CN110384690A - 异甘草素在制备抗焦虑药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及异甘草素在抗焦虑，尤其是阿尔茨海默病早期抗焦虑中的新用途。异甘草素通过改善情绪不安与躯体运动不安等焦虑样行为，缓解阿尔茨海默症早期处于高度活跃状态的焦虑症状，避免其对认知功能和执行能力的损害，改善和/或抑制阿尔茨海默症的发生和/或发展，且无明显毒副作用，为焦虑症，尤其是阿尔茨海默症早期焦虑的预防和/或治疗提供新的治疗药物。

Description

异甘草素在制备抗焦虑药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及异甘草素在抗焦虑，尤其是阿尔茨海默病早期抗焦虑中的新用途。

背景技术

焦虑是人们面临恐惧或者压力时表现出来的反映，是非常普遍的精神疾病，每年全世界有1％的人口因为焦虑导致残疾，英国有16.8％的人口遭受焦虑症的影响，同时也影响着约40万美国成年人。焦虑症主要表现为身体震颤、心悸、肌肉紧张、精神紧张、烦躁易怒、失眠和持续担心等症状。

阿尔茨海默病患者的早期(青年时期)在出现记忆明显障碍症状之前即会表现相关神经精神症状，如冷漠、焦虑、易怒、食欲和睡眠紊乱，这种病理表现也称为痴呆精神行为症状。有研究表明，像焦虑这种负面情绪能损害认知功能和执行能力。

西医针对焦虑症病理机制研究出许多可改善焦虑症状的药物，比如选择性5-羟色胺再摄取抑制剂、去甲肾上腺素再摄取抑制剂以及苯二氮卓类药物等。但是，长期使用这些药物会导致多种不可避免的副作用或耐受性。

甘草是一种多年生的草本植物，入药部位是其根和根茎部位，其性味甘平，归属心、肺、脾、胃经，因此其功效具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、安神解郁和调和诸药等作用。异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)(式Ⅰ结构)是甘草中异黄酮化合物，是黄色针状晶体，几乎不溶于水，可溶于极性小的溶剂如乙醚、氯仿等，存在于豆科植物甘草的根。甘草的广泛药理活性引起广泛的关注，除具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎作用，还可扩张动脉，对心脏和脑都有保护作用，另外还具镇静、催眠、改善氧化应激、调节雌激素等作用。

综上所述，异甘草素抗肿瘤、抗炎、抗氧化等效果确切，但未见异甘草素有抗焦虑的相关报道。

发明内容

本发明旨在提供异甘草素在制备抗焦虑药物中的应用，尤其在制备阿尔茨海默症早期抗焦虑药物中的应用。

本发明还提供抗焦虑的药物制剂，该药物制剂还可用于预防和/或治疗阿尔茨海默症早期焦虑。

异甘草素通过改善情绪不安与躯体运动不安等焦虑样行为，缓解阿尔茨海默症早期处于高度活跃状态的焦虑症状，避免其对认知功能和执行能力的损害，改善和/或抑制阿尔茨海默症的发生和/或发展。

异甘草素可用于制备抗焦虑药物，尤其适用于制备阿尔茨海默症早期抗焦虑药物，其中，异甘草素作为缓解和/或抑制高度活跃状态活性成分。

异甘草素通过改善情绪不安活性、和/或改善躯体运动不安活性，缓解和/或抑制高度活跃状态。

一种抗焦虑的药物制剂，其活性成分含有异甘草素。该药物制剂中异甘草素的重量百分比为0.01％～99.99％。该药物制剂尤其适用于阿尔茨海默症早期焦虑的预防和/或治疗，避免高度活跃状态对认知功能和执行能力的损害，改善和/或抑制阿尔茨海默症的发生和/或发展。

该药物制剂还含有药学上可接受的辅料和/或辅助活性成分，所述药学上可接受的辅料包括载体、润滑剂、崩解剂、增溶剂、分散剂、赋形剂、矫味剂、粘合剂、防腐剂、抗氧剂或着色剂等。所述辅助活性成分包括辅助缓解和/或抑制情绪部分活性成分、和/或辅助缓解和/或抑制躯体运动不安活性成分、和/或辅助缓解和/或抑制神经不安活性成分等。

