CN1103231C - 抗糖尿病及并发症的中药制剂及该制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了抗糖尿病及并发症的中药制剂以及该制剂的制备方法,其中药制剂是由甘草、山豆根、索福拉、苦参、人参、黄柏、黄芩、牡丹皮;或由山豆根、索福拉、苦参;或由索福拉、苦参为原料经制备而成。其制备方法包括了对该制剂的活性材料的提取精制。本制剂解决了血糖值的调整御障碍的关键问题,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地治疗和防止糖尿病及并发症的发生。
Description
本发明涉及的是中药制剂及其制备方法,特别是抗糖尿病及并发症的中药制剂以及该制剂的制备方法。
18年前发明者用几种中药治愈了重症I型糖尿病患者(胰岛素>70U/d)的糖尿病性晚期出现的合并症的皮肤病。并且在停药数年后,发现其血糖值还是正常因此把其主要有效成分(23种化合物,其中包括16种类新规化合物和7种既知的化合物,总称为“SOPHORA”—抗糖尿病及并发症活性材料)单离及构造化学的解明后,对此进行了多年的抗糖尿病生物化学分子水平的研究,终于把这几种中药的药理作用的细胞分子生化学水平的机理解明,而率先于世界同业,说明如下:
糖尿病是因为胰岛素的作用不足而引起的糖代谢异常,表现为血糖值的调整制御障碍。过量的葡萄糖停留在血液中,无法进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,功能性细胞内呈低葡萄糖浓度,在这种状态下,其肠内的二糖类水解酶群因受胰岛素依存性功能性细胞饥饿信号的诱导而活性上升,用现有药物的药物疗法,无法对食后的血糖值的急骤上升有效地制御,所以在临床上诱发了各种各样的糖尿病性并发症。临床上根据血液中的胰岛素浓度来区别糖尿病的类型,胰岛素依存性I型糖尿病约占3%,胰岛素非依存性II型糖尿病>90%,其余为胰岛素抵抗性糖尿病。一般先进国把血液中的胰岛素浓度在检出水准以下的前者归属于先天性青少年时发生型糖尿病。把后者归属于生活习惯病。通常,得了糖尿病5到6年以后并发神经机能障碍,7至10年并发网膜症和白内障,15年前后将并发糖尿病性肾病。糖尿病的分子医学认为诱发并发症的最大因子是:过剩的葡萄糖流入非胰岛素依存性组织细胞内,激活多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶,迅速地催化葡萄糖变成不易透过细胞膜的山梨醇,引起非胰岛素依存各组织的细胞渗透性损伤而发生并发症的。Engerman氏报告了以前一时性高血糖过的狗,在血糖值回复正常2年半以后,发生重症糖尿病性网膜症,其进行无法阻止。尤其是只要有过一时性的高血糖,其造成的不可逆性变化的非酶催化的糖化蛋白的最终代谢产物的分子,无法代谢并无法透过细胞膜而被留在非胰岛素依存性组织细胞内并能长期生存,导致并发症的发生。所以临床上,即使对高血糖进行强化胰岛素疗法以及用强化口服用血糖降下剂疗法,使血糖值回复到正常,糖化血红蛋白值控制在HbAlc>7.2-7.5%以内,也不能阻止糖尿病并发症的发生。因此,分子医学认为糖尿病性合并症的进展仍然无法阻止。对糖尿病并发症的对策,成为世界糖尿病研究者的最大课题。
现在世界上治疗糖病及并发症还没有特效药,近年先进国已经注目于天然药了。
本发明的目的之一是针对上述的各种类型的糖尿病患者的糖代谢异常,提供数种中药制剂,以解决血糖值的调整制御障碍的关键问题,亦即是对食后的血糖值的急聚上升有效地制御,使适量的葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
本发明的目的之二是提供制备上述中药制剂的方法。
本发明目的是通过以下技术方案实现的。
抗糖尿病及并发症的中药制剂,是由下列重量百分比的原料药物按下述方法制备而成的:
甘草16-24 山豆根8-12 索福拉8-12 苦参8-12 人参16-24 黄柏8-12 黄芩12-18 牡丹皮4-6。
或山豆根1 索福拉1 苦参1
或索福拉1 苦参1
以上植物除一般天然和仿天然人工栽培包括应用现代化生命科学优化后的植物材料。
上述中药制剂的制备有如下几种方法:
1.将上述经炮制和粉碎后的中药分别加水进行热浸渍,然后经溶出收集溶出液,再经沉淀、过滤、低温减压浓缩,最后将浓缩液灭菌后按上述各重量百分比制成合剂;或将浓缩液继续浓缩到干燥固体,再进行粉碎、过筛,最后按上述各重量百分比将其混匀,制成固体剂形并灭菌成药。
2.按方法1中将收集到的浓缩液按上述各组分重量百分比混匀,组成浓缩混合液,尔后用同量的乙酸乙脂(EtoAc)进行萃取、分离,收集乙酸乙脂萃取液和水溶液:
