CN110368468B - 一种具有抗污染损伤作用的组合物及制备方法、应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药和化妆品领域，特别涉及一种具有抗污染损伤作用的组合物及制备方法、应用。该组合物包括以下重量份数的原料：红景天1‑24份、高良姜1‑24份、银杏叶1‑24份和葡萄籽1‑24份。经试验验证本发明组合物可以调控苯并芘和PM2.5空气污染引起的多环芳烃通路相关因子，降低CYP1A1表达、清除自由基，降低活性氧ROS水平，修复氧化损伤，同时抑制炎症因子IL‑1B产生，并降低基质金属蛋白酶MMP1表达，因此可应用到因PM2.5空气污染引起的皮肤、呼吸道及肺部损伤。

Description

一种具有抗污染损伤作用的组合物及制备方法、应用
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种具有抗污染损伤作用的组合物及制备方法、应用。
背景技术
近年来，空气污染的形势日益严峻，致使污染对健康的威胁日益加重。空气污染危害人体呼吸系统健康、损害人的心肺功能外，还对裸露在外的人体最大器官—皮肤的健康造成日积月累的危害。根据权威学术研究论文报道，空气中雾霾的细小颗粒，吸附在皮肤及黏膜表面，导致黏膜炎症的产生和皮肤过敏老化等系列问题。随着人们生活水平的提高及健康意识的加强，越来越多的消费者重视污染的损伤。
臭氧、紫外和香烟烟雾是氧化的重要介质，引起皮肤和呼吸道黏膜产生大量的氧化鲨烯会导致细胞炎症产生；水溶性的颗粒物和灰尘，如公路粉尘、空调过滤器粉尘和PM2.5对角质细胞有潜在的细胞毒性。紫外辐射和环境毒素激活芳香烃受体信号，激活CYP1A1转录表达，参与黑色素细胞、角质细胞和成纤维细胞间的信号串扰，产生皮肤色斑和细胞氧化损伤色斑；柴油机尾气的纳米颗粒增加皮肤细胞中炎症因子IL-1\6\8和TNF的表达，导致细胞系统的基因反应过度。综上分析，大气污染从以下3个途径对皮肤和消化系统的黏膜造成危害：①介导ROS产生，从而引起一系列的反应，如干燥、屏障破坏、炎症反应及早衰等；②和细胞表面相关受体结合，激活相关通路，引起胶原蛋白等降解，导致皮肤早衰；③激活多环芳香烃受体，通过一系列途径产生细胞毒性。
目前，市面上的抗污产品，通常只是侧重其中一种途径，抗污染损伤效果不理想，因此，急需一种综合调控、抗污染损伤功效显著的组合物。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗污染损伤的组合物及其制备方法、应用。本发明抗污染组合物具有调控AHR通路、降低氧化损伤、抑制炎症产生和胶原蛋白降解的三重功效，抗污染损伤功效显著。
为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种具有抗污染损伤作用的组合物，包括以下重量份数的原料：
红景天1-24份、高良姜1-24份、银杏叶1-24份和葡萄籽1-24份。
一些实施方案中，所述组合物包括以下重量份数的原料：红景天2.4～9.6份、高良姜4～7.2份、银杏叶4.8～8份和葡萄籽2.4～9.6份。
一些具体实施例中，所述组合物包括以下重量份数的原料：
红景天6份、高良姜6份、银杏叶6份和葡萄籽6份。
一些具体实施例中，所述组合物包括以下重量份数的原料：
红景天2.4份、高良姜4.8份、银杏叶7.2份和葡萄籽9.6份。
一些具体实施例中，所述组合物包括以下重量份数的原料：
红景天9.6份、高良姜7.2份、银杏叶4.8份和葡萄籽2.4份。
一些具体实施例中，所述组合物包括以下重量份数的原料：
红景天4份、高良姜4份、银杏叶8份和葡萄籽8份。
本发明提供的组合物还包括填料；所述填料为药学或化妆品上可接受的添加剂。
一些实施方案中，所述填料为药学上可接受的添加剂。本发明中，对药学上可接受的添加剂的种类没有特殊限制，麦芽糊精、环糊精、微晶纤维素、甘露醇、木糖醇等本领域熟知的种类即可。
一些实施方案中，所述填料为化妆品上可接受的添加剂。本发明中，对化妆品上可接受的添加剂的种类没有特殊限制，甘油、丙二醇、丁二醇、聚乙二醇、羟乙基纤维素等本领域熟知的种类即可。
本发明还提供了所述的组合物的制备方法，包括：
