CN110312526A - 抗o-乙酰化gd2神经节苷脂抗体改善药物治疗潜力的用途 - Google Patents

抗o-乙酰化gd2神经节苷脂抗体改善药物治疗潜力的用途 Download PDF

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Ogd2 Drug
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Guo Jia Keyanzhongxin
National Institute Of Medicine And Health
Western Part Cancer Institute
Ogd2 Drug
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Abstract

本发明涉及通过使用识别OAcGD2神经节苷脂的抗体将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中的方法。

Description

抗O-乙酰化GD2神经节苷脂抗体改善药物治疗潜力的用途
本专利申请要求2016年12月5日提交的欧洲专利申请16002576.3的优先权，其通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及包含抗癌剂和识别特异性O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂(即OAcGD2神经节苷脂)的抗体(其增强癌细胞对所述抗癌剂的摄取)的组合物，以及它们在治疗、预防和/或控制特征在于表达OAcGD2神经节苷脂的细胞的特定癌症的方法中的用途。
背景技术
将抗癌剂递送至细胞是抗癌的治疗方法的核心方面。抗癌剂的生物化学特性取决于它们的分子量、环境pH以及它们的亲脂性与亲水性特征。
带负电的细胞膜的交叉是将抗癌剂递送至细胞的第一步。现在已经确定在动物肿瘤中产生pH梯度。由于抗癌剂在水介质中是可电离的，因此肿瘤细胞中的酸性细胞外pH差异地调节弱碱性或酸性抗癌剂的活性(MAHONEY等，Biochemical Pharmacology，66卷，第1207-1218页，2003年)。在溶液中，大多数抗癌剂以非电离和电离形式存在。非电离抗癌剂通常更易溶于脂质，并且可以容易地扩散穿过细胞膜。相反，电离抗癌剂具有低的脂质溶解度并且在不寄生通常用于生理学底物的转运蛋白的情况下不能穿透脂质膜。这种离子捕获机制可以改变药物积聚，然后明显调节化疗效率。
克服面临将抗癌剂转移到癌细胞和肿瘤中的生物屏障的能力必须与毒性程度相平衡。在常规的抗癌剂中，烷化剂、抗代谢分子或抗肿瘤抗生素直接损害或干扰DNA或RNA以防止癌细胞生长和繁殖。其他药物，比如拓扑异构酶抑制剂或有丝分裂抑制剂、特异性靶酶参与细胞周期。分化剂或激素也用于使癌细胞成熟为正常细胞或减缓癌症的生长。几乎所有的抗癌药物都是有毒的，并且化疗会引起严重且通常是危险的副作用，包括严重的恶心、骨髓抑制和免疫抑制。
另外，即使施用抗癌剂的组合，暴露于常规抗癌剂也可导致化疗失败和肿瘤发展。这种现象通常是由于预先存在的前体细胞或新出现的耐药性克隆。而且，抗癌剂可能会导致严重的副作用，比如心脏或神经损伤，甚至更显著，可增加给药后几年内第二次癌症的风险。
最近，对高效率和特异性沉默靶基因的RNA干扰的能力用于开发靶向人细胞中RNA的药物(BARATA等，Cancer Treatment Reviews，50卷，第35-47页，2016年)。为癌症治疗开发的基于RNA的疗法依赖于使用双链合成短RNA分子(miRNA)或合成DNA/RNA样寡核苷酸(ASO)。由于它们的负电荷，这些分子通过癌细胞的细胞膜的转移是非常成问题的。通过对寡核苷酸结构进行化学修饰和/或通过使用包括病毒载体、生物相容性阳离子聚合物和共聚物、无机纳米颗粒、去端肽胶原蛋白和脂质体的递送系统，可以减弱该缺点。但是，这些递送系统影响基于miRNA的疗法的药物代谢动力学过程并且还可具有毒性。而且，递送系统通常需要针对每种细胞类型进行参数优化。
因此，需要新的组合物和方法来克服癌细胞和肿瘤中药物摄取的缺点，以改善它们的治疗潜力并且还减少它们的副作用，比如毒性。
发明内容
发明人先前已经证明，特异性靶向O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂的(即OAcGD2神经节苷脂)的小鼠治疗性抗体在治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症中显示出有益效果(EP2076542 B1)。
发明人现已惊奇地发现，除了其自身的抗癌活性外，该抗体在用作另一种抗癌剂的佐剂时可有效治疗癌症。它们更尤其显示出对特异性靶向OAcGD2神经节苷脂的抗体和不同抗癌剂的联合治疗的表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的协同作用，使得可以减少抗癌剂的剂量，并因此减少毒性副作用。
因此，本发明涉及用于将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中的组合物，其包括(i)至少一种抗癌剂，和(ii)至少一种识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物，其中识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体有利于细胞摄取至少一种抗癌剂，并进而有利于其活性。现在，识别OAcGD2神经节苷脂的所述至少一种抗体、其功能片段或衍生物对所述神经节苷脂是特异性的。
在一个实施方式中，识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物包括：
a)具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的轻链可变区(VL)多肽；和
b)具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区(VH)。
在某些实施方式中，所述至少一种抗癌剂也选自包括或由下述组成的组中的至少一种抗癌剂：比如烷化剂的抗癌剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗体、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、皮质类固醇、激素或激素样药物、细胞因子、核苷类似物；如双链合成短RNA分子(miRNA)或合成DNA/RNA样寡核苷酸(ASO)的核酸。
所述至少一种抗癌剂可能自身不能穿过癌细胞的细胞膜。
所述至少一种抗癌剂的分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内。
本发明的另一目的是提供识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物，其用途为将抗癌剂选择性递送到表达抗癌剂的OAcGD2神经节苷脂的细胞中以治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症。
本发明的另一目的是提供将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中的方法，其包括使癌细胞与识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体以有效增强细胞摄取抗癌剂的量和浓度接触，其中抗体在细胞膜内引起渗透性缺陷，比如孔形成。
本发明的又一目的是提供预防和/或治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的方法，其包括向有需要的患者施用组合物，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
本发明的又一目的是提供增加患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂的敏感性的方法，其包括向有需要的患者施用组合物，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选的(iii)药学上可接受的载体。
本发明的又一目的是提供预防或延迟患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者中抵抗抗癌剂的癌症发展的方法，其包括向有需要的患者施用组合物，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
本发明的另一目的是提供鉴定适用于预防和/或治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的(i)至少一种抗癌剂和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的协同组合的方法。
本发明的又一目的是提供识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物用于增强表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中抗癌剂的细胞内摄取的新用途。
最后，本发明涉及一种试剂盒，其包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
附图说明
图1：对用40μg/ml的抗OAcGD2 mAb 8B6温育30分钟的成神经细胞瘤细胞系和胶质母细胞瘤原代细胞进行扫描电子显微镜检查。未处理(或用同种型匹配的阴性对照小鼠IgG3处理)的IMR5(图A))、LAN-1(图C)和DUASOII(图E)细胞共享连续的圆形，而在抗OAcGD2mAb 8B6处理的IMR5(图B)、LAN-1(图D)和DUASOII(图F)细胞的膜中出现一些孔。放大倍数分别为2.5千倍(KX)(图A、B、C、D和F)和2.0KX(图E)。
图2：在用40μg/ml抗OAcGD2 mAb 8B6温育30分钟的成神经细胞瘤细胞系和胶质母细胞瘤原代细胞上进行细胞和孔的直径和表面的测量：IMR5(图A)、LAN-1(图B和C)和DUASOII(图D和E)细胞。放大倍数分别为5.02KX(图A)、4.5KX(图B和C)和7.5KX(图D和E)。
图3：成神经细胞瘤细胞中5-FU、顺铂和多柔比星的内化。结合同种型匹配的阴性对照小鼠IgG3(40μg/ml)或抗OAcGD2 mAb 8B6、抗OAcGD2 mAb c8B6.14b、抗OAcGD2 mAbc8B6.15b(40μg/ml)用5-FU(1.52μM)-图A，或顺铂(1.52μM)-图B，或多柔比星(4.7μM)-图C和D处理LAN-1细胞。将抗癌剂和mAb在37℃下温育30分钟。在FACS采集之前，将成神经细胞瘤细胞用4％PFA固定。通过用0.05％皂苷与抗癌剂组合在30分钟内处理固定的LAN-1细胞进行阳性对照。通过流式细胞术(用535nm激光激发)评估肿瘤细胞中抗癌剂的并入，并且结果表示为在总细胞群中并入抗癌剂的细胞的百分比。
