜的种植面积约1500万亩。因此，加强芥菜的基础研究和育种工作，使我国丰富的芥菜种质资源得到充分利用。
紫叶芥菜属于叶用芥菜的一种，因其叶片富含花青素和抗氧化剂等而备受消费者的青睐。十字花科蔬菜作为鲜食蔬菜，香甜可口、营养丰富。英国研究人员最新发现，卷心菜、西兰花和羽衣甘蓝等十字花科蔬菜在被摄入肠道后能释放一种化学物质，具有抗炎和预防肠癌的作用。因此，与控制紫叶芥菜基因相关的分子标记的开发和利用，将为解析紫叶芥菜叶片中花色苷的形成和高效分子育种提供重要的分子基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记检测试剂盒，该试剂盒包含3条SCAR分子标记引物，其序列如表1所示。利用Bj901-L分别于下游引物Bj90A-R和Bj901-R组合。这两对分子标记可以用于鉴定不同叶色类型和种子纯度，以加快叶用芥菜种子纯度鉴定和新品种的培育，特别适用于叶用芥菜叶色基因型的分子检测。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记，包括2对SCAR分子标记，分别是Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R引物组合，其中，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。
利用所述的分子标记区分叶用芥菜的方法，包括以下步骤：
1）提取叶用芥菜总DNA；
2）利用所述的分子标记对提取的总DNA进行PCR扩增；
2.1）若Bj901-L和Bj90A-R引物组合不能扩增出目的条带，则判断为紫叶纯合芥菜；
2.2）若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出1条约1.4 Kb大小的条带，则进一步确定为绿叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出目的条带小于200 bp，则判断为紫叶纯合芥菜，若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出1.4 Kb和小于200 bp的两条目的条带，则判断为紫叶杂合芥菜。
PCR扩增的程序为：94℃总变性5min；94℃变性30S，63℃退火30S，72℃延伸1min，共34个循环；72℃延伸5 min，扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。
所述的叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记在芥菜叶色类型、种子纯度鉴定和芥菜分子育种中的应用。
一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记检测试剂盒，该试剂盒内包含三条SCAR分子标记引物，依次为Bj901-L、Bj90A-R和Bj901-R，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。
本发明根据紫叶芥菜和绿叶芥菜中与叶色紧密连锁分子标记，通过序列对比发现绿叶芥菜在该区段有一段1268bp的插入序列（图1），详细信息见SEQ ID NO:1到NO:2。基于以上序列信息开发了3条SCAR分子标记（表1），图2A和2B分别显示这些标记在核苷酸片段上的位置信息。其中引物组合Bj901-L和Bj901-R在紫叶纯合芥菜中扩增出158bp的条带，在绿叶纯合芥菜中扩增出1426bp的条带。在F1杂合紫色芥菜中，两条带均有扩增。另一对引物组合Bj901-L和Bj90A-R引物组合在紫叶纯合的芥菜中不能扩增出特异性条带，但是在紫叶杂合和绿叶纯合芥菜中均能扩增出262bp的目的条带。利用这些分子标记，可从将不同叶色类型的叶用芥菜分开，同时还能够对其基因型进行鉴定，通过基因型的鉴定能够快速区分纯合杂合芥菜材料。
本发明将分子标记制成检测试剂盒，该试剂盒包含3条SCAR分子标记引物（具体标记信息如表1所示）
表1紫叶芥菜SCAR分子标记检测的引物序列
引物名称 序列信息
Bj901-L GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT
Bj90A-R CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG
Bj901-R CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA
利用上述试剂盒中的引物对待鉴定不同叶色的芥菜植株的DNA进行PCR扩增，判定方式如下：
根据本实验室研究发现的与芥菜紫叶紧密连锁区段在紫叶芥菜与绿叶芥菜中的差异序列设计引物，成功开发了2对SCAR分子标记，包括Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R引物组合。用这两对引物能够快速鉴定和区分芥菜不同叶色材料的基因型和表型。
