CN110381984A - 用于改善性功能的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

实施方案包括使用含有基于小肽的化合物和药学上可接受的载剂的组合物来改善具有良性前列腺增生(BPH)的男性的性功能的方法。所述方法包括但不限于以肌内、口服、静脉内、前列腺内、鞘内、肿瘤内、鼻内、局部、经皮等方式向有需要的男性施用单独的或与载剂结合的所述化合物。

Description

用于改善性功能的组合物和方法
现有申请的交叉引用
本专利申请要求2017年3月1日提交的美国专利申请第15/446,406号的优先权，该专利申请据此以引用的方式整体明确并入。
序列表
本专利申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，该序列表据此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本在2017年4月14日创建，被命名为063307-0450163_SL.text，大小为33,198字节。
背景技术
1.技术领域
实施方案包括使用含有基于小肽的化合物和药学上可接受的载剂的组合物来改善性功能的方法。所述方法包括但不限于将所述组合物肌内、口服、静脉内、前列腺内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、病灶内、眼内、动脉内、鞘内、肿瘤内、鼻内、局部、透皮、皮下或皮内施用于有需要的患者，其中向这些患者的施用改善了性功能。在特别优选的实施方案中，所述方法可用于改善患有良性前列腺增生(BPH)的男性的性功能。
2.相关技术描述
良性前列腺增生(BPH)是与下泌尿道功能障碍相关的常见的中年和老年男性前列腺增大病症。这些症状包含若干问题，诸如排尿后膀胱有尿不尽的感觉；需要经常小便；排尿期间断续若干次；难以推迟排尿；尿流弱；排尿期间需要使劲和用力；以及需要在入睡后的夜间小便。虽然一种或多种确切的机制尚不清楚，但是具有下泌尿道症状和BPH的男性出现性功能障碍的风险显著增加，这在BPH患者中是常见的。除了这些问题之外，大多数针对BPH的传统医学和手术治疗也具有性副作用。
良性前列腺增生(BPH)在老年男性中是常见的，它伴有影响生活质量的症状，包括干扰活动和幸福感。BPH可以是进行性的，伴随尿潴留、感染、膀胱结石和肾衰竭的风险。尽管许多患有轻度到中度症状的男性在没有干预的情况下表现良好，但其他人的恼人的症状和并发症可能会进展，导致进行药物疗法或手术。
在以下专利申请中公开了一些已知能够破坏并因此促进去除或抑制有害或多余细胞和组织的进一步生长的药剂：2015年7月24日提交的美国专利申请14/808,731号，题为：降低罹患良性前列腺增生的患者的手术需要的方法；2015年1月27日提交的美国专利申请第14/606,683号，题为：治疗需要破坏或去除细胞的病症的方法，2015年6月12日提交的美国申请第14/738,551号，题为：COMBINATION COMPOSITIONS FOR TREATING DISORDERSREQUIRING REMOVAL OR DESTRUCTION OF UNWANTED CELLULAR PROLIFERATIONS，美国专利申请公布2007/0237780号(现已废弃)；2003/0054990号(现已废弃)；2003/0096350号(现为美国专利6,924,266号)；2003/0096756号(现为美国专利7,192,929号)；2003/0109437号(现为美国专利7,241,738号)；2003/0166569号(现为美国专利7,317,077号)；2005/0032704号(现为美国专利7,408,021号)；和2015/0148303号(现为美国专利9,243,035号)，其各自的公开内容通过引用整体并入本文。
组织的良性过度生长是其中希望从生物体中除去细胞的异常现象。良性肿瘤是不会在整个身体中转移，但会导致疾病症状的细胞增殖。如果此类肿瘤位于如大脑等器官中不可接近的区域，则其可能是致命的。存在良性器官肿瘤，所述器官包括肺、大脑、皮肤、垂体、甲状腺、肾上腺皮质和髓质、卵巢、子宫、睾丸、结缔组织、肌肉、肠、耳、鼻、喉、扁桃体、口腔、肝脏、胆囊、胰腺、前列腺、心脏和其他器官。
良性肿瘤和畸形可以通过多种方法(包括手术、放射疗法、药物疗法、热或电消融、冷冻疗法等等)来治疗。虽然良性肿瘤不会转移，但其会长大并且会复发。手术摘除良性肿瘤一般具有手术的所有困难和副作用，并且时常必须对一些良性肿瘤重复进行，如对于垂体腺瘤、脑膜瘤、前列腺增生等。另外，一些接受非手术治疗以缓解由良性肿瘤引起的症状的患者仍然需要后续的侵入性手术干预。Lepor,“Medical Treatment of BenignProstatic Hyperplasia,”Reviews in Urology，第13卷，1期，第20-33页(2011)，公开了药物疗法在治疗BPH中的功效的各种研究，以及由于BPH症状恶化或进展，对后续侵入性手术治疗的需要。
雄激素在男性良性前列腺增生的发展中的作用在文献中有充分记载(Wilson,N.Engl.J.Med.317:628-629,1987)。事实上，良性前列腺增生在不存在睾丸的情况下不会发展(参见Wendel等人，J.Urol.108:116-119,1972)。
已知通过手术或医学(LHRH激动剂)阉割阻断睾丸雄激素分泌会减小前列腺尺寸(Auclair等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.76:855-862,1977；Auclair等人，Endocrinology 101:1890-1893,1977；Labrie等人，Int.J.Andrology，增刊2(V.Hansson编),Scriptor Publisher APR，第303-318页，1978；Labrie等人，J.Andrology 1:209-228,1980；Tremblay和Belanger,Contraception 30:483-497,1984；Tremblay等人，Contraception 30:585-598,1984；Dube等人，Acta Endocrinol.(Copenh)116:413-417,1987；Lacoste等人，Mol.Cell.Endocrinol.56:141-147,1988；White,Ann.Surg.22:1-80,1895；Faure等人，Fertil.Steril.37:416-424,1982；Labrie等人，Endocrine Reviews7:67-74,1986；Huggins和Stevens,J.Urol.43:705-714,1940；Wendel等人，J.Urol.108:116-119,1972；Peters和Walsh,N.Engl.J.Med.317:599-604,1987；Gabrilove等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1331-1333,1987)。
几项研究表明，用抗雄激素治疗也会减小前列腺尺寸(Neri等人，Endocrinology,82:311-317,1968；Neri等人，Investigative Urology,10:123-130,1972；Tunn等人，ActaEndocrinol.(Copenh.)91:373-384,1979；Seguin等人，Mol.Cell.Endocrinol.,21:37-41,1981；Lefebvre等人，The Prostate 3:569-578,1982；Marchetti和Labrie,J.SteroidBiochem,29:691-698,1988；Lacoste等人，Mol.Cell.Endocrinol.56:141-147,1988；Tunn等人，Invest.Urol.18:289-292,1980；Scott和Wade,J.Urol.101:81-85,1969；Caine等人，J.Urol.114:564-568,1975；Stone等人，J.Urol.141:240A,1989；Clejan等人，J.Urol.141:534A,1989)。
美国专利第3,423,507号公开了抗雄激素乙酸环丙孕酮(1α,2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮)用于治疗良性前列腺增生的用途。纯抗雄激素(美国专利第4,329,364号)引起睾酮分泌增加，这会导致更高程度的雌激素芳构化，这是根据现有知识预计会对前列腺增生有负面影响的情况(Jacobi等人，Endocrinology 102:1748-1755,1978)。几项研究表明，与单独使用的任一种治疗相比，用化学阉割(LHRH激动剂)和抗雄激素的组合治疗引起对前列腺大小的更大抑制(Seguin等人，Mol.Cell.Endocrinol.21:37-41,1981；Lefebvre等人，The Prostate 3:569-578,1982；Marchetti和Labrie，J.SteroidBiochem.29:691-698,1988。
在前列腺以及许多其他组织中，睾酮被5α-还原酶不可逆地转化为更有效的雄激素二氢睾酮(Bruchovsky和Wilson，J.Biol.Chem.243:2012-2021,1968；Wilson,Handbookof Physiology 5(第7节)，第491-508页，1975)。已发现5α-还原酶的抑制剂会抑制前列腺生长(Brooks等人，Endocrinology 109:830,1981；Brooks等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.169:67,1982；Brooks等人，Prostate 3:35,1982；Wenderoth等人，Endocrinology 113,569-573,1983；McConnell等人，J.Urol.141:239A,1989)；Stoner,E.,Lecture on the role of 5.alpha.-reductase inhibitor in benign prostatichypertropy,84th AUA Annual Meeting,Dallas，1989年5月8日。
5α-还原酶抑制剂Merck L 652,931对青春期前大鼠前列腺和精囊发育的抑制作用在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.abst.#1165，第314页，1989中进行了描述。MK-906对男性二氢睾酮形成的抑制作用已在男性中由Gormley等人在Proc.71stAnnual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1225，第329页，1989中；Imperato-McGinley等人在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1639，第432页，1989中；Geller和Franson在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1640，第432页，1989中和Tenover等人在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#583，第169页，1989中进行了描述。5α-还原酶抑制剂N,N-二乙基-4-甲基-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-甲酰胺(4-MA)和6-亚甲基-4-孕烯-3,20-二酮(LY 207320)的活性已由Toomey等人，Proc.71stAnnual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1226，第329页，1989进行了描述。
除了熟知的雄激素对前列腺生长的影响之外，还有许多研究表明雌激素也在前列腺增殖中起作用(Walsh和Wilson,J.Clin.Invest.57:1093-1097,1976；Robinette等人，Invest.Urol.15:425-432,1978；Moore等人，J.Clin.Invest.63:351-257,1979)。而且，已证实雌激素会增强犬中雄激素诱导的前列腺生长(Walsh和Wilson，J.Clin.Invest.57:1093-1097,1976；Jacobi等人，Endocrinology 102:1748-1755,1978；Tunn等人，Urol.Int.35:125-140,1980)。雌激素对雄激素诱导的前列腺生长的这种增强作用的可能解释是，观察到17β-雌二醇已显示会增加犬前列腺中的雄激素结合(Moore等人，J.Clin.Invest.63:351-357,1979)。
已证实抗雌激素他莫昔芬(Tamoxifen)会改善犬中类固醇诱导的良性前列腺增生(Funke等人，Acta Endocrinol.100:462-472,1982)。在罹患良性前列腺增生的患者中抗雌激素他莫昔芬与类固醇抗雄激素乙酸环丙孕酮联合施用，对疾病症状显示出有益作用(DiSilverio等人，在Ipertrofia Prostatica Benigna中(F.Di Silverio,F.Neumann和M.Tannenbaum编)，Excerpta Medica，第117-125页，1986)。在美国专利第4,310,523号中，提出抗雄激素和抗雌激素的组合对于良性前列腺增生的预防和/或治疗有效。然而，他莫昔芬具有限制其有效性的内在雌激素活性。
雄激素芳构化导致的雌激素形成发生在几个部位。在雄性中，已经证明了在睾丸、脂肪和肌肉组织、皮肤、肝脏、脑和前列腺中雄激素的芳构化(Schweikert等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.40:413-417,1975；Folker和James，J.Steroid Biochem.49:687-690,1983；Longcope等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.46:146-152,1978；Lacoste和Labrie，未公开数据；Stone等人，The Prostate 9:311-318,1986；Stone等人，Urol.Res.15:165-167,1987)。有证据表明良性前列腺增生患者的前列腺组织中雌激素的产生增加(Stone等人，The Prostate 9:311-318,1986)。此类数据表明，局部形成雌激素可能在刺激前列腺生长中起关键作用，超过了循环雌激素预测的作用。
美国专利第4,472,382号公开了用抗雄激素和某些充当LH-RH激动剂的肽进行的BPH治疗。美国专利第4,596,797号公开了芳香酶抑制剂作为预防和/或治疗前列腺增生的方法。美国专利第4,760,053号描述了某些癌症的治疗，所述治疗将LHRH激动剂与抗雄激素和/或抗雌激素和/或至少一种性类固醇生物合成抑制剂组合。美国专利第4,775,660号公开了一种用组合疗法治疗乳腺癌的方法，所述组合疗法可以包括手术或化学预防卵巢分泌物并且施用抗雄激素和抗雌激素。
美国专利第4,659,695号公开了一种治疗易感雄性动物前列腺癌的方法，所述动物包括通过手术或化学方式，例如通过使用LHRH激动剂阻断睾丸激素分泌的人，所述方法包含与至少一种性类固醇生物合成抑制剂，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)和/或酮康唑(ketoconazole)联合施用抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)。上文所提及的每个专利(US 4,472,382、4,596,797、4,760,053、4,775,660和4,659,695)的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
BPH是由雄激素和雌激素两者的活性增加引起的。由于BPH的这种双重病因，所提出的激素疗法不太令人满意，并且一直是不可预测的，同时经常引起不可接受的副作用。而且，现有技术的治疗很少引起前列腺体积减小超过约20％到30％，对症候学的影响不一致(Scott和Wade，J.Urol.101:81-85,1969；Caine等人，J.Urol.114:564-568,1975；Peters和Walsh，New Engl.J.Med.317:599-604,1987；Gabrilove等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1331-1333,1987；Stone等人，J.Urol.141:240A,1989；Clejan等人，J.Urol.141:534A,1989；Stoner,E.,Lecture on the role of 5α-reductaseinhibitor in benign prostatic hypertrophy,84th AUA Annual Meeting,Dallas，1989年5月8日。
对以上概括的机制的阐述使得最近开发出有效的药剂来控制BPH进展，并且在许多情况下逆转BPH进展。在这些药剂最前沿的是默克公司(Merck&Co.,Inc.)的产品(非那雄胺)。这种化合物的作用是抑制将睾酮转化为5α-二氢睾酮的酶即睾酮5α还原酶，引起前列腺增大的速率降低，并且常常引起前列腺质量减少。
已证实NX-1207(非沙泊肽(Fexapotide)；Nymox Pharmaceutical Corporation-包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列的分离的肽)会促进前列腺中的细胞死亡，并且显示出针对具有良性前列腺增大(BPH)的男性和针对患有前列腺癌的男性的有益效果。当NX-1207直接施用于局部前列腺癌时，已证实与未经治疗的对照患者中存在的进展相比，NX-1207与癌症进展较少相关。当所述药物直接注射至BPH患者中的前列腺的增大过渡区时，已证实所述药物与BPH的下泌尿道症状的长期改善相关。还证实NX-1207具有极好的安全特征。
在本说明书全篇，包括前面对相关技术的描述，本文所述的任何和所有可公开获得的文档，包括任何和所有美国专利公开的专利申请，明确地以引用的方式整体并入本文。前面对相关技术的描述并非旨在以任何方式承认其中所描述的任何文件，包括未决的美国专利申请，是本公开的现有技术。而且，本文对与所描述的产品、方法和/或设备相关联的任何缺点的描述并非旨在限制实施方案。实际上，实施方案的各方面可以包括所描述的产品、方法和/或设备的某些特征而不会遭受其描述的缺点。
发明内容
在本领域中仍然需要用于改善具有良性前列腺增生(BPH)的男性的性功能的新型和有效治疗。本文所述的实施方案满足这些需要。
本发明人已发现NX-1207具有优于很多或大多数目前批准的针对BPH的药理学和手术治疗的副作用特征。作为一个实例，很多或大多数批准的BPH治疗经常与不期望的性副作用(诸如逆行射精和射精疼痛；性欲(性冲动)减退；勃起功能障碍以及其他性问题)相关。
这些来自批准的传统BPH医学和手术治疗的副作用通常涉及可预测的作用。例如，5-α还原酶抑制药物(诸如非那雄胺或度他雄胺)抑制睾酮(雄性激素)相关通路，所以性冲动和其他问题也不足为奇。α阻滞剂(诸如阿夫若欣(alfuzocin)、特若辛(terazocin)、多沙坐辛(doxazocin)、坦索罗辛(tamsulosin)、西洛多辛(silodosin)等等)影响很多组织中的α肾上腺素能受体，这可导致头晕、虚弱和性问题，诸如性欲减退和阳痿以及其他问题。在前列腺中进行的手术和其他侵入性消融技术会导致对邻近组织(诸如尿道)的破坏，所以逆行射精和射精疼痛以及其他性问题的常见例子通常是不可避免的。
用NX-1207治疗BPH时不出现长期的性副作用或只出现最低限度的长期的性副作用，这与上述已批准的传统治疗形成对照，其中在后者中所述副作用会导致性困难增加。BPH的NX-1207治疗在很大程度上不会出现这些困难。这表明对于NX-1207未出现传统治疗开始时导致经常恶化的负面情况。
所以，已知如下事实：由于已知的通路，副作用通常会增加BPH的标准医学和手术治疗的性问题。还已知如下事实：由于不出现这些负面情形，用NX-1207治疗BPH不会明显具有这些相同的副作用，并且不会由于副作用而导致性问题的相应增加和恶化。
然而，本文所述的实施方案涉及针对NX-1207的新用途，所述用途明显不同于不出现由于不期望的副作用而带来的性功能恶化。相比之下，所述新用途：1)不基于良性前列腺增生的治疗所产生的不期望的和有害的副作用，并且2)不基于性功能恶化。相反，它涉及产生NX-1207的用途所带来的积极的和改善的性功能。由于不出现有害副作用，因此不出现问题的进展和恶化，这完全不同于实际的积极改善，所述积极改善对于存在这些问题的男性而言是不同的本质和不同的经历。
在NX-1207在患有BPH的男性中的临床研究的过程中，目前最新出乎意料地发现，不仅NX-1207施用与不期望的长期的性副作用的不出现或仅很少出现相关，而且令人惊讶的是NX-1207作为改善性功能的药剂在某些男性群体中具有出乎意料的效用。此外，尤其是在接受NX-1207作为BPH病症的初始临床治疗的男性中，令人惊讶地发现了这种改善。
本公开部分基于以下发现：某些NTP肽(包括氨基酸序列Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-lle-Lys-Leu-Glu-lle-Lys-Arg-Cys-Leu(SEQ ID NO:66)所描述的特定肽)能够改善患有BPH的男性的性功能。
本公开还部分基于以下用途：某些NTP肽(包括氨基酸序列lle-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-lle-Lys-Leu-Glu-lle-Lys-Arg-Cys-Leu(SEQ ID NO:66)所描述的特定肽)与能够治疗性功能障碍的另外活性剂组合，在改善患有BPH的男性的性功能方面提供了出乎意料的改善。
一些实施方案涉及改善患有BPH的男性的性功能的方法，所述方法包括将治疗有效量的包含单独的或与至少一种能够治疗性功能障碍的另外活性剂组合的NTP肽的组合物施用于有需要的男性。所述组合物可以肌内、口服、静脉内、腹膜内、颅内(实质内)、脑室内、瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮、经气溶胶、输注、快速浓注、植入装置、持续释放系统等施用。或者，可以通过施用表达NTP肽的基因，通过施用诱导此类产生的疫苗或通过引入由于遗传修饰或其他原因在体内表达所述肽的细胞、细菌或病毒在体内表达NTP肽。