将乙酸乙脂萃取液经低温减压浓缩、水洗、再经低温减压浓缩得到乙酸乙脂浓缩液和水洗出液,并将其分别干燥成固体,为乙酸乙脂提取物(SEE)和水洗出提取物(SEW)备用;
将水溶液经低温减压浓缩干燥为固体,用醇溶解,经减压过滤,收集到醇提取液和醇非可溶液,并将其分别经低温减压浓缩干燥成固体,为醇提取物(SM)和醇非可溶提取物(SWW)备用;
将收集到的乙酸乙脂提取物(SEE)、水洗出提取物(SEW)、醇提取物(SM)、醇非可溶提取物(SWW),按一般的制剂学的方法混匀,加工成颗粒剂、片剂、胶囊剂等剂形并灭菌。
3.按方法2中将收集到的醇提取物(SM)和水洗出提取物(SEW),分别用少量的醇溶解后加入吸附ODS硅胶搅拌均匀,经低温减压浓缩到干燥固体粉末状备用;
把(SM,SEW)的ODS硅胶粉末,分别进行圆柱液相层析或固相层析分离法精制其有效成分,按TLC上的不同斑点或HPLC分析结果分别收集,并经低温减压浓缩到干燥固体状备用;
把各种ODS层析液或分离的干燥固体,溶解后,进行二糖水解酶抑制活性测定,和用实验动物进行各种糖类负荷的血糖值上升的抑制活性测定分别收集不同强度抑制活性的提取分离物,把收集到的各种活性材料,分别用ODS硅胶进行圆柱液相层析再精制,或用HPLC移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸再精制,或用固相层析分离法精制其活性材料,而后根据临床症状,选用相应活性材料的重量比制成颗粒剂、片剂或胶囊剂等剂形并灭菌;或添加适量的抗溶血剂、助溶剂后,根据临床症状,选用相应的活性材料的重量比,制成肌肉注射剂。
4.将方法2中收集到的乙酸乙脂提取物(SEE)分别进行圆柱液相层析或固相层析分离法精制其有效成分,按TLC上的不同斑点或HPLC分析结果分别收集,并经低温减压浓缩到干燥固体状备用;
把各种ODS层析液或分离的干燥固体,溶解后,进行二糖水解酶抑制活性测定和各种糖类负荷抑制活性测定,分别收集不同强度抑制活性的提取分离物,把收集到的各种活性材料,分别用ODS硅胶进行圆柱液相层析再精制,或用HPLC移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸再精制,或用固相层析分离法精制其活性材料,而后根据临床症状,选用相应活性材料的重量比制成颗粒剂、片剂或胶囊剂等剂形并灭菌;
5.把上述方法2-3中收集到的有机溶媒提取物以及方法1中的水合剂,分别用固相层析分离法和液相层析分离法以及HPLC方法分离精制出各种材料,进行醛糖还原酶的活性的抑制作用试验,从而分别收集抗糖尿病及抗并发症的生理活性材料;将收集到的该生理活性物质按本方法再重复提取一次,分别收集再精制出来的具有强力的抗糖尿病及抗并发症的生理活性物质,把该精制的具有强力的抗糖尿病及并发症的生物活性材料,粉碎后,根据临床症状,选用相应的活性物质的重量比,加工成颗粒剂、片剂、胶囊剂等剂形并灭菌。
本发明的制剂通过对I型糖尿病大白鼠用葡萄糖来进行糖负荷实验发现:制剂投与后,I型糖尿病大白鼠,可以有效地抑制用葡萄糖诱导而上升的血糖值,象有胰岛素的正常大白鼠一样,经时地把血糖值正常化了。此外,本发明的制剂还具有抑制I型糖尿病及健常人的各种糖类的负荷时血糖值上升效果,并且确认到其给药前后,血液中的胰岛素浓度不发生变动。关于本发明的活性材料所示的药理作用,和各种血糖降下剂的药理作用机序作了比较,说明如下。
1.本发明的制剂不使血液中胰岛素的浓度发生变动,和尿素衍生物制剂(SU)系血糖降下剂,以及troglitazone,akutose(新药2003年以后上市)的药理作用显然不同。前者(SU)是血液中的胰岛素浓度在正常值以下的胰岛素非依存性II型糖尿病常用的血糖降下剂,使血液中的胰岛素值升高,来降低血糖值的药剂。后者是血液中的胰岛素浓度在正常值以上的胰岛素抵抗性糖尿病所试用的胰岛素抵抗性改善血糖降下剂,能使胰岛素受容体对胰岛素的结合活性升高,从而降低血液中的胰岛素浓度的新药剂。
2.II型糖尿病治疗药缩二胍(biguanide)系血糖降下剂,投与后能促进嫌氧性解糖系把葡萄糖原及葡萄糖急速分解成乳酸,促使末梢组织的糖摄取机能亢进,并抑制肝糖的放出,来降低血糖值的药剂。此药对I型糖尿病没有效果。本发明的制剂不管对任何类型的糖尿病都有效,和双胍类血糖降下剂的作用机构不同。
3.胰岛素能促进糖输送和有糖等代谢关连酶的活性化的急性代谢效果,从而有引起重笃性且迁延性的低血糖症副作用。本发明的制剂在动物实验(急性毒性实验用临床常用量的500倍灌胃1个星期,7天)或是临床实验中没有出现过低血糖症等副作用,和胰岛素的作用机构不同。