其中，Bj901-L和Bj901-R在绿叶纯合芥菜中扩增出1条约1.4 Kb大小的条带，在紫叶纯合芥菜中扩增出一条小于200 bp的条带，在杂合材料中有两条DNA条带都被扩增。另一对引物组合Bj901-L和Bj90A-R引物组合在紫叶纯合的芥菜中不能扩增出特异性条带，但是在紫叶杂合和绿叶纯合芥菜中均能扩增出200 bp-300 bp的目的条带。因此，通过上述引物组合，通过提取叶用芥菜总DNA，并用以上2对引物对该材料的DNA进行PCR鉴定。根据以上两对引物组合扩增出条带的大小和有无等能够快速的区分叶用芥菜的表型和基因型。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
1. 紫叶芥菜与叶色紧密连锁的分子标记的开发将为芥菜分子育种和种质资源创新奠定基础；
2. 同时芥菜紫叶性状相关分子标记的开发与利用将进一步提高育种选择效率、加快育种进程；
3. 本发明提供的3条分子标记可有效的用于叶用芥菜紫叶与绿叶材料的鉴定和种子纯度鉴定。
附图说明
图1 紫叶芥菜和绿叶芥菜中该位点序列比对可视化图；
图2 实施例1中的3条引物在紫叶芥菜和绿叶芥菜紧密连锁区段序列信息开发标记的位置；
图3 2对分子标记在紫叶芥菜和绿叶芥菜亲本中的PCR扩增结果；
其中引物组合Bj901-L和Bj90A-R扩增样品1、2、3、4，引物组合Bj901-L和Bj901-R扩增5、6、7、8。样品1、2、5、6为紫叶芥菜纯合亲本DNA；3、4、7、8为紫叶芥菜纯合亲本DNA；
图4 2对分子标记在紫叶芥菜和绿叶芥菜杂交F1植株中的PCR扩增结果；
其中引物组合Bj901-L和Bj90A-R扩增图4A，引物组合Bj901-L和Bj901-R扩增图4B。样品1、2、3为紫叶芥菜纯合亲本DNA；样品4、5、6为紫叶芥菜纯合亲本DNA；样品7、8、9为杂交F1植株DNA。
图5 2对分子标记在紫叶芥菜和绿叶芥菜杂交F2植株中的PCR扩增结果；其中引物组合Bj901-L和Bj90A-R扩增图5A，引物组合Bj901-L和Bj901-R扩增图5B。样品1-10为杂交F2不同植株DNA。
具体实施方式
以下具体实施例，将进一步阐明本发明。这些实施例主要用于说明本发明，但是不限制本发明的范围。以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照生产商提供的操作手册中建议的方法或按照《分子克隆：实验室指南》（New York: Cold Spring HarborLaboratory, 1989）中所述的条件。
实施例1
一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记，包括2对SCAR分子标记，分别为Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R引物组合，其中，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。
利用所述的分子标记区分叶用芥菜的方法，包括以下步骤：
1）提取叶用芥菜总DNA；
2）利用所述的分子标记对提取的总DNA进行PCR扩增；
2.1）若Bj901-L和Bj90A-R引物组合不能扩增出目的条带，则判断为紫叶纯合芥菜；
2.2）若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出1条约1.4 Kb大小的条带，则进一步确定为绿叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出目的条带小于200 bp，则判断为紫叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出1.4 Kb和小于200 bp的两条目的条带，则判断为紫叶杂合芥菜。
PCR扩增的程序为：94℃总变性5min；94℃变性30S，63℃退火30S，72℃延伸1min，共34个循环；72℃延伸5 min，扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。
所述的叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记在芥菜叶色类型、种子纯度鉴定和芥菜分子育种中的应用。
一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记检测试剂盒，该试剂盒内包含三条SCAR分子标记引物，依次为Bj901-L、Bj90A-R和Bj901-R，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。
实施例2：分子标记在紫叶芥菜和绿叶芥菜分类上的应用
2.1叶用芥菜不同叶色材料特异分子标记的开发
首先在对紫叶芥菜和绿叶芥菜的与叶色基因紧密相关的基因序列进行差异分析。利用BLAST软件对SEQ ID NO:1和NO:2进行比对（图1）这2条序列进行比对分析发现，在该位点绿叶芥菜中存在一个1268 bp的插入序列。因此，本发明在两条序列保守区段和绿叶芥菜中的插入区段分别设计了引物（图2），具体信息见表1。
叶用芥菜不同叶色材料特异分子标记的验证