取红景天、高良姜、银杏叶和葡萄籽混合后以70％乙醇加热提取，过滤，浓缩，干燥，获得所述组合物。
一些实施方案中，所述加热提取为加入6倍原料总重量的70％乙醇，60～75℃加热1～3小时。
本发明还提供了所述组合物在制备具有抗污染损伤作用的药物或化妆品中的应用。
其中，所述污染损伤包括苯并芘和/或PM2.5空气污染引起的皮肤、呼吸道及肺部损伤。
具体地，所述抗污染损伤作用包括降低苯并芘诱导的角质层细胞和成纤维细胞的CYP1A1表达、清除自由基、降低活性氧ROS水平、修复氧化损伤、抑制炎症因子IL-1B产生和降低基质金属蛋白酶MMP1表达。
本发明还提供一种具有抗污染损伤作用的药物，包括本发明组合物以及药学上可接受的添加剂；该组合物包括以下重量份数的原料：
红景天1-24份、高良姜1-24份、银杏叶1-24份和葡萄籽1-24份。
本发明中，药物的剂型可以为片剂、胶囊或颗粒剂，也可以是药学领域其他常见的剂型。
本发明还提供一种具有抗损伤作用的化妆品，包括本发明组合物以及化妆品上可接受的添加剂；该组合物包括以下重量份数的原料：
红景天1-24份、高良姜1-24份、银杏叶1-24份和葡萄籽1-24份。
本发明中，化妆品的剂型可以为乳类、霜类或液体类，也可以是化妆品领域其他常见的剂型。
一种具有抗污染损伤作用的组合物及制备方法、应用。该组合物包括以下重量份数的原料：红景天1-24份、高良姜1-24份、银杏叶1-24份和葡萄籽1-24份。经试验验证本发明组合物可以调控苯并芘和PM2.5空气污染引起的多环芳烃通路相关因子，降低CYP1A1表达、清除自由基，降低活性氧ROS水平，修复氧化损伤，同时抑制炎症因子IL-1B产生，并降低基质金属蛋白酶MMP1表达，因此可应用到因PM2.5空气污染引起的皮肤、呼吸道及肺部损伤以及苯并芘污染引起的皮肤、呼吸道及肺部损伤。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示实施例1～4和比较例1～8组合物对二氧化硅损伤细胞模型的细胞活性影响；
图2示实施例1～4和比较例1～8组合物对苯并芘细胞模型的细胞活性影响；
图3示实施例1～4和比较例1～8组合物对AHR通路中AHRR相对含量变化；
图4示实施例1～4和比较例1～8组合物对AHR通路中CYP1A1相对含量变化；
图5示实施例1～4和比较例1～8组合物对炎症因子IL-1β相对含量变化；
图6示实施例1～4和比较例1～8组合物对基质金属蛋白酶MMP1相对含量变化；
图7示实施例1～4和比较例1～8组合物的DPPH的自由基清除率。
具体实施方式
本发明公开了一种具有抗污染损伤作用的组合物及制备方法、应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1(1:1:1:1)
由下述重量份的原料制备而成：
红景天6份、高良姜6份、银杏叶6份和葡萄籽6份。
制备方法：取红景天、高良姜、银杏叶和葡萄籽加70％乙醇，料液比1∶10，80℃条件下，提取3小时，85℃条件下旋蒸浓缩，70℃烘箱中烘干4h，所得提取物浸膏为本发明组合物。
实施例2(1:2:3:4)
由下述重量份的原料制备而成：
红景天2.4份、高良姜4.8份、银杏叶7.2份和葡萄籽9.6份。
制备方法同实施例1。
实施例3(4:3:2:1)
由下述重量份的原料制备而成：
红景天9.6份、高良姜7.2份、银杏叶4.8份和葡萄籽2.4份。
制备方法同实施例1。
实施例4(1:1:2:2)
由下述重量份的原料制备而成：
红景天4份、高良姜4份、银杏叶8份和葡萄籽8份。
制备方法同实施例1。
比较例1
由下述重量份的原料制备而成：
高良姜8份、银杏叶8份和葡萄籽8份。
制备方法同实施例1。
比较例2
由下述重量份的原料制备而成：
红景天8份、银杏叶8份和葡萄籽8份。
制备方法同实施例1。
比较例3
由下述重量份的原料制备而成：
高良姜8份、红景天8份和葡萄籽8份。
制备方法同实施例1。
比较例4
由下述重量份的原料制备而成：
高良姜8份、银杏叶8份和红景天8份。
制备方法同实施例1。
比较例5：单用红景天
