CN110358847B - 一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点及其引物组合和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于近交系小鼠品系遗传背景鉴定与遗传污染检测领域，涉及一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点及其引物组合和应用。该SNP位点包括11个针对BALB/c品系的特异性识别位点、73个识别除BALB/c外某品系的特征位点以及12个通用性位点，综合96个SNP位点结果，能够精确反映被试小鼠个体与特定小鼠近交系背景的吻合程度，全面地检测被试小鼠个体基因组的遗传性状及变异情况，实现小鼠遗传质量状态监控及实验稳定性质量监控。本发明还对SNP引物在后续检测中进行了反应条件优化，确保检测灵敏、特异、高效。
Description
技术领域
本发明属于近交系小鼠品系遗传背景鉴定与遗传污染检测领域，特别涉及一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点及其引物组合。
背景技术
用于实验动物遗传背景质量控制检测的方法主要有3类：生化标记分析法、微卫星DNA、SNP(单核苷酸的多态性)检测等。目前国际所规定的遗传检测方法是生化标记分析法，这一方法是检测同工酶或异构蛋白酶的变化来推测相应的基因变化；使用此方法进行检测，存在准确度低、灵敏度低、检测位点有限、反映遗传概貌有限等方法缺陷。分子遗传标记可以对实验动物进行更精细的基因分析，是一种更加完善的实验动物质量检测手段；其中SNP检测作为分子遗传标记的有效技术手段，在基因组水平上检测由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，即SNP所表现的多态性。这一方法可以监测到单个碱基的变异，具有密度高、代表性强、遗传稳定性等特点，能够全面地反映被试个体基因组的遗传及变异情况。
KASP法是竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR)的简称，该方法在高灵敏度荧光检测的基础上，对目标SNPs进行双等位基因的精准分型。与传统Taqman荧光标记技术不同的是，此种方法无需对靶点即特异性引物/探针进行标记，不需要根据每个SNP位点合成特异的荧光引物，其独特的ARM PCR原理，让所有的位点检测最终都使用通用荧光引物扩增，大大降低了实验成本。优化的PCR体系可满足不同位点高通量反应的需求，既有金标准的准确，又降低了使用成本，保持了高通量检测的便利，比Taqman具有更好的位点适应性。KASP技术将传统检测等位基因的2个反应合成了1个反应，成本更低。SNPs检测不但弥补了传统检测流程需要完成PCR、切胶回收、测序比对等复杂流程耗时较长的缺点，而且大大节省了测序的费用，实现了成本的有效控制。
中国专利ZL2018104752119，一种近交系遗传质量监控的SNP快速检测方法和SNP位点及其引物，该专利提供了一种SNP快速检测方法，但是该方法无法针对性地确定某个品系(如BALB/cJ小鼠)的SNP检测位点；此外关于同一个位点可以有很多不同的引物，即使确定了位点，也不能保障后续的引物都可以正常应用，更不能保证检测结果特异且检测信号好，所以得到引物后续反应条件也需要进一步的优化。此外，关于特定品系的特异性位点无法提供备选引物。
发明内容
针对现有技术中存在的缺点与不足，本发明提供了一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点及其引物组合和应用，在全基因组范围内，针对特定近交系小鼠品系(BALB/cJ)的遗传多态性展开检测；在这一检测组合中，每一个检测点都能分别检测出样本与两个特定小鼠品系是纯合，杂合或无关联性/检测阴性；且检测的各样本点均匀分布于特定近交系小鼠的基因组中。综合96个位点结果，能够精确反映被试小鼠个体与特定小鼠近交系背景的吻合程度，全面地检测被试小鼠个体基因组的遗传性状及变异情况，从而建立一种高效快速检测实验动物遗传稳定性的方法，实现小鼠遗传质量状态监控及实验稳定性质量监控。
本发明在全基因组范围内筛选出了一套高效、特异性的BALB/c SNP位点组合(共96个位点)及其引物，可用于快速检测BALB/c近交系小鼠的遗传背景，并对相关品系遗传质量状态进行监控。
本发明建立了一种高效、特异性的SNP位点组合，可用于快速检测BALB/cJ近交系小鼠的遗传背景，以及监控遗传质量状态。
本发明的目的在于提供一种近交系遗传质量监控的SNP位点。
本发明的目的在于提供一种近交系遗传质量监控的SNP位点引物。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点，其特征在于，所述SNP位点如下：
其中，BALB/c品系特异性识别位点标为“特异位点”，识别除BALB/c外某品系的特征位点标为“*”，通用性位点未加备注。
一组用于上述的BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点的引物组合，如SEQID NO.1至SEQ ID NO.288所示。
一组用于上述的BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点的引物组合，包括(1)BALB/c品系特异性识别位点的备选引物序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.33所示；(2)识别除BALB/c外某品系的特征位点的引物序列如SEQ ID NO.70至SEQ ID NO.288所示；(3)通用性位点的引物序列如SEQ ID NO.34至SEQ ID NO.69所示。
本发明还公开了所述的BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点在遗传质量监控中的应用。
本发明进一步公开了一种BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP检测方法，是：使用SNP位点的引物组合对样本SNP进行扩增，扩增产物根据样本SNP模板的碱基组成，分别显示两组不同信号并可被仪器检出，综合全部位点信号，对样本的遗传背景进行鉴定，如果样本遗传质量出现杂交污染，可进一步对检测结果进行比对，识别可能的污染源/杂交背景；对SNP位点的引物组合扩增的反应条件如下：
本发明具有的有益效果如下：
本发明使用的BALB/cJ SNP panel共含有96个位点，除用于BALB/cJ品系常规遗传质量监控外，可用于与129S1/SvImJ、A/J、C57BL/6J、CBA/CaJ、DBA/1J、FVB/NJ、NOD/LtJ品系的区分，同时，用于相关突变品系的常规遗传质量监控。
本发明的SNP分型方案仅需要96个SNP位点即可用于BALB/cJ近交系小鼠的遗传质量监控。本方法无需对靶点即特异性引物/探针进行标记，不需要根据每个SNP位点合成特异的荧光引物，让所有的位点检测最终都使用通用荧光引物扩增；对目标SNPs进行双等位基因分型，将传统检测等位基因的2个反应合成了1个反应，操作简便、成本降低。对BALB/cJ近交系小鼠的常规质量监控具有重要的意义。
附图说明
图1为位点rs3023718在引物优化前进行基因型归属检测结果示意图；
图2为位点rs3023718在引物优化后进行基因型归属检测结果示意图；
图3为位点rs3023766在引物优化前进行基因型归属检测结果示意图；
图4为位点rs3023766在引物优化后进行基因型归属检测结果示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1：SNP panel设计
1、确定SNP panel中包含的近交品系
确定7个近交系来建立BALB/cJ近交品系的SNP检测panel(如表1)。在后续实验中BALB/cJ品系SNP panel可用于常规SNP检测，用于与129S1/SvImJ、A/J、C57BL/6J、CBA/CaJ、DBA/1J、FVB/NJ、NOD/LtJ品系的区分，同时，可以用于相关突变品系的常规遗传质量监控。
表1SNP检测panel近交系列表
| 序号 | 品系名称 |
| 1 | 129S1/SvImJ |
| 2 | A/J |
| 3 | C57BL/6J |
| 4 | CBA/CaJ |
| 5 | DBA/1J |
| 6 | FVB/NJ |
| 7 | NOD/LtJ |
2、设计用于区分BALB/cJ近交系与其它品系的特异性位点组合
a)设计目的：用于筛选BALB/cJ品系区别于前述其他品系(129S1/SvImJ、A/J、C57BL/6J、CBA/CaJ、DBA/1J、FVB/NJ、NOD/LtJ)的SNP位点组合，可用于常规SNP检测。
b)设计原则：以染色体为单位，SNP位点组合应涵盖5对及以上的染色体，且每对染色体应含有2个及以上特异性区分位点，则认为该SNP组合可以反映这一近交小鼠品系的特异性遗传特征，即可以将该品系小鼠与其它近交系进行区分。可特异性区分位点：在某一品系中，位点与其它品系位点均不相同。这一设计原则避免了单一SNP检测位点可能因某一个体的突变而丧失其特异性，导致无法与其它品系进行区分，也不能确定是遗传漂变还是品系污染。
在这一设计原则下，根据具体需求，遗传质量监控的频率为1年/次或以上，若出现品系污染，则最长污染周期不超过1年(或相应最短监控周期)，影响小鼠应不超过4代。按照F1代与其它品系配繁，后续小鼠全部与纯背景近交品系回交计算，F2代污染全部染色体，F3污染50％染色体(<＝10条)，F4污染25％染色体(<＝5条)。以此计算，当5条或以上染色体含有特异性位点时，该SNP组合能够将测试小鼠近交系与其它品系有效区分；同时为充分覆盖全基因组各染色体的遗传信息，某一单条染色体上含有2个及以上位点，则最终检测结果具有参考价值，可满足鉴定需要。
c)结果筛选与验证：基于网络公开数据库(Sanger,Broad Institute,NCBI)近100个近交品系的SNP相关数据与前述8个相关近交品系的SNP位点信息，本实施例设计出一组可以显著区分BALB/cJ近交系与其他品系的特异性位点，该特异性位点组合(共包含11个SNP位点，如表2)散在分布于BALB/cJ的各染色体上，包含BALB/cJ近交系的典型特征，即与129S1/SvImJ、A/J、C57BL/6J、CBA/CaJ、DBA/1J、FVB/NJ、NOD/LtJ品系均不相同，同时，此特异性位点组合应满足在染色体上等间距分布(每条染色体上特异性位点数应不少于2个)，从而满足BALB/cJ品系的验证，同时支持BALB/cJ品系与其他品系遗传信息的有效区分。
