CN110338422B - 提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法 - Google Patents

提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食品生物技术领域，更具体地涉及一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋技术。该方法以大豆豆渣为原料，经豆渣预处理、大豆纤维素制备、微细大豆纤维素粉末制备、微细大豆纤维胶囊化的加工步骤，实现微细大豆纤维乳酸菌胶囊化包埋。本发明通过微射流均质技术制备形成细丝状的微细化大豆纤维素，并进一步协同钙离子诱导果胶溶液交联对乳酸菌进行胶囊化包埋，该方法形成的糊状胶体可有效提高乳酸菌的胃肠液耐受性，保持乳酸菌的高活力。本发明操作简便，包埋效果稳定，可应用于乳酸菌发酵饮料，满足消费者对高活力乳酸菌食品的需求，具有广阔的市场应用前景。

Description

提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法
技术领域
本发明属于食品生物技术领域，具体涉及到一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细化大豆纤维胶囊化包埋技术。
背景技术
乳酸菌作为一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌，可调节人体肠道菌群微环境，对抑制肠道内腐败菌生长，提高食品生物效价，有效改善胃肠道功能发挥重要作用。经乳酸菌发酵生产制得的软饮料具有特殊的发酵香气，且营养价值高，深受消费者青睐。目前，根据国际乳品联盟推荐，乳酸菌食品进入人体肠道后活菌数量至少需要超过106cfu/mL才能显示益生效应。然而，食品摄入后乳酸菌在分别经历低pH值胃环境与胆盐环境时出现相当高的损失，难有足够数量的活菌到达大肠而发挥益生作用。因此，提高乳酸菌在胃肠液逆环境下的耐受能力是乳酸菌食品商业化的重点研究问题。
胶囊化作为保护乳酸菌的有效方式，是利用高聚合壁材作为包装物将菌体包埋、封存成为微粒的加工技术。微胶囊将乳酸菌与外界环境隔离，不仅可以减缓乳酸菌与营养物质的接触，减轻货架期间过度代谢产生的食品后酸化现象，同时也可以避免食品摄入后乳酸菌与逆环境的直接接触。
近年来，国内外主要是通过喷雾干燥、聚电解质交联、复聚凝胶等方式制备微胶囊。例如发明专利“一种乳酸菌微胶囊及其制备方法”(公开号为CN 102370057B)公开了一种利用大豆蛋白、脱脂乳、麦芽糊精、葡萄糖和明胶为包埋壁材，采用喷雾干燥技术制备乳酸菌微胶囊的方法，该方法成本低，包埋效果好，形成的微胶囊对乳酸菌在酸逆环境下有一定的保护效果。再如发明专利“一种载乳酸菌的大豆分离蛋白、果胶及壳聚糖复合微胶囊的制备方法”(公开号为CN 102687857B)公开了一种以大豆分离蛋白、果胶及壳聚糖为壁材，通过反复调节体系pH值对乳酸菌进行聚电解交联的包埋方法，该方法制得的微胶囊具有良好的酸耐受能力，经体外胃肠液模拟消化后活菌数超过106cfu/mL。另外，发明专利“以蛋白聚集体-多糖为壁材的益生菌微胶囊及制备方法”(公开号为CN 106723233B)公开了一种以米糠蛋白和多糖溶液为壁材，先后通过吐温80乳化，没食子酸复聚凝胶固化包埋乳酸菌的方法，该方法可提高乳酸菌的胃酸抵抗能力，形成的微胶囊具有良好的贮藏性。然而，聚电解质交联与复聚凝胶法的制备工艺较为复杂，成本较高，制备形成的胶囊颗粒较大，分散性较差，限制了其在食品工业化生产中的应用。喷雾干燥法虽然操作简便，能耗低，但使用的包埋壁材多为水溶性，在低酸性胃液下仍存在溶解性与机械强度下降，导致其对乳酸菌的保护效果十分有限。
因此，有必要进一步探索新的包埋壁材以提高乳酸菌的胃肠液耐受性。
发明内容
鉴于背景技术存在的上述问题，本发明提供一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，该方法需兼具简便的操作工艺、较短的制备周期较短和较高的制备效率，该方法制备的微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌需克服传统乳酸菌胃肠液不耐受、水溶性壁材在低酸性胃液下凝胶能力下降与机械强度减弱等缺点。