在另一个实施方案中，如通过性功能问卷(SFQ)评分大于10％所测量，与施用不含有NTP肽的对照组合物相比，施用包含单独的或与至少一种能够治疗性功能障碍的另外活性剂组合的NTP肽的组合物改善了性功能。
上文的一般性描述和下文的具体实施方式都是示例性和说明性的，并且旨在提供受权利要求保护的实施方案的进一步解释。所属领域的技术人员从以下对实施方案的详细描述显而易知其他目标、优点和特征。
具体实施方式
在描述本发明的蛋白质、核苷酸序列、肽、组合物、活性剂等以及方法之前，应当理解本发明不限于所描述的特定方法、方案、细胞系、载体和试剂，因为这些可以改变。还应理解，本文所用的术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，而非旨在限制本发明实施方案的范围，所述范围将仅受所附权利要求书限定。
除非另外指明，否则本文使用的术语和短语定义如下。在本说明书全篇中，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种宿主细胞”包括多种此类宿主细胞，并且提及“一种抗体”是提及一种或多种抗体和其所属领域的技术人员已知的等同物，等等。
本文所述的氨基酸和氨基酸残基可以根据下表中提供的可接受的单字母或三字母代码来指代。
表1
除非上下文另外指明，否则表述“NTP肽”是指包含对应于神经丝蛋白的氨基酸序列的至少一部分或对应于神经丝蛋白的片段的氨基酸序列的肽，并且包括此类肽的同源物、衍生物、变体、融合蛋白、立体异构体和肽模拟物。表述“NTP肽”还指在以下一个或多个美国专利申请中要求保护的肽或其他物质组合物：2015年7月24日提交的美国专利申请第14/808,713号，题为：降低罹患良性前列腺增生的患者的手术需要的方法；2015年1月27日提交的美国专利申请第14/606,683号，题为：治疗需要破坏或去除细胞的病症的方法，2015年6月12日提交的美国申请第14/738,551号，题为：用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的组合组合物；美国专利申请公开2007/0237780号(现已废弃)；2003/0054990号(现为美国专利7,172,893号)；2003/0096350号(现为美国专利6,924,266号)；2003/0096756号(现为美国专利7,192,929号)；2003/0109437号(现为美国专利7,241,738号)；2003/0166569号(现为美国专利7,317,077号)；和2005/0032704号(现为美国专利7,408,021号)；和2015/0148303号(现为美国专利9,243,035号)。这些申请中的每一个的公开内容以全文引用的方式并入本文中。下面列出了具体的肽。
1)SEQ ID NO.1:MEFSLLLPRLECNGA或Met-Glu-Phe-Ser-Leu-Leu-Leu-Pro-Arg-Leu-Glu-Cys-Asn-Gly-Ala
2)SEQ ID NO.2:GAISAHRNLRLPGSS或Gly-Ala-Ile-Ser-Ala-His-Arg-Asn-Leu-Arg-Leu-Pro-Gly-Ser-Ser
3)SEQ ID NO.3:DSPASASPVAGITGMCT或Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met-Cys-Thr
4)SEQ ID NO.4:MCTHARLILYFFLVEM或Met-Cys-Thr-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met
5)SEQ ID NO.5:YFFLVEMEFLH或Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Glu-Phe-Leu-His
6)SEQ ID NO.6:VGQAGLELPTS或Val-Gly-Gln-Ala-Gly-Leu-Glu-Leu-Pro-Thr-Ser
7)SEQ ID NO.7:DDPSVSASQSARYRTGH或Asp-Asp-Pro-Ser-Val-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Arg-Tyr-Arg-Thr-Gly-His
8)SEQ ID NO.8:TGHHARLCLANFCG或Thr-Gly-His-His-Ala-Arg-Leu-Cys-Leu-Ala-Asn-Phe-Cys-Gly
9)SEQ ID NO.9:ANFCGRNRVSLMCPSWS或Ala-Asn-Phe-Cys-Gly-Arg-Asn-Arg-Val-Ser-Leu-Met-Cys-Pro-Ser-Trp-Ser
10)SEQ ID NO.10:PELKQSTCLSLPKCWDYRR或Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
11)SEQ ID NO.11:LKQSTCLSLPKCWDYRR或Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
12)SEQ ID NO.12:STCLSLPKCWDYRR或Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
13)SEQ ID NO.13:LSLPKCWDYRR或Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
14)SEQ ID NO.14:KCWDYRRAAVPGL或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu
15)SEQ ID NO.15:KCWDYRRAAVPGLFILFFL或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu
16)SEQ ID NO.16:KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCP或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro
17)SEQ ID NO.17:KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser
18)SEQ ID NO.18:WDYRR或Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
19)SEQ ID NO.19:FILFFLRHRCPTL或Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu
20)SEQ ID NO.20:FILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS或Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser
21)SEQ ID NO.21:HRCPTLTQDEVQWCDHSSLQPSTPEIKHP或His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Ser-Thr-Pro-Glu-Ile-Lys-His-Pro
22)SEQ ID NO.22:PASASQVAGTKDMH或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met-His
23)SEQ ID NO.23:DMHHYTWLIFIFIFNFLR或Asp-Met-His-His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg
24)SEQ ID NO.24:HYTWLIFIFIFNFLRQSLN或His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg-Gln-Ser-Leu-As n
25)SEQ ID NO.25:SVTQAGVQWRNLGSLQPLPPGFKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF或Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Arg-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-A rg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe
26)SEQ ID NO.26:PGFKLFSCPSLLSSWDYRR或Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
27)SEQ ID NO.27:FKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF或Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-P ro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe
28)SEQ ID NO.28:FSCPSLLSSWDYRR或Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
29)SEQ ID NO.29:SLLSSWDYRR或Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
30)SEQ ID NO.30:SSWDY或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
31)SEQ ID NO.31:SSWDYRR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
32)SEQ ID NO.32:SSWDYRRPPRLANFFVFLVEMGFTM或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met
33)SEQ ID NO.33:FVFLVEMGFTM或Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met
34)SEQ ID NO.34:MGFTMFARLILISGPCDLPASAS或Met-Gly-Phe-Thr-Met-Phe-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Ile-Ser-Gly-Pro-Cys-Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser
35)SEQ ID NO.35:ISGPC或Ile-Ser-Gly-Pro-Cys
36)SEQ ID NO.36:DLPASASQSAGITGVSH或Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val-Ser-His
37)SEQ ID NO.37:GVSHHARLIFNFCLFEM或Gly-Val-Ser-His-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met
38)SEQ ID NO.38:NFCLFEMESH或Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met-Glu-Ser-His
39)SEQ ID NO.39:SVTQAGVQWPNLGSLQPLPPGLKRFSCLSLPSSWDYGHLPPHPANF或Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Pro-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-P ro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gl y-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe
40)SEQ ID NO.40:PPGLKRFSCLSLPSSWDYG或Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-G ly
41)SEQ ID NO.41:FSCLSLPSSWDYGH或Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His
42)SEQ ID NO.42:LSLPSSWDY或Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
43)SEQ ID NO.43:SSWDYGHLPPHPANFCIFIRGGVSPYLSGWSQTPDLR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe-Cys-Ile-Phe-Ile-Arg-Gly-Gly-Val-Ser-Pro-Tyr-Leu-Ser-Gly-Trp-Ser-Gln-Thr-Pro-Asp-Leu-Arg
44)SEQ ID NO.44:PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR或Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-A rg-Arg
45)SEQ ID NO.45:PELKQSTCLSLPKCWDYRR或Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
46)SEQ ID NO.46:PPGLKRFSCLSLPSSWDYG或Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-G ly
47)SEQ ID NO.47:FSCLSLPSSWDYGH或Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His
48)SEQ ID NO.48:STCLSLPKCWDYRR或Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
49)SEQ ID NO.49:FSCPSLLSSWDYRR或Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
50)SEQ ID NO.50:LSLPSSWDY或Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
51)SEQ ID NO.51:LSLPKCWDYRR或Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
52)SEQ ID NO.52:SLLSSWDYRR或Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
53)SEQ ID NO.53:LPSSWDYRR或Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
54)SEQ ID NO.54:SSWDYRR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
55)SEQ ID NO.55:SSWDY或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
56)SEQ ID NO.56:SSWDYRRFILFFL或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu
57)SEQ ID NO.57:WDYRRFIFNFL或Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu
58)SEQ ID NO.58:FNFCLF或Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe
59)SEQ ID NO.59:FIFNFL或Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu
60)SEQ ID NO.60:PASASPVAGITGM或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met
61)SEQ ID NO.61:PASASQVAGTKDM或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met
62)SEQ ID NO.62:PASASQSAGITGV或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val
63)SEQ ID NO.63:PASASPVAG或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly
64)SEQ ID NO.64:FFLVEM或Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met
65)SEQ ID NO.65:SVTQAGVQW或Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp
66)SEQ ID NO.66:IDQQVLSRIKLEIKRCL或Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
67)SEQ ID NO.67:LSRIKLEIK或Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys
68)SEQ ID NO.68:GDHGRPNLSRLKLAIKYEVKKM或Gly-Asp-His-Gly-Arg-Pro-Asn-Leu-Ser-Arg-Leu-Lys-Leu-Ala-Ile-Lys-Tyr-Glu-Val-Lys-Lys-Met
69)SEQ ID NO.69:QQSIAVKFLAVFGVSI或Gln-Gln-Ser-Ile-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Ala-Val-Phe-Gly-Val-Ser-Ile
70)SEQ ID NO.70:GLLFPVFSVCYLIAPKSPLGL或Gly-Leu-Leu-Phe-Pro-Val-Phe-Ser-Val-Cys-Tyr-Leu-Ile-Ala-Pro-Lys-Ser-Pro-Leu-Gly-Leu
71)SEQ ID NO.71:MMVCWNRFGKWVYFI或Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile
72)SEQ ID NO.72:SAIFNFGPRYLYHGV或Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu-Tyr-His-Gly-Val
73)SEQ ID NO.73:PFYFLILVRIISFLI或Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-Ile-Leu-Val-Arg-Ile-Ile-Ser-Phe-Leu-Ile
74)SEQ ID NO.74:GDMEDVLLNCTLLKR或Gly-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg
75)SEQ ID NO.75:SSRFRFWGALVCSMD或Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-Gly-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp
76)SEQ ID NO.76:SCRFSRVAVTYRFIT或Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr-Arg-Phe-Ile-Thr
77)SEQ ID NO.77:LLNIPSPAVWMARNT或Leu-Leu-Asn-Ile-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr
78)SEQ ID NO.78:MAQSRLTATSASRVQ或Met-Ala-Gln-Ser-Arg-Leu-Thr-Ala-Thr-Ser-Ala-Ser-Arg-Val-Gln
79)SEQ ID NO.79:AILLSQPPKQLGLRA或Ala-Ile-Leu-Leu-Ser-Gln-Pro-Pro-Lys-Gln-Leu-Gly-Leu-Arg-Ala
80)SEQ ID NO.80:PANTPLIFVFSLEAG或Pro-Ala-Asn-Thr-Pro-Leu-Ile-Phe-Val-Phe-Ser-Leu-Glu-Ala-Gly
81)SEQ ID NO.81:FHHICQAGLKLLTSG或Phe-His-His-Ile-Cys-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Thr-Ser-Gly
82)SEQ ID NO.82:DPPASAFQSAGITGV或Asp-Pro-Pro-Ala-Ser-Ala-Phe-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val
83)SEQ ID NO.83:SHLTQPANLDKKICS或Ser-His-Leu-Thr-Gln-Pro-Ala-Asn-Leu-Asp-Lys-Lys-Ile-Cys-Ser
84)SEQ ID NO.84:NGGSCYVAQAGLKLLASCNPSK或Asn-Gly-Gly-Ser-Cys-Tyr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Ala-Ser-Cys-Asn-Pro-Ser-Lys