图4：多柔比星在黑素瘤(M21细胞)、乳腺癌(MDA-MB-231细胞)、小细胞肺癌(H524细胞)、尤因氏肉瘤细胞(TC71细胞)和胶质母细胞瘤细胞(DuGan)中的内化。结合同种型匹配的阴性对照小鼠IgG3(40μg/ml)或抗OAcG D2 mAb 8B6(40μg/ml)，用0.26μM的抗癌剂(除了MDA-MB-231，0.18μM)处理细胞。将抗癌剂和mAb在37℃下温育30分钟。在FACS采集之前，用4％PFA固定肿瘤细胞。通过用皂苷0.05％与抗癌剂组合在30分钟内处理固定的肿瘤细胞来进行阳性对照。通过流式细胞术(用535nm激光激发)评估黑素瘤(M21)-图A、乳腺癌(MDA-MB-231)-图B、小细胞肺癌(H524)-图C、尤因氏肉瘤(TC71)-图D和胶质母细胞瘤(DuGan)-图E细胞中抗癌剂的并入，并且结果表示为在总细胞群中并入抗癌剂的细胞的百分比。
图5：抗OAcGD2 mAb 8B6在体内成神经细胞瘤实验肝转移小鼠模型中增强化疗抗肿瘤活性。通过静脉内注射小鼠(n＝10/组)接种2.5×105NXS2小鼠成神经细胞瘤细胞。在肿瘤细胞接种后第3天开始8B6mAb治疗，每周两次，连续3周(累积剂量＝150μg，A-C)。在肿瘤接种后第10天开始所有化疗处理。图A：以10mg/kg口服给药异维甲酸，每周5次，持续2周。图B：以0.36mg/kg腹膜内注射给药拓扑替康，每周5次，持续1周。图C：以1mg/kg腹膜内注射给药多柔比星，每周5次，持续2周。在肿瘤接种后28天对小鼠实施安乐死。通过测定与仅用载剂处理的小鼠相比的新鲜样品的肝脏重量来评估抗肿瘤功效。肝脏重量表示肝转移数。y轴开始于0.8g，对应于平均正常肝脏重量。数据表示为平均值±SEM。
图6：抗OAcGD2 mAb 8B6结合异维甲酸(图A)、拓扑替康(图B)和多柔比星(图C)的系统耐受性。在第0天在图6中呈现的小鼠组(n＝10)的平均重量定义为100％重量。每组的体重在治疗期间保持稳定。△，用mAb 8B6治疗的小鼠；○，用抗癌剂治疗的小鼠；□，用化疗药物加mAb 8B6治疗的小鼠。
图7：抗-OAcGD2 mAb 8B6克服体内胶质母细胞瘤异种移植小鼠模型中患者衍生的TMZ难治GBM-10细胞(GBM-10TMZR)中的肿瘤抗性。在第0天，将1×106GBM-10细胞皮下注射到小鼠中。然后将小鼠分成两组：第一组小鼠在第12、22和32天以0.05mg/小鼠的单剂量通过腹膜内注射接受替莫唑胺(TMZ)，而第二组小鼠不进行治疗。监测肿瘤体积(图A)。评估从TMZ治疗的小鼠和未治疗的小鼠中分离的GBM-10细胞中的OAcGD2表达(图B)。接下来通过有限稀释测定确定TMZ难治水平，并表达为肿瘤异种移植物中胶质母细胞瘤癌症干细胞(GSC)频率。在从未治疗的(图C，GBM-10CTL(TMZ))和复发GBM-10异种移植物(图D，GBM-10TMZR)分离的GBM-10细胞中比较单药疗法(8B6或TMZ)和双药物组合(TMZ+8B6)对GSC存活的影响。
具体实施方式
在第一方面中，本发明涉及将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中的方法，其包括使细胞与识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物以有效增强细胞摄取抗癌剂的量和浓度接触，其中抗体在细胞膜内引起缺陷，比如孔形成。
优选地，识别OAcGD2神经节苷脂的所述至少一种抗体为多聚体抗体。
事实上，发明人已经确定，识别OAcGD2神经节苷脂并具有同时多聚化特性的抗体(例如具有聚集特性的8B6IgG3抗体和包含具有多聚化特性(即六聚体形成)的嵌合IgG1恒定区的嵌合8B6抗体)诱导抗癌剂的渗透，而没有这种多聚化特性的抗体(例如包含IgG1恒定区的嵌合8B6抗体)对这种渗透没有影响。因此，似乎OAcGD2神经节苷脂结合和多聚化特性对于表达OAcGD2神经节苷脂的细胞的细胞膜中的孔形成都是必需的。如本文所使用，术语“多聚体抗体”可指二聚体、三聚体、四聚体、......或聚集体。
为了本发明的目的，术语细胞膜、细胞质膜、外细胞膜和质膜是等同的并且可以无差别地使用。
术语“将抗癌剂递送到细胞中”是指抗癌剂释放到细胞内，使得抗癌剂可到达其细胞内靶标。
根据优选的实施方式，表达OAcGD2神经节苷脂的细胞是具有锚定于细胞膜的OAcGD2神经节苷脂的肿瘤细胞、癌细胞、癌症干细胞或过度增生细胞。术语“癌症干细胞”在本领域中具有其一般含义，并且是指具有与正常干细胞相关的特征的癌细胞亚群(在实体瘤和血液癌症中发现)，特别是产生特定癌症样本中发现的所有细胞类型的能力。它们具有自我更新、分化为多种癌细胞系和广泛增殖的能力。它们可以仅用少量癌症干细胞引发新肿瘤，并且往往对包括化疗和放疗的常规疗法具有抗性。已经在非常不同类型的癌症中鉴定出癌症干细胞，包括但不限于白血病(包括急性髓系白血病和急性淋巴白血病)、乳腺癌、神经胶质瘤(包括胶质母细胞瘤)、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、膀胱癌或胃癌。已经观察到不同的标记物在大量癌细胞中鉴定癌症干细胞，这些标记物是变化的并且取决于癌症的类型。可用于鉴定癌症干细胞的标记物的例子包括但不限于CD34、CD38、CD19、白细胞介素-3-受体α(CD123)、CD33、CD44、CD44v6、CD47、CD24、EpCAM(ESA)、Lin、CD133、A2B5、SSEA-1、CD166、CD26、CD200、α2β1、Sca、CD45、Pecam、ALDH、ALDH1、Oct4、ABCG2、CXCR4、AFP、EMA、IGF-IR。
术语“细胞摄取抗癌剂”是指抗癌剂接触靶细胞并且内化/渗透到靶细胞中，比如肿瘤细胞、癌细胞、癌症干细胞或过度增生细胞。现在已经充分确定，细胞膜的交叉是抗癌剂到达其细胞内靶标的第一个限制步骤。
术语“缺陷”是指局部细胞膜扰动，其引起细胞瞬时变形，导致细胞膜通透性增加。例如，细胞膜的局部内陷或外翻可能由于识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物与表达OAcGD2神经节苷脂的细胞的结合。换句话说，表达OAcGD2神经节苷脂的细胞的细胞膜通透性的瞬时增加仅在识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物存在的情况下发生。缺陷可以是瞬时的，使得细胞膜可缩回到其原始构象。
术语“孔形成”是指甘油磷酸脂双层的物理修饰或破坏，导致在细胞膜内形成孔。这导致细胞膜通透性的瞬时增加，并且还可在细胞外分子的内吞作用中起作用。孔形成允许分子从细胞外区室进入细胞内区室。孔的数量和直径取决于若干参数，比如细胞类型、细胞膜组成、与细胞接触的抗体的数量和持续时间。孔径大小决定了使用本发明的方法可递送到细胞的细胞质中的试剂的尺寸。扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)可用于测量孔径(ZHAO等，Journal of Drug Targeting，16:1，18-25，2008)。
根据优选的实施方式，膜孔的平均直径为约1nm至约100nm，优选约1nm至约50nm，并且最优选约1nm至约10nm。
脂双层细胞膜的厚度为4nm-10nm。因此，在一些情况下，孔的平均直径可以大大优于细胞膜厚度。
在所有实施方式中，识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物在细胞膜上产生非选择性孔。“非选择性孔”是指允许不带电或带电分子(比如电离抗癌剂)扩散通过细胞膜的磷脂双层的孔。孔径大小是选择穿过细胞膜的不带电或带电化合物的相关标准。
当在适当条件下与表达OAcGD2神经节苷脂的细胞接触时，识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物具有通过在细胞膜内导致孔来诱导抗癌剂在给定细胞培养群的部分或全部细胞内的细胞渗透的能力。“细胞渗透”是指在明显优于被动扩散的条件下来自外部环境的抗癌剂在细胞内环境中通过。
该发现提供了治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的全新方法。通过在癌细胞中进行非选择性孔，识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物极大地增强了癌细胞对抗癌剂的通透性。这可能不仅导致其治疗效果的增加，而且还导致其相关潜在副作用的减少。
当在体外和/或离体使用时，实施本发明的方法用于药物筛选目的。因此，将抗癌剂体外和/或离体递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞(优选肿瘤细胞)中的方法适于筛选抗癌剂和识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物的协同组合。
因此，本发明还涉及用于将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞(优选肿瘤细胞)中的组合物，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂至少一种抗体、其功能片段或衍生物，其中识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体增强细胞(优选肿瘤细胞)摄取至少一种抗癌剂。
当在体内使用时，实施本发明的方法用于治疗目的。因此，将抗癌剂体内递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞(优选肿瘤细胞)中的方法适于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症。
因此，本发明还涉及组合物，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体，该组合物的用途为治疗和/或预防表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的方法中。
本发明还涉及识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物，其用途为将至少一种抗癌剂选择性递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中，以治疗和/或预防癌症。
本发明还涉及预防和/或治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
术语“表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的治疗方法”或“治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的方法”是等同的，并且是指治愈、逆转、减弱、缓解、最小化、抑制或停止表达OAcGD2神经节苷脂的癌症或表达OAcGD2神经节苷脂的癌症进展的有害作用，或减弱表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的进展。优选地，这种治疗还导致肿瘤生长或转移扩散的消退，即可测量肿瘤的尺寸减小。最优选地，这种治疗导致肿瘤完全消退。