表2 11个BALB/cJ近交系的特异性位点
3、设计用于识别除BALB/cJ外某品系的特征位点
SNP位点设计中，包含用于鉴定BALB/cJ以外品系的识别位点(识别除BALB/cJ外某品系的特征位点)，这些特征位点能特异性检测至少一个非BALB/cJ品系，这一设计是为了在BALB/cJ品系检测中鉴定是否杂交，并用于溯源常规遗传质量监控中出现的非BALB/cJ品系的SNP位点。若SNP改变不包含在其他已知品系/所有可能杂交品系的特异性区分位点中，则有可能为突变/遗传漂变。
设计结果：共得到特定的73个特征位点，并列举了各个位点可用于有效区分BALB/cJ近交系小鼠以外的各个品系，73个特征位点与11个BALB/cJ特异识别位点联合使用，效果更优，从而实现遗传质量监控中杂交品系溯源的检测需求。
表3用于杂交品系溯源检测的部分位点列表
4、设计BALB/cJ品系常规遗传质量监控的位点(通用性SNP位点)
a)设计目的：用于BALB/cJ品系常规遗传质量监控。
b)设计原则和设计结果：在上述BALB/cJ品系SNP特异性区分位点等基础上，为满足常规遗传质量监控的要求，其中应包含通用性SNP位点，同时满足每条染色体上通用性SNP检测位点的密度应大于2个且间距相对均匀。基于这一原则，共设计12个通用性SNP位点(如表4中所示为供多品系鉴定分析的通用位点列表)，其中包括可供多品系检测分析的位点(见表5)。
其中，已在‘备注’栏标出BALB/cJ品系特异性识别位点(共11个)，‘*’表示识别除BALB/cJ外某品系的特征位点(共73个)；未加备注的为多个品系的通用性位点(共12个)。
表4供多品系鉴定分析的通用位点列表
表5 96个SNP位点
实施例2：BALB/cJ SNP位点引物设计
SNP位点筛选完成后，SNP位点上下游序列各100bp序列使用编程工具在小鼠基因组序列中进行拉取；5’端引物设计：在SNP位点的上游分别设计20-30bp的引物，在引物的末端分别为SNP的两个突变碱基，引物5’端增加一段约20bp的分别识别不同信号的序列，如FAM及HEX信号；3’设计下游引物，长度约18-28bp。
Tm(℃)在55-65℃之间，GC％在34％-60％之间，共设计引物288条，引物序列见表6，将3条引物同时进行PCR扩增，若体系中产生其中一个信号，则说明样品模板中含有该碱基突变类型。
表6位点引物信息
实施例3：BALB/cJ小鼠的SNP组合分型测试
高通量基因分型及数据分析，使用IntelliQube荧光检测进行读数，使用IntelliScore进行PCR后的数据分析，自动导出基因型进行分析。以129S1/SvImJ小鼠作为对照品系，对BALB/cJ进行96个位点的引物测试基因分型,详见下表7；结果表明BALB/cJ在96个位点中与NCBI上登记的位点信息全部一致，其中特征位点与对照品系(129S1/SvImJ小鼠)存在明显差别，该结果验证了本发明中，用于BALB/cJ背景检测的SNP引物组合可以用于该品系的遗传质量监控。
表7 129S1/SvImJ作为对照的BALB/cJ引物测试结果
实施例4：对BALB/c小鼠个体进行SNP分型鉴定
检测步骤及方法均一致，不同的是样本DNA不同。共选取4品系，包含与BALB/cJGpt遗传背景相似的BALB/cJGpt突变系小鼠进行SNP位点检测，查看小鼠遗传质量情况，结果显示BALB/cJGpt近交系及BALB/cJGpt突变系小鼠位点与NCBI数据库均一致，具体见表8。
表8小鼠样品检测结果
实施例5：引物测试条件优化实施例(两例)：
1.测试例7#(rs3023718):
使用SNP位点rs3023718，通过对BALB/cJ近交后代的检测，比较该SNP位点优化前后实验结果。
该位点特异检测结果(参见表5中所示)：两组测试均使用同一组针对该位点的SNP检测引物(参见表5中所示的该位点引物)：
本位点测试条件优化：测试温度从55-61℃温度区间调整为优化后的62-68℃温度区间。效果如下：未优化，温度区间55-61℃，测试结果不能分辨待测样本在该位点基因型归属，如图1所示。优化后，温度区间调整为62-68℃，测试结果有显著改善，能明确分离阴性对照(黑色样品点，信号均小于0.10)，Hex阳性纯合(X:小于0.15，Y:大于0.30)，Fam阳性纯合(X:大于0.20，Y:小于0.15)；结果符合仪器的信号检出限为>0.15的要求。在此测试条件下，来自前述两近交系杂合小鼠的多个样品(已知样本)，在这一SNP位点(rs3023718)可被鉴定出杂合遗传背景(图2，坐标：X:0.25，Y:0.20附近样本点群落)。结论：优化后，该引物及测试条件可以满足这一检测位点的测试要求。
2.测试例10#(rs3023766)：
使用通用性SNP位点：位点rs3023766，通过对BALB/cJ近交后代的检测，比较该SNP位点优化前后实验结果。
该位点特异检测结果(参见表5中所示)：两组测试均使用同一组针对该位点的SNP检测引物(参见表5中所示的该位点引物)：
本位点测试条件优化如下：测试温度从55-61℃温度区间调整为优化后的62-68℃温度区间，效果如下：未优化时，温度区间55-61℃，Hex与FAM信号(即对应G/C信号)部分在检出限以下(<0.15),测试结果不能分辨待测样本在该位点基因型归属图3所示。
优化后，温度区间调整为62-68℃，测试结果有显著改善，能明确分离阴性对照(X:小于0.10，Y:小于0.10，)，Hex阳性纯合(X:小于0.10，Y:大于0.30)，Fam阳性纯合(X:大于0.30，Y:小于0.10)；结果符合仪器的信号检出限为>0.15的要求。在此测试条件下，来自前述两近交系杂合小鼠的多个样品(已知样本)，在这一SNP位点(rs3023766)可被鉴定出纯合遗传背景(图4，样本点群落，坐标:X：0.35,Y：0.10附近)。结论：优化后，该引物及测试条件可以满足这一检测位点的测试要求。
SEQUENCE LISTING
<110> 江苏集萃药康生物科技有限公司
<120> 一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点及其引物组合和应用
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<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 30
ctccagcacg gacatagaaa gag 23
<210> 31
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 31
gaaggtgacc aagttcatgc ttagctccct ctcctggata ctata 45
<210> 32
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 32
gaaggtcgga gtcaacggat ttagctccct ctcctggata ctatg 45
<210> 33
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 33
gatacagtgg tgaggttgac agaat 25
<210> 34
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 34
gaaggtgacc aagttcatgc tcaagaagca catgatttgg agcaa 45
<210> 35
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 35
gaaggtcgga gtcaacggat tcaagaagca catgatttgg agcag 45
<210> 36
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 36
gccttgtctg ctaaggaaga ttg 23
<210> 37
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 37
gaaggtgacc aagttcatgc taactgctcc aagtcctgta ttga 44
<210> 38
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 38
gaaggtcgga gtcaacggat taactgctcc aagtcctgta ttgg 44
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 39
ttccaaaatc ccatgctttc c 21
<210> 40
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 40
gaaggtgacc aagttcatgc tgtctttcaa tacagaacag gactacac 48
<210> 41
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 41
gaaggtcgga gtcaacggat tgtctttcaa tacagaacag gactacat 48
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 42
tgctgccagt tgaatatgtg c 21
<210> 43
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 43
gaaggtgacc aagttcatgc tatttcctgg aaaaagacac tgtatg 46
<210> 44
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 44
gaaggtcgga gtcaacggat tatttcctgg aaaaagacac tgtata 46
<210> 45
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 45
tctccaggtc agccttctca cta 23
<210> 46
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 46
gaaggtgacc aagttcatgc tcctacaaaa agcttggctt ctctta 46
<210> 47
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 47