85)SEQ ID NO.85:MWTLKSSLVLLLCLT或Met-Trp-Thr-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Leu-Cys-Leu-Thr
86)SEQ ID NO.86:CSYAFMFSSLRQKTS或Cys-Ser-Tyr-Ala-Phe-Met-Phe-Ser-Ser-Leu-Arg-Gln-Lys-Thr-Ser
87)SEQ ID NO.87:EPQGKVPCGEHFRIR或Glu-Pro-Gln-Gly-Lys-Val-Pro-Cys-Gly-Glu-His-Phe-Arg-Ile-Arg
88)SEQ ID NO.88:QNLPEHTQGWLGSKW或Gln-Asn-Leu-Pro-Glu-His-Thr-Gln-Gly-Trp-Leu-Gly-Ser-Lys-Trp
89)SEQ ID NO.89:LWLLFAVVPFVILKC或Leu-Trp-Leu-Leu-Phe-Ala-Val-Val-Pro-Phe-Val-Ile-Leu-Lys-Cys
90)SEQ ID NO.90:QRDSEKNKVRMAPFF或Gln-Arg-Asp-Ser-Glu-Lys-Asn-Lys-Val-Arg-Met-Ala-Pro-Phe-Phe
91)SEQ ID NO.91:LHHIDSISGVSGKRMF或Leu-His-His-Ile-Asp-Ser-Ile-Ser-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Arg-Met-Phe
92)SEQ ID NO.92:EAYYTMLHLPTTNRP或Glu-Ala-Tyr-Tyr-Thr-Met-Leu-His-Leu-Pro-Thr-Thr-Asn-Arg-Pro
93)SEQ ID NO.93:KIAHCILFNQPHSPR或Lys-Ile-Ala-His-Cys-Ile-Leu-Phe-Asn-Gln-Pro-His-Ser-Pro-Arg
94)SEQ ID NO.94:SNSHSHPNPLKLHRR或Ser-Asn-Ser-His-Ser-His-Pro-Asn-Pro-Leu-Lys-Leu-His-Arg-Arg
95)SEQ ID NO.95:SHSHNRPRAYILITI或Ser-His-Ser-His-Asn-Arg-Pro-Arg-Ala-Tyr-Ile-Leu-Ile-Thr-Ile
96)SEQ ID NO.96:LPSKLKLRTHSQSHH或Leu-Pro-Ser-Lys-Leu-Lys-Leu-Arg-Thr-His-Ser-Gln-Ser-His-His
97)SEQ ID NO.97:NPLSRTSNSTPTNSFLMTSSKPR或Asn-Pro-Leu-Ser-Arg-Thr-Ser-Asn-Ser-Thr-Pro-Thr-Asn-Ser-Phe-Leu-Met-Thr-Ser-Ser-Lys-Pro-Arg
98)SEQ ID NO.98:SSSLGLPKCWDYRHE或Ser-Ser-Ser-Leu-Gly-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-His-Glu
99)SEQ ID NO.99:LLSLALMINFRVMAC或Leu-Leu-Ser-Leu-Ala-Leu-Met-Ile-Asn-Phe-Arg-Val-Met-Ala-Cys
100)SEQ ID NO.100:TFKQHIELRQKISIV或Thr-Phe-Lys-Gln-His-Ile-Glu-Leu-Arg-Gln-Lys-Ile-Ser-Ile-Val
101)SEQ ID NO.101:PRKLCCMGPVCPVKI或Pro-Arg-Lys-Leu-Cys-Cys-Met-Gly-Pro-Val-Cys-Pro-Val-Lys-Ile
102)SEQ ID NO.102:ALLTINGHCTWLPAS或Ala-Leu-Leu-Thr-Ile-Asn-Gly-His-Cys-Thr-Trp-Leu-Pro-Ala-Ser
103)SEQ ID NO.103:MFVFCLILNREKIKG或Met-Phe-Val-Phe-Cys-Leu-Ile-Leu-Asn-Arg-Glu-Lys-Ile-Lys-Gly
104)SEQ ID NO.104:GNSSFFLLSFFFSFQ或Gly-Asn-Ser-Ser-Phe-Phe-Leu-Leu-Ser-Phe-Phe-Phe-Ser-Phe-Gln
105)SEQ ID NO.105:NCCQCFQCRTTEGYA或Asn-Cys-Cys-Gln-Cys-Phe-Gln-Cys-Arg-Thr-Thr-Glu-Gly-Tyr-Ala
106)SEQ ID NO.106:VECFYCLVDKAAFECWWFYSFDT或Val-Glu-Cys-Phe-Tyr-Cys-Leu-Val-Asp-Lys-Ala-Ala-Phe-Glu-Cys-Trp-Trp-Phe-Tyr-Ser-Phe-Asp-Thr
107)SEQ ID NO.107:MEPHTVAQAGVPQHD或Met-Glu-Pro-His-Thr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Val-Pro-Gln-His-Asp
108)SEQ ID NO.108:LGSLQSLLPRFKRFS或Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Ser-Leu-Leu-Pro-Arg-Phe-Lys-Arg-Phe-Ser
109)SEQ ID NO.109:CLILPKIWDYRNMNT或Cys-Leu-Ile-Leu-Pro-Lys-Ile-Trp-Asp-Tyr-Arg-Asn-Met-Asn-Thr
110)SEQ ID NO.110:ALIKRNRYTPETGRKS或Ala-Leu-Ile-Lys-Arg-Asn-Arg-Tyr-Thr-Pro-Glu-Thr-Gly-Arg-Lys-Ser
111)SEQ ID NO.111:IDQQVLSRI或Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile
112)SEQ ID NO.112:KLEIKRCL或Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
113)SEQ ID NO.113:VLSRIK或Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys
114)SEQ ID NO.114:RIKLEIK或Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys
115)SEQ ID NO.115:VLSRIKLEIKRCL或Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu；和
116)SEQ ID NO.116:IDQQVLSRIKLEI或Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile。
表述“NTP肽”还优选地包括(但不限于)SEQ ID NO:1至116的氨基酸序列。
术语“片段”是指由蛋白质或肽的氨基酸序列的连续子序列组成的蛋白质或多肽，并且包括天然存在的片段，诸如由天然存在的体内蛋白酶活性产生的剪接变体和片段。此类片段可以在氨基端、羧基端和/或内部(如通过天然剪接)截短。可以在有或没有氨基端甲硫氨酸的情况下制备此类片段。术语“片段”包括来自相同蛋白质或肽的相同或不同的片段，具有共同或非共同的连续氨基酸序列，直接或通过接头连接在一起。所属领域的普通技术人员将能够使用本文概述的指导和程序来选择用于实施方案的适合片段而无需过度实验。
术语“变体”是指其中与蛋白质或肽的氨基酸序列相比存在一个或多个氨基酸置换、缺失和/或插入的蛋白质或多肽，并且包括蛋白质或肽的天然存在的等位基因变体或替代性剪接变体。术语“变体”包括用相似或同源的氨基酸或不相似的氨基酸置换肽序列中的一个或多个氨基酸。有许多标度可以将氨基酸分为相似或同源的。(Gunnar von Heijne,Sequence Analysis in Molecular Biology，第123-39页(Academic Press,New York,N.Y.1987.)。优选的变体包括在一个或多个氨基酸位置的丙氨酸取代。其他优选的取代包括对蛋白质的总净电荷、极性或疏水性具有很小影响或没有影响的保守性取代。下表2中列出了保守性取代。
表2
保守性氨基酸取代
表3列出了另一种氨基酸取代方案：
表3
原始残基 取代
Ala gly；ser
Arg lys
Asn gln；his
Asp glu
Cys ser
Gln asn
Glu asp
Gly ala；pro
His asn；gln
Ile leu；val
Leu ile；val
Lys arg；gln；glu
Met leu；tyr；ile
Phe met；leu；tyr
Ser thr
Thr ser
Trp tyr
Tyr trp；phe
Val ile；leu
其他变体可以由较不保守的氨基酸置换组成，诸如选择在维持以下方面的作用上更显著不同的残基：(a)置换区域中的多肽主链的结构(例如，折叠或螺旋构象)，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，或(c)侧链体积。一般预期对功能具有更显著影响的取代是下面那些取代：其中(a)甘氨酸和/或脯氨酸被另一种氨基酸取代或缺失或插入；(b)亲水性残基，例如丝氨酰基或苏氨酰基，取代疏水性残基(或被疏水性残基取代)，例如亮氨酰基、异亮氨酰基、苯丙氨酰基、缬氨酰基或丙氨酰基；(c)半胱氨酸残基取代任何其他残基(或被任何其他残基取代)；(d)具有电正性侧链的残基，例如赖氨酰基、精氨酰基或组氨酰基，取代具有电负性电荷的残基(或被具有电负性电荷的残基取代)，例如谷氨酰基或天冬氨酰基；或(e)具有庞大侧链的残基，例如苯丙氨酸，取代不具有此类侧链的残基(或被具有此类侧链的残基取代)，例如甘氨酸。其他变体包括设计用于产生新颖糖基化和/或磷酸化位点的那些变体，或设计用于去除现有糖基化和/或磷酸化位点的那些变体。变体包括在糖基化位点、蛋白水解裂解位点和/或半胱氨酸残基处的至少一个氨基酸取代。变体还包括在接头肽上的蛋白质或肽氨基酸序列之前或之后具有额外氨基酸残基的蛋白质和肽。例如，可以在NTP肽的氨基末端和羧基末端二者添加半胱氨酸残基，以便通过形成二硫键来使肽环化。术语“变体”还涵盖具有NTP肽氨基酸序列，在肽的3'或5'端侧翼具有至少一个并且至多25个或更多个额外氨基酸的多肽。
术语“衍生物”是指已经通过自然过程(诸如加工和其他翻译后修饰)，但还通过化学修饰技术(例如，通过添加一个或多个聚乙二醇分子、糖、磷酸盐和/或其他此类分子)进行了化学修饰的经化学修饰的蛋白质或多肽，其中所述一种或多种分子不天然连接至野生型蛋白质或NTP肽。衍生物包括盐。此类化学修饰在基础教科书和更详细的专著以及大量研究文献中有很好的描述，并且它们是所属领域的技术人员熟知的。应了解，相同类型的修饰可以在给定蛋白质或多肽中的几个位点以相同或不同程度存在。而且，给定蛋白质或多肽可以含有许多类型的修饰。修饰可以发生在蛋白质或多肽的任何地方，包括肽主链、氨基酸侧链和氨基或羧基端。
修饰包括例如乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价连接、血红素部分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、糖基化、脂质连接、硫酸化、谷氨酸残基的γ-羧化、羟基化和ADP-核糖基化、硒化、硫酸化、转运RNA介导的向蛋白质添加氨基酸(诸如精氨酰化)和泛素化。参见，例如Proteins--Structure And Molecular Properties,第2版,T.E.Creighton,W.H.Freeman and Company,New York(1993)和Wold,F.,"Posttranslational Protein Modifications:Perspectives and Prospects,"第1-12页，B.C.Johnson编，Academic Press,New York(1983)；Seifter等人，Meth.Enzymol.182:626-646(1990)和Rattan等人，"Protein Synthesis:Posttranslational Modifications andAging,"Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62(1992)。术语“衍生物”包括导致蛋白质或多肽变成支链或环状的化学修饰，有或没有支化。环状、支链和支链环状蛋白质或多肽可以由翻译后的自然过程产生，并且也可以通过完全合成的方法制得。
术语“同源物”是指通过标准方法确定的NTP肽的氨基酸序列至少60％相同的蛋白质，所述标准方法通常用于比较两个多肽的氨基酸位置的相似性。两种蛋白质之间的相似度或一致性程度可以通过已知方法容易地计算，包括但不限于Computational MolecularBiology,Lesk,A.M.编，Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.编，Academic Press,New York,1993；Computer Analysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编，HumanaPress,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.编，MStockton Press,New York,1991；及Carillo H.和Lipman,D.,SIAM,J.Applied Math.,48:1073(1988)中描述的那些。设计用于测定一致性的优选方法以给出测试序列之间的最大匹配。在公开可用的计算机程序中编码用于测定一致性和相似性的方法。
用于确定两个序列之间的同一性和相似性的优选的计算机程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux,J.等人，Nucleic Acids Research,12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA,Atschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.,215:403-410(1990)。BLAST X程序从NCBI和其他来源公开可用(BLAST Manual,Altschul,S.等人，NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894；Altschul,S.等人，J.Mol.Biol.,215:403-410(1990)。举例来说，使用计算机算法如GAP(Genetic Computer Group,University of Wisconsin,Madison,Wis.)，将要测定其序列一致性百分比的两种蛋白质或多肽进行比对，以使其各自的氨基酸最佳匹配(通过所述算法确定的“匹配范围”)。
空位引入罚分(按平均对角线的3倍计算；“平均对角线”是所用比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是通过特定比较矩阵分配给每个完全氨基酸匹配的评分或数字)和空位扩展罚分(通常是{分数(1/10)}乘以空位引入罚分)，以及诸如PAM 250或BLOSUM 62的比较矩阵与所述算法结合使用。标准比较矩阵(参见Dayhoff等人，载于：Atlas of ProteinSequence and Structure，第5卷，增刊3中的PAM250比较矩阵；参见Henikoff等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA,89:10915-10919中的BLOSUM 62比较矩阵)也可以由所述算法使用。然后通过所述算法计算一致性百分比。与比较蛋白质或肽相比，同源物通常将会具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入，视情况而定。
术语“融合蛋白”是指这样的蛋白质，其中一个或多个肽与蛋白质(诸如(但不限于)抗体或抗体片段，如Fab片段或短链Fv)重组融合或化学缀合(包括共价缀合和非共价缀合)。术语“融合蛋白”还指肽的多聚体(即二聚体、三聚体、四聚体和高级多聚体)。此类多聚体包含含有一种肽的同聚多聚体、含有多于一种肽的异聚多聚体，和含有至少一种肽和至少一种其他蛋白质的异聚多聚体。此类多聚体可以是疏水性、亲水性、离子和/或共价缔合、键或键联的结果，可以使用接头分子通过交联形成，或者可以通过例如脂质体形成来间接键联而成。
术语“肽模拟物”或“模拟物”是指模拟肽或蛋白质的生物学活性但在化学性质上不再是肽的生物学活性化合物，即它们不再含有任何肽键(即氨基酸之间的酰胺键)。这里，术语肽模拟物以更广泛的意义使用以包括在性质上不再完全是肽的分子，如伪肽、半肽和类肽。下面描述了这种更广泛意义上的肽模拟物的实例(其中肽的一部分被不具有肽键的结构置换)。无论是完全还是部分非肽，根据实施方案的肽模拟物提供了反应性化学部分的空间排列，其与肽模拟物所基于的肽中的活性基团的三维排列非常相似。由于这种相似的活性位点几何结构，肽模拟物对生物系统具有类似于肽生物活性的作用。
实施方案的肽模拟物优选地在三维形状和生物学活性方面与本文所述的肽基本上相似。对本领域中已知的肽进行结构修饰以产生肽模拟物的方法的实例包括主链手性中心的反转，产生D-氨基酸残基结构，特别是在N末端，所述D-氨基酸残基结构可以使得针对蛋白水解降解的稳定性增强，而对活性没有不利影响。在论文“Tritriated D-ala1-Peptide T Binding”,Smith C.S.等人，Drug Development Res.,15，第371-379页(1988)中给出了一个实例。第二种方法是改变环状结构以获得稳定性，诸如N至C链间酰亚胺和内酰胺(Ede等人，载于Smith和Rivier(编)“Peptides:Chemistry and Biology”,Escom,Leiden(1991)，第268-270页)。在受构象限制的胸腺五肽样化合物中给出了这样的一个实例，如在Goldstein,G.等人的美国专利第4,457,489号(1985)中公开的那些，所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中。第三种方法是用赋予蛋白水解抗性的伪肽键取代肽中的肽键。
已经描述了许多伪肽键，所述伪肽键一般不影响肽结构和生物学活性。这种方法的一个实例是取代逆反向伪肽键(“Biologically active retroinverso analogues ofthymopentin”,Sisto A.等人，载于Rivier,J.E.和Marshall,G.R.(编)“Peptides,Chemistry,Structure and Biology”,Escom,Leiden(1990)，第722-773页)和Dalpozzo等人(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:561-566，其以引用的方式并入本文中)。根据这种修饰，除了一个或多个肽键被逆反向伪肽键替换以外，肽的氨基酸序列可以与上文所述的肽的序列相同。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对由作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。还可以通过用类似结构的其他化学基团置换氨基酸的化学基团来进行进一步修饰。已知会增强酶促裂解稳定性而没有或几乎没有生物活性损失的另一种适合的伪肽键是还原的电子等排体伪肽键(Couder等人(1993),Int.J.PeptideProtein Res.,41:181-184，其以全文引用的方式并入本文中)。
因此，除了一个或多个肽键被电子等排体伪肽键替换以外，这些肽的氨基酸序列可以与肽的序列相同。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原的电子等排体伪肽键的肽的合成是所属领域中已知的(Couder等人(1993)，以上引用)。其他实例包括引入酮亚甲基或甲基硫醚键以置换肽键。
肽的类肽衍生物代表另一类肽模拟物，这类肽模拟物保留了针对生物学活性的重要结构决定因素，但消除了肽键，从而赋予蛋白水解耐受性(Simon等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371，该文献以引用的方式整体并入本文)。类肽是N-取代的甘氨酸寡聚物。已经描述了许多N-烷基，其各自对应于天然氨基酸的侧链(Simon等人(1992)，以上引用)。肽的一些或所有氨基酸都可以被对应于被置换的氨基酸的N-取代的甘氨酸置换。
术语“肽模拟物”或“模拟物”还包括如下定义的反-D肽和对映异构体。
术语“反-D肽”是指由与肽的L-氨基酸序列相比以相反顺序排列的D-氨基酸组成的生物学活性蛋白质或肽。因此，L-氨基酸肽的羧基端残基变成D-氨基酸肽的氨基端等。例如，肽ETESH(SEQ ID NO:117)变为HdSdEdTdEd，其中Ed、Hd、Sd和Td是分别对应于L-氨基酸E、H、S和T的D-氨基酸。
术语“立体异构体”是指其中肽的氨基酸序列中的一个或多个L-氨基酸残基被相对应的一个或多个D-氨基酸残基替换的生物学活性蛋白质或肽。
如本文所用的“组合物”泛指含有所述肽或氨基酸序列，以及任选地另外的活性剂的任何组合物。组合物可以包含无水制剂、水溶液或无菌组合物。包含肽的组合物可以用作杂交探针。探针可以以冷冻干燥的形式储存，并且可以与如碳水化合物的稳定剂缔合。在杂交中，探针可以在水溶液中使用，所述水溶液含有盐(例如NaCl)、洗涤剂(例如十二烷基硫酸钠(SDS))和其他组分(例如Denhardt溶液、乳粉、鲑鱼精子DNA等)。
如本文所用，术语“治疗有效量”泛指能够有效发挥功能、特征和优点的量。在一些实施方案中，治疗有效量可以为约0.1mg至约100mg、或约0.5mg至约50mg、或约1mg至约25mg、或约1.5mg至约15mg、或约2.0至约5mg、或约2.5mg或者它们之间的任何范围或值。