4.α-葡萄糖苷酶阻碍·食后高血糖改善剂AO-128(voglibose),拜糖平(acarbose),不能改善胰岛素依存性功能性细胞饥饿的状态,对I型糖尿病没有效果,以及,对用单糖类来作糖负荷实验时的血糖值上升没有抑制作用。长期使用后,小肠中、下段的上皮细胞微绒毛上的二糖类水解酶群能代偿性地比活性和总活性上升,需要不断加大剂量。本发明的制剂对血糖值上升抑制效果之一是抑制二糖类水解酶的活性,和这类药剂的作用有共通的地方,其效果是拜糖平十倍以上,但是本发明的制剂对I型糖尿病有效果,说明本发明的制剂里含有和这类药剂的作用不同的活性成分,改善胰岛素依存性功能性细胞的糖代谢状态。且能使肠内的二糖类水解酶群的比活性和总活性回复正常。
5.本发明里的抗糖尿病活性成分里有一种叫作4’,5.7∽Trihydroxyisoflavone化合物,还有以下作用:Inhibits protein tyrosinekinases,including autophosphorylation of epidermal growth factorreceptor kinase(IC50=2.6um).Also inhibits other protein kinases byacting as competitive inhibitor of ATP.Inhibits tumor cell proliferationand induces tumor cell differentiation.Inhibits exogenous substratephosphrylation by EGFR kinase and pp60(vistd)with simiilar potencies(IC50=20-25um).Has only a trivial effect on PKC andPKA(IC50>350um).Produces cell cycle arrest and apoptsis in Jurkat T-leukemia cells.Prevents anti-CD3 monoclonal antibody-induced thymicapoptosis.Also inhibits topoisomerasell activity in vitro.Blocksoxidative DNA damage in vitro.Daidzein(Cat.No,251600)is an inactiveanalog of genistein.这种对细胞膜的EGFR kinase的生理活性能leading引起Insulin receptor substrate protein tyrosine kinases IPTK活性化;(orinsulin receptor prote in tyrosine phosphatase PTP),(Insulin receptorprotein tyrosine),它们之间的相关机理是4’,5.7∽Trihydroxyisoflavone这个化合物4’位的-OH基,可使Insulin的作用依存性细胞膜表面的Insulinreceptor substrate protein tyrosine kinases活性化,从而象(1999年5月7日的Science p.974.的)“L-783,281”那样使糖进入Insulin的作用依存性细胞内从而降低了血糖值。因为4’位-OMe基的5.7∽Dihydroxyisoflavone和(Chrysin)5.7∽dihydroxyflavone,Sophorabioside,Sophoricoside以及Rutin,Datiscetin等化合物没有这种对细胞膜的EGFRkinase的生理活性,都不能使Insulin的作用依存性细胞膜表面的IRTK活性化。
6.本发明里的抗糖尿病活性成分,还可诱导Insulin receptor proteintyrosine kinases IRPTP的蛋白质的遗传密码发生调整。使IRPTP的IB-/-信号增大,从而使Insulin抵抗性糖尿病患者的细胞内葡萄糖载体对IRPTP的IB-/-信号感受性强化,这个药理作用过程用系列化学术语来说叫作“药物拿扣”(“Ph.‘s lacking”)现象,使糖进入Insulin的作用依存性细胞内从而降低了血糖值,从而使血糖正常化;这项“施氏药拿扣”(“S.Ph.’s lacking”)的定量化研究还在进行中。
7. 本发明里的抗糖尿病活性成分里的“施氏活性物质1-11”(“S.A.C.1-11”)能使Insulin的作用依存性组织的细胞膜上,形成新的葡萄糖通道,并能使Insulin的作用依存性组的细胞核同RNA,DNA转录这个新的葡萄糖通道的验基配列,从而使次世代的Insulin的作用依存性组织的细胞膜上,保留遗传了这个新的葡萄糖通道,而使次世代的Insulin的使用依存性组织的细胞在没有Insulin的作用下也能完成糖的代谢。解明这个细胞核内RNA、DNA转录的机理的研究,是今后的重大课题。