为实现上述目的，发明人提供了一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，该方法包括以下步骤：
大豆纤维素制备：将干豆渣与无水乙醇混合，加热搅拌，脱脂过滤，烘干粉碎，得到脱脂豆渣细粉；将所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液混合，去除木质素，离心，稀释，调pH值，酶解去除多余蛋白，第一次抽滤，水洗，第二次抽滤，得到大豆纤维素；
微细大豆纤维素粉末制备：将所述大豆纤维素用去离子水配成大豆纤维素溶液，经过微射流均质微细化处理，干燥，得到微细大豆纤维素粉末；
微细大豆纤维胶囊化：将所述微细大豆纤维素粉末与钙离子交联剂配制成纤维素/钙离子溶液，与MRS液体培养基培养的乳酸菌悬液混合均匀，加入果胶溶液，搅拌，得到微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌。
区别于现有技术，上述技术方案至少具有以下有益效果：
(1)本发明采用微射流均质技术对大豆纤维素进行了细化处理，微射流均质属于机械降解法，与常规化学法相比具有制备周期短、效率高和环境友好的特点；
(2)本发明采用微细大豆纤维素粉末协同Ca2+诱导果胶交联的方法对乳酸菌进行胶囊化包埋。该方法操作简便，形成的糊状胶体区别于喷雾干燥、聚电解质交联、复聚凝胶等方式形成的固体胶粒，加工适用性强，克服了水溶性壁材在低酸性胃液下凝胶能力下降与机械强度减弱的缺点；
(3)本发明所采用的交联剂为食品级钙离子添加剂，绿色清洁，胶囊化后的乳酸菌经胃肠液耐受后，活菌数量仍保持在106-107cfu/mL，该技术可应用于乳酸菌发酵饮料，满足消费者对高活力乳酸菌食品的需求。
该方法的操作适用性强，胶囊化效果稳定，可应用于乳酸菌发酵饮料，满足消费者对高活力乳酸菌食品的需求，具有广阔的市场前景。
附图说明
图1为具体实施方式所述不同微射流压力下大豆纤维素的微观形貌与粒度分布，(A)大豆纤维素(对比例1)，(B)大豆纤维素-100MPa(实施例1)，(C)大豆纤维素-150MPa(实施例2)，(D)大豆纤维素-200MPa(实施例3)；
图2为具体实施方式所述一种微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌在胃肠逆环境下的凝胶强度变化趋势图。
具体实施方式
下面详细说明本发明提供的提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法。
一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其中，包括以下步骤：
大豆纤维素制备：将干豆渣与无水乙醇混合，加热搅拌，脱脂过滤，烘干粉碎，得到脱脂豆渣细粉将所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液混合，去除木质素，离心，稀释，调pH值，酶解去除多余蛋白，第一次抽滤，水洗，第二次抽滤，得到大豆纤维素；
微细大豆纤维素粉末制备：将所述大豆纤维素用去离子水配成大豆纤维素溶液，经过微射流均质微细化处理，干燥，得到微细大豆纤维素粉末；
微细大豆纤维胶囊化：将所述微细大豆纤维素粉末与钙离子交联剂配制成纤维素/钙离子溶液，与MRS液体培养基培养的乳酸菌悬液混合均匀，加入果胶溶液，搅拌，得到微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌。
微射流均质处理是纤维素微细化的一种清洁，快速的新型加工方法，该方法利用高压流体携带纤维素颗粒以极快的速度(<2s)通过具有特殊孔径的相互作用腔，在高速碰撞过程中实现纤维素颗粒降解为微米，亚微米或纳米级尺寸，经降解得到的微细化纤维素呈现高度分支形态并带有大量羟基，可稳定分散在水相体系，并对凝胶网络具有一定的强化效果。基于此，本发明以大豆豆渣为原料制备大豆纤维素，通过微射流均质技术制备微细化大豆纤维素，并进一步协同Ca2+诱导果胶溶液形成糊状胶体，实现乳酸菌的微胶囊化，从而提高乳酸菌的胃肠液耐受能力。在豆渣的预处理步骤中，用50℃水浴对大豆干豆渣与食用酒精的按体积比1:10进行混合的混合物进行加热搅拌6h脱脂后过滤，以防豆渣在贮藏过程中因油脂氧化而产生异味，并且每隔2h换一次乙醇，脱脂豆渣经烘干后粉碎得到脱脂豆渣细粉。