红景天提取物的制备方法：取红景天用粉碎机进行粉碎加70％乙醇，红景天和70％乙醇的料液比1∶10，80℃条件下，提取3小时，85℃条件下旋蒸浓缩，70℃烘箱中烘干4h，所得红景天的提取物浸膏。
比较例6：单用高良姜
高良姜提取物的制备方法：取高良姜用粉碎机进行粉碎加70％乙醇，高良姜和70％乙醇的料液比1∶10，80℃条件下，提取3小时，85℃条件下旋蒸浓缩，70℃烘箱中烘干4h，所得高良姜的提取物浸膏。
比较例7：单用银杏叶
银杏叶提取物的制备方法：取银杏叶用粉碎机进行粉碎加70％乙醇，银杏叶和70％乙醇的料液比1∶10，80℃条件下，提取3小时，85℃条件下旋蒸浓缩，70℃烘箱中烘干4h，所得银杏叶的提取物浸膏。
比较例8：单用葡萄籽
葡萄籽提取物的制备方法：取葡萄籽用粉碎机进行粉碎加70％乙醇，葡萄籽和70％乙醇的料液比1∶10，80℃条件下，提取3小时，85℃条件下旋蒸浓缩，70℃烘箱中烘干4h，所得葡萄籽的提取物浸膏。
实施例5功效评价试验
一、细胞实验溶液试剂配制：
苯并芘：用含有血清培养基配制苯并芘终浓度为10uM的培养基，10ml于15ml离心管中，放入冰箱保存备用。
微米二氧化硅(micro-SiO2)：选购粒径为1-2μm的二氧化硅作为PM2.5的类似物，用DMSO配置为2％(w/v)的母液，用含有血清的培养基配置终浓度为10ug/ml。
提取物：分别取实施例1～4和比较例1～8的组合物，用含有血清培养基配制一定终浓度(0.5mg/ml)的培养基2ml，于离心管中，放入冰箱保存备用。
配制mtt溶液(配制5ml浓度为5mg/ml的mtt溶液)：称取0.025gmtt粉末置于15ml离心管中，加入PBS至5ml，盖上盖子，振荡均匀，封口，用锡纸包紧放入冰箱备用。
二、二氧化硅模拟PM2.5细胞实验
(1)按照铺板设计，往96孔板中调零孔和PBS孔加100μL无菌PBS填充；取对数期的细胞，重复细胞传代步骤，然后进行细胞计数(细胞计数÷4×10000个/ml)，调整细胞悬液浓度为70000个/ml。每孔加入100μL细胞悬液；把培养板放入37摄氏度培养箱进行细胞培养，待次日贴壁后给药。
(2)取出96孔板，吸走原有的培养液，按设置的铺板顺序从上到下，从左到右加入前一天配制好的二氧化硅的培养基100μL，4h之后，吸走含二氧化硅的培养基，加入含提取物(即实施例1～8和比较例1～4的组合物)的培养基，按设置的铺板顺序从上到下，从左到右加入前一天配制好的不同实施例和比较例的组合物100μL；细胞放入培养箱培养24小时。统计细胞增殖情况。
(3)MTT测试
药物作用24h后，吸走原有的培养基，每孔加入20μL前一天配制好的mtt溶液，放进培养箱培养4小时。终止培养，小心吸走孔内培养液，每孔加入150μLDMSO，把板子前后左右摇晃数次。用酶标仪检测OD-490mm各孔的吸光度A值。计算细胞活力：细胞活力＝(药物组A值-调零孔A值)/(对照孔A值-调零孔A值)×100％。
结果见图1，与模型组相比，本发明组合物实施例1～4效果对二氧化硅处理后的细胞的增殖具有极显著的促进作用(P<0.05或P<0.0l)，同时，实施例1～4效果均明显优于比较例1～8。
三、苯并芘细胞实验
(1)按照铺板设计，往96孔板中调零孔和PBS孔加100μL无菌PBS填充；取对数期的细胞，重复细胞传代步骤，然后进行细胞计数(细胞计数÷4×10000个/ml)，调整细胞悬液浓度为70000个/ml。每孔加入100μL细胞悬液；把培养板放入37摄氏度培养箱进行细胞培养，待次日贴壁后给药。
(2)取出96孔板，吸走原有的培养液，按设置的铺板顺序从上到下，从左到右加入前一天配制好的苯并芘的培养基100μL，4h之后，吸走含苯丙芘培养基，分别加入含提取物(即实施例1～4和比较例1～8的组合物)的培养基，按设置的铺板顺序从上到下，从左到右加入前一天配制好的不同实施例和比较例的组合物100μL；细胞放入培养箱培养24小时，统计细胞增殖情况。
(3)MTT测试
药物作用24h后，吸走原有的培养基，每孔加入20μL前一天配制好的mtt溶液，放进培养箱培养4小时。终止培养，小心吸走孔内培养液，每孔加入150μLDMSO，把板子前后左右摇晃数次。用酶标仪检测OD-490mm各孔的吸光度A值。计算细胞活力：细胞活力＝(药物组A值-调零孔A值)/(对照孔A值-调零孔A值)×100％。