本发明的制剂一般不改变血液中胰岛素浓度,并对单糖负荷引起的血糖值的上升有制御活性。能显示出这样的临床效果的物质,可以说是集中了的所有的抗糖尿病药剂的长处。一般属于生活习惯病性的II型糖尿病,以及胰岛素抵抗性糖尿病患者,用了本发明的制剂治疗3天后,可以不用其他的降血糖药。改变不良生活习惯和连续使用本发明的制剂1.5∽数年后可以停药,并有健常人同等质量的生活。
in vivo的动物试验表明,用本发明的制剂[2.25mg/kg/d]可以完全防止链脲佐菌素(Streptozotocin)诱发的I型糖尿病大白鼠动物模型的白内障等并发症的发生,其效果比Epalrestat[ONO-2235]强20 40倍。in vitro的生化学实验证明本发明的制剂对糖尿病及并发症的发病机制之一,多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性有抑制作用,对HumanRecombinant AR的活性50%抑制时所需要浓度(IC50)是3.0mg/L,其有效成分异黄酮甙E和F,分别是0.80μM和1.07μM。经对酶的抑制作用动力学分析,显示对底物DL-甘油醛(±)-glyceraldehyde和游离酶的结合有竞争作用,其类型为可逆性竞争性抑制,KI值分别为1.78μM和2.67μM;对辅酶NADPH的抑制模式,为非竞争性抑制,KI值是3.20μM和4.44μM。证明具有防止糖尿病并发症的白内障和肾脏病变发生的生理活性。in vivo动物试验,用本发明的制剂3mg/kg/d能使重症I型糖尿病大白鼠的白内障等症状得到改善。是为第一种天然的抗糖尿病并发症的治疗药。
现在世界上,肥胖症、高血压、高胆固醇、心脑血管疾患和糖尿病等生活习惯病患人数,已达数亿,超过40岁以上总人口的十分之一。本发明能抑制正常大白鼠的体重增加,机理是在其能减少糖的吸收,所以有防止肥胖的作用,提示可利用于抗肥胖症的治疗以及可用为健康美容食品,和用于予防生活习惯病。从这些意义上来说,世界医药界对中药这个天然药物的宝库注目,诚为必然。
以下结合实施例,对本发明作进一步具体阐述。
首先本发明使用下列的中药原料提取活性成分说明如下:
1.甘草 Glycyrrhizae Radiz,Leguminosae,Glycyrrhiza uralensis Fisch et.DC.,G.Glabra L.var glandulifera Reg.et Herd(=G.glandulifera Waldstein etKitaibel),G.echinata L.包括中国的东北、西北、新疆、内外蒙古、印度、伊朗、伊拉克、西伯利亚、阿富汉等地产豆科甘草属(Glycyrrhiza eurycarpa L.)等植物根和茎叶里共同含有的β-构造的糖类、黄酮类、黄酮甙类、异黄酮类、异黄酮甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性的抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
2.山豆根 S.tonkinensis,Gagnep.Sophora,Leguminosae,Cycleahypoglauca diels.Indigofera amblyantha Craib.Sophora subprostratae Radix,Leguminosae.包括中国的西南、南部、东南各省广西、云南、福建、广东、湖南、四川、贵州、日本、越南等地产的柔枝槐(越南槐)等植物根和茎叶里共同含有的β-构造的二糖类、黄酮类、黄酮甙类、异黄酮类、异黄酮甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(Sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性有抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
3.索福拉(俗称苦骨) Sophora subprostrata,Kugua,ShiHaiChaoSophora,Leguminosae.包括中国的全土、特别是西南、南部、东南各省广西、云南、福建、广东、湖南、安徽、河南、四川、贵州、日本、越南等地产的苦参和柔枝槐(广豆根)之间的杂交种、新变种等豆科Sophora槐属等植物根和茎叶里共同含有的β-构造的苦骨糖类、黄酮类、黄酮甙类、异黄酮类、异黄酮甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性。(β-构造的苦骨糖类除外)对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldosereductase,AR)的活性有抑制作用,并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