如本文所用的表述“性功能障碍”泛指防止男性经历来自活动的愉悦感的性反应周期的任何期期间的问题。性反应周期具有四个期：兴奋期、持续期、高潮期和消退期。性功能障碍包括但不限于性欲望降低(性欲低)、勃起障碍、早泄、延迟或抑制射精、延迟高潮和性快感缺乏。
在其中另外的活性剂与NTP肽一起使用的一个替代性实施方案中，表述“活性剂”用于表示旨在治疗性欲望降低(性欲减退)、勃起障碍、早泄、延迟或抑制射精、延迟高潮或性快感缺乏的任何药剂。
合适的活性剂可以包括但不限于：(i)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，包括但不限于柠檬酸西地那非(VIAGRA；Pfizer)、盐酸伐地那非(LEVITRA,GlaxoSmithKline)和他达拉非(CIALIS,Eli Lilly)；(ii)外源性睾酮(例如，舌下或面颊片剂、皮下植入物、透皮贴剂或凝胶剂或者肌内注射剂的形式)；(iii)选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括但不限于柠檬酸可洛米芬(CLOMID,Sanofi Aventis)、柠檬酸恩氯米芬(ANDROXAL,ReprosTherapeutics)、柠檬酸他莫昔芬(NOLVADEX；AstraZeneca)和盐酸雷洛昔芬(EVISTA)。
实施方案涉及改善患有BPH的男性的性功能的方法，所述方法包括将治疗有效量的包含单独的或与至少一种另外活性剂组合的NTP肽的组合物施用于有需要的男性。
本领域的普通技术人员理解，BPH症状的恶化或进展的男性将是IPSS评分随时间推移而增加，或未显示出IPSS随时间推移而改善(即，减少)的哺乳动物。所属领域的普通技术人员知道并且了解如何使用众所周知和行业公认的标准确定IPSS评分。
国际前列腺症状评分(I-PSS)基于七个关于泌尿症状的问题和一个关于生活质量的问题的答案。每个关于泌尿症状的问题允许患者从指示特定症状的严重程度增加的六个答案中选择一个。答案为0到5的分配点。总评分因此可以在0到35的范围内(无症状到症状极明显)。所述问题是指以下泌尿症状：
问题症状
1 排空不完全
2 尿频
3 尿间断
4 尿急
5 尿流细
6 费力
7 夜尿症
问题八是指患者感知到的生活质量。
IPSS的前七个问题与美国泌尿学会(American Urological Association；AUA)症状指数上出现的问题一致，其目前对症状进行如下分类：
轻度(症状评分小于等于7)
中度(症状评分范围8-19)
严重(症状评分范围20-35)
国际科学委员会(International Scientific Committee；SCI)以世界卫生组织(World Health Organization；WHO)和国际抗癌联盟(International Union AgainstCancer；UICC)的名义推荐仅使用单一问题来评估生活质量。这一问题的答案从“欣喜的”到“糟糕的”或从0到6变动。虽然这个单一问题可能会或可能不会捕获良性前列腺增生(BPH)症状或生活质量的整体影响，但其可以充当用于医生患者对话的有价值的起点。
并非所有患有BPH的男性都表现出与BPH相关的症状的恶化或进展。换句话说，一些患有BPH的男性可能不会看到其IPSS评分随时间推移而增加，尽管他们继续患有所述障碍。类似地，一些患有BPH的男性可能看到IPSS评分随时间推移而显著增加。本文所述的实施方案可以包括治疗患有BPH的哺乳动物，所述哺乳动物易于发生BPH症状的恶化或进展，如IPSS随时间推移的增加或未发生IPSS随时间推移的任何明显减少所证明。在另一个实施方案中，所治疗的男性是那些患有或易于患有BPH的男性。
本发明人出乎意料地发现，当进行针对治疗BPH的临床试验时，NTP肽单独或与另一种活性剂组合施用，显著改善了性功能，如性功能问卷(SFQ)所测量。本发明人发现，与已施用对照的那些男性相比，当单独或与另一种活性剂组合施用NTP肽时，表现出性功能改善的男性的百分比增加。本发明人发现，在临床试验期间，与已施用对照的表现出性功能改善的男性的百分比相比，表现出性功能改善并且已经单独或与另一种活性剂组合施用一种或多种NTP肽的男性的百分比增加超过约10％。例如，如果已施用对照的表现出性功能改善的男性的百分比为约50％，那么表现出性功能改善并且已经单独或与另一种活性剂组合施用一种或多种NTP肽的男性的百分比将大于55％，从而产生至少约10％的性功能改善。在一些实施方案中，单独或与另一种活性剂组合施用一种或多种NTP肽提供了至少约15％的性功能改善、或至少约18％、或至少约23％、或至少约27％、或至少约35％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约65％、或大于100％的性功能改善。
此外，本发明人令人惊讶地发现，与向此前已使用常规疗法(例如，药物、外科手术或它们二者)治疗的患者施用一种或多种NTP肽相比，向BPH初治患者单独或与另一种活性剂组合施用一种或多种NTP肽提供了性功能的显著增加。与向接受先前治疗的患者施用一种或多种NTP肽相比，向初治患者施用一种或多种NTP肽提供了至少约10％的改善、或至少约25％的改善、或至少约50％的改善、或至少约75％的改善、或至少大于100％的改善(例如，向初治患者施用一种或多种NTP肽改善了性功能，而向接受先前治疗的患者施用一种或多种NTP肽降低了性功能)。
实施方案包括改善患有BPH的男性的性功能的方法，所述方法包括向男性单独施用NTP肽或与施用另外的活性剂组合施用NTP肽一次或超过一次。所述方法包括但不限于单独或与载剂结合肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、病灶内、眼内、动脉内、鞘内、肿瘤内、鼻内、局部、透皮、皮下或皮内施用NTP-肽。优选的NTP肽包括以下中的一种或多种：
对于所属领域的技术人员显而易见的是，可以选择上述NTP肽的其他较小片段，使得这些肽具有相同或相似的生物活性。所属领域的技术人员可以选择其他片段，使得这些肽具有相同或相似的生物活性。实施方案的肽涵盖这些其他片段。一般来说，实施方案的肽具有至少4个氨基酸，优选至少5个氨基酸，并且更优选至少6个氨基酸。
实施方案还涵盖改善患有BPH的男性的性功能的方法，所述方法包括施用包含NTP肽以及另外的活性剂的组合物，所述NTP肽包含连接在一起的两种或更多种NTP肽。就NTP肽具有所需生物活性来说，两种此类肽也具有所需的生物活性。
本实施方案所涵盖的NTP肽和其片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物可以使用所属领域的技术人员已知的方法制备，如重组DNA技术、蛋白质合成和分离天然存在的肽、蛋白质、AD7c-蛋白质和其片段、变体、衍生物和同源物。
NTP肽及其片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物可以使用本领域技术人员已知的方法从其他肽、蛋白质及其片段、变体、衍生物和同源物制备。此类方法包括(但不限于)使用蛋白酶将肽或蛋白质裂解成所需的NTP肽。
NTP肽可以使用熟知的重组DNA技术方法来制备，诸如Sambrook等人MolecularCloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.和/或Ausubel等人编，Current Protocols in Molecular Biology,GreenPublishers Inc.和Wiley and Sons,N.Y.中所阐述的那些方法。
编码NTP肽的基因或cDNA可以例如通过筛选基因组或cDNA文库，或通过PCR扩增来获得。可以基于来自相同或相关基因家族的其他已知基因或基因片段，例如在其他肽或蛋白质中发现的保守基序的序列信息产生适用于筛选文库的探针或引物。另外，在已经鉴定出编码NTP肽的基因的情况下，所述基因的全部或一部分可以作为探针用于鉴定同源基因。探针或引物可以用于筛选来自被认为表达NTP肽基因的各种组织来源的cDNA文库。通常，对于筛选将使用高度严格性条件，以使从筛选中获得的假阳性的数量减到最少。
制备编码NTP肽的基因的另一种方法是使用技术人员熟知的方法进行化学合成，诸如Engels等人，Angew.Chem.Intl.Ed.,1989,28:716-734描述的那些方法。这些方法尤其包括用于核酸合成的磷酸三酯、亚磷酰胺和H-膦酸酯方法。此类化学合成的优选方法是使用标准亚磷酰胺化学法进行聚合物负载的合成。通常，编码肽或蛋白质的DNA长度将为几百个核苷酸。使用这些方法可以将大于约100个核苷酸的核酸合成为几个片段。然后可以将片段连接在一起以形成全长肽或蛋白质。通常，编码蛋白质氨基端的DNA片段将具有ATG，其编码甲硫氨酸残基。这个甲硫氨酸可以存在或可以不存在于成熟形式的蛋白质或肽上，这取决于宿主细胞中产生的蛋白质是否被设计成从所述细胞分泌。
可以使用标准连接技术来将编码NTP肽的基因、cDNA或其片段插入到适当的表达或扩增载体中。通常选择载体在所用的特定宿主细胞中具功能性(即，载体与宿主细胞机构相容，使得可以发生基因的扩增和/或基因的表达)。编码NTP肽的基因、cDNA或其片段可以在原核、酵母、昆虫(杆状病毒系统)和/或真核宿主细胞中扩增/表达。宿主细胞的选择将部分取决于NTP肽是否会被糖基化和/或磷酸化。如果是这样，酵母、昆虫或哺乳动物宿主细胞是优选的。
通常，用于任何宿主细胞中的载体将含有至少5'侧翼序列(也称为启动子)和其他调控元件，诸如一种或多种增强子、复制起点元件、转录终止元件、含供体和受体剪接位点的完整内含子序列、信号肽序列、核糖体结合位点元件、多腺苷酸化序列、用于插入编码待表达的多肽的核酸的多接头区以及选择标记元件。下文论述这些元件中的每一个。任选地，载体可以含有标签序列，即位于蛋白质或肽编码序列的5'或3'末端的寡核苷酸分子；所述寡核苷酸分子编码多聚组氨酸(诸如六组氨酸(SEQ ID NO:118))，或其他标签，诸如FLAG、HA(血球凝集素)或Myc(对其而言存在市售抗体)。所述标签通常在多肽表达后与多肽融合，并且可以充当从宿主细胞中亲和纯化蛋白质或肽的手段。可以例如使用针对所述标签的抗体作为亲和基质，通过柱色谱法实现亲和纯化。任选地，随后可以通过各种手段，如使用某些肽酶从纯化的蛋白质或肽中去除标签。
可以由本领域的技术人员在NTP肽的N-末端或C-末端融合人免疫球蛋白铰链和Fc区。后续Fc融合蛋白可以通过使用蛋白A亲和柱进行纯化。已知Fc在体内表现出长的药代动力学半衰期，并且已发现与Fc融合的蛋白质在体内表现出比未融合的对应物明显更长的半衰期。而且，与Fc区的融合允许分子二聚化/多聚化，其可能对一些分子的生物活性适用。
5'侧翼序列可以是同源的(即，来自与宿主细胞相同的物种和/或品系)、异源的(即，来自宿主细胞物种或品系以外的物种)、杂合的(即，来自多于一个来源的5'侧翼序列的组合)、合成的，或者5'侧翼序列可以是天然蛋白质或肽基因5'侧翼序列。因而，5'侧翼序列的来源可以是任何单细胞原核或真核生物、任何脊椎或无脊椎生物或任何植物，条件是5'侧翼序列在宿主细胞机构中具功能性并且可以被宿主细胞机构激活。
可用于本实施方案的载体的5'侧翼序列可以通过本领域熟知的几种方法中的任一种来获得。通常，除了蛋白质或肽基因侧翼序列之外，本文中适用的5'侧翼序列先前已通过作图和/或通过限制性内切核酸酶消化鉴定，并且因此可以使用适当的限制性内切核酸酶从适当组织来源中分离。在一些情况下，5'侧翼序列的完整核苷酸序列可能是已知的。此处，可以使用上述用于核酸合成或克隆的方法合成5'侧翼序列。在已知全部或仅一部分5'侧翼序列的情况下，可以使用PCR和/或通过筛选具有来自相同或另一物种的适合寡核苷酸和/或5'侧翼序列片段的基因组文库来获得。
在5'侧翼序列未知的情况下，含有5'侧翼序列的DNA片段可以从可以含有例如编码序列或甚至另一个或多个基因的DNA的较大片断中分离。可以通过使用一种或多种精心选择的酶进行限制性内切核酸酶消化来实现分离以分离适当的DNA片段。消化后，可以通过琼脂糖凝胶纯化、柱或所属领域的技术人员已知的其他方法分离所需片段。选择适于实现这一目的的酶对于所属领域的普通技术人员来说是显而易见的。
复制起点元件通常是商购的原核表达载体的一部分，并且有助于载体在宿主细胞中扩增。在一些情况下，将载体扩增到某一拷贝数对于蛋白质或肽的最佳表达很重要。如果选择的载体不含复制起点位点，则可以基于已知序列化学合成，并且连接到载体中。转录终止元件通常位于蛋白质或肽编码序列3'端，并且用于终止蛋白质或肽的转录。通常，原核细胞中的转录终止元件是富含G-C的片段，其后是聚T序列。虽然所述元件可以从文库克隆或作为载体的一部分商购，但也可以使用如上文所述的那些的核酸合成方法容易地合成。
选择性标记基因元件编码在选择性培养基中生长的宿主细胞存活和生长所必需的蛋白质。典型的选择标记基因编码的蛋白质(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其他毒素，例如氨苄青霉素(ampicillin)、四环素(tetracycline)或卡那霉素(kanamycin)的抗性，(b)补充细胞的营养缺陷；或(c)供给无法从复合培养基获得的关键营养素。优选的选择标记是卡那霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。
核糖体结合元件，通常被称为夏因-达尔加诺(Shine-Dalgarno)序列(原核生物)或科扎克(Kozak)序列(真核生物)，通常是mRNA翻译起始所必需的。所述元件通常位于启动子的3'和待合成的蛋白质或肽的编码序列的5'。Shine-Dalgarno序列是变化的，但通常是多嘌呤(即，具有高A-G含量)。已经鉴定了许多Shine-Dalgarno序列，其中每一种都可以使用上述方法容易地合成并且用于原核载体中。
在希望从宿主细胞分泌NTP肽的那些情况下，信号序列可以用于将肽引导出合成它的宿主细胞，并且可以缺失蛋白质的羧基端部分以防止膜锚定。通常，信号序列位于NTP肽基因或cDNA的编码区中，或直接位于肽基因编码区的5'端。已经鉴定了许多信号序列，并且在所选宿主细胞中具功能性的任何信号序列均可以与肽基因或cDNA结合使用。因此，信号序列可以与肽基因或cDNA同源或异源，并且可以与肽基因或cDNA同源或异源。另外，可以使用上述方法化学合成信号序列。在大多数情况下，多肽通过信号肽的存在从宿主细胞中分泌将导致从多肽中去除氨基端甲硫氨酸。
在许多情况下，NTP肽基因或cDNA的转录因载体中存在一个或多个内含子而增加；在真核宿主细胞，尤其哺乳动物宿主细胞中产生所述肽时，尤其如此。所用内含子可以天然存在于肽基因内，尤其在所用基因是全长基因组序列或其片段的情况下。在内含子不是天然存在于基因内的情况下(对于大多数cDNA而言)，内含子可以从另一来源获得。内含子相对于侧翼序列和肽基因的位置通常很重要，因为内含子必须转录为有效的。因而，在插入到表达载体中的肽基因是cDNA分子的情况下，内含子的优选位置是转录起始位点的3'，和聚A转录终止序列的5'。对于肽cDNA而言优选地，一个或多个内含子将位于cDNA的一侧或另一侧(即，5'或3')，使其不会中断这一编码序列。来自任何来源，包括任何病毒、原核和真核(植物或动物)生物的任何内含子，均可以用于实践此实施方案，条件是它与插入其中的宿主细胞相容。本文还包括合成内含子。任选地，可以在载体中使用一个以上的内含子。
在上述一种或多种元件尚未存在于待使用的载体中的情况下，它们可以分别获得并且连接到载体中。用于获得每种元件的方法是所属领域的技术人员熟知的，并且与上述方法(即，DNA合成、文库筛选等)相当。
用于实践此实施方案的最终载体可以由起始载体(诸如市售载体)构建。此类载体可以含有或可以不含有待包括在完成的载体中的一些元件。如果起始载体中不存在所需元件，则可以通过用适当的限制性内切核酸酶切割载体，使得待连接在载体中的元件末端和载体末端对于连接可相容来使每个元件分别连接到载体中。在一些情况下，为了获得令人满意的连接，可能必须使待连接在一起的末端成为平端。通过首先在所有四种核苷酸的存在下使用Klenow DNA聚合酶或T4DNA聚合酶填充“粘性末端”来实现平端化。这一程序是所属领域中众所周知的，并且例如在上文Sambrook等人进行了描述。或者，可以先将要插入到载体中的两种或更多种元件连接在一起(如果它们将彼此相邻定位)，并且随后将其连接到载体中。
构建载体的另一种方法是在一种反应混合物中同时进行各种元件的所有连接。此处，由于元件的不当连接或插入，将产生许多无义或无功能的载体，然而可以通过限制性内切核酸酶消化来鉴定和选择功能性载体。
用于实践此实施方案的优选载体是与细菌、昆虫和哺乳动物宿主细胞相容的那些载体。此类载体尤其包括pCRII、pCR3和pcDNA3.1(Invitrogen Company,San Diego,Calif.)、pBSII(Stratagene Company,La Jolla,Calif.)、pET15b(Novagen,Madison,Wis.)、PGEX(Pharmacia Biotech,Piscataway,N.J.)、pEGFP-N2(Clontech,Palo Alto,Calif.)、pETL(BlueBachl；Invitrogen)和pFastBacDual(Gibco/BRL,Grand Island,N.Y.)。
在构建载体并且将编码全长或截短蛋白质或肽的核酸分子插入到载体的适当位点中后，可以将完成的载体插入合适的宿主细胞中用于扩增和/或多肽表达。宿主细胞可以是原核宿主细胞(如大肠杆菌)或真核宿主细胞(如酵母细胞、昆虫细胞或脊椎动物细胞)。在适当条件下培养时，宿主细胞可以合成蛋白质或肽，随后所述蛋白质或肽可以从培养基中收集(如果宿主细胞将其分泌到培养基中)或直接从产生其的宿主细胞中收集(如果其未被分泌)。
在收集后，可以使用诸如分子筛色谱法、亲和色谱法等等的方法来纯化NTP肽。用于蛋白质或肽生产的宿主细胞的选择将部分取决于肽是否会被糖基化或磷酸化(在这种情况下优选真核宿主细胞)，以及宿主细胞能够将肽折叠成其天然三级结构的方式(例如，二硫桥的正确取向等)，使得生物活性蛋白质由具有生物活性的肽制备，所述肽可以在使用如下所述的适当化学条件合成后折叠。适合的细胞或细胞系可以是哺乳动物细胞，如中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell；CHO)、人胚肾(HEK)293、293T细胞或3T3细胞。适合的哺乳动物宿主细胞和用于转化、培养、扩增、筛选和产物生产及纯化的方法的选择是所属领域中已知的。其他适合的哺乳动物细胞系是猴COS-1和COS-7细胞系，以及CV-1细胞系。其他示例性哺乳动物宿主细胞包括灵长类动物细胞系和啮齿动物细胞系，包括转化的细胞系。正常的二倍体细胞，源自原代组织体外培养的细胞株以及原代外植体也是适合的。候选细胞可能在基因型上缺乏选择基因，或者可能含有显性作用的选择基因。其他适合的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠神经母细胞瘤N2A细胞、HeLa、小鼠L-929细胞，源自Swiss、Balb-c或NIH小鼠的3T3系、BHK或HaK仓鼠细胞系。
同样可用作适用于本发明实施方案的宿主细胞是细菌细胞。例如，各种大肠杆菌菌株(例如，HB101、DH5α、DH10和MC1061)在生物技术领域中作为宿主细胞是熟知的。在这一方法中也可以使用枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、其他芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、链霉菌属(Streptomyces spp.)等的多种菌株。本领域技术人员已知的许多酵母细胞菌株也可作为用于表达本发明实施方案的多肽的宿主细胞。
另外，如果需要，昆虫细胞系统可以用于本发明实施方案的方法中。例如在Kitts等人(Biotechniques,1993,14(5):810-817)、Lucklow(Curr.Opin.Biotechnol.,1993,4:564-572)和Lucklow等人(J.Virol.,1993,67(8):4566-4579)中描述了此类系统。优选的昆虫细胞是Sf-9和Hi5(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)。
可以使用诸如氯化钙、电穿孔、显微注射、脂转染或DEAE-葡聚糖法等方法将载体插入(也称为转化或转染)到所选宿主细胞中。所选方法将部分地随待使用的宿主细胞的类型而变。这些方法和其他适合的方法是所属领域的技术人员熟知的，并且例如在上文Sambrook等人中阐述。
含有载体(即，转化或转染的)的宿主细胞可以使用技术人员熟知的标准培养基来培养。培养基通常将含有细胞生长和存活所比需的所有营养素。用于培养大肠杆菌细胞的适合培养基例如Luria培养液(LB)和/或Terrific培养液(TB)。适用于培养真核细胞的培养基是RPMI 1640、MEM、DMEM，所有这些培养基都可以补充有所培养的特定细胞系所需的血清和/或生长因子。用于昆虫培养的适合培养基是Grace培养基，其根据需要补充有酵母提取物、乳清蛋白水解物和/或胎牛血清。通常，仅添加抗生素或对转化细胞的选择性生长有用的其他化合物作为培养基的补充物。待使用的化合物由存在于转化宿主细胞的质粒上的可选标记元件决定。举例来说，在可选标记元件是卡那霉素抗性的情况下，添加到培养基中的化合物将是卡那霉素。
可以使用本领域已知的标准方法来评估宿主细胞中产生的NTP肽的量。此类方法包括但不限于蛋白质印迹分析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、非变性凝胶电泳、HPLC分离、质谱法、免疫沉淀和/或活性测定，如DNA结合凝胶迁移测定。
如果蛋白质或肽设计成从宿主细胞中分泌，则可以在细胞培养基中发现大部分蛋白质或肽。以这种方式制备的蛋白质通常不具有氨基端甲硫氨酸，因为它在从细胞分泌期间被去除。然而，如果蛋白质或肽不从宿主细胞中分泌，则其将存在于细胞质和/或细胞核(对于真核宿主细胞)或细胞溶质(对于革兰氏阴性细菌宿主细胞)中并且可能具有氨基端甲硫氨酸。
对于位于宿主细胞细胞质和/或细胞核中的NTP肽，通常首先机械破坏或用洗涤剂破坏宿主细胞以将细胞内内容物释放到缓冲溶液中。然后可以从所述溶液中分离肽。