该药物制剂根据需要制备成具有预防和/或治疗作用的药学上可接受的任意剂型，包括固体制剂、液体制剂、半固体制剂或者气体制剂。固体制剂包括但不限于丸剂、散剂、丹剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、粉剂等；液体制剂包括但不限于口服液、注射液、混悬液、冲剂等；半固体制剂包括但不限于软膏剂、糊剂等，气体制剂包括但不限于气雾剂、喷雾等。

相对于现有技术，本发明的优点在于：异甘草素有针对性地改善焦虑症，无明显的毒副作用，用于阿尔茨海默症早期焦虑的预防和/或治疗，避免其对认知功能和执行能力的损害，改善和/或抑制阿尔茨海默症的发生和/或发展，为阿尔茨海默症的预防和/或治疗提供新的治疗药物。

附图说明

图1ISL对PS cDKO小鼠运动和速度的影响。(A)小鼠旷场运动轨迹图；(B)小鼠在边缘区域活动时间百分比；(C)和(D)小鼠移动的距离和速度。

图2ISL对PS cDKO小鼠焦虑状态的影响。(A)小鼠在明箱与暗箱间的运动轨迹图；(B)小鼠在明箱活动的时间；(C)小鼠在明箱内的移动距离；(D)小鼠在明箱与暗箱间的穿梭次数。

图3ISL对PS cDKO小鼠糖水偏好的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步示例性地详细说明本发明。需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。

(一)实验动物：AD动物模型为条件性PS1/PS2双基因敲除(PS1/PS2 conditionaldouble knockout，PS cDKO)小鼠，简称PS cDKO小鼠，具有基因型为Cre+/-、PS1f/f、PS2-/-的是PS cDKO小鼠；基因型为Cre+/-、PS1+/+、PS2+/+的是野生型对照组小鼠，动物自由摄食饮水，饲养在室温21±2℃，湿度(45％～65％)和明暗交替(12h︰12h)环境中。所有实验动物操作均符合实验动物伦理学及生物医学伦理审查办法的规定。

(二)药物：异甘草素(ISL)购买于上海同田生物，货号：1601262，MW：256.25g/mol，4℃保存。DMSO：Sigma，货号：D2650。0.9％生理盐水：四川科伦药业股份有限公司。

异甘草素配制：ISL先溶于DMSO中，随后用0.9％NaCl稀释至0.2％。使用剂量30mg/kg，腹腔注射量0.1ml/10g。

(三)实验动物分组与治疗方法：64只清洁级2.5月龄PS cDKO小鼠及其同窝野生型小鼠，雌雄各半，随机双盲分为四组：同窝野生型组(Wildtype，WT，n＝16)、野生型+ISL组(WT+ISL，n＝16)、PS cDKO组(cDKO，n＝16)及PS cDKO+ISL组(cDKO+ISL，n＝16)，WT+ISL组和cDKO+ISL组给予腹腔注射ISL，根据文献用药量为30mg/kg，注射时间为30d，每天一次，WT组和cDKO组注射等量0.2％DMSO药物稀释液。

(四)实验方案：

1.旷场实验：旷场实验是通过观察动物在旷场环境中的活动区域、活动速度和活动距离来评价动物的自主活动行为、探究行为与紧张程度的一种常用实验方法，也是焦虑症的一个评价指标。旷场实验中，每只小鼠依次放入旷场箱中，旷场箱子为蓝色塑料制作而成，长、宽、高为45×45×50cm，箱子外部配有隔音箱，防止外界干扰，自由活动15min。观察小鼠在旷场内活动能力，记录指标分别为小鼠的移动速度，总的移动距离以及在边缘区域活动时间的百分比，分析小鼠的运动能力及有无焦虑样症状。待每只小鼠旷场实验结束后，用25％酒精擦拭实验箱，保持清洁，同时避免实验鼠间的气味对实验干扰。