4.苦参 Sophora flavescens Ait,S.,L.包括中国的全土、特别是西南、南部、东南各省广西、云南、福建、广东、湖南、安徽、河南、四川、贵州、日本、越南等地产的苦参种、变种毛苦参ver.Kronei(Hance)C.Y.Ma.红花苦参vsr.Galegoides(Pall)柔枝槐Sophora tonkinensis,Gagnep,S,.L.;var.Purourescens C.Y.Ma.;var.polyphlla S.Z.Huang etZ.C.Zhou;日本产的苦参:S.angustifolia(Sieb.et Zucc).Yakocl.S.,L.等、豆科Sophora属等植物根和茎叶里共同含有的β-构造的苦骨糖类、黄酮类、黄酮甙类、异黄酮类、以及异黄酮甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性有抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
5.人参 Ginseng Radix.五加科Panax ginseng C,.A.Meyer.同族植物Panax japonicum C.A.Meyer.包括中国的东北、朝鲜全土、日本、北美洲产的等同属植物根和茎叶里共同含有的β-构造的二、三糖类、以及人参皂甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR))的活性有抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度有效地防止各种各样的糖果尿病及并发症的发生。(生晒人参须或小枝生晒人参效果比较好)
6.黄柏 phellodendri Cortex.Rutaceae柑橘科,P.amurenseRupecht.,P.chinense Schneid.,P.wilsonii Hayata et Kanehira;Berbe-ridaceae,Berberis.,Rutaceae,Phellodendron amurense Rupre-cht.,P.amurense Rupr.var.Japonicum(Maxim.)Ohwi.,P.amurense Rupr.V-ar.sachalinense Fr.Schm.,P.amurense Rupr.Var.lavallei(Dode)Sprague.,Berberis asiatca Roxh.Et DC.,B.insignis Hook.fil B.vulgarii L.包括中国(含台湾省)全土、朝鲜全土、日本、印度等地产的近缘或同属植物的树皮里所含有的β构造的二、三糖类、以及黄柏皂甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性有抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
7.黄芩 scutellariae Radix.Labiatae紫苏科,scutellariabaicalensis Georgi.,Scutellaria viscidula Bunge.S.rehderiana Diels.S,amoena Wight.包括中国的全土、特别是河南、山西、山东、湖南、安徽、河北、四川、甘肃、陕西、内蒙古、以及印度、朝鲜、伊朗、伊拉克、西伯利亚、阿富汗、日本、越南等地产的Labiatae紫苏科同属植物根和茎叶里共同含有的β-构造的黄芩二、三糖类、黄酮类、黄酮甙类、异黄酮类、以及异黄酮甙类的抗糖尿病生理活性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性有抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
8. 牡丹皮Moutan radicis Cortex.Paeoniaseae牡丹科,Paeonia moutanSims(=P.suffruticosa Andrews)包括中国的全土、特别是河南、山西、山东、湖南、安徽、河北、四川、甘肃、陕西、以及印度、朝鲜、日本、越南等地产的Paeoniaseae牡丹科同属植物根的根皮含有的β-构造的糖类、酚类、黄酮类、黄酮甙类、异黄酮类、以及异黄酮甙类的抗糖尿病生活理性成分。本活性成分里所含的化合物所具有的抑制小肠粘膜调制的三种(sucrases,isomaltases,maltases)α-葡萄糖苷酶的活性、和对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性有抑制作用,(β-构造的二糖类除外)并能使葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。