可以使用多种技术来实现从溶液中纯化NTP肽。如果已经合成NTP肽使其在羧基末端或氨基末端含有标签，诸如六组氨酸(SEQ ID NO:118)(例如，肽/六His(SEQ ID NO: 118))，或其他小肽，诸如FLAG(Sigma-Aldritch,St.Louis,Mo.)，或钙调蛋白结合肽(Stratagene,La Jolla,Calif.)，则可以通过以一步法使溶液通过亲和柱来将其基本上纯化，其中柱基质对标签或直接对蛋白质(即，特异性识别肽的单克隆抗体)具有高亲和力。举例来说，多聚组氨酸以高亲和力和特异性结合镍、锌和钴；因此，采用基于镍的亲和树脂(如Qiagen的QlAexpress系统或Invitrogen的Xpress System中所用的)或基于钴的亲和树脂(如BD Biosciences-CLONTECH的Talon系统中所用的)的固定化金属离子亲和色谱法可以用于纯化肽/聚His。(参见，例如，Ausubel等人编，Current Protocols in MolecularBiology,10.11.8节,John Wiley&Sons,New York)。
在未连接标签的情况下制备NTP肽，以及没有可用的抗体时，可以使用其他熟知的纯化程序。此类程序包括但不限于离子交换色谱法、羟基磷灰石色谱法、疏水相互作用色谱法、分子筛色谱法、HPLC、与凝胶洗脱组合的天然凝胶电泳和制备式等电聚焦(Isoprime机器/技术，Hoefer Scientific)。在一些情况下，可以组合这些技术中的两种或更多种以实现提高的纯度。
如果预期主要在细胞内发现NTP肽，则可以使用技术人员已知的任何标准技术从宿主细胞中提取细胞内物质(包括革兰氏阴性细菌的包涵体)。举例来说，可以通过弗氏压碎器(French press)、均质化和/或超声处理然后离心来裂解宿主细胞以释放周质/细胞质的内容物。如果肽已经在细胞溶质中形成包涵体，则包涵体通常可以与内部细胞膜和/或外部细胞膜结合，并且因此在离心后主要发现于团块物质中。然后可以在极端pH条件下或用离液剂，如洗涤剂、胍、胍衍生物、脲或脲衍生物，在还原剂，如二硫苏糖醇的存在下在碱性pH下或在三羧乙基膦的存在下在酸性pH下，处理团块物质以释放、分裂和溶解包涵体。然后可以使用凝胶电泳、免疫沉淀等分析其现在可溶形式的肽。如果需要分离肽，则可以使用标准方法实现分离，例如下面和Marston等人Meth.Enz.,1990,182:264-275描述的那些方法。
在一些情况下，NTP肽在分离时可能不具有生物学活性。用于将多肽再折叠或转化为其三级结构并且产生二硫键的各种方法可以用于恢复生物活性。此类方法包括将溶解的多肽暴露于通常高于7的pH并且存在特定浓度的离液剂。离液剂的选择与用于包涵体溶解的选择非常相似，但通常浓度较低，并且不一定与用于溶解的离液剂相同。在大多数情况下，重折叠/氧化溶液还含有还原剂或特定比例的还原剂加上其氧化形式，以产生特定的氧化还原电位，从而允许在蛋白质半胱氨酸桥的形成中发生二硫化物改组。一些常用的氧化还原对包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫代双GSH、氯化铜、二硫苏糖醇(DTT)/二噻烷DTT、2-巯基乙醇(BME)/二硫代二甘醇(BME-BME)。在许多情况下，共溶剂对于提高再折叠效率是必需的，并且用于这一目的的更常用的试剂包括甘油、不同分子量的聚乙二醇和精氨酸。
如果在宿主细胞中没有形成显著程度的NTP肽包涵体，则在细胞匀浆离心后，将主要在上清液中发现NTP肽，并且可以使用如下面所阐述的那些方法从上清液中分离NTP肽。
在那些部分或完全分离NTP肽是优选的情形下，可以使用技术人员熟知的标准方法来实现纯化。此类方法包括但不限于通过电泳，然后电洗脱，各种类型的色谱法(免疫亲和、分子筛和/或离子交换)和/或高压液相色谱法来分离。在一些情况下，可能优选使用这些方法中的一种以上进行完全纯化。
除了使用重组DNA技术制备和纯化NTP肽之外，NTP肽及其片段、变体、同源物、融合蛋白、肽模拟物和衍生物还可以使用本领域已知的技术，通过化学合成方法(诸如固相肽合成)来制备，所述技术诸如Merrifield等人,1963,J.Am.Chem.Soc.,85(14):2149-2154,Houghten等人Proc Natl Acad.Sci.USA,1985,82(15):5131-5135以及Stewart和Young,Solid Phase Peptide Synthesis,Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill.阐述的那些。可以合成在氨基端有或没有甲硫氨酸的此类肽。化学合成的NTP肽可以使用这些参考文献中所阐述的方法氧化以形成二硫桥。预期NTP肽具有与重组产生的或从天然来源纯化的肽相当的生物活性，因此可与重组或天然肽互换使用。
其中肽与聚合物键联的经化学修饰的NTP肽组合物包括在本发明实施方案的范围内。所选聚合物通常是水溶性的，使得其连接的蛋白质不会在水性环境(如生理环境)中沉淀。所选聚合物通常被修饰为具有单一反应性基团，如用于酰化的活性酯或用于烷基化的醛，使得可以如本发明方法中所提供的那样控制聚合度。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是支链或非支链的。聚合物的混合物包括在肽聚合物范围内。
在一些情况下，可能期望制备天然存在的NTP肽的核酸和/或氨基酸变体。可以使用定点诱变、PCR扩增或其他适当方法产生核酸变体，其中引物具有所需的点突变(对于诱变技术的描述，参见Sambrook等人，同上，和Ausubel等，同上)。使用Engels等人(同上)描述的方法的化学合成也可以用于制备此类变体。也可以使用所属领域的技术人员已知的其他方法。
优选的核酸变体是那些含有核苷酸置换的核酸变体，所述核苷酸置换负责在将用于产生NTP肽的宿主细胞中产生密码子偏好。此类密码子优化可以通过计算机算法确定，所述计算机算法并入了密码子频率表，诸如University of Wisconsin Package Version9.0,Genetics Computer Group,Madison,Wis.所提供的用于高度表达的细菌基因的密码子偏好的Ecohigh.Cod。其他有用的密码子频率表包括Celegans_high.cod、Celegans_low.cod、Drosophila_high.cod、Human_high.cod、Maize_high.cod和Yeast_high.cod。其他优选变体是与野生型相比，编码如上所述的保守性氨基酸变化的那些变体(例如，其中天然存在的氨基酸侧链的电荷或极性基本上不因被不同的氨基酸取代而改变)，和/或设计成产生新颖糖基化和/或磷酸化位点的那些变体，或设计成消除现有糖基化和/或磷酸化位点的那些变体。
NTP肽及其片段、同源物、变体、融合蛋白、肽模拟物、衍生物和盐也可以使用技术人员已知的常规肽合成技术来制备。这些技术包括化学偶联法(参见Wunsch,E:"Methodender organischen Chemie",第15卷,Band 1+2,Synthese von Peptiden,Thieme Verlag,Stuttgart(1974)和Barrany,G.；Marrifield,R.B.:"The Peptides,”E.Gross,J.Meienhofer编,第2卷,第1章,第1-284页,Academic Press(1980))、酶促偶联法(参见Widmer,F.Johansen,J.T.,Carlsberg Res.Commun.,第44卷,第37-46页(1979)；Kullmann,W.:"Enzymatic Peptide Synthesis",CRC Press Inc.Boca Raton,Fla.(1987)；和Widmer,F.,Johansen,J.T.载于"Synthetic Peptides in Biology and Medicines,"Alitalo,K.,Partanen,P.,Vatieri,A.编,第79-86页,Elsevier,Amsterdam(1985))或化学法和酶促法的组合(如果对于过程设计和经济有利)。使用本文提供的指导，所属领域的技术人员能够改变NTP肽的肽序列以产生具有与原始或天然NTP肽相同或相似的生物学活性(生物活性)的同源物。
使用给定NTP肽的模拟物而不是肽本身存在优势。一般来说，肽模拟物更具生物可利用性，具有更长的作用持续时间并且比产生天然蛋白质和肽更便宜。
可以使用组合化学技术和本领域已知的其他技术来开发NTP肽的肽模拟物(参见例如Proceedings of the 20th European Peptide Symposium，G.Jung,E.Bayer编，第289-336页，以及其中的参考文献)。本领域已知的用于对肽进行结构修饰以产生肽模拟物的方法的实例包括主链手性中心的反转，产生D-氨基酸残基结构，特别是在N末端，所述D-氨基酸残基结构可以使得针对蛋白水解降解的稳定性增强，而对活性没有不利影响。在论文“Tritriated D-ala1-Peptide T Binding”,Smith C.S.等人，Drug Development Res.,15，第371-379页(1988)中提供了一个实例。
第二种方法是改变环状结构以获得稳定性，诸如N至C链间酰亚胺和内酰胺(Ede等人，载于Smith和Rivier(编)“Peptides:Chemistry and Biology”,Escom,Leiden(1991)，第268-270页)。在受构象限制的胸腺五肽样化合物中给出了这样的一个实例，如在Goldstein,G.等人的美国专利第4,457,489号(1985)中公开的那些，所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
第三种方法是用赋予蛋白水解耐受性的伪肽键取代NTP肽中的肽键。已经描述了许多伪肽键，其一般不影响肽结构和生物活性。这种方法的一个实例是取代逆反向伪肽键("Biologically active retroinverso analogues of thymopentin",Sisto A.等人在Rivier,J.E.和Marshall,G.R.(编)"Peptides,Chemistry,Structure and Biology",Escom,Leiden(1990)，第722-773页中)和Dalpozzo等人(1993),Int.J.Peptide ProteinRes.,41:561-566，其以引用的方式并入本文中)。根据这种修饰，肽的氨基酸序列可以与上述肽的序列相同，除了一个或多个肽键被逆反向伪肽键置换以外。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对由作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。
具有一个或多个还原的逆反向伪肽键的肽的合成是本领域已知的(Sisto(1990)和Dalpozzo等人(1993)，上文引用)。因此，肽键可以被非肽键取代，所述非肽键允许肽模拟物采用原始肽类似结构，因此具有生物活性。还可以通过用类似结构的其他化学基团置换氨基酸的化学基团来进行进一步修饰。已知会增强酶促裂解稳定性而没有或几乎没有生物活性损失的另一种适合的伪肽键是还原的电子等排体伪肽键，是(Couder等人(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:181-184，其以全文引用的方式并入本文中)。因此，这些肽的氨基酸序列可以与肽序列相同，除了一个或多个肽键被电子等排体伪肽键置换以外。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原的电子等排体伪肽键的肽的合成是所属领域中已知的(Couder等人(1993)，以上引用)。其他实例包括引入酮亚甲基或甲基硫醚键以置换肽键。
NTP肽的类肽衍生物代表另一类肽模拟物，这类肽模拟物保留了针对生物学活性的重要结构决定因素，但消除了肽键，从而赋予蛋白水解耐受性(Simon等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371并且该文献以引用的方式整体并入本文)。类肽是N-取代的甘氨酸寡聚物。已经描述了许多N-烷基，其各自对应于天然氨基酸的侧链(Simon等人(1992)，以上引用并且以全文引用的方式并入本文中)。肽的一些或所有氨基酸都被对应于被置换的氨基酸的N-取代的甘氨酸置换。
可以通过NMR波谱法、晶体学和/或计算机辅助分子建模确定原始肽的三级结构来辅助肽模拟物的开发。这些技术有助于开发比原始肽具有更高效力和/或更高生物利用率和/或更高稳定性的新型组合物(Dean(1994),BioEssays,16:683-687；Cohen和Shatzmiller(1993),J.Mol.Graph.,11:166-173；Wiley和Rich(1993),Med.Res.Rev.,13:327-384；Moore(1994),Trends Pharmacol.Sci.,15:124-129；Hruby(1993),Biopolymers,33:1073-1082；Bugg等人(1993),Sci.Am.,269:92-98，全部以全文引用的方式并入本文中)。
一旦鉴定出潜在的肽模拟物化合物，就可以使用以下实例中概述的方法来合成和测定以评估其活性。通过上述方法获得的具有肽的生物学活性和类似三维结构的肽模拟化合物涵盖在此实施方案中。对于所属领域的技术人员来说显而易见的是，肽模拟物可以由带有上述一种或多种修饰的任何肽产生。此外显而易见的是，除了它们作为治疗性化合物的实用性之外，此实施方案的肽模拟物还可以用于开发甚至更有效的非肽化合物。
目前存在许多能够合成本文所述的肽的机构。举例来说，给定NTP肽的序列，所述机构可以合成肽并且转寄合成的肽，以及随附文件和肽一致性的证明。
本发明实施方案涉及改善具有良性前列腺增生(BPH)的男性的性功能的方法。此类方法包括将治疗有效量的单独的或与另外的活性剂组合的NTP肽施用于有需要的男性。有需要的男性可以是患有良性前列腺增生，可能具有或可能不具有增加的患前列腺癌风险的男性，或者具有患前列腺癌风险的男性。有需要的哺乳动物还可以是将受益于缓解与BPH相关的症状或防止所述症状的恶化或进展的任何哺乳动物。
另外的活性剂(如果使用)可以是选自以下的一种或多种活性剂：(i)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，包括但不限于柠檬酸西地那非(VIAGRA；Pfizer)、盐酸伐地那非(LEVITRA,GlaxoSmithKline)和他达拉非(CIALIS,Eli Lilly)；(ii)外源性睾酮(例如，舌下或面颊片剂、皮下植入物、透皮贴剂或凝胶剂或者肌内注射剂的形式)；(iii)选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括但不限于柠檬酸可洛米芬(CLOMID,Sanofi Aventis)、柠檬酸恩氯米芬(ANDROXAL,Repros Therapeutics)、柠檬酸他莫昔芬(NOLVADEX；AstraZeneca)和盐酸雷洛昔芬(EVISTA)。
NTP肽的治疗性组合物可以包含治疗有效量的NTP肽与药学上可接受的载剂的掺合物。在一些替代性实施方案中，另外的活性剂可以与NTP肽在相同的组合物中施用，并且在其他实施方案中，包含NTP肽的组合物作为注射剂施用，而另外的活性剂配制成口服药剂(凝胶、胶囊、片剂、液体等)。载剂物质可以是注射用水，优选补充有用于向哺乳动物施用的溶液中常见的其他物质。通常，供治疗使用的NTP肽将以包含纯化肽以及一种或多种生理学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂的组合物的形式施用。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是示例性的适当载剂。优选地，使用适当赋形剂(例如蔗糖)将产物配制成冻干物。根据需要可以包括其他标准载剂、稀释剂和赋形剂。实施方案的组合物还可以包含所属领域的普通技术人员已知的具有适当pH值范围的缓冲液，包括约pH 7.0-8.5的Tris缓冲液，或约pH 4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可以包括山梨糖醇或其适合的替代品。
实施方案还涵盖使用与蛋白质或其他分子结合或键联或结合形成组合物的NTP肽，所述组合物在肿瘤或其他不需要的细胞位点处或其附近被肿瘤或位点特异性酶或蛋白酶或通过靶向肿瘤或其他不需要的细胞的抗体结合物裂解时，在肿瘤或其他不需要的细胞位点处或其附近释放所述肽。
实施方案还涵盖使用与蛋白质或其他分子结合或键联或结合形成组合物的NTP肽，所述组合物在待处理组织暴露于光(如在激光疗法或其他光动力或光活化疗法中)、其他形式的电磁辐射，如红外辐射、紫外辐射、x射线或γ射线辐射、局部热量、α或β辐射、超声波发射或其他来源的局部能量时释放肽或肽的一些生物活性片段。
实施方案还涵盖采用树枝状大分子、富勒烯和其他合成分子、聚合物和大分子的NTP肽的治疗性组合物，其中所述肽和/或其相对应的DNA分子本身或连同其他种类的分子(诸如肿瘤特异性标志物)一起与所述分子、聚合物或大分子结合、连接或包封在其中。例如，美国专利第5,714,166号，生物活性和/或靶树枝状大分子结合物(Bioactive and/orTargeted Dendimer Conjugates)，提供了一种制备以及尤其是使用树枝状聚合物偶联物的方法，所述树枝状聚合物偶联物由至少一种具有一种或多种靶标导向因子的树枝状大分子和至少一种与之结合的生物活性剂组成。美国专利第5,714,166号的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
实施方案还涵盖用NTP肽和/或基因和药物递送媒介物(诸如脂质乳剂、胶束聚合物、聚合物微球、电活性聚合物、水凝胶和脂质体)与另外的活性剂组合的治疗性组合物来治疗男性的方法。
用于口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、粉末剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，可以将另外的活性剂和/或NTP肽与下列中的至少一种掺合：(a)一种或多种惰性赋形剂(或载剂)，如柠檬酸钠或磷酸二钙；(b)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(c)粘合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(d)保湿剂，如甘油；(e)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶液缓凝剂，如石蜡；(g)吸收促进剂，如季铵化合物；(h)润湿剂，如乙酰醇和单硬脂酸甘油酯；(i)吸附剂，如高岭土和膨润土；和(j)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。对于胶囊、片剂和丸剂而言，剂型还可以包含缓冲剂。
用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可以包含所属领域中常用的惰性稀释剂，如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂。示例性乳化剂是乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物等。
除此类惰性稀释剂外，组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可以改变实施方案的组合物中活性成分的实际剂量水平以获得有效获得针对特定组合物和施用方法的所需治疗反应的NTP肽和另外的活性剂的量。因此，所选剂量水平取决于所需疗效、施用途径、所需治疗持续时间和其他因素。
对于包括人在内的哺乳动物，可以基于体表面积施用有效量。对于不同大小、物种的动物和人的剂量相互关系(以mg/M2体表面积计)由E.J.Freireich等人，CancerChemother.Rep.,50(4):219(1966)描述。体表面积可以根据个体的身高和体重大致确定(参见例如Scientific Tables,Geigy Pharmaceuticals,Ardsley,N.Y.第537-538页(1970))。
施用于宿主的NTP肽和任选地另外的活性剂的总日剂量可以是单次剂量或分次剂量。剂量单位组合物可以含有可以用于构成日剂量的此类约数的此类量。然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间和途径、施用药物的效力、吸收和排泄率，与其他药物的组合以及所治疗的特定疾病的严重程度。优选组合物仅作为注射剂或输注剂施用一次，或者在另一个优选的实施方案中，组合物施用两次。在此实施方案中，组合物施用的间隔时间段可以在2个月至10年、或8个月至4年、或约1年至约2年之间变化。
根据实施方案施用NTP肽组合物的方法包括但不限于，肌内、口服、静脉内、腹膜内、颅内(实质内)、脑室内、瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮、经气溶胶、输注、快速浓注、植入装置、持续释放系统等施用所述化合物。
施用实施方案的NTP肽的另一种方法是透皮或经皮途径。另外的活性剂可以与NTP肽一起使用，或者可以如上所述分别施用，或可以根本不施用。这种实施方案的一个实例是使用贴剂。具体地说，可以用肽于例如二甲基亚砜(DMSO)，或DMSO与棉籽油的混合物中的微细悬浮液制备贴剂，并且使其与携带肿瘤的哺乳动物远离皮肤袋内肿瘤定位部位的皮肤接触。其他介质或其与其他溶剂和固体支撑物的混合物也同样有效。贴剂可以含有溶液或悬浮液形式的肽化合物。然后可以例如通过将其插入到患者的皮肤袋中将贴剂施加到患者的皮肤上，皮肤袋通过借助于缝线、夹子或其他保持装置将皮肤折叠并保持在一起而形成。所述袋应以这样的方式使用，以确保在不受哺乳动物干扰的情况下与皮肤持续接触。除了使用皮肤袋之外，还可以使用确保贴剂与皮肤接触牢固放置的任何装置。举例来说，可以使用胶粘绷带将贴剂保持在皮肤上的适当位置。
NTP肽，任选与另外的活性剂组合，可以以持续释放调配物或制备物形式施用。持续释放制备物的适合实例包括呈成型制品(例如膜或微胶囊)形式的半透性聚合物基质。持续释放基质包括聚酯、水凝胶、聚丙交酯(美国专利第3,773,919号、EP 58,481)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等人,Biopolymers,1983,22(1):547-556)、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等人,J.Biomed.Mater.Res.,1981,15:167-277和Langer,Chem.Tech.,1982,12:98-105)、乙烯-乙酸乙烯酯(Langer等人,同上)或聚-D(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。持续释放组合物还可以包括脂质体，所述脂质体可以通过本领域已知的几种方法中的任一种制备(例如，Eppstein等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1985,82(11):3688-3692；EP 36,676；EP 88,046；和EP 143,949)。