所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液混合的混合物在50℃水浴下搅拌4h后除去豆渣中的木质素，离心后的沉淀用去离子水稀释，通过HCl溶液调节pH值为9，加入碱性蛋白酶搅拌酶解4h除去多余蛋白，第一次抽滤，水洗1次后进行第二次抽滤，制得大豆纤维素。
优选地，所述微细大豆纤维素粉末制备步骤中，所述大豆纤维素溶液的质量浓度为2wt％。
不同微射流均质压力对纤维素的微观形态有着显著影响，在一定压力范围内，微射流均质压力越大，纤维素的平均粒径越小。优选地，所述微细大豆纤维素粉末制备步骤中，所述微射流均质微细化处理压力为100-200MPa，处理温度为25℃，处理次数为3次。
微细化的大豆纤维素可以增强胶囊的凝胶强度。优选地，所述微细大豆纤维素粉末的平均粒径D50小于20μm。
优选地，所述强碱为浓度为5％的NaOH溶液，所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液以质量比为1:25进行混合。
优选地，所述酶解采用的是碱性蛋白酶，以所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液的混合液重量为基准，所述碱性蛋白酶的干物料添加量为0.5wt％，酶活为200000U/g。
优选地，所述大豆纤维素的纯度大于90％，蛋白质含量低于2％。
优选地，所述钙离子交联剂为氯化钙或乳酸钙，以所述纤维素/钙离子溶液的重量为基准，所述钙离子交联剂添加量为0.5-1.0％，所述微细大豆纤维素粉末的添加量为1.0-2.0％。
低酯果胶是高酯果胶经碱或酶降解后的产物，其风味愉悦，价格低廉，含有的羧基可与Ca2+形成盐桥呈现出蛋壳状的凝胶网络结构，常作为食品饮料体系的增稠剂与稳定剂。然而，低酯果胶在体系pH环境下降(pH<5)时凝胶性能并不稳定，单纯使用对乳酸菌的保护效果十分有限。微细化纤维素作为一种不可溶性膳食纤维，其特有的分子内与分子间氢键可提高多糖的凝胶强度，使其表现出良好的酸耐受能力，可作为乳酸菌胶囊化的良好壁材。
优选地，所述果胶溶液中所添加的果胶为酯化度在15-40％的低酯果胶，果胶溶液的浓度为0.8-1.0％。
优选地，在所述微细大豆纤维胶囊化步骤中，所述乳酸菌悬液、钙离子溶液和果胶溶液的重量配比为2:3:5，并调整pH值为3.5-4.5。
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。应理解，这些实施例仅用于进一步解释说明本发明而不用于限制专利的保护范围。
本发明中测试所用的仪器设备有：tecnai G2F20场发射透射电镜，美国FEI仪器公司；Mastersizer 3000激光粒度仪，英国马尔文仪器公司；Physical 301旋转流变仪，奥地利安东帕仪器公司；所用的乳酸菌分别为副干酪乳杆菌，植物乳杆菌以及嗜热链球菌均购于武汉朗尚嘉生物科技有限公司。
实施例1
本实施例提供一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细化大豆纤维胶囊化包埋技术，具体步骤为：
(1)大豆纤维素制备：称取100g豆渣与无水乙醇按质量比1:10混合，经50℃水浴加热搅拌6h脱脂后过滤，每隔2h换一次乙醇，脱脂豆渣经烘干后粉碎得到豆渣细粉。称取50g豆渣细粉与5％的NaOH溶液按质量比1:25混合，50℃水浴搅拌4h后脱去豆渣中的木质素，离心后沉淀加水稀释回原体积，调节pH＝9后加入基于豆渣干重0.5wt％的碱性蛋白酶(200000U/g)，40℃搅拌酶解4h，抽滤，水洗后再抽滤制得大豆纤维素。
(2)微射流微细化处理：称取2g大豆纤维素配制成2％的大豆纤维素溶液，通过微射流均质机进行微细化处理，均质压力为100MPa，均质次数为5次，温度控制为25℃，干燥后制得的微细化大豆纤维素粉末。
(3)微细化纤维素协同钙离子诱导果胶交联：将副干酪乳杆菌接种至20mLMRS液体培养基中，接种量为5％，35℃培养18h，培养结束后将发酵液离心(4800rmp，5min)去除上清液，剩余菌悬浮物经无菌蒸馏水清洗后得到乳酸菌悬液。分别称取0.75g微细化纤维素与0.30g食品级氯化钙，配制成50mL纤维素-钙离子溶液，之后吸取4mL乳酸菌悬液与6mL纤维素-钙离子溶液混合均匀，并向混合液中添加10mL 0.8％的果胶溶液，搅拌5min，通过微细化纤维素协同钙离子诱导果胶形成糊状胶体包埋乳酸菌。
实施例2