此外牡丹根皮含有的糖类、酚类,可单离后用于刺激胰岛β细胞,促进β细胞的胰岛素的分泌量,改善糖尿病患者的胰岛素的作用不足而引起的糖代异常症状。
本发明的制备工艺流程,涉及到一般的中药制剂学的前处理工程,本文里省略。只强调制作中必须注意的几个问题。
原材料洗去杂质时必须注意不可用水太多,浸水太久,以免有效成分流失。
原材料干燥时必须注意避免用天日暴晒,以免有效成分变性。宜用40℃以下低温干燥或以阴干。
原材料粉碎时必须注意不可用冷水久浸,宜用粉碎机械,把干原材料粉碎成1×1×1mm以下的粗粒。
实施例1,
A.把粉碎成2号筛以下的粗粒干原材料,各分别放入20倍(重量比)从100℃到80℃的热水中浸渍2小时,然后80℃以下溶出2小时,收集溶出液,同法提取3次,收集溶出液,沉淀24小时,滤除渣滓。
B.把收集到的煎液,可用土洋方法(40℃以下)低温减压浓缩成1kg/L后备用。或在低温浓缩时可选用现代化低温减压浓缩机械,如喷雾低温减压浓缩机,或低温薄膜浓缩器。
把收集到的低温减压浓缩液灭菌后,(或加适量的防腐剂、助溶剂、矫味剂后),按上述的中药顺序,2∶1∶1∶1∶2∶1∶1.5∶0.5或按山豆根、索福拉、苦参的1∶1∶1或索福拉、苦参的1∶1的容积比×10ml,(或据临床症状的轻重,选用其他容积比。)分装到100ml的棕色瓶。按临床症状的轻重,选用适当剂量的合剂,分别在3餐饭前30分服用。在空腹血糖值回复正常后,可改成1天两次,分别在早、晚餐饭前30分服用。
实施例2,
按实施例1的A和B工艺把收集到的低温减压浓缩液,继续低温减压浓缩到干燥固体。然后,用粉碎机械,粉碎成细粒,过5号筛。(或加适量的赋形剂、助溶剂、矫味剂后,)按上述的材料顺序,2∶1∶1∶1∶2∶1∶1.5∶0.5或按山豆根、索福拉、苦参的1∶1∶1或索福拉、苦参的1∶1的原材料的重量比,(或据临床症状的轻、重选用其他原材料的重量比。)按一般的制剂学的方法混均。可加工成颗粒剂、片剂、(糖衣片)胶囊剂等剂形并灭菌。按临床症状的轻重,选用适当剂量,分别在3餐前30分服用。在空腹血糖值回复正常后,可改成1天两次,分别在早、晚餐饭前30分服用。动物实验的结果表明固体制剂具有液剂的同等效果。
实施例3,
按实施例1的A和B工艺,把收集到的低温减压浓缩液,按上述的中药顺序,以2∶1∶1∶1∶2∶1∶1.5∶0.5或按山豆根、苦骨、苦参的1∶1∶1或苦骨、苦参的1∶1的重量比混匀,用同量的乙酸乙脂(EtOAc)进行萃取三次,一方面将合并收集到的萃取乙酸乙脂液,用40℃以下低温减压浓缩到1/10时,用同量的精制水洗出水溶性成分3次,用40℃以下低温减压浓缩乙酸乙脂液和水洗出液到干燥固体状,成为乙酸乙脂提取物(SEE)和水洗出提取物(SEW);另一方面把收集到的乙酸乙脂非可溶的水溶液,经低温减压浓缩干燥固体,用10倍量的醇溶解出可溶性部分,加压过滤,收集到醇可溶液和醇非可溶液,分别用30℃和40℃以下低温减压浓缩到干燥为固体状的醇提取物(SM)和醇非可溶提取物(SWW)。最后,把收集到的(SEE,SM,SEW,SWW)用粉碎机械,粉碎成细粒,过5号筛。或加适量的赋形剂、助溶剂、矫味剂后,或据临床症状的轻、重选用其他原材料的重量比,按一般的制剂学的方法混均,可加工成颗粒剂、片剂、(糖衣片)胶囊剂等剂型并灭菌。按临床症状的轻重,选用适当剂量,分别在3餐前30分服用。在空腹血糖值回复正常后,可改成1天两次,分别在早、晚餐饭前30分服用。
实施例4,
把实施例3中收集到的醇提取物(SM)和水洗出提取物(SEW),分别用少量的醇溶解后加入同量的吸附性逆相ODS硅胶搅拌均匀,用30℃以下低温减压浓缩到干燥固体粉末状后备用。
把(SM,SEW)的ODS硅胶胶粉末,可以常规逆相圆柱液相层析分离法,分别用40∽60倍量的逆相ODS硅胶(孔径5mm×5mm)进行圆柱液相层析(圆柱的长度=直径×20∽50),或用固相层析分离法来精制其有效成分。移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸。层析液按照薄层硅胶层析TLC的上的不同斑点,或HPLC分析结果分别收集,分别用30℃以下低温减压浓缩到干燥固体状后备用。
把各种ODS层析液或分离的干燥固体(溶解后),分别用从动物小肠粘膜调制的二糖类水解酶进行抑制活性测定,分别收集各种不同强度抑制活性的提取分离物备用。
把各种ODS层析液或分离的干燥固体(溶解后),分别用从实验动物进行(同时经口投与的)各种糖类负荷(耐糖能实验)抑制活性测定,分别收集提取分离的各种不同强度抑制血糖值上升的活性物质备用。特别是把能抑制单糖类负荷时的血糖值上升的活性物质,和能使没有胰岛素的实验动物上升的血糖值经时地正常化的活性物质,分别收集起来备用。