gaaggtcgga gtcaacggat tctacaaaaa gcttggcttc tcttc 45
<210> 48
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 48
ggtattgcat taaataatgg agaaatg 27
<210> 49
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 49
gaaggtgacc aagttcatgc tcttagagag tggcaatggc agta 44
<210> 50
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 50
gaaggtcgga gtcaacggat tcttagagag tggcaatggc agtg 44
<210> 51
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 51
caggaggaag aaaggaaacg aa 22
<210> 52
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 52
gaaggtgacc aagttcatgc ttcaaagtct tccaaaagtt ttcac 45
<210> 53
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 53
gaaggtcgga gtcaacggat tcaaagtctt ccaaaagttt tcat 44
<210> 54
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 54
caaaccatcc ctttacttct gt 22
<210> 55
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 55
gaaggtgacc aagttcatgc tgaacaaggc gcatgtggaa a 41
<210> 56
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 56
gaaggtcgga gtcaacggat tgaacaaggc gcatgtggaa c 41
<210> 57
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 57
caaaatgggt gcatttcaag c 21
<210> 58
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 58
gaaggtgacc aagttcatgc tctcagacca tctataggaa ctgg 44
<210> 59
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 59
gaaggtcgga gtcaacggat tctcagacca tctataggaa ctgc 44
<210> 60
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 60
tgttggagta gtaggccctt c 21
<210> 61
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 61
gaaggtgacc aagttcatgc tgtggtttag ccttaacagt tatgaac 47
<210> 62
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 62
gaaggtcgga gtcaacggat tgtggtttag ccttaacagt tatgaag 47
<210> 63
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 63
actcctaacg gtggtggtgt 20
<210> 64
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 64
gaaggtgacc aagttcatgc tcagttgtac ataacacctt caacat 46
<210> 65
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 65
gaaggtcgga gtcaacggat tcagttgtac ataacacctt caacac 46
<210> 66
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 66
actgaaatct aagagaacct aacat 25
<210> 67
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 67
gaaggtgacc aagttcatgc ttattatctc actgctgtca agtaggc 47
<210> 68
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 68
gaaggtcgga gtcaacggat tgtattatct cactgctgtc aagtagga 48
<210> 69
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 69
gtcattcacc tgaatacagc caga 24
<210> 70
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 70
gaaggtgacc aagttcatgc tgggtgtgac cattctagag tctcagt 47
<210> 71
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 71
gaaggtcgga gtcaacggat tgggtgtgac cattctagag tctcaga 47
<210> 72
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 72
catttgtctt cactccaggg tcta 24
<210> 73
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 73
gaaggtgacc aagttcatgc tggtgctgga aaccacactc aa 42
<210> 74
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 74
gaaggtcgga gtcaacggat tggtgctgga aaccacactc ag 42
<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 75
gagagggtgc tcagcgagta a 21
<210> 76
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 76
gaaggtgacc aagttcatgc tgttccagaa gtaagtgttt gggg 44
<210> 77
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 77
gaaggtcgga gtcaacggat tgttccagaa gtaagtgttt gggc 44
<210> 78
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 78
gtgccaagga aaccccctaa 20
<210> 79
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 79
gaaggtgacc aagttcatgc ttccactgaa ctttaaagag acaaga 46
<210> 80
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 80
gaaggtcgga gtcaacggat ttccactgaa ctttaaagag acaagg 46
<210> 81
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 81
tctaagattt gccactggat ttgtc 25
<210> 82
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 82
gaaggtgacc aagttcatgc ttggagaaag aaaataagca cacg 44
<210> 83
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 83
gaaggtcgga gtcaacggat tttggagaaa gaaaataagc acaca 45
<210> 84
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 84
ccaccacagc ccagcattat 20
<210> 85
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 85
gaaggtgacc aagttcatgc ttgttcagga ggggcactct aac 43
<210> 86
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 86
gaaggtcgga gtcaacggat ttgttcagga ggggcactct aat 43
<210> 87
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 87
tcattccaaa caggagttcc aac 23
<210> 88
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 88
gaaggtgacc aagttcatgc ttagttttga ctaaaactat ggaaga 46
<210> 89