术语“表达OAcGD2神经节苷脂的癌症”是指在其表面上具有表达O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂的细胞的癌症。通常，所述细胞在其细胞表面上表达大于1,000个OAcGD2神经节苷脂分子，优选地在其细胞表面上大于10,000个，更优选地大于50,000个OAcGD2神经节苷脂分子。表达OAcGD2神经节苷脂的所述癌症选自包括或由下述组成的组中：成神经细胞瘤、神经胶质瘤、成视网膜细胞瘤、尤因氏家族肿瘤、肉瘤(即横纹肌肉瘤、骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和纤维肉瘤)、小细胞肺癌、乳腺癌、黑素瘤、转移性肾癌、头颈癌和血液癌症(即白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和骨髓瘤)。更一般地，术语“表达OAcGD2神经节苷脂的癌症”是指表现出大于10％的表达OAcGD2神经节苷脂的细胞的癌症，优选地大于15％，更优选地大于20％。优选地，所述细胞是癌症干细胞(CSC)。表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的“治疗”是指施用组合物，以破坏表面上表达OAcGD2神经节苷脂的肿瘤或癌细胞，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的“预防”是指施用组合物，以减少肿瘤生长或阻止转移扩散或甚至阻止肿瘤复发，该组合物包括(i)至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。优选地，如果在已患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的受试者复发之前施用治疗，则预防结果可以是防止转移扩散发生。最优选地，预防的另一结果可以是预防已接受治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的受试者的肿瘤复发。
如本文所使用，术语“患者”是指任何哺乳动物，包括人。该术语不旨在限于特定年龄或性别。因此，该术语包括成人和新生儿以及儿童，无论是男性还是女性。
术语“抗癌剂”是指具有抗增生性、抗致癌和/或抑癌特性的化学、物理或生物试剂或化合物，其可用于抑制肿瘤生长、增殖和/或发展。优选地，抗癌剂具有抗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的活性。
所述至少一种抗癌剂可选自包括或由下述组成的组中：抗癌剂，比如烷化剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗体、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、皮质类固醇、激素或激素样药物、细胞因子、核苷类似物；核酸，如双链合成短RNA分子(miRNA)或合成DNA/RNA样寡核苷酸(ASO)。
所述至少一种抗癌剂可能自身不能穿过癌细胞的细胞膜。
在所有实施方式中，抗癌剂具有与约1nm至约2μm范围内的孔的尺寸相容的空间位阻，使得其可以通过细胞与识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物接触而产生的孔穿过细胞膜。
在一些实施方式中，抗癌剂可以嵌入生物相容的且可生物降解的纳米颗粒中。当抗癌剂为核酸，如双链合成短RNA分子(miRNA)或合成DNA/RNA样寡核苷酸(ASO)或短多肽时，这尤其适用，从而保护它们免受核酸酶或蛋白酶的裂解。
在该情况下，技术人员可以基于它们的尺寸以及它们的物理化学和药物代谢动力学特征来选择纳米颗粒的类型。例如，通过在胃腺癌动物模型中使用氧化铁纳米颗粒(HIRAKI等，Molecular Therapy-Nucleic Acids(2015)4，e231)，以及结肠直肠腺癌动物模型中的碳酸酯磷灰石纳米颗粒(SUN等，2014，Mol Cell Biochem，390卷，第l9-30页)，成功地将miRNA递送至癌细胞。可以使用不同的技术测量纳米颗粒的尺寸分布，比如原子力显微镜(AFM)、透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)。例如，氧化铁纳米颗粒的单个颗粒尺寸为10nm-60nm，并且由碳酸酯磷灰石纳米颗粒组成的颗粒尺寸为70nm-80nm，如果它们形成聚集体则至多200nm-300nm。
纳米颗粒还可用于化疗中使用的抗癌剂，其均匀地分布在患者体内并且不能将癌细胞与健康细胞区分开。
近年来，已经针对用于治疗癌症的超小无机颗粒(USNP)进行了相当大的努力。金USNP的核尺寸在1nm至3nm的范围内。
当与识别OAcGD2神经节苷脂的抗体一起温育时，纳米颗粒和超小纳米颗粒的尺寸与表达OAcGD2神经节苷脂的癌细胞的细胞膜内观察到的孔的尺寸相容。
在一些实施方式中，抗癌剂不嵌入纳米颗粒中。在该情况下，溶液中的抗癌剂是非球形的、动态的(翻滚的)和溶剂化的。因此，可以使用抗癌剂的扩散特性来确定动态水合的溶剂化抗癌剂的表观尺寸。动态光散射(DLS)被认为是计算流体动力学半径(Rh)的最佳技术，该流体动力学半径被定义为以与观察下的分子相同的速率扩散的等效硬球的半径。Rh表示动态水合/溶剂化分子的表观尺寸。Rh通常使用斯托克斯-爱因斯坦方程由扩散系数计算。回转半径(Rg)，定义为从分子核到分子中每个质量元素的质量加权平均距离，是允许确定分子尺寸的另一参数。但是，可以使用诸如小角度中子散射(SANS)和小角度X-射线散射(SAXS)的其他技术或从高分辨率X-射线结构获得分子的Rg。
通过其分子量表征形成用于治疗癌症的组合物的一部分的抗癌剂也是合适的。
在优选的实施方式中，抗癌剂的分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内。
“分子量”是指分子的平均质量，通过将定义所述分子的分子式中的原子的原子量相加来计算。词语质量和重量在本发明中可互换使用。“原子量”是指在门捷列夫周期表中公开的元素的典型地球样品中发现的同位素质量的加权平均值。
道尔顿的定义可在绿皮书(IUPAC，Green book，第三版，“Quantities，Units andSymbols in physical chemistry”，2007)中找到。道尔顿，符号Da，用作统一的原子量单位，符号u的替代名称。道尔顿与碳-12核素的质量有关，并且被定义为碳-12原子的1/12质量(ma(12C)/12≈1.666 538 782(83)x10-27kg＝10-3/Na(kg)，其中Na是阿伏加德罗常数，等于6.022 14X 1023mol-1)。因此，碳-12的摩尔质量精确地为12g/mol。这导致当摩尔质量以g/mol(等于g.mol-1)的SI单位表示时，摩尔质量在数值上与原子量相同。作为例子，水(H2O)的摩尔质量为18g.mol-1，并且其分子量为18Da。道尔顿可与SI前缀组合来表达千道尔顿(kDA)或兆道尔顿(Da)的大分子质量。例如，摩尔质量为200,000g·mol-1的抗癌剂具有200,000Da的分子量，其也可定义为200kDa。
此外，在某些实施方式中，根据本发明的组合物的抗癌剂的分子量范围为10kDa至15kDa，更优选11kDa至14kDa，更优选12kDa至13kDa。最优选地，根据本发明的组合物的抗癌剂的分子量在10kDa至13kDa的范围内。
在其他实施方式中，根据本发明的组合物的抗癌剂的分子量范围为80kDa至200kDa，更优选100kDa至180kDa，更优选120kDa至160kDa的分子量。最优选地，根据本发明的组合物的抗癌剂的分子量在150kDa至200kDa的范围内。
在其他实施方式中，根据本发明的组合物的抗癌剂的分子量范围为120道尔顿至800道尔顿，更优选150道尔顿至600道尔顿，更优选250道尔顿至550道尔顿的分子量。最优选地，根据本发明的组合物的抗癌剂的分子量在120道尔顿至550道尔顿的范围内。
另外，在某些实施方式中，所述至少一种抗癌剂选自包括或由下述组成的组中的抗癌剂：抗肿瘤抗生素，比如蒽环类；拓扑异构酶抑制剂，比如喜树碱；烷化剂，比如咪唑并四嗪或环磷酰胺；异戊烯醇脂质；抗代谢分子，比如二嗪和过渡金属盐。
蒽环类是治疗癌症最有效的一类药物。这些分子起源于20世纪50年代，首先从土壤细菌波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)中鉴定出来。蒽环类抗生素由具有相邻醌和氢醌部分的刚性平面四环结构、在C-13处具有羰基的短侧链和通过糖苷键附接至四环的C-7的氨基糖柔胺(daunosamine)组成。蒽环类通过被动扩散进入细胞，并能够与拓扑异构酶-DNA复合物相互作用，从而抑制细胞生长。尽管在杀死癌细胞方面具有有效活性，但其中只有少数被批准用于医药用途，比如柔红霉素、多柔比星、伊达比星、表柔比星、戊柔比星、米托蒽醌或匹蒽醌(pixantrone)。而且，它们的临床有用性受到累积剂量依赖性心脏毒性的限制，其可导致不可逆的心力衰竭。优选地，用于本发明组合物的蒽环类抗生素选自包括或由下述组成的组中：柔红霉素、多柔比星、伊达比星、戊柔比星及它们的其他衍生物。最优选地，本发明组合物中使用的蒽环类抗生素是多柔比星或其衍生物之一。
在所有实施方式中，根据本发明的组合物包含治疗有效量的至少一种抗癌剂和治疗有效量的识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物。
如本文所使用，术语“治疗有效量”旨在包括将实现期望的治疗效果或生物效应的任何量。治疗效果取决于所治疗的表达OAcGD2神经节苷脂的癌症或期望的生物效应。这样，治疗效果可以是与表达OAcGD2神经节苷脂的癌症相关的症状的严重程度降低和/或抑制表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的(部分或完全)进展。引发治疗反应所需的量可以基于癌症类型、患者的年龄、健康、体形和性别来确定。
根据优选的实施方式，多柔比星或其衍生物之一可以每3周或4周以40mg/m2至60mg/m2的剂量在1天至3天内对成人受试者施用。多柔比星或其衍生物之一的最大累积剂量不应超过600mg/m2。对于儿童，剂量降低到25mg/m2与30mg/m2之间(MATTHAY等，N Engl JMed，1999，341卷，第1165-1173页)。为了将剂量(mg/m2)转换为剂量(mg/kg)，对于人而言简单地除以37(NAIR和JACOB，J Basic Clin Pharm.，2016，7(2)卷：第27-31页)。
本文给出的剂量用于成人和/或儿童，但是可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物的规格。
喜树碱是包含平面五环结构的杂环化合物，其包括吡咯并[3,4-β]-喹啉部分(环A、B和C)、共轭吡啶酮部分(环D)和具有(S)构型的α-羟基内酯环(E-环)内的在第20位的一个手性中心。这些基于喹啉的生物碱最初是从亚洲树喜树(Camptotheca acuminate)中提取的。拓扑替康和依立替康是被批准用于治疗癌症的仅有的两种喜树碱衍生物药物。优选地，本发明组合物中使用的喜树碱选自包括或由下述组成的组中：拓扑替康、依立替康、卢比替康和其他衍生物。最优选地，本发明组合物中使用的喜树碱是拓扑替康、依立替康或其衍生物之一。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，拓扑替康或其衍生物之一可以每3周以1.5mg/m2的起始剂量在5天内施用，然后每3周以1mg/m2与1.5mg/m2之间的剂量在5天内施用。对于儿童，剂量减少至每28天在5天内0.75mg/m2(DI GIANNATALE等，Phase II studyof temozolomide in combination with topotecan(TOTEM)in relapsed or refractoryneuroblastoma：a European Innovative Therapies for Children with Cancer-SIOP-European Neuroblastomastudy and Reza Rahbar,Carlos Rodriguez-Galindo,JohnG.Meara,Edward R.Smith,Antonio R.Perez-Atayde.2 décembre 2013 SpringerScience&Business Media)。