结果见图2，组合物样品可明显的提高苯并芘处理过的hacat细胞活性，差异有显著性(P<0.05或P<0.0l)，其中实施例1～4效果均优于比较例1～8。
四、qPCR检测
重复苯并芘细胞实验(1)和(2)步骤，24h之后收集细胞，对不同处理组，AHRR\CYP1A1\IL-1B\MMP1指标在mRNA水平相对表达量进行测试。
具体步骤为总RNA提取、逆转录和定量PCR测试，最后利用ΔΔCT法进行数据分析，结果见图3～6。
由图3～4可知，本发明组合物能调节AHRR通路的AHRR和CYP1A1的表达，具体为，促进AHRR拮抗蛋白的表达，抑制AHR结合进入细胞核，并显著降低CYP1A1的表达，实施例的效果优于比较例。
由图5-6可知，本发明组合物能抑制污染物引起的炎症因子IL-1B和基质金属蛋白酶MMP1的表达，其中实施例1～4效果均优于比较例1～8。
五、DPPH实验
DPPH实验溶液配制
(1)0.1mmol/L DPPH溶液：称取0.00394gDPPH粉末置于棕色的容量瓶中，用无水乙醇溶解，并滴定至100mL。(避光，0～4度保存，最好现配现用)
(2)不同浓度的样品溶液：作为储备液保存于4℃冰箱中，用时逐级稀释，用缓冲液将样品配置成不同浓度。(1mL)
DPPH实验步骤(避光操作)：
1)分别按顺序将不同浓度的样品溶液150uL到96孔板中；
2)按顺序将配置好的0.1mmol/LDPPH 150uL溶液加到96孔板中；
3)盖上盖子，用锡箔纸将96孔板密封好，室温避光放置30min；
4)在酶标仪517nm处测定各孔的吸光度OD517；
5)DPPH清除率＝【1-(OD样-OD空)/OD参】×100％。
式5)中：OD参—是指含有用于溶解样品的溶剂、DPPH溶液的体系的吸光度值；OD样—是指含有样品、DPPH溶液的体系的吸光度值；OD空—是指含有样品、无水乙醇的体系的吸光度值。计算DPPH清除率，结果见图6。
如图7所示，本发明组合物能有效地提高自由基的清除率，清除率达80％及以上，其中实施例1～4效果均优于比较例1～8。
由以上实验结果可知，本发明组合物具有调控AHR通路、降低氧化损伤、抑制炎症产生和胶原蛋白降解的三重功效，能够有效抵御污染侵害和修复污染对皮肤的损伤。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种具有抗污染损伤作用的组合物，其特征在于，由以下重量份数的原料组成：
红景天2.4~9.6份、高良姜4~7.2份、银杏叶4.8~8份和葡萄籽2.4~9.6份；
所述组合物的制备方法为：取红景天、高良姜、银杏叶和葡萄籽混合后以70%乙醇加热提取，过滤，浓缩，干燥，获得所述组合物。
2.权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括：
取红景天、高良姜、银杏叶和葡萄籽混合后以70%乙醇加热提取，过滤，浓缩，干燥，获得所述组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述加热提取为加入6倍原料总重量的70%乙醇，60~75℃加热1~3小时。
4.权利要求1所述的组合物在制备具有抗污染损伤作用的药物或化妆品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述污染损伤包括苯并芘和/或PM2.5空气污染引起的皮肤损伤 。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抗污染损伤作用包括降低苯并芘诱导的角质层细胞的CYP1A1表达、清除自由基、降低活性氧ROS水平、修复氧化损伤、抑制炎症因子IL-1B产生和降低基质金属蛋白酶MMP1表达。
7.一种具有抗污染损伤作用的药物，其特征在于，包括权利要求1所述的组合物以及药学上可接受的添加剂；所述药物的剂型为片剂、胶囊或颗粒剂。
8.一种具有抗污染损伤作用的化妆品，其特征在于，包括权利要求1所述的组合物以及化妆品上可接受的添加剂；所述化妆品的剂型为乳类、霜类或液体类。
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