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 89
gaaggtcgga gtcaacggat ttagttttga ctaaaactat ggaagg 46
<210> 90
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 90
attcagattt gacattagtt cttg 24
<210> 91
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 91
gaaggtgacc aagttcatgc tcgccatatt ttatgtggtc aaatgt 46
<210> 92
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 92
gaaggtcgga gtcaacggat tgccatattt tatgtggtca aatgc 45
<210> 93
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 93
aagtgactca aagtgtgctt acaaa 25
<210> 94
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 94
gaaggtgacc aagttcatgc tacagactca agggcacacc tc 42
<210> 95
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 95
gaaggtcgga gtcaacggat tacagactca agggcacacc tt 42
<210> 96
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 96
cagaggagat cttagaaggc tttg 24
<210> 97
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 97
gaaggtgacc aagttcatgc ttgtgaaggc cattatgaat tagctg 46
<210> 98
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 98
gaaggtcgga gtcaacggat ttgtgaaggc cattatgaat tagctc 46
<210> 99
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 99
ggtatctggt atgaaatcac actcct 26
<210> 100
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 100
gaaggtgacc aagttcatgc tgctaactta gtgtgaccag gagaagag 48
<210> 101
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 101
gaaggtcgga gtcaacggat tgctaactta gtgtgaccag gagaagaa 48
<210> 102
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 102
cctctcttag aacacctcca ttctc 25
<210> 103
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 103
gaaggtgacc aagttcatgc tataggatgt gctgtttgga tacg 44
<210> 104
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 104
gaaggtcgga gtcaacggat tataggatgt gctgtttgga taca 44
<210> 105
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 105
ataaatgcta gatgtggtgg atgg 24
<210> 106
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 106
gaaggtgacc aagttcatgc tgccatgact cctaggcagt ctgta 45
<210> 107
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 107
gaaggtcgga gtcaacggat tccatgactc ctaggcagtc tgtc 44
<210> 108
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 108
tgaagttgtg aagagcagag cc 22
<210> 109
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 109
gaaggtgacc aagttcatgc ttagggcatg gtgggactgt t 41
<210> 110
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 110
gaaggtcgga gtcaacggat tttagggcat ggtgggactg ta 42
<210> 111
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 111
gtctgctgac tgcaataacc tctg 24
<210> 112
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 112
gaaggtgacc aagttcatgc tttaccagtt ttggcttaat ttccg 45
<210> 113
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 113
gaaggtcgga gtcaacggat tcttaccagt tttggcttaa tttcca 46
<210> 114
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 114
aatggaatat gggagtgagg ga 22
<210> 115
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 115
gaaggtgacc aagttcatgc ttacagctgt acccctcctg ac 42
<210> 116
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 116
gaaggtcgga gtcaacggat ttacagctgt acccctcctg ag 42
<210> 117
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 117
caacacaatc tcagttccca g 21
<210> 118
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 118
gaaggtgacc aagttcatgc tactagagct gtgtggctga tgta 44
<210> 119
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 119
gaaggtcgga gtcaacggat tactagagct gtgtggctga tgtc 44
<210> 120
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 120
gaagatggga ttgagcatct ctg 23
<210> 121
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 121
gaaggtgacc aagttcatgc tcaggtgcca cagatagtga acat 44
<210> 122
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 122
gaaggtcgga gtcaacggat tcaggtgcca cagatagtga acac 44
<210> 123
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 123
gtaagctatc agaaagctaa gcc 23
<210> 124
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 124
gaaggtgacc aagttcatgc tcaggaaagg gaaggctcac ca 42
<210> 125
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 125
gaaggtcgga gtcaacggat tcaggaaagg gaaggctcac cc 42
<210> 126
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 126
ccagcagtgg caaaggatgt g 21
<210> 127
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 127
gaaggtgacc aagttcatgc ttgtgatcct gatgtctgga gtcg 44
<210> 128
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 128
gaaggtcgga gtcaacggat ttgtgatcct gatgtctgga gtca 44
<210> 129
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 129
ccaaaccttt gttgtatcaa cattg 25
<210> 130