把上述收集到的各种活性物质,分别用逆相ODS硅胶进行圆柱液相层析再精制、或用HPLC移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸再精制,或用固相层析分离法来精制其有效成分。用in vitro,in vivo方法测定活性,分别收集提取分离的各种不同强度抑制血糖值上升的活性物质备用。特别是把能抑制单糖类负荷时的血糖值上升的活性物质,和能使没有胰岛素的实验动物上升的血糖值经时地正常化的活性物质,分别收集起来备用。
把收集到的各活性物质,粉碎后(或加适量的赋形剂、助溶剂、矫味剂后,)据临床症状的轻、重选用相应的活性物质的重量比。按一般的制剂学的方法混均。可加工成颗粒剂、片剂、(糖衣片)胶囊剂等剂形并灭菌。按临床症状的轻重,选用适当剂量,分别在3餐前30分服用。在空腹血糖值回复正常后,可改成1天两次,分别在早、晚餐饭前30分服用。
或把收集到的能抑制单糖类负荷时的血糖值上升的活性物质,和能使没有胰岛素的实验动物上升的血糖值经时地正常化的活性物质,加适量抗溶血剂、助溶剂后,据临床胰岛素抵抗性的症状的轻、重选用相应的活性物质的重量比。按一般的肌肉注射剂制剂学的方法制成抗糖尿病性肌肉注射剂。没有胰岛素的in vivo培养细胞实验的结果,表明本制剂能迅速促使适量的葡萄糖顺利地进入胰岛素依存性组织和功能性细胞膜内,改善功能性细胞内的葡萄糖浓度,有效地防止各种各样的糖尿病及并发症的发生。和in vivo动物实验的结果表明本制剂具有强力且迅速的临床效果。(本制剂能使胰岛素作用的依存性组织和功能性细胞、和末梢组织的糖摄取能、糖质代谢机能亢进,从而有引起低血糖症副作用,使用时请临床医师和护理人注意。)但是本制剂有一定的溶血性(毒性)临床必须有一定经验的医师指导慎重使用于胰岛素抵抗性糖尿病的患者和胰岛素受体机不全的糖尿病患者。因为目前尚没有不会减低本制剂的生理活性的溶血防止剂、适当的溶血防止剂目前还在研究中。本制剂具有预防血管新生性疾病(特别指用于抗癌症)的临床效果。
实施例5,
把实施例3中收集到的乙酸乙脂提取物(SEE),按常规逆相圆柱液相层析分离法,分别用40∽60倍量的硅胶进行圆柱液相层析(圆柱的长度=直径×20∽50),或用固相层析分离法来精制其有效成分。移动相用CH2CL2和不同梯度比例的醇。层析液按照薄层硅胶层析TLC的上的不同斑点,或按HPLC的分析结果分别收集,分别用30℃以下低温减压浓缩到干燥固体状后备用。
按实施例4的同样方法,进行二糖类水解酶抑制活性测定和各种糖类负荷抑制活性测定,分别收集不同强度抑制活性的提取分离物,把收集到的各种抑制活性提取分离物,分别用ODS硅胶进行圆柱液相层析再精制,或用HPLC移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸再精制,或用固相层析分离法精制其活性物质,而后根据临床症状,选用相应活性物质的重量比制成颗粒剂、片剂或胶囊剂等剂形并灭菌。
实施例6,
把上述各实施例中收集到的水、有机溶媒提取物,用固相层析分离法和液相层析分离法以及HPLC方法分离精制,根据in vitro的对多元醇通路的关键酶—醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的活性抑制作用的活性测定的结果,或是各种物质的以对Human Recombinant AR的活性50%抑制时所需要浓度(IC50)、来分别收集抗糖尿病及并发症生理活性物质。其次是根据in vitro动物实验的防止链脲佐菌素(Streptozotocin)诱发的I型糖尿病大白鼠动物模型的各种糖尿病及并发证的发生的结果,来分别收集抗糖尿病及并发症生理活性物质。
把收集到的抗糖尿病及并发症生理活性物质,以in vitro和in vitro活性分析方法测定的结果为标准,来指导用固相层析分离法和液相层析分离法以及HPLC方法分离进行生理活性物质的再精制。分别收集再精制出来的具有强力的抗糖尿病及并发症生理活性物质,以及上述各实施例中再精制出来的具有强力的抗糖尿病及并发症生理活性物质,粉碎后(或加适量的赋形剂、助溶剂、矫味剂后,)据临床症状的轻、重选用相应的活性物质的重量比。按一般的制剂学的方法混均。可加工成颗粒剂、片剂、(糖衣片)胶囊剂等剂形并灭菌。按临床症状的轻重,选用适当剂量,用于抗糖尿病性并发症。
本发明的成分组成中药的一种或数种,包括上述各实施例中的抗糖尿病生理活性成分的一种或数种,不仅用于糖尿病并发症的治疗而且还可用于抗肥胖症的治疗和用于预防生活习惯病、抗白内障、抗视网膜毛细血管增生、抗神经功能不全、和肾功能不全的治疗,包括用于预防生活习惯病,预防血管新生性病症(特别指用于抗癌症。)