施用实施方案的NTP肽的另一种方法是通过将NTP肽直接或间接输注到待治疗的组织中。此类实施方案的一个实例是将NTP肽直接注射到待治疗的组织中。治疗可以包括在过去某个时候单次注射、多次注射或者在几小时、几天或几个月或几年的时间里进行一系列注射，并且具有通过患者报告的反应或通过其他监测性功能改善的方法所测量的性功能改善。这可以例如通过问诊或通过问卷来完成，其中有很多可用的标准化问卷，诸如：(1)简易男性性功能调查表(“BMFSI”)(O’Leary等人,Urology,1995,46:697-706)；(2)国际勃起功能指数(“IIEF”)(Rosen等人,Urology,1997,49:822-830)；(3)男性性健康问卷(“MSHQ”)(Rosen等人,Urology,2004,64:777-782)；(4)国际尿失禁协会男性简表(“ICS-男性SF”)(Donovan等人,BJUI,1996,77:554-562)；等等。向待治疗组织的注射可以通过插入如鼻、口腔、耳、阴道、直肠或尿道等腔道中的装置或通过切口进行以便到达体内组织并且可以连同成像或光学系统(如超声波或光纤镜)一起进行，以便识别适当的注射部位。这种实施方案的另一个实例是使用可以随时间推移向组织提供恒定的NTP肽输注的装置。
施用实施方案的NTP肽的另一种方法是通过将装置植入待治疗的组织中。在此实施方案中，另外的活性剂通常通过与NTP肽不同的施用途径施用。这种实施方案的一个实例是在待治疗的组织中植入含肽晶片，并且通过口服施用来施用另外的活性剂。随时间推移，晶片将治疗剂量的NTP肽释放到组织中。或者或另外，可以通过向受影响区植入其上已经吸收了NTP肽的膜、海绵或其他适当材料来局部施用所述组合物。在使用植入装置的情况下，可以将装置植入任何适合的组织或器官中，并且可以通过快速浓注，或通过连续施用，或通过导管使用连续输注，直接通过装置递送所述肽。
一个实施方案包括改善患有BPH的男性的性功能的方法，所述方法包括向男性(包括BPH症状容易恶化或进展的男性)施用治疗有效量的NTP肽(特别是包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列的分离的肽)至少一次。另一个实施方案包括改善患有BPH的男性的性功能的方法，所述方法包括向男性(包括BPH症状容易恶化或进展的男性)施用治疗有效量的NTP肽(特别是包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列的分离的肽)，随后施用一种或多种活性成分。另一实施方案包括通过治疗不患有BPH但易患BPH的男性来改善患有BPH的男性的性功能的方法，并且在其他实施方案中，所述男性患有选自以下的一种或多种病状：尿道口狭窄、嵌顿性包茎、阴茎束缚带、包茎、前列腺癌、盆腔肿块(选自妇科恶性肿瘤)、动脉瘤扩张、膀胱结石、膀胱赘生物、粪便嵌塞、胃肠道或腹膜后恶性肿块、尿道狭窄、结石、水肿、龟头炎、前列腺脓肿、前列腺炎、血吸虫病、膀胱炎、包虫病、吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)、单纯疱疹病毒、莱姆病(Lyme disease)、尿道周脓肿、横贯性脊髓炎、结核性膀胱炎、尿道炎、水痘-带状疱疹病毒、阴茎创伤、阴茎断裂、阴茎裂伤和福勒综合征(Fowler’s syndrome)。
在某些实施方案中，包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列的分离的肽单独或与上文讨论的一种或多种活性剂组合，另外与至少一种选自以下的化合物组合施用：(1)5α-还原酶的抑制剂和/或抗雌激素，(2)5α-还原酶的抑制剂和/或芳香酶抑制剂，(3)5α-还原酶抑制剂和/或17β-HSD抑制剂，(4)5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(5)5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(6)5α-还原酶抑制剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(7)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(8)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(9)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和17β-HSD抑制剂，(10)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(11)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(12)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(13)17β-HSD抑制剂和抗雌激素，(14)17β-HSD抑制剂和芳香酶抑制剂，(15)17β-HSD抑制剂、芳香酶抑制剂和抗雌激素，(16)17β-HSD抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(17)17β-HSD抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(18)17β-HSD抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(19)抗雌激素和芳香酶抑制剂以及(20)抗雌激素、芳香酶抑制剂和抗雄激素，(21)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂和抗雌激素，(22)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂和芳香酶抑制剂，(23)LHRH激动剂或拮抗剂、5α还原酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(24)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(25)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(26)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(27)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(28)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(29)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和17β-HSD抑制剂，(30)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(31)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(32)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(33)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂和抗雌激素，(34)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂和芳香酶抑制剂，(35)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、芳香酶抑制剂和抗雌激素，(36)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(37)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(38)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(39)LHRH激动剂或拮抗剂、抗雌激素和芳香酶抑制剂以及(40)LHRH激动剂或拮抗剂、抗雌激素、芳香酶抑制剂和抗雄激素。
在其他实施方案中，包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列的分离的肽与至少一种选自以下的活性剂组合施用：(i)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，包括但不限于柠檬酸西地那非(VIAGRA；Pfizer)、盐酸伐地那非(LEVITRA,GlaxoSmithKline)和他达拉非(CIALIS,EliLilly)；(ii)外源性睾酮(例如，舌下或面颊片剂、皮下植入物、经皮贴剂或凝胶剂或者肌内注射剂的形式)；(iii)选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括但不限于柠檬酸可洛米芬(CLOMID,Sanofi Aventis)、柠檬酸恩氯米芬(ANDROXAL,Repros Therapeutics)、柠檬酸他莫昔芬(NOLVADEX；AstraZeneca)和盐酸雷洛昔芬(EVISTA)。
提供以下实施例以说明本发明的实施方案。然而，应理解，实施方案不限于这些实施例中所描述的特定情况或细节。在说明书全篇，对包括美国专利在内的公开可获得文献的任何和所有引用都具体地以引用的方式并入。具体地说，实施方案明确地以引用的方式并入以下专利申请中所含的实施例：2015年7月24日提交的待决美国专利申请第14/808,731号，题为：降低罹患良性前列腺增生的患者的手术需要的方法；2015年1月27日提交的美国专利申请第14/606,683号，题为：治疗需要破坏或去除细胞的病症的方法，2015年6月12日提交的美国申请第14/738,551号，题为：用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的障碍的组合组合物，(现为US2016/0361380)，美国专利申请公开第2007/0237780号(现已废弃)；第2003/0053990号(现为美国专利第7,172,893号)；第2003/0096350号(现为美国专利第6,924,266号)；第2003/0096756号(现为美国专利第7,192,929号)；第2003/0109437号(现为美国专利第7,241,738号)；第2003/0166569号(现为美国专利第7,317,077号)；第2005/0032704号(现为美国专利第7,408,021号)；和第2015/0148303号(现为美国专利第9,243,035号)，每个专利申请公开都揭示其中指定的某些肽是在正常啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织、真皮和其他组织中引起体内细胞死亡的有效药剂。
实施例1
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予三百七十(370)名患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗(“初治”)的既往史的患者前列腺内注射(a)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝213)或(b)单独PBS(n＝157)。在治疗后对这些患者进行随访12个月，并通过泌尿学调查来监测他们的进展。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题，(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗与低评分相关。随后在治疗后12个月再次进行SFQ。比较NX-1207患者与接受单独PBS的患者的结果在SFQ中与基线评分的差值。在12个月时未显著发生可归因于NX-1207的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生显著不良性事件之外，在NX-1207治疗的患者中在SFQ中也显著从基线改善，在安慰剂治疗的患者中则未发现这种结果。本研究的结果如下表1中所示。
表1
(*)与基线相比p<0.0001
根据这些研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。与安慰剂相比，使用NTP肽治疗一次能够显著改善性功能，如通过性功能问卷所测量，所述改善的量为约65％。
实施例2
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予一百二十三(123)名具有显著的性问题并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗(“初治”)的既往史的BPH患者前列腺内注射(a)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝75)或(b)单独PBS(n＝48)。在治疗后对这些患者进行随访12个月，并通过泌尿学调查来监测他们的进展。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题；(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗以及病症与低评分相关。该组中的全部123名BPH患者均具有<＝3分的基线治疗前SFQ评分(这表示存在显著的性问题)。随后在治疗后12个月再次进行SFQ。比较NX-1207患者与接受单独PBS的患者的结果在治疗前基线和治疗后一年时SFQ<＝3分的患者的比例。在12个月时未显著发生可归因于NX-1207的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生不良性事件之外，在NX-1207治疗的患者中具有显著的性问题的患者的比例也从基线显著减小，而安慰剂治疗的患者未显示出该比例从基线的显著变化。本研究的结果如下表2中所示。
表2
(1)与基线相比p<0.0001；(2)与安慰剂相比p<0.005
根据该研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH、具有显著的性问题并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。与安慰剂相比，使用NTP肽治疗一次能够显著改善性功能，如通过性功能问卷所测量，约25.3％患者的性功能得以改善，而相比之下4.1％的仅接受安慰剂的患者的性功能得以改善，从而使得与安慰剂相比，表现出性功能改善的患者的数量增加为约84％。
实施例3
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予一百五十六(156)名无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗(“初治”)的既往史的BPH患者前列腺内内注射(a)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝88)或(b)单独的PBS(n＝68)。随访所有患者12.6-51.1个月的时间段，然后通过第二开放标签注射溶于PBS的NX-1207(2.5mg)来治疗所有患者。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题，(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗与低评分相关。随后在第二次治疗后6个月再次进行SFQ。比较接受NX-1207注射2次的NX-1207患者与接受单独PBS然后注射NX-1207 1次的患者的结果在SFQ中与基线评分的差值。未显著发生可归因于NX-1207的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生不良性事件之外，在NX1207治疗的先前BPH初治患者中在SFQ中也显著从基线改善，在初始安慰剂(PBS)治疗的患者中则未发现这种结果。本研究的结果如下表3中所示。
表3
(1)与基线相比p<0.0001；(2)与PBS组相比p<0.02。
根据本研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。与使用安慰剂治疗然后使用NTP肽治疗一种相比，使用NTP肽治疗两次能够显著改善性功能，如通过性功能问卷所测量，所述改善的量为约82％。
实施例4
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予一百五十(150)名无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗(“初治”)的既往史的BPH患者前列腺内注射(a)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝83)或(b)单独的PBS(n＝67)。随访所有患者12.6-51.1个月的时间段，然后通过第二开放标签注射溶于PBS的NX-1207(2.5mg)来治疗所有患者。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题，(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗与低评分相关。随后在第二次治疗后6个月再次进行SFQ。比较接受NX-1207注射2次的NX-1207患者与接受单独PBS然后注射NX-1207 1次的患者的结果在SFQ中无恶化或有改善的患者反应的比例。未显著发生可归因于NX-1207的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生不良性事件之外，在NX-1207治疗的先前BPH初治患者中在SFQ中也存在无恶化或有从基线的改善的患者的比例的显著差异，在初始安慰剂(PBS)治疗的先前BPH初治患者中则未发现这种结果。本研究的结果如下表4中所示。
表4
(*)与PBS组相比p<0.02
根据本研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。与使用安慰剂治疗然后使用NTP肽治疗一次相比，使用NTP肽治疗两次能够使性功能不恶化或改善性功能，如通过性功能问卷所测量，约84％患者的性功能得以改善，而相比之下67％的仅接受安慰剂的患者的性功能得以改善，从而使得与安慰剂相比，表现出性功能不恶化或改善的患者的数量增加为约20％。
实施例5
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予一百五十(150)名无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗(“初治”)的既往史的BPH患者前列腺内内注射(a)(2.5mg)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝83)或(b)单独的PBS(n＝67)。在治疗后对这些患者进行随访12.6-51.1个月，并通过泌尿学调查来监测他们的进展。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题；(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗与低评分相关。随后在治疗后12.6-51.1个月再次进行SFQ。在12.6-51.1个月时未显著发生可归因于NX-1207的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生不良性事件之外，与安慰剂治疗的患者相比，在NX-1207治疗的患者中在SFQ中也存在从基线的平均变化的长期显著差异。本研究的结果如下表5中所示。
表5
(*)p<0.004
根据本研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。与安慰剂相比，使用NTP肽的一次治疗能够显著改善性功能，如通过性功能问卷所测量，所述改善的量为约230％(使用NTP肽治疗的患者显示出显著改善，而使用对照治疗的患者显示出显著恶化)。
实施例6
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予三百二十四(324)名BPH患者前列腺内内注射(a)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝189)或(b)单独的PBS(n＝135)。在治疗后对这些患者进行随访12.6-51.1个月，并通过泌尿学调查来监测他们的进展。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题；(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗与低评分相关。该组中的八十九(89)名BPH患者均具有<＝3分的基线治疗前SFQ评分(这表示存在显著的性问题)。随后在治疗后12.6-51.1个月再次进行SFQ。比较NX-1207患者与接受单独PBS的患者的结果在治疗前基线和治疗后12.6-51.1个月时SFQ<＝3分的患者的比例。在12.6-51.1个月时未显著发生可归因于NX-1207的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生不良性事件之外，与安慰剂治疗的患者的比例变化相比，在未接受针对BPH的先前治疗的NX-1207治疗的患者中具有显著的性问题的患者的比例也从基线显著减小。本研究的结果如下表6中所示。
表6
(*)与安慰剂相比p<0.05
根据本研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。与安慰剂相比，使用NTP肽的一次治疗能够改善性功能，如通过性功能问卷所测量，约30％患者的性功能得以改善，而相比之下仅接受安慰剂的患者的性功能改善减少82％，从而使得与安慰剂相比，表现出性功能无恶化或改善的患者的百分比增加约373％(使用NTP肽治疗的患者显示出显著改善，而使用对照治疗的患者显示出显著恶化)。