根据另一优选的实施方式，对于成人受试者，依立替康或其衍生物之一可以每3周通过90分钟静脉输注以340mg/m2-350mg/m2施用(FRIEDMAN等，J.Clin.Oncol.，27(28)卷，第4733-4740页，2009年)。
本文给出的剂量用于成人和/或儿童，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物的规格。
咪唑并四嗪是一类含有邻位稠合咪唑和四嗪环的杂双环化合物。在这些化合物中，替莫唑胺(TMZ)已被批准用于治疗新诊断的多形性成胶质母细胞瘤(GBM)以及难治的间变性星形细胞瘤。这种前药需要被活化才能具有活性。尽管对患有胶质母细胞瘤的一部分患者有明确的益处，但TMZ还诱导与TMZ抗性的出现相关的进行性肿瘤生长。优选地，用于本发明组合物的咪唑并四嗪是替莫唑胺或其衍生物之一。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，替莫唑胺或其衍生物之一可以在1天内以75mg/m2与200mg/m2之间的剂量施用。
本文给出的剂量用于人类，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物以及儿童的规格。
异戊烯醇脂质由五碳前体异戊烯二磷酸酯和二甲基烯丙基二磷酸酯合成，其主要通过甲羟戊酸途径产生。因为简单的类异戊二烯(直链醇、二磷酸酯等)通过连续添加C5单元形成，所以以这种方式对它们进行分类是方便的，对于那些含有大于40个碳的结构(即，>8类异戊二烯单元)使用多萜亚类。例如，维生素A和其衍生物以及植烷酸和其氧化产物降植烷酸被归类为C20类异戊二烯。类胡萝卜素是重要的简单类异戊二烯，其用作抗氧化剂和用作维生素A的前体。另一类生物学上重要的分子例如醌和氢醌，其包含连接至非类异戊二烯来源的醌类核的类异戊二烯尾。维生素E和K以及泛醌是这类的例子。在异戊烯醇脂质中，类视黄醇是维生素A的天然和合成衍生物。数个研究报道了它们用作治疗癌症比如急性髓系白血病(AML)的强大分化诱导剂或肿瘤细胞凋亡诱导剂。例如，维生素A衍生物包括视黄酸(RA)、全反式视黄酸(ATRA)、9-顺式RA、4-HPPR、13-顺式RA和视黄酸的合成类似物，比如AM580。最近，发现13-顺式RA在骨髓移植后治疗高风险成神经细胞瘤中是有益的(Matthay等，N Engl J Med；341:1165-1173,1999)。优选地，用于本发明组合物的异戊烯醇脂质选自包括或由下述组成的组中：ATRA、9-顺式RA和13-顺式RA。最优选地，用于本发明组合物的异戊烯醇脂质是13-顺式RA，也称为异维甲酸。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，异维甲酸可以以80mg/m2与160mg/m2之间的剂量施用(YU等，N Engl J Med.，2010，363(14)卷：第1324-1334页)。
本文给出的剂量用于人类，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物以及儿童的规格。
二嗪是包含五元杂环化合物的有机化合物，该化合物具有五个氮原子，并且两个氮原子在1位和2位(哒嗪)、1位和3位(嘧啶)、或1位和4位(吡嗪)。优选地，用于本发明组合物的二嗪选自包括或由下述组成的组中的嘧啶和嘧啶衍生物：硫鸟嘌呤、氟达拉滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、吉西他滨、6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)和相关物。最优选地，用于本发明组合物的二嗪是5-FU或氟达拉滨。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，5-FU可以每4周在4至5天内以350mg/m2与400mg/m2之间的剂量施用。
根据优选的实施方式，氟达拉滨可以每28天以40mg/m2/天的口服剂量施用连续5天。本文给出的剂量用于人类，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物以及儿童的规格。
IUPAC将过渡金属定义为具有不完整的亚壳层或可形成仅具有不完整的亚壳层的稳定离子的任何元素。过渡金属是元素周期表中21至30、39至48、71至80和103至112的四十种化学元素。优选地，用于本发明组合物的过渡金属选自包括或由下述组成的组中：顺铂、奥沙利铂、依铂、洛铂、奈达铂、卡铂、异丙铂、沙铂、四铂、DCP、PLD-147、JM118、JM126、JM335和其他衍生物。最优选地，用于本发明组合物的过渡金属是卡铂或顺铂。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，顺铂可以每3周或4周以50mg/m2与100mg/m2之间的剂量施用。对于儿童的剂量为每28天60mg/m2。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，卡铂可以每3周或4周以300mg/m2与400mg/m2之间的剂量施用。对于儿童的剂量为每21天200mg/m2(Kohler等，EuropeanJournal of Cancer(2013)49，3671-3679)。
本文给出的剂量用于成人和/或儿童，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物的规格。
氮芥化合物是具有两个与氮原子键合的β-卤代烷基的化合物。在这类化合物中，环磷酰胺已被用于治疗多种癌症。
根据优选的实施方式，对于成人受试者，环磷酰胺可以以400mg/m2与1800mg/m2之间的剂量在2-5天内分开施用；对于间歇性治疗，可以间隔2-4周重复，而对于连续的每日治疗，可以在60mg/m2与120mg/m2/天之间重复。在儿童中，剂量为1.5mg/m2与3mg/m2/天之间，持续5天。
本文给出的剂量用于成人和/或儿童，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物的规格。
根据优选的实施方式，当包括识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的组合物用于预防和/或治疗表达选自包括或由下述组成的组中的表达OAcGD2神经节苷脂的癌症：成神经细胞瘤、神经胶质瘤、成视网膜细胞瘤、尤因氏家族肿瘤、肉瘤(即横纹肌肉瘤、骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和纤维肉瘤)、小细胞肺癌、乳腺癌、黑素瘤、转移性肾癌、头颈癌和血液癌症(即白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和骨髓瘤时，所述至少一种抗癌剂选自包括或由下述组成的组中：环磷酰胺、多柔比星、拓扑替康、依立替康、替莫唑胺(TMZ)、视黄酸(RA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟达拉滨、卡铂和顺铂。
根据另一优选的实施方式，当包括识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的组合物用于预防和/或治疗成神经细胞瘤时，抗癌剂是替莫唑胺、拓扑替康、依立替康、氟达拉滨、环磷酰胺或其混合物。
在该优选的实施方式中，分别已知组合中所要求保护的每种化合物(即识别OAcGD2神经节苷脂的抗体和抗癌剂)作为表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的治疗，具有针对相同疾病或相关病症的治疗活性。将识别OAcGD2神经节苷脂的抗体与抗癌剂组合，产生了预料不到的技术效果，即协同作用。
在某些实施方式中，识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物包括：
a)具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的轻链可变区(VL)多肽；和
b)具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区(VH)。
术语“可变区”是指参与抗体与抗原的结合的抗体重链(VH)和轻链(VL)的结构域。
根据优选的实施方式，轻链可变区(VL)多肽为氨基酸序列SEQ ID NO:3。
优选地，轻链可变区(VL)多肽选自包括或由下述组成的组中：SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7。
根据另一优选的实施方式，轻链可变区(VL)多肽具有选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列：SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。
优选地，轻链可变区(VL)多肽具有选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列：SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。
根据另一优选的实施方式，重链可变区(VH)多肽为氨基酸序列SEQ ID NO:8。
优选地，重链可变区(VH)多肽选自包括或由下述组成的组中：SEQ ID NO:9、SEQID NO:10和SEQ ID NO:11。
根据另一优选的实施方式，重链可变区(VH)多肽具有选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列：SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ IDNO:51。
优选地，重链可变区(VH)多肽具有选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列：SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50。
根据另一优选的实施方式，轻链可变区(VL)多肽为氨基酸序列SEQ ID NO:12。
根据另一优选的实施方式，重链可变区(VH)多肽为氨基酸序列SEQ ID NO:13。
仍更优选地，识别OAcGD2神经节苷脂至少一种抗体、其功能片段或衍生物，包括：
a)具有氨基酸序列SEQ ID NO:14的轻链可变区(VL)多肽；和
b)具有氨基酸序列SEQ ID NO:15的重链可变区(VH)。
重链(VH)可变区的互补-决定区(CDR)具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ IDNO:18中所示的氨基酸序列，并且轻链(VL)可变区的互补-决定区具有SEQ ID NO:19、SEQID NO:20和SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。