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 130
gaaggtgacc aagttcatgc taacccatgt ctgtctgcag tgc 43
<210> 131
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 131
gaaggtcgga gtcaacggat taacccatgt ctgtctgcag tgt 43
<210> 132
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 132
ggacatcgta gagcgtctca gct 23
<210> 133
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 133
gaaggtgacc aagttcatgc taaatactct tgtaggtcag aagttga 47
<210> 134
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 134
gaaggtcgga gtcaacggat taaatactct tgtaggtcag aagttgg 47
<210> 135
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 135
agacagatta ttttcacctt agtgtc 26
<210> 136
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 136
gaaggtgacc aagttcatgc tatggggctc agttgggcg 39
<210> 137
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 137
gaaggtcgga gtcaacggat tgatggggct cagttgggca 40
<210> 138
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 138
tttgtggtgc tgggaatgaa c 21
<210> 139
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 139
gaaggtgacc aagttcatgc taactgtgat gcaatatcag tgctct 46
<210> 140
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 140
gaaggtcgga gtcaacggat tactgtgatg caatatcagt gctcg 45
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 141
gttagcagcc tgcttgcact t 21
<210> 142
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 142
gaaggtgacc aagttcatgc ttagacttgg tcactgtccc atcat 45
<210> 143
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 143
gaaggtcgga gtcaacggat ttagacttgg tcactgtccc atcac 45
<210> 144
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 144
cacctatgct agtagcagct ttcact 26
<210> 145
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 145
gaaggtgacc aagttcatgc tgcttgctaa aaaggtttcc agga 44
<210> 146
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 146
gaaggtcgga gtcaacggat tcttgctaaa aaggtttcca ggc 43
<210> 147
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 147
cacaggccaa atttaaacag aactc 25
<210> 148
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 148
gaaggtgacc aagttcatgc tgcctgcttg ctctttctag gata 44
<210> 149
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 149
gaaggtcgga gtcaacggat tgcctgcttg ctctttctag gatg 44
<210> 150
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 150
cctggggtga tgcttgttct 20
<210> 151
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 151
gaaggtgacc aagttcatgc ttgggaccct ccatgtagtg atg 43
<210> 152
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 152
gaaggtcgga gtcaacggat tctgggaccc tccatgtagt gatt 44
<210> 153
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 153
gtagactgtg attccagacc gct 23
<210> 154
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 154
gaaggtgacc aagttcatgc tctttcaagg aaatggtagg tgtct 45
<210> 155
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 155
gaaggtcgga gtcaacggat tctttcaagg aaatggtagg tgtcg 45
<210> 156
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 156
tgaaagacgc caggaagacc 20
<210> 157
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 157
gaaggtgacc aagttcatgc tacccactat ctatcagtgt gttcc 45
<210> 158
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 158
gaaggtcgga gtcaacggat tacccactat ctatcagtgt gttct 45
<210> 159
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 159
agagttcctg ttgctccatg tc 22
<210> 160
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 160
gaaggtgacc aagttcatgc ttctcttctg atgtcccttc cc 42
<210> 161
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 161
gaaggtcgga gtcaacggat ttctcttctg atgtcccttc cg 42
<210> 162
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 162
cagtcccagc aagctaaaca ct 22
<210> 163
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 163
gaaggtgacc aagttcatgc tccaggaata agctgccttt ct 42
<210> 164
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 164
gaaggtcgga gtcaacggat tccaggaata agctgccttt cc 42
<210> 165
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 165
actaccccac cttagctctg tac 23
<210> 166
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 166
gaaggtgacc aagttcatgc tgacacagct ctccacctct gat 43
<210> 167
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 167
gaaggtcgga gtcaacggat tgacacagct ctccacctct gac 43
<210> 168
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 168
cctgtgttta ctcacaaccg tac 23
<210> 169
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 169
gaaggtgacc aagttcatgc tccatgcctc cttctaactt ctt 43
<210> 170
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 170
gaaggtcgga gtcaacggat tccatgcctc cttctaactt ctc 43
<210> 171
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 171