实施例7
在双盲条件下由泌尿学家在诊所环境中在超声引导下给予三百二十四(324)名BPH患者前列腺内内注射(a)溶于磷酸盐缓冲盐水pH7.2("PBS")的NX-1207(2.5mg)(n＝189)或(b)单独的PBS(n＝135)。在治疗后对这些患者进行随访12.6-51.1个月，并通过泌尿学调查来监测他们的进展。在治疗之前，通过病史来评估每位患者的性功能，每位患者都完成了性功能问卷("SFQ")，该问卷根据患者认为他所具有的任何以下问题的程度评为0至12分：1.性冲动减退，2.勃起和保持勃起的能力，以及3.射精方面的问题；(简易男性性功能调查表的问题评估量表)。评分越高表示出现了改善，即性功能自我评估更好，性问题更少；评分越低表示出现了恶化，即性问题更多。很多已批准的BPH药物和治疗与低评分相关。该组中的八十九(89)名BPH患者均具有<＝3分的基线治疗前SFQ评分(这表示存在显著的性问题)。随后在治疗后12.6-51.1个月再次进行SFQ。比较NX-1207患者与接受单独PBS的患者的结果在治疗前基线和治疗后12.6-51.1个月时SFQ<＝3分的患者的比例。在12.6-51.1个月时未发生可归因于NX-1207的显著的性不良事件。令人惊讶的是，除未发生不良性事件之外，与接受NX-1207的先前治疗的患者的比例变化相比，在未接受针对BPH的先前治疗的NX-1207治疗的患者中具有显著的性问题的患者的比例也从基线显著减小。本研究的结果如下表7中所示。
表7
*与施用NX-1207的先前治疗的BPH患者相比p<0.001
根据本研究的结果，施用本发明的NTP肽可用于改善患有BPH并且无任何针对BPH的常规已批准的医学或手术治疗的既往史的患者群体的性功能。使用NTP肽治疗一次能够显著改进性功能，如通过性功能问卷所测量，在该子组中约30％患者的性功能得以改善，而相比之下如通过SFQ所测量，已接受针对BPH的先前治疗并且还接受使用NTP肽治疗一次的患者的性功能改善的数量减少9.1％。因此，这些结果显示，NTP肽的使用改善了初治患者的性功能，所述改善远远优于接受使用常规疗法针对BPH的先前治疗的患者的改善。事实上，将NTP肽用于初治患者可以产生30％的改善，而将NTP肽用于已接受针对BPH的先前治疗的患者使性功能改善减少9.1％，从而与已接受先前治疗的患者相比，初治患者的改善量为约130％。
序列表
<110> 尼莫克斯股份有限公司
<120> 用于改善性功能的组合物和方法
<130> 063307-0450163
<140> 15/446,406
<141> 2017-03-01
<160> 118
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 1
Met Glu Phe Ser Leu Leu Leu Pro Arg Leu Glu Cys Asn Gly Ala
1 5 10 15
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 2
Gly Ala Ile Ser Ala His Arg Asn Leu Arg Leu Pro Gly Ser Ser
1 5 10 15
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 3
Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met Cys
1 5 10 15
Thr
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 4
Met Cys Thr His Ala Arg Leu Ile Leu Tyr Phe Phe Leu Val Glu Met
1 5 10 15
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 5
Tyr Phe Phe Leu Val Glu Met Glu Phe Leu His
1 5 10
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 6
Val Gly Gln Ala Gly Leu Glu Leu Pro Thr Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 7
Asp Asp Pro Ser Val Ser Ala Ser Gln Ser Ala Arg Tyr Arg Thr Gly
1 5 10 15
His
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 8
Thr Gly His His Ala Arg Leu Cys Leu Ala Asn Phe Cys Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 9
Ala Asn Phe Cys Gly Arg Asn Arg Val Ser Leu Met Cys Pro Ser Trp
1 5 10 15
Ser
<210> 10
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 10
Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Arg Arg
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 11
Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg
1 5 10 15
Arg
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 12
Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 13
Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 14
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 14
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu
1 5 10
<210> 15
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 15
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Phe Phe Leu
<210> 16
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 16
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro
20
<210> 17
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 17
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp Glu Val Gln
20 25 30
Trp Cys Asp His Ser Ser
35
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 18
Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
<210> 19
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 19
Phe Ile Leu Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu
1 5 10
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 20
Phe Ile Leu Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp
1 5 10 15
Glu Val Gln Trp Cys Asp His Ser Ser
20 25
<210> 21
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 21
His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp Glu Val Gln Trp Cys Asp His
1 5 10 15
Ser Ser Leu Gln Pro Ser Thr Pro Glu Ile Lys His Pro
20 25
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 22
Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met His
1 5 10
<210> 23
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 23
Asp Met His His Tyr Thr Trp Leu Ile Phe Ile Phe Ile Phe Asn Phe
1 5 10 15
Leu Arg
<210> 24
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 24
His Tyr Thr Trp Leu Ile Phe Ile Phe Ile Phe Asn Phe Leu Arg Gln
1 5 10 15
Ser Leu Asn
<210> 25
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 25
Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Arg Asn Leu Gly Ser Leu Gln
1 5 10 15
Pro Leu Pro Pro Gly Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser
20 25 30
Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe
35 40 45
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 26
Pro Gly Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Arg Arg
<210> 27
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 27
Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg
1 5 10 15
Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe
20
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 28
Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 29
Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 30
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 30
Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 31
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
<210> 32
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 32
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe Phe Val
1 5 10 15
Phe Leu Val Glu Met Gly Phe Thr Met
20 25
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 33
Phe Val Phe Leu Val Glu Met Gly Phe Thr Met
1 5 10
<210> 34
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 34
Met Gly Phe Thr Met Phe Ala Arg Leu Ile Leu Ile Ser Gly Pro Cys
1 5 10 15
Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser
20
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 35
Ile Ser Gly Pro Cys
1 5
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 36
Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val Ser
1 5 10 15
His
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 37
Gly Val Ser His His Ala Arg Leu Ile Phe Asn Phe Cys Leu Phe Glu
1 5 10 15
Met
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 38
Asn Phe Cys Leu Phe Glu Met Glu Ser His
1 5 10
<210> 39
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 39
Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Pro Asn Leu Gly Ser Leu Gln
1 5 10 15
Pro Leu Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser
20 25 30
Ser Trp Asp Tyr Gly His Leu Pro Pro His Pro Ala Asn Phe
35 40 45
<210> 40
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 40
Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp
1 5 10 15
Asp Tyr Gly
<210> 41
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 41
Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His
1 5 10
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 42
Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
<210> 43
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 43
Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His Leu Pro Pro His Pro Ala Asn Phe Cys
1 5 10 15
Ile Phe Ile Arg Gly Gly Val Ser Pro Tyr Leu Ser Gly Trp Ser Gln
20 25 30
Thr Pro Asp Leu Arg
35
<210> 44
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 44
Pro Gly Phe Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp
1 5 10 15
Asp Tyr Arg Arg
20
<210> 45
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 45
Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Arg Arg
<210> 46
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 46
Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp
1 5 10 15
Asp Tyr Gly
<210> 47
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 47
Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His
1 5 10
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 48
Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 49
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 49
Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 50
Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 51
Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 52
Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 53
Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 54
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 55
Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
<210> 56
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 56
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Phe Ile Leu Phe Phe Leu
1 5 10
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 57
Trp Asp Tyr Arg Arg Phe Ile Phe Asn Phe Leu
1 5 10
<210> 58
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 58
Phe Asn Phe Cys Leu Phe
1 5
<210> 59
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 59
Phe Ile Phe Asn Phe Leu
1 5
<210> 60
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 60
Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met
1 5 10
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 61
Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met
1 5 10
<210> 62
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 62
Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val
1 5 10
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 63
Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly
1 5
<210> 64
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 64
Phe Phe Leu Val Glu Met
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 65
Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp
1 5
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 66
Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys
1 5 10 15
Leu
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 67
Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys
1 5
<210> 68
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 68
Gly Asp His Gly Arg Pro Asn Leu Ser Arg Leu Lys Leu Ala Ile Lys
1 5 10 15
Tyr Glu Val Lys Lys Met