利用CTAB法提取叶用芥菜紫叶和绿叶亲本材料的总DNA。然后，利用上述设计好的引物对不同叶色材料的DNA进行PCR扩增验证。PCR扩增程序：94 ℃总变性5 min；94 ℃变性 30S，63 ℃退火30 S，72℃延伸1 min，共34个循环；72 ℃延伸5 min。扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，结果如图3。引物组合Bj901-L和Bj90A-R引物组合在紫叶纯合的芥菜（1和2）中不能扩增出特异性条带，但是在绿叶纯合芥菜中均能扩增出200 bp-300 bp的目的条带（3和4）。Bj901-L和Bj901-R在紫叶纯合芥菜中扩增出一条小于200 bp的条带（5和6），在绿叶纯合芥菜中扩增出1条约1.4 Kb大小的条带（7和8）。实验结果表明，Bj901-L和Bj90A-R引物组合能够根据PCR扩增条带的有无初步鉴定紫叶纯合和绿叶纯合材料；Bj901-L和Bj901-R引物组合则能够根据PCR扩增条带的大小进一步鉴定紫叶纯合和绿叶纯合材料；
实施例3：分子标记在芥菜紫叶、绿叶及F1后代基因型的鉴定上的应用
利用上述开发成功的分子标记Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R进一步对叶用芥菜紫叶和绿叶亲本及杂交F1代植株的基因型进行鉴定。
芥菜紫叶纯合、绿叶纯合及杂交F1代植株每个材料取三次重复，提取每种材料不同植株叶片的总DNA并进行PCR扩增。PCR扩增程序：94℃变性10 min；94℃变性30 S，63℃退火30 S，72℃延伸1 min，34循环；72℃延伸10 min。PCR扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。Bj901-L和Bj90A-R引物组合在芥菜紫叶亲本中不能扩增出目的条带，在芥菜绿叶亲本和杂交F1代中都能扩增出约200 bp-300 bp的目的条带（图4A）。Bj901-L和Bj901-R引物组合在芥菜紫叶亲本中扩增出目的条带小于200 bp，在芥菜绿叶亲本中主要扩增出1条约1.4 Kb大小的条带。但是在杂交F1代中都能扩增出两条目的条带均有扩增（图4B）。
以上实验结果表明：结合本发明开发的两对分子标记可以快速有效的将芥菜紫叶、绿叶纯合亲本及杂交F1代的基因型快速区分。
实施例4：分子标记在紫叶、绿叶芥菜F2分离群体植株基因型的鉴定和种子纯度鉴定
在此基础上，利用上述开发成功的分子标记Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R进一步对叶用芥菜紫叶和绿叶杂交F2分离群体中植株的基因型进行鉴定。
随机从实验田种植的紫叶、绿叶芥菜F2分离群体中取7株紫叶、3株绿叶材料植株叶片，实验室提取这些材料的DNA，经PCR鉴定，实验结果如图5。引物组合Bj901-L和Bj90A-R引物组合在图5A 5和7两个样品不能扩增出特异性条带，但是在其他紫叶杂合和绿叶纯合芥菜中均能扩增出200bp-300bp的目的条带。初步说明5和7两个芥菜样品基因型是紫叶纯合。Bj901-L和Bj901-R在图5B 5和7两个样品扩增出一条小于200bp的条带，再次证明5和7两个芥菜样品基因型是紫叶纯合。在图5B 8到10点样孔中扩增出1条约1.4Kb大小的条带，证明这三个芥菜样品基因型是绿叶纯合。Bj901-L和Bj901-R在图5B其他的样品材料中均能扩增出2条目的条带，说明这些样品为紫叶杂合芥菜。综上实验结果表明，本发明中的两对引物在F2群体中能够很快区分不同叶用芥菜的基因型和对应的叶片颜色。
以上所述之实施例，仅用以更好的解释本发明，但不限制本发明实施范围。对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书所公开的序列信息，通过置换或改变的方式设计出其他形式的引物组合，故凡基于本发明的原理及序列信息所做的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。
附SEQ ID
NO:1 （紫色）158bp
GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTATTTACACAGATAACTGATCACGAATATTCGTTTCTCTATATTTAAGACGTATTTAATTAGTTGCTCACTAATGTTGTTGCTAAAACTCTCTCATTAATTTGTCTTTCAGTAAAAACACTCAAACGTCGTACACG
NO:2 （绿色）1426bp
GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTATTTACACAGATAACTGATCACGAATATTCGTTTCTCTATATTTAAGACGTATCTCAAGTGGATAAAAAACCTCTCTCTTACTTTTCTCTCTCTAAAACTCTCTCCACAAGAAAACCAGATCCCGTTTTTTGTCCGGTGGCCGGTGGCCCTCTCACCGCCGGTCACCCCCCTTGTTTCTTCTTGCGCAGGTTCCCGCCTCACACGCTCCACTCTCTTCTCCAAGTAGATCCGATATGCGTTTTGCTCTATATCTCCACCGGTGTTGAGATCTGGCGGACCTAAAATTGAACACACGGGTGTCCGTGTTTCCTCTGGAGCAAAAGCGAGGTATCTTCTTTGGTCTAAGGTGGAGGGTTCCGGACAGGGTACGTTCTACGGCGGGTGAAGACAGATCTGTGTAGATCTGGTTCTCGGAGCCGACGGAGACAGTCTGGGAGCGTCGCTGCCTCCTCCTTGTTCCCGCTCGTCTTACTCTTCTCCGCTGTCGTTTGTTTACTTTCCGGTTAGTTCAGAGCTTCTCATCTCCTTCTGAGAAAGGCGGTCTCAGAGGCAGCCGCCGAGGACCTCTGTTTTAAATCTGAAGTCAGCAAACCTAGGCGTCACTCTTCTGCCGTTATGTCTCTTTCGCCGTCTTCCGGAGGCTCTGAGCTTTGAGGACATGCTCAGTTTCGATCTCCTTTGTACGGTGAGGTTCTTATCGTCAGTCGTATCGCTCTGTTTGTGTGGAGCTCCTGCTCCGGTTCTTCAAGCGCTCGCAGGAAGGTTGTGAGGAGTATGTCCTGCCTCTTTGTCGATTGGAAAGCATCTATCTCTCCGACGCTGTGGCCGGTGTAAGGAGTTTAAACCACCGCCTGCAGTCCACGAGTCTCGTTCTTCACCGCTTGCTTTTCCATTAGTCGGATTGGATCAACAGCCGCATCTTCTTCAATCTTCTGGTTTGTTCGGAGCGGACCCTTCACGGAATGATAGCCGGGGCCGGGACGCCTAACCGCCTCCGCCTGTCACGTCCTCTGATTCCTTTCGGGATCTCATCCGCTCCTGAGCTTTTCCTAGACCTCTAATCTTTTTTGCAGGTTTCCCGCTTTAAAGTGTCCTCTGGGTCTTCGAGTGCCAATTGCTGACATTTTGATCTCCATGTTTAGCCTTAGTCTTCATAGATTAAGCCTAACTATATATCTAAGGATCTTTTTTTATCTTTTTTGGGGGATCTTTAGGTAGCCTTTGCTAGTTCTAGCAGATTTAGATCCAAGCTTTTGTATCTCAATGCCATTTCTATGAAATGAATTCACATTTTGTCAAAAAAAAAAAAAAAAGACGTATTTAATTAGTTGCTCACTAATGTTGTTGCTAAAACTCTCTCATTAATTTGTCTTTCAGTAAAAACACTCAAACGTCGTACACG
序列表
<110> 信阳师范学院
<120> 一种区分叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜的分子标记及区分方法与应用
<140> 2019102045989
<141> 2019-03-18
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 158
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gttcctgcaa gagctggtat gttatttaca cagataactg atcacgaata ttcgtttctc 60
tatatttaag acgtatttaa ttagttgctc actaatgttg ttgctaaaac tctctcatta 120
atttgtcttt cagtaaaaac actcaaacgt cgtacacg 162
<210> 2
<211> 1426
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gttcctgcaa gagctggtat gttatttaca cagataactg atcacgaata ttcgtttctc 60
tatatttaag acgtatctca agtggataaa aaacctctct cttacttttc tctctctaaa 120
actctctcca caagaaaacc agatcccgtt ttttgtccgg tggccggtgg ccctctcacc 180
gccggtcacc ccccttgttt cttcttgcgc aggttcccgc ctcacacgct ccactctctt 240
ctccaagtag atccgatatg cgttttgctc tatatctcca ccggtgttga gatctggcgg 300
acctaaaatt gaacacacgg gtgtccgtgt ttcctctgga gcaaaagcga ggtatcttct 360
ttggtctaag gtggagggtt ccggacaggg tacgttctac ggcgggtgaa gacagatctg 420
tgtagatctg gttctcggag ccgacggaga cagtctggga gcgtcgctgc ctcctccttg 480