本实施例提供一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细化大豆纤维胶囊化包埋技术，具体步骤为：
(1)大豆纤维素制备：称取100g豆渣与无水乙醇按质量比1:10混合，经50℃水浴加热搅拌6h脱脂后过滤，每隔2h换1次乙醇，脱脂豆渣经烘干后粉碎得到豆渣细粉。称取50g豆渣细粉与5％的NaOH溶液按质量比1:25混合，50℃水浴搅拌4h后脱去豆渣中的木质素，离心后沉淀加水稀释回原体积，调节pH＝9后加入基于豆渣干重0.5％的碱性蛋白酶(200000U/g)，40℃搅拌酶解4h，抽滤，水洗后再抽滤制得大豆纤维素。
(2)微射流微细化处理：称取2g大豆纤维素配制成2％的大豆纤维素溶液，通过微射流均质机进行微细化处理，均质压力为150MPa，均质次数为5次，温度控制为25℃，干燥后制得的微细化大豆纤维素粉末。
(3)微细化纤维素协同钙离子诱导果胶交联：将植物乳杆菌接种至20mL MRS液体培养基中，接种量为5％，35℃培养18h，培养结束后将发酵液离心(4800rmp，5min)去除上清液，剩余菌悬浮物经无菌蒸馏水清洗后得到乳酸菌悬液。分别称取0.85g微细化纤维素与0.40g食品级氯化钙，配制成50mL纤维素-钙离子溶液，之后吸取4mL乳酸菌悬液与6mL纤维素-钙离子溶液混合均匀，并向混合液中添加10mL 0.9％的果胶溶液，搅拌5min，通过微细化纤维素协同钙离子诱导果胶形成糊状胶体包埋乳酸菌。
实施例3
本实施例提供一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细化大豆纤维胶囊化包埋技术，具体步骤为：
(1)大豆纤维素制备：称取100g豆渣与无水乙醇按质量比1:10混合，经50℃水浴加热搅拌6h脱脂后过滤，每隔2h换一次乙醇，脱脂豆渣经烘干后粉碎得到豆渣细粉。称取50g豆渣细粉与5％的NaOH溶液按质量比1:25混合，50℃水浴搅拌4h后脱去豆渣中的木质素，离心后沉淀加水稀释回原体积，调节pH＝9后加入基于豆渣干重0.5％碱性蛋白酶(200000U/g)，40℃搅拌酶解4h，抽滤，水洗后再抽滤制得大豆纤维素。
(2)微射流微细化处理：称取2g大豆纤维素配制成2％的大豆纤维素溶液，通过微射流均质机进行微细化处理，均质压力为200MPa，均质次数为5次，温度控制为25℃，干燥后制得的微细化大豆纤维素粉末。
(3)微细化纤维素协同钙离子诱导果胶交联：将嗜热链球菌接种至20mL MRS液体培养基中，接种量为5％，35℃培养18h，培养结束后将发酵液离心(4800rmp，5min)去除上清液，剩余菌悬浮物经无菌蒸馏水清洗后得到乳酸菌悬液。分别称取1.0g微细化纤维素与0.50g食品级氯化钙，配制成50mL微细化纤维素-钙离子溶液，之后吸取4mL乳酸菌悬液与6mL纤维素-钙离子溶液混合均匀，并向混合液中添加10mL 1％的果胶溶液，搅拌5min，通过微细化纤维素协同钙离子诱导果胶形成糊状胶体包埋乳酸菌。
采用实施例1-3方法提供的上述微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌具有较高的活菌量，即该微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌经pH＝2.5的酸体系处理2h，再经pH＝7.5，0.02％的胆盐浓度处理4h后乳酸菌活菌数量仍保持为106-107cfu/mL，具体实验数据见表1。
对比例1
本对比例提供一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的大豆纤维胶囊化包埋技术，具体步骤为：
(1)豆渣预处理：称取100g豆渣与无水乙醇按质量比1:10混合，经50℃水浴加热搅拌6h脱脂后过滤，每隔2h换一次乙醇，脱脂豆渣经烘干后粉碎得到豆渣细粉。
(2)大豆纤维素制备：称取50g豆渣细粉与5％的NaOH溶液按质量比1:25混合，50℃水浴搅拌4h后脱去豆渣中的木质素，离心后沉淀加水稀释回原体积，调节pH＝9后加入基于豆渣干重0.5％碱性蛋白酶(200000U/g)，40℃搅拌酶解4h，抽滤，水洗后再抽滤制得大豆纤维素。