在另一具体实施方式中，所述识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物包括：
a)重链，其包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18的三个重链互补区(CDR)，和来自免疫球蛋白重链的重链框架序列，和
b)轻链，其包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21的三个轻链互补区(CDR)，和来自免疫球蛋白轻链的轻链框架序列。
互补-决定区(CDR)分别出现在SEQ ID NO:15的氨基酸残基26-35(CDR1_VH)、50-68(CDR2_VH)、99-108(CDR3_VH)处和SEQ ID NO:14的氨基酸残基24-39(CDR1_VL)、54-60(CDR2_VL)、94-102(CDR3_VL)处。
每个CDR的氨基酸分配都符合众所周知的编号系统，包括IMGT、Kabat和Chothia系统(IMGT，The International Immunogenetics InformationLEFRANC等，Nucleic Acids Research，vol.27，p：209-212，1999；KABAT，sequences of Proteins ofImmunological Interest，5th edition.U.S Department of Health and HumanServices，Public Health Service，National Institutes of Health，NIH publication，No91-3242，991；CLOTHIA&LESK，J Mol Biol.，vol.196(4)，p:901-917，1987)。
术语“识别OAcGD2神经节苷脂的抗体”是指对于OAcGD2神经节苷脂的抗体在25℃下的平衡缔合常数(KA)大于2×105M，优选KA等于或小于2x 106M，更优选KA等于或大于1x107M或甚至2x 107M。这种亲和力可以通过本领域可获得的技术简单地测量，例如，Scatchard测定、竞争ELISA、BIACORE测定或KINEXA测定。
根据本发明，在根据本发明的组合物中使用的抗体对GD2神经节苷脂不是特异性的。根据本发明的组合物中使用的抗体的平衡缔合常数(KA)对于GD2神经节苷脂比对于OAcGD2神经节苷脂弱至少10倍，更优选至少100倍。优选地，对于GD2神经节苷脂的抗体在25℃下的平衡缔合常数(KA)小于105M，优选对于GD2神经节苷脂的KA小于104M。
术语“功能片段”是指特异性结合OAcGD2神经节苷脂的抗体片段。此类片段可由本领域技术人员简单地鉴定，并且包括，例如，scFv片段，Fab片段(例如，通过木瓜蛋白酶消化)、Fab'片段(例如，通过胃蛋白酶消化和部分还原)、F(ab')2片段(例如，通过胃蛋白酶消化)、Facb(例如，通过纤溶酶消化)，以及Fv和Fd(例如，通过胃蛋白酶消化、部分还原和再聚集)片段也包括在本发明中。
此类片段可以使用本领域熟知的方法通过酶裂解、合成或重组技术产生，比如STANWORTH等(Handbook of Experimental Immunology，vol.1，chapter 8，BlackwellScientific Publications，1978)中所述。还可以使用抗体基因以各种截短形式产生抗体，其中已经在天然终止位点的上游引入了一个或多个终止密码子。例如，编码F(ab')2重链部分的组合基因可以设计为包括编码重链的CH1结构域和/或铰链区的DNA序列。抗体的各个部分可以通过常规技术化学连接在一起，或者可使用基因工程技术制备成连续蛋白质。
现在，这些片段至少包含先前描述的重链和轻链的可变区。
这些片段可以是可溶的，但也作为嵌合抗原受体(CAR)的单链可变部分锚定在细胞膜内。
如本文所使用，术语“嵌合抗原受体(CAR)”是指包含抗体的至少一个抗原结合结构域和至少一个效应细胞信号传导结构域的人工杂合多肽。此类CAR包括工程化受体，其将人工特异性移植到特定免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞和NKT细胞)上。可采用CAR以非MHC限制的方式将单克隆抗体的特异性赋予到T细胞上，从而利用单克隆抗体的抗原结合特性。当在T细胞中表达时，CAR识别未加工的抗原而不依赖于它们的主要组织相容性抗原的表达，这与生理性T细胞受体(TCR)不同，因此绕过肿瘤逃逸的两种主要机制，HLA表达的下调或蛋白酶体抗原加工。CAR与特异性抗原的结合引发免疫应答。
在特定方面，CAR包括胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。现在，该排列可为多聚体的，比如双抗体或多聚体(例如，国际专利申请PCT WO 2016/016343中描述的多链嵌合抗原受体)。
胞外结构域对应于抗原结合结构域和间隔结构域(茎区)。抗原结合结构域优选地为单链可变片段(scFv)。这种scFv是遗传工程化的抗体片段，其通常由免疫球蛋白的重链和轻链或其部分比如VH和VL组成，通过柔性肽接头连接在一起，如在PLUCKTHUN(ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenburg and Moore eds.，Springer-Verlag，New York，p:269-315，1994)中作为例子所公开的。柔性肽接头可为6至40个氨基酸残基的肽。使用小氨基酸比如丙氨酸和甘氨酸可用于产生柔性接头。示例性柔性接头包括甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物比如(GS)n、GSGGSn(SEQ ID NO:22)n、GGGSn(SEQ ID NO:23)n和GGGGSn(SEQ ID NO:24)n，其中n是至少为1的整数，甘氨酸-丙氨酸聚合物或甘氨酸-丝氨酸聚合物，或本领域已知的其他柔性接头。作为有用聚合物的例子，可以引用GGGGSGGGGSGGGGS((G4S)3；SEQ ID NO:25)、GSTSGSGKPGSGEGSTKG(CD19接头；SEQID NO:26)、GGSSRSSSSGGGGSGGGG(18聚体；SEQ ID NO:27)，GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS((G4S)4；SEQ ID NO:28)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:29)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:30)，GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO:31)、GGGGGGGG(SEQ ID NO:32)或GGGGGG(SEQ ID NO:33)。最后，这些scFv片段可以通过本领域技术人员熟知的方法获得，比如GILLILAND等描述的方法(Tissue Antigens，vol.47，pp.1-20，1996)。如本文所使用，术语“茎区”也称为“间隔区或铰链结构域”是指用于将跨膜结构域连接到胞外结构域的任何寡肽或多肽。具体地，茎区用于为胞外结构域提供更大的灵活性和可及性。间隔区元素在CAR中起主要的结构作用。间隔区将靶向部分与T-细胞膜物理分离。每种抗原所需的最佳距离可能不同。为了实现有效的靶标访问，如果CAR结合靠近靶细胞膜的抗原决定部位，或者当抗原的尺寸和糖基化状态复杂时，似乎需要间隔区。常用的人IgG衍生的间隔区(铰接-CH2-CH3)，因为它们对CAR表达具有稳定作用，但间隔区的Fc结构域与骨髓细胞上的Fcγ受体(FcgR)之间的相互作用可导致T细胞的激活-诱导的细胞死亡以及体内有限的持久性。这可通过删除或修饰对于FcgR结合必需的恒重(CH)2结构域的区域来克服，从而改善临床前模型中体内CAR T-细胞持久性和抗肿瘤活性。常用的其他铰接结构域包括衍生自CD28或CD8的那些或来自人IgG衍生的间隔区的其他截短片段。在优选的实施方式中，CAR包括胞外结构域和跨膜结构域之间的茎区。茎区可包括至多300个氨基酸，优选10至100个氨基酸，并且最优选25至50个氨基酸。该茎区可源自全部或部分的天然存在的分子，比如CD8、CD4或CD28的细胞外区域的一部分，或来自抗体恒定区的全部或部分。可选地，该茎区可为合成序列。
跨膜结构域是膜锚定结构域，并且也是胞外结构域和胞内结构域之间的接头。该跨膜结构域可为人IgG4Fc铰链区、Fc区、CD4跨膜结构域、T细胞受体跨膜、或来自其他人跨膜信号传导蛋白的其他跨膜结构域，比如CD16、TCRζ链(CD3ζ)、CD28和CD8以及促红细胞生成素受体和其突变体。优选地，该跨膜结构域是T细胞受体跨膜结构域。优选地，T细胞受体跨膜结构域由能够与抗原(TCR)的T细胞受体形成复合物的跨膜蛋白质产生。优选地，T细胞受体跨膜结构域包括TCRζ链(CD3ζ)、CD28、OX40/CD134、4-1BB/CD137/TNFRSF9、FcεRIγ、ICOS/CD278、ILRB/CD122、IL-2RG/CD132、CD27、DAP10和CD40中的一种或多种的部分或全部。
胞内结构域是细胞内信号传导结构域，其负责在胞外结构域与靶抗原结合后的细胞内信号传导，导致激活免疫细胞。换句话说，细胞内信号传导结构域负责激活其中表达嵌合受体的免疫细胞的至少一种正常效应子功能。术语“效应子功能”是指T细胞的特化功能，其可以是细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。因此，术语“细胞内信号传导结构域”是指转导效应子功能信号并指导细胞执行特化功能的蛋白质部分。虽然通常会采用整个细胞内信号传导结构域，但在许多情况下，不必使用整个细胞内多肽。在可以使用细胞内信号传导结构域的截短部分的程度上，可使用这种截短部分代替完整链，只要它仍转导效应子功能信号即可。因此，术语细胞内信号传导结构域意味着包括足以转导效应子功能信号的细胞内信号传导结构域的任何截短部分。
用于多链CAR的信号转导结构域的优选例子可以是Fc受体或T细胞受体和共同受体的细胞质序列(其协同作用以在抗原受体参与后启动信号转导)，以及这些序列的任何衍生物或变体和具有相同的功能能力的任何合成序列。信号转导结构域包括两种不同类型的细胞质信号传导序列，即启动抗原依赖性初级激活的那些，以及以抗原非依赖性方式起作用以提供次级或共刺激信号的那些。原代细胞质信号传导序列可包括信号传导基序，其已知为ITAM的基于免疫受体酪氨酸的激活基序。ITAM是明确定义的信号传导基序，其在多种受体的胞质内尾部中发现，其用作syk/zap70类酪氨酸激酶的结合位点。用于本发明的ITAM的例子可包括作为非限制性例子的那些衍生自TCRζ、FcRγ、FcRβ、FcRε、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。在优选的实施方式中，多链CAR的信号传导转导结构域可包括CD3ζ信号传导结构域，或Fcε链RIβ或γ链的胞质内结构域。
在特定实施方式中，本发明的多链CAR的信号转导结构域包括共刺激信号分子。共刺激分子是除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子，其是有效免疫应答所需的。