ttcccgctcg tcttactctt ctccgctgtc gtttgtttac tttccggtta gttcagagct 540
tctcatctcc ttctgagaaa ggcggtctca gaggcagccg ccgaggacct ctgttttaaa 600
tctgaagtca gcaaacctag gcgtcactct tctgccgtta tgtctctttc gccgtcttcc 660
ggaggctctg agctttgagg acatgctcag tttcgatctc ctttgtacgg tgaggttctt 720
atcgtcagtc gtatcgctct gtttgtgtgg agctcctgct ccggttcttc aagcgctcgc 780
aggaaggttg tgaggagtat gtcctgcctc tttgtcgatt ggaaagcatc tatctctccg 840
acgctgtggc cggtgtaagg agtttaaacc accgcctgca gtccacgagt ctcgttcttc 900
accgcttgct tttccattag tcggattgga tcaacagccg catcttcttc aatcttctgg 960
tttgttcgga gcggaccctt cacggaatga tagccggggc cgggacgcct aaccgcctcc 1020
gcctgtcacg tcctctgatt cctttcggga tctcatccgc tcctgagctt ttcctagacc 1080
tctaatcttt tttgcaggtt tcccgcttta aagtgtcctc tgggtcttcg agtgccaatt 1140
gctgacattt tgatctccat gtttagcctt agtcttcata gattaagcct aactatatat 1200
ctaaggatct ttttttatct tttttggggg atctttaggt agcctttgct agttctagca 1260
gatttagatc caagcttttg tatctcaatg ccatttctat gaaatgaatt cacattttgt 1320
caaaaaaaaa aaaaaaagac gtatttaatt agttgctcac taatgttgtt gctaaaactc 1380
tctcattaat ttgtctttca gtaaaaacac tcaaacgtcg tacacg 1472

Claims (5)

1.一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记，其特征在于，包括2对SCAR分子标记，分别是Bj901-L和Bj90A-R引物组合以及Bj901-L和Bj901-R引物组合，其中，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。
2.利用权利要求1所述的分子标记区分叶用芥菜的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）提取叶用芥菜总DNA；
2）利用所述的分子标记对提取的总DNA进行PCR扩增；
2.1）若Bj901-L和Bj90A-R引物组合不能扩增出目的条带，则判断为紫叶纯合芥菜；
2.2）若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出1条约1.4 Kb大小的条带，则进一步确定为绿叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出目的条带小于200 bp，则判断为紫叶纯合芥菜；若Bj901-L和Bj901-R引物组合扩增出以上两条目的条带，则判断为紫叶杂合芥菜。
3.如权利要求2所述的利用分子标记区分叶用芥菜的方法，其特征在于，PCR扩增的程序为：94℃总变性5min；94℃变性30S，63℃退火30S，72℃延伸1min，共34个循环；72℃延伸5min，扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。
4.权利要求1所述的叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记在芥菜叶色类型、种子纯度鉴定和芥菜分子育种中的应用。
5.一种叶用紫叶芥菜和绿叶芥菜分子标记检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒内包含三条SCAR分子标记引物，依次为Bj901-L、Bj90A-R和Bj901-R，Bj901-L 的序列信息为GTTCCTGCAAGAGCTGGTATGTTAT，Bj90A-R的序列信息为CGCATATCGGATCTACTTGGAGAAG；Bj901-R的序列信息为CGTGTACGACGTTTGAGTGTTTTTA。
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