(3)纤维素协同钙离子诱导果胶交联：植物乳杆菌接种至20mL MRS液体培养基中，接种量为5％，35℃培养18h，培养结束后将发酵液离心(4800rmp，5min)去除上清液，剩余菌悬浮物经无菌蒸馏水清洗后得到乳酸菌悬液。分别称取1.0g纤维素与0.50g食品级氯化钙，配制成50mL纤维素-钙离子溶液，之后吸取4mL乳酸菌悬液与6mL纤维素-钙离子溶液混合均匀，并向混合液中添加10mL 0.8％的果胶溶液，搅拌5min，通过微细化纤维素协同钙离子诱导果胶形成糊状胶体包埋乳酸菌。
对比例2
本对比例提供一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的果胶胶囊化包埋技术，具体步骤为：
(1)钙离子诱导果胶交联：副干酪乳杆菌接种至20mL MRS液体培养基中，接种量为5％，35℃培养18h，培养结束后将发酵液离心(4800rmp，5min)去除上清液，剩余菌悬浮物经无菌蒸馏水清洗后得到乳酸菌悬液。称取0.40g食品级氯化钙，配制成50mL钙离子溶液，之后吸取4mL乳酸菌悬液与6mL钙离子溶液混合均匀，并向混合液中添加10mL 0.8％的果胶溶液，搅拌5min，通过微细化纤维素协同钙离子诱导果胶形成糊状胶体包埋乳酸菌。
对比例3
考察裸菌在胃肠液中的耐受性，其具体步骤为：副干酪乳杆菌接种至20mLMRS液体培养基中，接种量为5％，35℃培养18h，培养结束后将发酵液离心(4800rmp，5min)去除上清液，剩余菌悬浮物经无菌蒸馏水清洗后得到乳酸菌悬液。之后吸取4mL乳酸菌悬液与6mL蒸馏水混合均匀，并向混合液中添加10mL 0.8％的果胶溶液，搅拌5min。
下面说明实施例1-3和对比例1-3中微细大豆纤维素粉末的微观形态测试方法和微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌的凝胶强度及其对乳酸菌在胃肠液环境下的保护效果分析方法。
(1)微细大豆纤维素粉末的微观形态测试方法为：采用0.1％的微细大豆纤维素粉末溶液滴加至涂有碳膜的载玻片上，氮气吹干后，置于场发射透射电镜下进行形貌观察，电镜加速电压为80kv，观察单位距离为2μm。
(2)微细大豆纤维素粉末的粒径测试为：取少量纤维素样品置于激光粒度仪分散器中，分散介质为水溶液，待测试遮光度达到指定区间后，开启超声波发生器(200W)并开始测试。
(3)微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌的凝胶强度采用流变性能分析方法，具体方法为：采用流变仪分别对胃肠液处理前后的胶囊凝胶强度进行测定，测定采用频率振荡模式。取少量凝胶置于流变仪载物平板上，调节平板测试温度为25℃，应变为0.5％，振荡频率范围为1-10Hz，记录凝胶模量(弹性模量与损耗模量)随振荡频率升高发生的变化。
(4)乳酸菌在胃肠液环境下的保护效果采用平板计数评价法评价乳酸菌在胃肠逆环境下的耐受性。具体方法为：吸取1mL胶囊化后的乳酸菌悬液于5mLpH＝2.5的无菌生理盐水中，37℃培养箱中静置2h。待静置结束后，吸取2.5mL样液于5mLpH＝7.5，0.1％浓度的胆盐下静置4h，之后进行梯度稀释，最后每个梯度吸取200μL进行平板涂布，涂布后的培养基平板置于37℃培养箱中培养48h，计算菌落数量。
实施例1-3和对比例1-2提供的微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌在胃肠逆环境下的凝胶损耗正切变化及对乳酸菌的保护效果实验数据见表1。
表1微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌胃肠逆环境下的凝胶损耗正切变化及对乳酸菌的保护效果
Figure BDA0002126488870000111
从图1、图2和表1实验数据可以看出，实施例1与实施例2中的纤维素呈现的连续的细丝形态，平均粒径分别为28.1μm与13.2μm；实施例2中的纤维素呈现的断裂的簇状形态，平均粒径为7.2μm；对比例1中的纤维素呈现块状的颗粒形态，平均粒径为152.0μm。这说明不同微射流均质压力对纤维素的微观形态有着显著影响，在一定压力范围内，微射流均质压力越大，纤维素的平均粒径越小。
经酸液处理2h，肠液处理4h后，实施例1-3的凝胶损耗正切值变化量明显小于对比例1和对比例2，而对比例1与对比例2的呈现较高的凝胶损耗正切值变化量。这说明微细化的纤维素可以增强胶囊的凝胶强度，使得实施例1-3的胶囊凝胶在胃肠液条件下表现出较低的凝胶强度变化。