“共刺激配体”是指抗原呈递细胞上的分子，其特异性结合T细胞上的同源共刺激分子，从而提供(除了由例如结合TCR/CD3复合物与负载肽的MHC分子提供的主要信号之外)介导T细胞应答的信号，包括但不限于增殖激活、分化等。共刺激配体可包括但不限于CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、PD-L1、PD-L2、4-1BBL、OX40L、可诱导的共刺激配体(ICOS-L)、细胞间粘附分子(ICAM、CD30L、CD40、CD70、CD83、HLA-G、MICA、M1CB、HVEM、淋巴毒素β受体、3/TR6、ILT3、ILT4)、结合Toll配体受体的激动剂或抗体和与B7-H3特异性结合的配体。共刺激配体还尤其包括与T细胞上存在的共刺激分子特异性结合的抗体，比如但不限于CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、DAP-10、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LTGHT、NKG2C、B7-H3、与CD83特异性结合的配体。
“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合伴侣，其与共刺激配体特异性结合，从而介导细胞的共刺激反应，比如但不限于增殖。共刺激分子包括但不限于MHC I类分子、BTLA和Toll配体受体。共刺激分子的例子包括CD27、CD28、CD8、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、DAP-10、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3和与CD83等特异性结合的配体。
术语“其衍生物”是指与选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列具有至少90％、优选至少95％、最优选至少98％(即分别对应于约12、6和2个氨基酸取代)的同一性百分比的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51，优选至少99％(即对应于约1个氨基酸取代)的同一性百分数。
当与CDR序列相关时，术语“其衍生物”是指与选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列具有至少80％，优选至少90％(即分别对应于约2个和1个氨基酸取代)的同一性百分比的氨基酸序列：SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:20和SEQ ID NO:21。
鉴于其个人知识和本专利申请的教导，本领域技术人员可以简单地鉴定这些衍生物。还应理解，天然氨基酸可被化学修饰的氨基酸替换。通常，这种化学修饰的氨基酸延长了多肽半衰期。
如本文所使用，两个氨基酸序列之间的“同一性百分比”是指通过所述序列的最佳比对获得的待比较的两个序列之间的相同氨基酸的百分比，该百分比是纯粹统计学的，并且这两个序列之间的差异随机分布在氨基酸序列上。如本文所使用，“最佳比对”或“最优比对”是指确定的同一性百分比(见下文)为最高的比对。两个氨基酸序列之间的序列比较通常通过比较先前根据最佳比对比对的这些序列来实现；这种比较是在比较的部分上实现的，以便鉴定并比较局部相似区域。除了通过手动方式，还通过使用由Smith和Waterman开发的局部同源性算法(Ad.App.Math.，vol.2，p:482，1981)，通过使用由Neddleman和Wunsch开发的全局同源性算法(J.Mol.Biol.，vol.48，p:443，1970)，通过使用由Pearson和Lipmolan开发的相似性方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，vol.85，p:2444，1988)，通过使用这种算法的计算机软件(GAP，BESTFIT，BLAST P，BLAST N，FASTA，TFASTA in theWisconsin Genetics software Package，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，WI USA)，通过使用MUSCLE多重比对算法(Edgar，Robert C.，Nucleic AcidsResearch，vol.32，p:1792，2004)，来实现执行比较的最佳序列比对。为了获得最佳的局部比对，可优选地使用BLAST软件和BLOSUM 62矩阵。通过比较最佳比对的这两个序列来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比，氨基酸序列能够包括关于参考序列的添加或缺失，以便获得这两个序列之间的最佳比对。通过如下计算同一性百分比：确定这两个序列之间相同位置的数目，并将该数目除以比较位置的总数，并通过将获得的结果乘以100从而得到这两个序列之间的同一性百分比。
用于本发明组合物的抗体是重组产生的。
尽管糖基化抗体是优选的，但本发明组合物中使用的抗体可以是或可以不是糖基化的。在优选的实施方式中，用于本发明组合物的抗体可以是低岩藻糖。
用于本发明组合物的抗体可为免疫缀合物。
如本文所使用，术语“免疫缀合物”是指包含与第二分子，优选免疫调节剂、细胞毒剂或放射性同位素结合的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的缀合物分子。这种免疫缀合物可为抗体药物缀合物(ADC)、免疫细胞因子(ICK)或抗体放射性缀合物(ARC)。现在，该第二分子可为对另一抗原具有结合特异性的抗体，所形成的免疫缀合物是双特异性抗体，比如BiTE(双特异性T-细胞接合器)。所述抗体或其片段与所述第二分子复合或共价结合(例如融合蛋白)。优选地，所述抗体或其片段通过共价连接与所述第二分子结合。该第二分子可为能够与糖特异性地相互作用以形成非共价键的蛋白质或糖蛋白，比如凝集素。
用于本发明组合物的抗体可为双特异性或多特异性抗体。几种形式比如双可变结构域免疫球蛋白(DVD)、双特异性T-细胞接合器(BiTE)、双抗体、四价串联抗体(TandAb)或双亲和重定向分子(DART)是组合物中使用的抗体的合适形式(WEIDLE等，CancerGenomics&Proteomics，2013，vol.10，pp.1-18)。
优选地，当患者为人时，用于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的抗体为人或人源化(CDR-移植)形式的抗体；但是可使用小鼠显形式示的抗体。当考虑重复治疗时，人或人源化IgG抗体不太可能从患者产生抗IgG免疫应答。
在所有实施方式中，根据本发明的组合物包含治疗有效量的至少一种抗癌剂和治疗有效量的识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物。
根据优选的实施方式，抗体、其功能片段或衍生物可通过以2mg/m2与2,000mg/m2之间的剂量注射向受试者施用，优选剂量为5mg/m2与1,000mg/m2之间，最优选的剂量为10mg/m2与500mg/m2之间。
本文给出的剂量用于人类，但可根据体重或平方米规格调整至其他哺乳动物以及儿童的规格。
如本文所使用，术语“治疗有效量”旨在包括将实现期望的治疗或生物效应的任何量。治疗效果取决于所治疗的表达OAcGD2神经节苷脂的癌症或所期望的生物效应。因此，治疗效果可以是与表达OAcGD2神经节苷脂的癌症相关的症状的严重程度降低和/或抑制表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的(部分或完全)进展。引发治疗反应所需的量可基于癌症类型、患者的年龄、健康、体形和性别来确定。
还可基于患者对治疗的反应的监测来确定最佳量。
在某些实施方式中，组合物还包括用于治疗的药学上可接受的载体。
表述“药学上可接受的”是指生理上可耐受的分子实体和组合物，并且当施用于人时通常不产生过敏或类似的不良反应，比如胃部不适、头晕等。优选地，如本文所使用，表述“药学上可接受的”意指可由联邦或州政府的管理机构批准或在美国药典或其他公认的药典中列出用于动物，以及尤其是人类。
术语“载体”是指与化合物一起施用的溶剂、佐剂、赋形剂或载剂。此类药物载体可为无菌液体，比如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，比如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。
所述组合物可以是适于向患者施用的任何药物形式，包括但不限于溶液、悬浮液、冷冻干燥粉末、胶囊和片剂。现在，本发明组合物的施用途径优选为肠胃外；如本文所使用，术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内、直肠、阴道、粘膜、鞘内、颅内或瘤内施用。因此，药学组合物包含对于要注射的制剂是药学上可接受的载剂。这些可以特别是等渗的、无菌的、生理盐水溶液(磷酸二氢钠或磷酸二钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙或氯化镁等或这些盐的混合物)，或干燥的、尤其冷冻干燥的组合物，其在添加时取决于在无菌水或生理盐水的情况下，允许构成可注射溶液。适当的药学载体描述于E.W.Martin的“Remington'sPharmaceutical Sciences”中。
最优选地，该组合物是适合于向患者静脉内给药的任何药物形式。
本发明的抗体、功能片段或衍生物可溶解在缓冲液或水中或并入乳液、微乳液、水凝胶(例如基于PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物的水凝胶)、微球、纳米球、微粒、纳米颗粒(例如聚(乳酸-共-乙醇酸)微粒(例如聚乳酸(PLA)；聚(丙交酯-共-乙醇酸)(PLGA)；聚谷氨酸酯微球、纳米球、微粒或纳米颗粒)、脂质体或其他盖伦制剂中。在所有情况下，制剂必须是无菌且流动的，达到可接受的可注射性程度。它必须在制造和储存条件下稳定，并且必须防止微生物比如细菌和真菌的污染作用。
分散体也可在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和油中制备。在普通的储存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物的生长。
可将本发明的抗体、功能片段或衍生物配制成中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括与无机酸(比如例如盐酸或磷酸)或有机酸(如乙酸，草酸，酒石酸，扁桃酸等)形成的酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)。用游离羧基形成的盐也可源自无机碱，比如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，和有机碱，比如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等。
载体也可为溶剂或分散介质，其包含，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，其合适的混合物，和植物油。本发明的抗体也可通过聚乙二醇化作为例子进行修饰，以增加其生物分配性(biodisponibility)。