aggaggctag tgggggtatg 20
<210> 172
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 172
gaaggtgacc aagttcatgc tgtgatacca tttcattagt ttccc 45
<210> 173
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 173
gaaggtcgga gtcaacggat ttgtgatacc atttcattag tttcct 46
<210> 174
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 174
aaagcctgga ttattagaag ca 22
<210> 175
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 175
gaaggtgacc aagttcatgc tcctggtcca agttgcactc g 41
<210> 176
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 176
gaaggtcgga gtcaacggat tcctggtcca agttgcactc a 41
<210> 177
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 177
agaagcctgc caactgtcct c 21
<210> 178
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 178
gaaggtgacc aagttcatgc tgcacatttg taagcagcaa tgag 44
<210> 179
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 179
gaaggtcgga gtcaacggat tcgcacattt gtaagcagca atgaa 45
<210> 180
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 180
aggagtgatg atgtctcaga tgga 24
<210> 181
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 181
gaaggtgacc aagttcatgc tggctcaaaa gttcagagac acag 44
<210> 182
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 182
gaaggtcgga gtcaacggat tggctcaaaa gttcagagac acac 44
<210> 183
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 183
gctttgattt ggctttcctg 20
<210> 184
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 184
gaaggtgacc aagttcatgc ttttagtcgg ccatgaccag g 41
<210> 185
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 185
gaaggtcgga gtcaacggat ttttagtcgg ccatgaccag a 41
<210> 186
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 186
cctttcttcc tggtagagca tt 22
<210> 187
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 187
gaaggtgacc aagttcatgc tgagaggccg cagacagatt cg 42
<210> 188
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 188
gaaggtcgga gtcaacggat tgagaggccg cagacagatt ca 42
<210> 189
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 189
aggcagctct ttctttctgt tgtg 24
<210> 190
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 190
gaaggtgacc aagttcatgc tccacgaggt tctgttaagg ttga 44
<210> 191
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 191
gaaggtcgga gtcaacggat tcacgaggtt ctgttaaggt tgg 43
<210> 192
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 192
gctgttttca ctccagtatt tccat 25
<210> 193
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 193
gaaggtgacc aagttcatgc tgtttgggtc cttttgtgct ca 42
<210> 194
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 194
gaaggtcgga gtcaacggat tgtttgggtc cttttgtgct cg 42
<210> 195
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 195
aggagcacgg aagcagagga 20
<210> 196
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 196
gaaggtgacc aagttcatgc tctcagtggc ttaccactca tagaac 46
<210> 197
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 197
gaaggtcgga gtcaacggat tctcagtggc ttaccactca tagaaa 46
<210> 198
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 198
aatgttgaat tttctagaga gcagg 25
<210> 199
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 199
gaaggtgacc aagttcatgc tgatgtaaca ttcctgtcct caatgt 46
<210> 200
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 200
gaaggtcgga gtcaacggat tgatgtaaca ttcctgtcct caatgc 46
<210> 201
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 201
tgaggtaggg tgtctcaatc aaac 24
<210> 202
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 202
gaaggtgacc aagttcatgc tcagaccaga gccctccctt aag 43
<210> 203
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 203
gaaggtcgga gtcaacggat tcagaccaga gccctccctt aaa 43
<210> 204
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 204
ccctaggaat gtctgggagg a 21
<210> 205
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 205
gaaggtgacc aagttcatgc tgctgcaaca aatgtcttct taggatg 47
<210> 206
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 206
gaaggtcgga gtcaacggat tgctgcaaca aatgtcttct taggata 47
<210> 207
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 207
cattaaggac cagggactga ctcta 25
<210> 208
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 208
gaaggtgacc aagttcatgc taaaaggctg cctgtccccc 40
<210> 209
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 209
gaaggtcgga gtcaacggat taaaaggctg cctgtccccg 40
<210> 210
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 210
ctggtgaaag acacctgtgg g 21
<210> 211
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 211
gaaggtcgga gtcaacggat tatgtctaga gtgcgaagca gtttc 45
<210> 212
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 212