20
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 69
Gln Gln Ser Ile Ala Val Lys Phe Leu Ala Val Phe Gly Val Ser Ile
1 5 10 15
<210> 70
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 70
Gly Leu Leu Phe Pro Val Phe Ser Val Cys Tyr Leu Ile Ala Pro Lys
1 5 10 15
Ser Pro Leu Gly Leu
20
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 71
Met Met Val Cys Trp Asn Arg Phe Gly Lys Trp Val Tyr Phe Ile
1 5 10 15
<210> 72
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 72
Ser Ala Ile Phe Asn Phe Gly Pro Arg Tyr Leu Tyr His Gly Val
1 5 10 15
<210> 73
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 73
Pro Phe Tyr Phe Leu Ile Leu Val Arg Ile Ile Ser Phe Leu Ile
1 5 10 15
<210> 74
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 74
Gly Asp Met Glu Asp Val Leu Leu Asn Cys Thr Leu Leu Lys Arg
1 5 10 15
<210> 75
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 75
Ser Ser Arg Phe Arg Phe Trp Gly Ala Leu Val Cys Ser Met Asp
1 5 10 15
<210> 76
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 76
Ser Cys Arg Phe Ser Arg Val Ala Val Thr Tyr Arg Phe Ile Thr
1 5 10 15
<210> 77
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 77
Leu Leu Asn Ile Pro Ser Pro Ala Val Trp Met Ala Arg Asn Thr
1 5 10 15
<210> 78
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 78
Met Ala Gln Ser Arg Leu Thr Ala Thr Ser Ala Ser Arg Val Gln
1 5 10 15
<210> 79
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 79
Ala Ile Leu Leu Ser Gln Pro Pro Lys Gln Leu Gly Leu Arg Ala
1 5 10 15
<210> 80
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 80
Pro Ala Asn Thr Pro Leu Ile Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Gly
1 5 10 15
<210> 81
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 81
Phe His His Ile Cys Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Thr Ser Gly
1 5 10 15
<210> 82
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽
<400> 82
Asp Pro Pro Ala Ser Ala Phe Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val
1 5 10 15
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<211> 15
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<220>
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肽
<400> 83
Ser His Leu Thr Gln Pro Ala Asn Leu Asp Lys Lys Ile Cys Ser
1 5 10 15
<210> 84
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 84
Asn Gly Gly Ser Cys Tyr Val Ala Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ser Cys Asn Pro Ser Lys
20
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<220>
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<400> 85
Met Trp Thr Leu Lys Ser Ser Leu Val Leu Leu Leu Cys Leu Thr
1 5 10 15
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<211> 15
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<220>
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Cys Ser Tyr Ala Phe Met Phe Ser Ser Leu Arg Gln Lys Thr Ser
1 5 10 15
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<211> 15
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<220>
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<400> 87
Glu Pro Gln Gly Lys Val Pro Cys Gly Glu His Phe Arg Ile Arg
1 5 10 15
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 88
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 89
Leu Trp Leu Leu Phe Ala Val Val Pro Phe Val Ile Leu Lys Cys
1 5 10 15
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<211> 15
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 90
Gln Arg Asp Ser Glu Lys Asn Lys Val Arg Met Ala Pro Phe Phe
1 5 10 15
<210> 91
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 91
Leu His His Ile Asp Ser Ile Ser Gly Val Ser Gly Lys Arg Met Phe
1 5 10 15
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<220>
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肽
<400> 92
Glu Ala Tyr Tyr Thr Met Leu His Leu Pro Thr Thr Asn Arg Pro
1 5 10 15
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<220>
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肽
<400> 93
Lys Ile Ala His Cys Ile Leu Phe Asn Gln Pro His Ser Pro Arg
1 5 10 15
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<211> 15
<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 94
Ser Asn Ser His Ser His Pro Asn Pro Leu Lys Leu His Arg Arg
1 5 10 15
<210> 95
<211> 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 95
Ser His Ser His Asn Arg Pro Arg Ala Tyr Ile Leu Ile Thr Ile
1 5 10 15
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<211> 15
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 96
Leu Pro Ser Lys Leu Lys Leu Arg Thr His Ser Gln Ser His His
1 5 10 15
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 97
Asn Pro Leu Ser Arg Thr Ser Asn Ser Thr Pro Thr Asn Ser Phe Leu
1 5 10 15
Met Thr Ser Ser Lys Pro Arg
20
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 98
Ser Ser Ser Leu Gly Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg His Glu
1 5 10 15
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 99
Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Ile Asn Phe Arg Val Met Ala Cys
1 5 10 15
<210> 100
<211> 15
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<220>
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肽
<400> 100
Thr Phe Lys Gln His Ile Glu Leu Arg Gln Lys Ile Ser Ile Val
1 5 10 15
<210> 101
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 101
Pro Arg Lys Leu Cys Cys Met Gly Pro Val Cys Pro Val Lys Ile
1 5 10 15
<210> 102
<211> 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 102
Ala Leu Leu Thr Ile Asn Gly His Cys Thr Trp Leu Pro Ala Ser
1 5 10 15
<210> 103
<211> 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 103
Met Phe Val Phe Cys Leu Ile Leu Asn Arg Glu Lys Ile Lys Gly
1 5 10 15
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<211> 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 104
Gly Asn Ser Ser Phe Phe Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ser Phe Gln
1 5 10 15
<210> 105
<211> 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 105
Asn Cys Cys Gln Cys Phe Gln Cys Arg Thr Thr Glu Gly Tyr Ala
1 5 10 15
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<220>
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肽
<400> 106
Val Glu Cys Phe Tyr Cys Leu Val Asp Lys Ala Ala Phe Glu Cys Trp
1 5 10 15
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20
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 107
Met Glu Pro His Thr Val Ala Gln Ala Gly Val Pro Gln His Asp
1 5 10 15
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 108
Leu Gly Ser Leu Gln Ser Leu Leu Pro Arg Phe Lys Arg Phe Ser
1 5 10 15
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
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<400> 109
Cys Leu Ile Leu Pro Lys Ile Trp Asp Tyr Arg Asn Met Asn Thr
1 5 10 15
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<223> 人工序列的描述：合成
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<400> 110
Ala Leu Ile Lys Arg Asn Arg Tyr Thr Pro Glu Thr Gly Arg Lys Ser
1 5 10 15
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<400> 111
Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile
1 5
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 112
Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys Leu
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 113
Val Leu Ser Arg Ile Lys
1 5
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<211> 7
<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 114
Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys
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<220>
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<400> 115
Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys Leu
1 5 10
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
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<400> 116
Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile
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<210> 117
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 117
Glu Thr Glu Ser His
1 5
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<211> 6
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
6xHis标签
<400> 118
His His His His His His
1 5

Claims (20)

1.一种改善具有良性前列腺增生(BPH)的男性的性功能的方法，所述方法包括将治疗有效量的包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu中的氨基酸序列的肽施用于所述男性。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽和载剂。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述肽施用多于一次。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽，所述肽具有至少一个并且至多25个侧接SEQ ID NO.66的N-末端或C-末端的另外的氨基酸。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述肽通过选自以下的方法施用：口服、皮下、皮内、鼻内、静脉内、前列腺内、肌内、鞘内、鼻内、肿瘤内、局部和经皮。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述方法与对照相比使性功能改善超过约18％。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述方法与对照相比使性功能改善超过约50％。
8.如权利要求6所述的方法，其中所述方法与对照相比使性功能改善超过约100％。
9.如权利要求1所述的方法，还包括将选自以下的另外的治疗剂施用于哺乳动物：5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂、睾酮、选择性雌激素受体调节剂(SERM)以及它们的混合物。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂包括西地那非、他达拉非、伐地那非及其药学上可接受的盐或溶剂化物。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述选择性雌激素受体调节剂(SERM)包括可洛米芬、恩氯米芬及其药学上可接受的盐或溶剂化物。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述肽作为注射剂和/或输注剂施用一次或两次。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述肽的施用之间的时间段可以在约2个月至约10年、或约8个月至约4年、或约一年至约两年之间变化。
14.如权利要求1所述的方法，其中改善性功能包括消除选自以下的性机能障碍、减少所述性机能障碍的影响、或缓解所述性机能障碍：性欲望降低、勃起障碍、早泄、延迟或抑制射精、延迟高潮、性快感缺乏以及它们的组合。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述男性无针对BPH的医学或手术治疗的既往史。
16.如权利要求15所述的方法，其中与有针对BPH的医学或手术治疗的既往史并且接受相同治疗有效量的包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列的肽的男性相比，所述方法使性功能改善超过约10％。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述方法使性功能改善超过约50％。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述方法使性功能改善超过约100％。
19.如权利要求1所述的方法，其中使用至少一种标准化问卷来评估男性的性功能的所述改善。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述至少一种标准化问卷选自简易男性性功能调查表、国际勃起功能指数、男性性健康问卷和国际尿失禁协会男性简表。
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