把上述本发明里抗糖尿病及其并发症活性材料的制剂的成分组成中药的一种材料或数种β-结构的糖类、黄酮甙类、异黄酮类、异黄酮甙类酚类等抗糖尿病生理活性成分的一种或数种的天然物、合成物及其已优化的衍生物,用于糖尿病的治疗为目的以及利用其抗肥胖症的治疗,包括作为健康美容食品的材料和用于预防生活习惯的行为均属侵权。
Claims (7)
1.抗糖尿病及并发症的中药制剂,其特征在于,该制剂是由下列重量百分比的原料药物按下述方法制备而成的:
甘草16-24 山豆根8-12 索福拉8-12 苦参8-12 人参16-24 黄柏8-12 黄芩12-18 牡丹皮4-6。
将上述经炮制和粉碎后的原料药物分别加水进行热浸渍,然后经溶出收集溶出液,再经沉淀、过滤、低温减压、浓缩,最后将浓缩液灭菌后按上述各重量百分比制成合剂;或将浓缩液继续浓缩到干燥固体,再进行粉碎、过筛,最后按上述各重量百分比将其混匀,制成固体剂形并杀菌成药。
2.根据权利要求1所述的中药制剂,其特征在于,各原料药物的重量百分比为:甘草20、山豆根10、索福拉10、苦参10、人参20、黄柏10、黄芩15、牡丹皮5。
3.一种制备权利要求1或2所述的中药制剂的方法,其特征在于,将上述经炮制和粉碎后的原料药物分别加水进行热浸渍,然后经溶出收集溶出液,再经沉淀、过滤、低温减压浓缩,最后将浓缩液灭菌后按上述各重量百分比制成合剂;或将浓缩液继续浓缩到干燥固体,再进行粉碎、过筛,最后按上述各重量百分比将其混匀,制成固体剂形并杀菌成药。
4.一种制备权利要求1或2所述的中药制剂的方法,其特征在于,按权利要求3将收集到的浓缩液按上述各组分重量百分比混匀,组成浓缩混合液,尔后用同量的乙酸乙脂EtoAc进行萃取、分离,收集乙酸乙脂萃取液和水溶液:
将乙酸乙脂萃取液经低温减压浓缩、水洗、再经低温减压浓缩得到乙酸乙脂浓缩液和水洗出液,并将其分别干燥成固体,为乙酸乙脂提取物SEE和水洗出提取物SEW备用;
将水溶液经低温减压浓缩干燥为固体,用醇溶解,经减压过滤,收集到醇提取液和醇非可溶液,并将其分别经低温减压浓缩干燥成固体,为醇提取物SM和醇非可溶提取物SWW备用;
将收集到的乙酸乙脂提取物SEE、水洗出提取物SEW、醇提取物SM、醇非可溶提取物SWW,按一般的制剂学的方法混匀,加工成颗粒剂、片剂、胶囊剂等剂形并灭菌。
5.一种制备权利要求1或2所述的中药制剂的方法,其特征在于:按权利要求4中将收集到的醇提取物SM和水洗出提取物SEW,分别用少量的醇溶解后加入吸附ODS硅胶搅拌均匀,经低温减压浓缩到干燥固体粉末状备用;
把SM,SEW的ODS硅胶粉末,分别进行圆柱液相层析或固相层析分离法精制其有效成分,按TLC上的不同斑点或HPLC分析结果分别收集,并经低温减压浓缩到干燥固体状备用;
把各种ODS层析液或分离的干燥固体,溶解后,进行二糖水解酶抑制活性测定,和各种糖类负荷抑制活性测定分别收集不同强度抑制活性的提取分离物,把收集到的各种抑制活性提取分离物,分别用ODS硅胶进行圆柱液相层析再精制,或用HPLC移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸再精制,或用固相层析分离法精制其活性物质,而后根据临床症状,选用相应活性物质的重量比制成颗粒剂、片剂或胶囊剂等剂形并灭菌;或添加适量的抗溶血剂、助溶剂后,根据临床症状,选用相应的活性物质的重量比,制成肌肉注射剂。
6.一种制备权利要求1或2所述的中药制剂的方法,其特征在于将:权利要求4中收集到的乙酸乙脂提取物SEE分别进行圆柱液相层析或固相层析分离法精制其有效成分,按TLC上的不同斑点或HPLC分析结果分别收集,并经低温减压浓缩到干燥固体状备用;
把各种ODS层析液或分离的干燥固体,溶解后,进行二糖水解酶抑制活性测定和各种糖类负荷抑制活性测定,分别收集不同强度抑制活性的提取分离物,把收集到的各种抑制活性提取分离物,分别用ODS硅胶进行圆柱液相层析再精制,或用HPLC移动相用水和不同梯度比例的醇加0.5%乙酸再精制,或用固相层析分离法精制其活性物质,而后按权利要求1、或2的重量比制成颗粒剂、片剂或胶囊剂等剂形并灭菌;
7.一种制备权利要求1或2所述的中药制剂的方法,其特征在于:把权利要求4--5中收集到的有机溶媒提取物以及权利要求3中的水合剂,分别用固相层析分离法和液相层析分离法以及HPLC方法分离,进行醛糖还原酶的活性的抑制作用试验,从而分别收集治疗糖尿病及抗并发症的生理性物质;将收集到的该生理活性物质按本方法再重复提取一次,分别收集再精制出来的具有强力的治疗糖尿病及抗并发症的生理活性物质,把该精制的具有强力的治疗糖尿病及抗并发症的生物活性物质,粉碎后,按权利要求1或2的重量比,加工成颗粒剂、片剂、胶囊剂等剂形并杀菌。
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