gaaggtgacc aagttcatgc tatgtctaga gtgcgaagca gtttg 45
<210> 213
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 213
gcgagacagt gacacgcaaa 20
<210> 214
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 214
gaaggtgacc aagttcatgc tcaagaaggg atgaagtcag agga 44
<210> 215
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 215
gaaggtcgga gtcaacggat tcaagaaggg atgaagtcag aggg 44
<210> 216
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 216
aatggccgtt ccctcacttg 20
<210> 217
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 217
gaaggtgacc aagttcatgc tgagaccaag gcacaacatc agttc 45
<210> 218
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 218
gaaggtcgga gtcaacggat tgagaccaag gcacaacatc agttt 45
<210> 219
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 219
ccaaaggaaa aaagaagatc aatc 24
<210> 220
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 220
gaaggtgacc aagttcatgc ttgtcttctg tttcctgtat tatcttcg 48
<210> 221
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 221
gaaggtcgga gtcaacggat ttgtcttctg tttcctgtat tatcttcc 48
<210> 222
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 222
gaaagcaact ctgacaaaca ccc 23
<210> 223
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 223
gaaggtgacc aagttcatgc tgcaatagtg aggaaatccc tacg 44
<210> 224
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 224
gaaggtcgga gtcaacggat tgcaatagtg aggaaatccc taca 44
<210> 225
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 225
tcttgtgtcc actctggtgt tctg 24
<210> 226
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 226
gaaggtgacc aagttcatgc ttgaatgcca cagtaataag gagcta 46
<210> 227
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 227
gaaggtcgga gtcaacggat ttgaatgcca cagtaataag gagctg 46
<210> 228
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 228
tccccttagc cattttgtat attcc 25
<210> 229
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 229
gaaggtgacc aagttcatgc tttctacggt ggtgtcttta gggac 45
<210> 230
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 230
gaaggtcgga gtcaacggat tttctacggt ggtgtcttta gggaa 45
<210> 231
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 231
acctgatctt tagaataatg taggga 26
<210> 232
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 232
gaaggtgacc aagttcatgc tttccacatg agcggtgttg ag 42
<210> 233
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 233
gaaggtcgga gtcaacggat tttccacatg agcggtgttg at 42
<210> 234
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 234
cagccttgcc tgtgtgtttc 20
<210> 235
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 235
gaaggtgacc aagttcatgc tagaaggctc ccataagcca gc 42
<210> 236
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 236
gaaggtcgga gtcaacggat tagaaggctc ccataagcca ga 42
<210> 237
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 237
caaggtctgt aaagagccag aaaa 24
<210> 238
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 238
gaaggtgacc aagttcatgc ttgaccttta gtccacgccc act 43
<210> 239
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 239
gaaggtcgga gtcaacggat ttgaccttta gtccacgccc acc 43
<210> 240
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 240
gccctcattc accactacac ca 22
<210> 241
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 241
gaaggtgacc aagttcatgc tggaacctta aacaaaatca tgcg 44
<210> 242
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 242
gaaggtcgga gtcaacggat tggaacctta aacaaaatca tgcc 44
<210> 243
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 243
atttgcctgg tgtgagcaac a 21
<210> 244
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 244
gaaggtgacc aagttcatgc taatggaggg gaaggactat agttg 45
<210> 245
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 245
gaaggtcgga gtcaacggat taatggaggg gaaggactat agtta 45
<210> 246
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 246
tgacctgatg tgttgcctga ct 22
<210> 247
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 247
gaaggtgacc aagttcatgc taaggcacca caggtcacaa cat 43
<210> 248
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 248
gaaggtcgga gtcaacggat taaggcacca caggtcacaa cac 43
<210> 249
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 249
gggccttccc tagtgtaatt tgtat 25
<210> 250
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 250
gaaggtgacc aagttcatgc ttcagcatgt cctgtcttta aagta 45
<210> 251
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 251
gaaggtcgga gtcaacggat ttcagcatgt cctgtcttta aagtg 45
<210> 252
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 252
gaaaaagcaa atattcctgg atagt 25
<210> 253
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 253