例如，通过使用比如卵磷脂的涂层，通过在分散的情况下保持所需的颗粒大小和通过使用表面活性剂，可保持适当的流动性。可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水杨酸钠等来防止微生物的作用。在许多情况下，优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。
通过在组合物中使用延迟摄取的试剂，例如单硬脂酸铝、明胶、多元醇和半衰期增强的共价和非共价制剂，可实现可注射组合物的延长摄取。
肽不稳定或降解的原因很多，包括水解和变性。疏水相互作用可导致分子团聚在一起(即聚集)。可添加稳定剂以减少或防止这样的问题。
稳定剂包括环糊精和其衍生物(参见美国专利号5,730,969)。还可添加合适的防腐剂，比如蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、海藻糖、葡聚糖和甘油以稳定最终制剂。可将选自离子和非离子表面活性剂、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-半乳糖醛酸、海藻糖、葡聚糖、羟乙基淀粉和其混合物的稳定剂添加至制剂。添加碱金属盐或氯化镁可稳定肽。还可通过使肽与选自由葡聚糖、软骨蛋白硫酸、淀粉、糖原、糊精和藻酸盐组成的组中的糖类接触来稳定肽。可添加的其他糖包括单糖、二糖、糖醇和其混合物(例如，葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、木糖醇)。多元醇可稳定肽，并且可与水混溶或是水溶性的。适当的多元醇可为多羟基醇、单糖和二糖，包括甘露醇、甘油、乙二醇、丙二醇、三甲基乙二醇、乙烯基吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、甘露糖、麦芽糖、蔗糖和其聚合物。各种赋形剂也可稳定肽，包括血清白蛋白、氨基酸、肝素、脂肪酸和磷脂、表面活性剂、金属、多元醇、还原剂、金属螯合剂、聚乙烯吡咯烷酮、水解明胶和硫酸铵。
在所有实施方式中，可分别、同时或依次施用分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂和识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物。
在某些实施方式中，与识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、功能片段或衍生物分别、同时或依次施用的至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，与识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、功能片段或衍生物分别、同时或依次施用的至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，与识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、功能片段或衍生物分别、同时或依次施用的至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
例如，识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物可在施用分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂之前施用。施用的方式和顺序旨在获得组合的最大有效性；每次施用可以具有从快速总施用药到连续输注的可变持续时间。因此，分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂和识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的组合不限于那些通过它们的物理结合获得，但是也可通过可同时或依次进行单独施用的那些获得。
在某些实施方式中，药物组合物还包含第二、第三、第四、第n抗癌剂，包括但不限于烷化剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗体、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、皮质类固醇、激素或激素样药物、细胞因子、核苷类似物等。
可与组合物(其包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体)组合、分别施用或在相同的组合物中施用的用于治疗和/或预防表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的方法中的其他抗癌剂的例子，包括但不限于：
(a)烷化剂：甲氯胺(mechloramine)、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、左旋溶肉瘤素等，
(b)抗代谢分子：6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟脲苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞等，
(c)抗肿瘤抗生素：放线菌素-D、博来霉素、丝裂霉素-C、米托蒽醌等，
(d)拓扑异构酶抑制剂：足叶乙苷(VP-16)、替尼泊苷等，
(e)有丝分裂抑制剂：紫杉醇、多西他赛等，
(f)酪氨酸激酶抑制剂：伊马替尼、吉非替尼(gefininib)、舒尼替尼等，
(g)皮质类固醇：强的松、甲基强的松、地塞米松等，
(h)激素或激素样药物：氟维司群、它莫西芬、托瑞米芬、阿那曲唑，依西美坦、来曲唑、乙酸甲地孕酮、雌激素、比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、亮丙瑞林、戈舍瑞林等，
(i)细胞因子：约5-20kDa的可溶性小蛋白质，其在与特异性抗原接触时由一个细胞群(例如，引发的T-淋巴细胞)释放，并且充当细胞之间的细胞间介质。细胞因子的例子包括淋巴因子、单核因子、白介素和几种相关的信号传导分子，比如肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素，
(j)核苷类似物：克拉屈滨、氟达拉滨、喷司他丁等。
在某些实施方式中，药物组合物还包括第二、第三、第四、第n抗癌剂，包括但不限于核酸，例如双链合成短RNA分子(miRNA)或合成DNA/RNA样寡核苷酸(ASO)。微小RNA(miRNA)是内源单链非编码RNA，其范围为16至25个核苷酸，参与mRNA翻译的转录后减弱。在包括癌症的许多疾病中经常观察到它们的失调。已经确认mir-34家族和mir-17-92簇的重要性用于成神经细胞瘤的肿瘤发生和转移，而mir-184的过表达减少了成神经细胞瘤的肿瘤生长(Chu和Lee，2012，Intech，MicroRNA target signatures in Advanced stageNeuroblastoma，Neuroblastoma–Present and future，Prof.Hiroyuki Shimada，IBSN978-953-307-016-2，chapter 13，pp.271-286)。因此，通过设计不同类型的小型单链或双链、化学合成和优化的核酸(来自约22个核苷酸)，比如上调miRNA活性的miRNA模拟物或agomirs、敲除单个miRNA分子的miRNA抑制剂或antagomir，可以控制特异性miRNA活性或紧密调节细胞中的miRNA细胞水平。靶向参与表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的miRNA的这种短的化学合成的核酸可用于本发明的组合物中。
本发明的第二方面涉及增加包含抗癌剂的表达OAcGD2神经节苷脂的癌症治疗的功效的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
在某些实施方式中，在增加表达OAcGD2神经节苷脂的癌症治疗的功效的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在增加表达OAcGD2神经节苷脂的癌症治疗的功效的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在增加表达OAcGD2神经节苷脂的癌症治疗的功效的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
表述“增加治疗的功效”是指与使用单独抗癌剂的治疗相比，通过本发明的方法获得的癌细胞死亡数量的增加。
当在抗癌治疗中与识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物(其作用机理不同于分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的抗癌剂)的组合施用时，分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的抗癌剂的功效可得到显著改善。
通过确定治疗协同作用可证明根据本发明的组合的改善的功效。“协同作用”的明确且广为接受的定义是：它表示组合药物的效果比单独使用每种药物的效果所预期了解的简单加性效应更大。协同作用的可能有利结果可为增加治疗效果的功效。优选地，当使用本发明的组合物时，更有效地治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症。
分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂和识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的组合的功效可使用由Chou和Talalay开发的组合指数(CI)方法(Chou TC，Pharmacol Rev 58:621-681，2006)从测量的实验数据来解释。简言之，对于组合比(D)1:(D)2＝P:Q的两种药物(D)1和(D)2的组合，在组合中，(D)1,2＝(D)1+(D)2，我们得到(D)1＝(D)1,2X[P/(P+Q)]和(D)2＝(D)1,2X[Q/(P+Q)]。组合指数方程CIx＝[(D)1/(Dx)1]+[(D)2/(Dx)2]，表示对于对系统的x％抑制Dx的给定效果(Fa)x，对每种药物的分数(fraction)剂量之和的组合加性效应，(D)1/(Dx)1和(D)2/(Dx)2应等于1。CI＝1，表示加性效应，CI<1，表示协同作用，而CI>1，表示拮抗作用。
组合对实体瘤的功效也可通过例如比较治疗前后肿瘤尺寸的数量来实验确定。优选地，当肿瘤尺寸减少至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、100％，和更优选地至少50％至70％时，分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂和识别本文公开的OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的组合是有效的。
组合对实体瘤的功效还可通过例如跟踪癌细胞的数量、癌细胞浸润到外周器官中或肿瘤转移来确定。
还可通过评估患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症患者的存活期、无进展存活期(PFS)、响应率(RR)、响应期和/或生活质量来测量癌症治疗功效。