实施例1-3与对比例1-2中的乳酸菌初始量为2.65×109cfu/mL，经胃肠液处理后实施例1保留菌量为3.69×106cfu/mL，实施例2保留菌量为4.59×107cfu/mL，实施例3保留菌量为1.89×106cfu/mL，对比例1保留菌量为2.52×105cfu/mL，对比例2保留菌量为4.05×105cfu/mL，未保护的裸菌菌量为6.48×104。这说明采用微射流均质处理的豆渣微细化纤维素可有效提高果胶凝胶对乳酸菌的保护效果，降低乳酸菌在酸逆环境下的损失，而采用普通的纤维素(对比例1)协同果胶包埋与单独使用果胶(对比例2)进行包埋并没有起到较好的保护效果，而未做保护措施的裸菌(对比例3)在酸逆环境下的损失率则为最大。
需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。

Claims (6)

1.一种提高乳酸菌胃肠液耐受性的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：
大豆纤维素制备：将干豆渣与无水乙醇混合，加热搅拌，脱脂过滤，烘干粉碎，得到脱脂豆渣细粉；将所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液混合，去除木质素，离心，稀释，调pH值，酶解去除多余蛋白，第一次抽滤，水洗，第二次抽滤，得到大豆纤维素；
微细大豆纤维素粉末制备：将所述大豆纤维素用去离子水配成大豆纤维素溶液，经过微射流均质微细化处理，干燥，所述微射流均质微细化处理压力为100-200MPa，处理温度为25℃，处理次数为3次，得到微细大豆纤维素粉末，所述微细大豆纤维素粉末的平均粒径D50小于20μm；
微细大豆纤维胶囊化：将所述微细大豆纤维素粉末与钙离子交联剂配制成纤维素/钙离子溶液，所述钙离子交联剂为氯化钙或乳酸钙，以所述纤维素/钙离子溶液的重量为基准，所述钙离子交联剂添加量为0.5-1.0%，所述微细大豆纤维素粉末的添加量为1.0-2.0%，与MRS液体培养基培养的乳酸菌悬液混合均匀，加入果胶溶液，所述乳酸菌悬液、钙离子溶液和果胶溶液的重量配比为2:3:5，并调整pH值为3.5-4.5，搅拌，得到微细大豆纤维胶囊化包埋乳酸菌。
2.根据权利要求1所述的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其特征在于，所述微细大豆纤维素粉末制备步骤中，所述大豆纤维素溶液的质量浓度为2wt%。
3.根据权利要求1所述的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其特征在于，所述强碱为浓度为5%的NaOH溶液，所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液以质量比为1:25进行混合。
4.根据权利要求1所述的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其特征在于，所述酶解采用的是碱性蛋白酶，以所述脱脂豆渣细粉与强碱溶液的混合液重量为基准，所述碱性蛋白酶的干物料添加量为0.5wt%，酶活为200000U/g。
5.根据权利要求1所述的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其特征在于，所述大豆纤维素的纯度大于90%，蛋白质含量低于2%。
6.根据权利要求1所述的微细大豆纤维胶囊化包埋方法，其特征在于，所述果胶溶液中所添加的果胶为酯化度在15-40%的低酯果胶，果胶溶液的浓度为0.8-1.0%。
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Contract record no.: X2023350000156

Denomination of invention: Microencapsulated embedding method of soybean fiber to improve the tolerance of lactic acid bacteria to gastrointestinal fluid

Granted publication date: 20220513

License type: Common License

Record date: 20230329

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