gaaggtgacc aagttcatgc tagacagcgt gagcggagcg 40
<210> 254
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 254
gaaggtcgga gtcaacggat tcagacagcg tgagcggagc a 41
<210> 255
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 255
ccagctcctg aaatcgtttt cctaa 25
<210> 256
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 256
gaaggtgacc aagttcatgc tctcaactct aagaagtcca tcatatga 48
<210> 257
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 257
gaaggtcgga gtcaacggat tctcaactct aagaagtcca tcatatgg 48
<210> 258
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 258
cctgcaactc acagctcagt caata 25
<210> 259
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 259
gaaggtgacc aagttcatgc tgtttatagt ttcccatgga caaa 44
<210> 260
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 260
gaaggtcgga gtcaacggat tgtttatagt ttcccatgga caac 44
<210> 261
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 261
tttaagtggc gtcaagaaga a 21
<210> 262
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 262
gaaggtgacc aagttcatgc tgctgttacg gagaagccga ga 42
<210> 263
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 263
gaaggtcgga gtcaacggat tgctgttacg gagaagccga gg 42
<210> 264
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 264
ggaaggtcag tcctgactct cacttt 26
<210> 265
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 265
gaaggtgacc aagttcatgc tcctgcacat gtaactacaa tgcaatca 48
<210> 266
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 266
gaaggtcgga gtcaacggat tctgcacatg taactacaat gcaatcg 47
<210> 267
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 267
cctgtgaaga tttaccacac tgcttgtta 29
<210> 268
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 268
gaaggtgacc aagttcatgc ttatttccag aacagcgggc a 41
<210> 269
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 269
gaaggtcgga gtcaacggat ttatttccag aacagcgggc g 41
<210> 270
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 270
gctggctagt ttgacatctt tgag 24
<210> 271
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 271
gaaggtgacc aagttcatgc tctatctccc tattgacctc cttca 45
<210> 272
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 272
gaaggtcgga gtcaacggat tctatctccc tattgacctc cttcg 45
<210> 273
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 273
cacctacttt caacacttgc agcacaa 27
<210> 274
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 274
gaaggtgacc aagttcatgc tgaggaaagt gaagcagaag aggg 44
<210> 275
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 275
gaaggtcgga gtcaacggat tggaggaaag tgaagcagaa gagga 45
<210> 276
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 276
cagccacaac tcctaccgta atgta 25
<210> 277
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 277
gaaggtgacc aagttcatgc tgttcattct gtggcatttt ctctgt 46
<210> 278
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 278
gaaggtcgga gtcaacggat tttcattctg tggcattttc tctgg 45
<210> 279
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 279
gccagggtct tacaagaaat acaaa 25
<210> 280
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 280
gaaggtgacc aagttcatgc ttgatgttga attaggaatt aagaaacttc g 51
<210> 281
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 281
gaaggtcgga gtcaacggat tgttgatgtt gaattaggaa ttaagaaact tct 53
<210> 282
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 282
gataagtcaa gtctagcctt gccacaat 28
<210> 283
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 283
gaaggtgacc aagttcatgc tatcaccaac ttaaacaatt gccattctta t 51
<210> 284
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 284
gaaggtcgga gtcaacggat tcaccaactt aaacaattgc cattcttac 49
<210> 285
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 285
gagccatcca atattgggct tt 22
<210> 286
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 286
gaaggtgacc aagttcatgc tcaatacagg gaaggtctct tcatga 46
<210> 287
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 287
gaaggtcgga gtcaacggat taatacaggg aaggtctctt catgc 45
<210> 288
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（manual sequence）
<400> 288
tcagtatcca acctgggagg ctta 24
Claims (2)
1.如下表所述SNP位点组合在BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控中的应用，
表中，BALB/cJ品系列的特异性识别位点“*”备注为“特异位点”，识别129S1/SvImJ、A/J、C57BL/6J、CBA/CaJ、DBA/1J、FVB/NJ、NOD/LtJ品系的特征位点备注为“*”，通用性位点未加备注。
2.一组用于权利要求1所述的BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点的引物组合，其特征在于，所述引物组合如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.288所示。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CN201910827737.3A CN110358847B (zh) | 2019-09-03 | 2019-09-03 | 一组用于BALB/cJ近交系小鼠遗传质量监控的SNP位点及其引物组合和应用 |
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