2.明暗箱实验：明暗箱实验是基于啮齿类动物对明亮区域的厌恶以及对新鲜环境有探索冲动的特性，啮齿动物多为夜行性动物，相对于黑暗的环境来说，明亮的地方代表了自然的威胁。通过明暗箱实验有助于通过分析小鼠或大鼠行为改变研究抗焦虑药物的功效和作用。动物在明箱活动增多，则说明动物的焦虑症状较少，反之则焦虑症状较重。所以在明箱的活动状态为评判小鼠焦虑状态的指标。明暗箱实验所用设备，黑箱与白箱尺寸均为15×15×45cm。黑箱与白箱联通，置于隔音箱中，每只小鼠分别由白箱放入，头反向朝于两箱连接处。每只小鼠记录10min，观察小鼠在明箱与暗箱中的活动情况。分别记录小鼠在明箱中的活动距离，明箱中的活动时间及明箱与暗箱的穿梭次数。分析小鼠是否具有焦虑样行为表现。待每只小鼠实验结束，用25％酒精清洁实验箱，避免小鼠间气味干扰。

3.糖水偏好实验：糖水偏好实验是一种基于奖励的测试，用于快感缺失指标，是抑郁症的核心检测指标之一，啮齿类动物天生就对甜食感兴趣。糖水实验中对甜味剂蔗糖溶液的偏好减少代表快感缺失，而这种减少可以通过用抗抑郁药治疗来逆转。糖水偏好实验共分四天进行，小鼠单笼饲养，实验过程中避免小鼠被打扰。第1d给予每只小鼠一瓶饮用水一瓶1％蔗糖水，12h交换位置，排除小鼠对水瓶的位置偏好。第2d给予小鼠两瓶糖水，12h调换位置。第3d每只小鼠禁水进食24h。第4d，提前称量糖水和饮用水的重量，同样给予小鼠一瓶糖水一瓶饮用水，12h更换位置。实验结束后再次称量糖水和饮用水的重量，最后统计糖水消耗量占总消耗量的比值，从而评估小鼠的快感缺乏程度进而判断抑郁症状。

统计方法：实验数据使用平均值±标准误(Mean±SEM)表示，采用SPSS 21软件进行分析。多组间比较使用One-way ANOVA方法统计，P﹤0.05表示具有统计学意义。

(四)实验结果

观察各组小鼠在旷场内活动能力，判断小鼠在旷场环境中的运动变化。图1显示各组小鼠虽然在边缘区域活动的百分比没有明显差异(P>0.05)，但是PS cDKO小鼠在移动总距离和移动速度上明显高于WT小鼠(P<0.01)，经过ISL治疗后移动距离和速度明显下降，具有统计学意义(P<0.05)，提示PS cDKO小鼠运动过于活跃可能与具有焦虑样行为相关，而ISL治疗有缓解作用。

利用动物趋暗避明特性对动物进行焦虑行为测试。对于患有焦虑症状的小鼠来说，它们会更偏爱处于黑暗的环境中，对于明亮的环境的探索相对较少。图2实验结果显示PS cDKO小鼠在明箱活动的时间、移动距离和穿梭次数明显低于WT小鼠(P<0.05)，经ISL治疗后，PS cDKO小鼠增加了在明箱活动的时间、活动距离和穿梭次数(P<0.05)，提示PS cDKO小鼠具有焦虑样行为，并且ISL治疗后可改善其焦虑样行为。

糖水偏好实验用于快感缺失指标检测，是目前检测抑郁症的重要指标之一，可以清楚的诊断是否存在抑郁倾向，实验结果如图3所示。结果显示，每组小鼠对糖水的偏好程度并没有差异，青壮年期PS cDKO小鼠没有抑郁行为(P>0.05)。

本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均属于本发明的范围。

Claims (9)

1.异甘草素在制备抗焦虑药物中的应用。

2.异甘草素在制备阿尔茨海默症早期抗焦虑药物中的应用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，异甘草素作为缓解和/或抑制高度活跃状态活性成分。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，异甘草素通过改善情绪不安活性、和/或改善躯体运动不安活性，缓解和/或抑制高度活跃状态。

5.一种抗焦虑的药物制剂，其特征在于，其活性成分含有异甘草素。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于，所述焦虑为阿尔茨海默症早期焦虑。

7.根据权利要求5或6所述的药物制剂，其特征在于，还含有药学上可接受的辅料和/或辅助活性成分。

8.根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述辅助活性成分包括辅助缓解和/或抑制情绪部分活性成分、和/或辅助缓解和/或抑制躯体运动不安活性成分、和/或辅助缓解和/或抑制神经不安活性成分。

9.根据权利要求5或6所述的药物制剂，其特征在于，为具有预防和/或治疗作用的药学上可接受的剂型。