在优选的实施方式中，根据本发明的组合物的分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂与最初选择作为单一药剂的用于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的抗癌剂相同。
协同作用的另一种可能的有利结果可为降低至少一种抗癌剂的剂量，但增加或保持相同的功效以避免毒性。
本发明的第三方面涉及增加患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂的敏感性的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
在某些实施方式中，在用于增加患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者中对抗癌剂的敏感性的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在用于增加患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者中对抗癌剂的敏感性的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在用于增加患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者中对抗癌剂的敏感性的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
除了提供改善的癌症治疗之外，与接受不同治疗的同一患者所经历的生活质量相比，本文所述的某些组合的施用可改善患者的生活质量。例如，如本文所述，将识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物和抗癌剂的组合向有需要的患者施用，与同一患者若仅接受抗癌剂作为治疗将体验到的生活质量相比，可提供的改善的生活质量。例如，利用本文所述组合的联合治疗可降低所需抗癌剂的剂量，从而减轻与治疗相关的副作用(例如恶心、呕吐、脱发、皮疹、食欲降低等)。该组合还可导致肿瘤负荷减轻和相关的不良事件，比如疼痛、器官功能障碍、体重减轻等。
协同作用的另一个可能的有利结果可为最小化或减缓耐药性的发展及其显著后果，即表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的复发。
本发明的第四方面涉及预防或延迟患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂有抗性的癌症的发展的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
在某些实施方式中，在用于预防或延迟患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂有抗性的癌症发展的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在用于预防或延迟患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂有抗性的癌症发展的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在用于预防或延迟患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂有抗性的癌症发展的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
采用单一抗癌剂对癌症初步治疗(即一线癌症治疗)后，患者在癌症复发或癌症的征兆和症状重现之前的短时间内存活而没有任何癌症征兆或症状，这种情况并不罕见。通过使用分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的组合，目的是防止克隆选择导致抗性细胞长出。
在优选的实施方式中，根据本发明的组合物的分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂不同于癌症抗性起源的抗癌剂。
治疗抗性的机制包括：增加对抗癌剂损伤的DNA的识别和修复，改变的细胞周期检查点控制，细胞凋亡途径的功能受损，以及由于外排抗癌剂的ABC转运蛋白表达增加导致的药物积累减少。有证据表明癌症干细胞(CSC)表示癌症细胞亚群，其特征在于对化疗和放疗的抗性增强，表明常规抗癌方法可能往往无法根除启动和延续肿瘤发生的细胞亚群。现在，除了CSC之外的癌细胞可潜在地通过使用类似的途径对化疗和放疗产生增加的抗性。通过特异性阻断多药抗性ABC转运蛋白可实现逆转化学抗性，如人黑素瘤所示。
令人吃惊的是，发明人确定了一种用于逆转化学抗性的新方法，特别是在CSC群体中，而不需要干扰涉及抗癌剂摄入的多药抗性转运蛋白或穿梭。
本发明的第四方面还涉及治疗患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者的难治的或复发的癌症的方法，其包括向有需要的患者使用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，其中所述癌症为难治的或包括选自由烷化剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和核苷类似物组成的组中的一种或多种抗癌剂的一线癌症治疗后复发的。
本发明的第四方面还涉及一种组合物，用于治疗患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者的难治的或复发的癌症，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，其中所述癌症为难治的或在包括选自由烷化剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和核苷类似物组成的组中的一种或多种抗癌剂的一线癌症治疗后复发的。
在某些实施方式中，在治疗患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者的难治的或复发的癌症的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在治疗患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者的难治的或复发的癌症的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在治疗患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者的难治的或复发的癌症的方法中使用的组合物中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，难治的或复发的癌症是成神经细胞瘤。
根据另一优选的实施方式，当所述组合物用于治疗难治的或复发的成神经细胞瘤的方法时，所述至少一种抗癌剂是替莫唑胺、拓扑替康、依立替康、环磷酰胺、氟达拉宾、顺铂、多柔比星、异维甲酸，足叶乙苷或其混合物。
也在某些实施方式中，难治的或复发的癌症是胶质母细胞瘤。
根据另一优选的实施方式，当组合物用于治疗难治的或复发的胶质母细胞瘤的方法时，所述至少一种抗癌剂是替莫唑胺、拓扑替康、依立替康、环磷酰胺、氟达拉滨、顺铂、卡铂或其混合物。
在优选的实施方式中，在治疗难治的或复发的癌症的方法中使用的组合物的分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂与一线癌症治疗中使用的治疗剂相同。
协同作用的另一种可能的有利结果可为依赖于协同作用和细胞毒性之间的平衡来提供协同组合。
本发明的第五方面涉及鉴定分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的协同组合的体外/离体方法，该方法包括下述步骤：
a)在体外用包含至少下述组合物温育表达O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂的原代肿瘤细胞或癌细胞系细胞：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的一种抗癌剂，和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和
b)根据Chou和Talalay所公开的方法测量CI50指数，其中低于1的CI50表示协同作用。
原代肿瘤细胞是例如外植的人肿瘤细胞。这些细胞的任何衍生物都可产生例如癌细胞系。
在某些实施方式中，在通过本发明的体外/离体方法鉴定的协同组合中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在通过本发明的体外/离体方法鉴定的协同组合中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在通过本发明的体外/离体方法鉴定的协同组合中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
本发明的第六方面涉及用于体外筛选分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物的协同组合的试剂盒。
在某些实施方式中，在用于体外筛选本发明的协同组合的试剂盒中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在用于体外筛选本发明的协同组合的试剂盒中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在用于体外筛选本发明的协同组合的试剂盒中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
本发明的第七方面涉及适于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的试剂盒。在所有实施方式中，所述试剂盒包括(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选的(iii)药学上可接受的载体。
在某些实施方式中，在本发明的适于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的试剂盒中，所述至少一种抗癌剂具有10kDa至15kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在本发明的适于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的试剂盒中，所述至少一种抗癌剂具有80kDa至200kDa的范围内的分子量。
也在某些实施方式中，在本发明的适于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的试剂盒中，所述至少一种抗癌剂具有120道尔顿至800道尔顿的范围内的分子量。
还可包括能够通过特定选择的施用途径递送试剂盒组分的设备。
试剂盒组分可包装在一起或分成两个或更多个容器。在一些实施方式中，容器可为包含适于重构的组合物的无菌冷冻干燥制剂的小瓶。试剂盒也可包含一种或多种适于重构和/或稀释的其他试剂的缓冲液。可使用的其他容器包括但不限于袋、盘、盒、管等。试剂盒组分可在容器内无菌包装并保持。可包括的另一组分是对使用试剂盒的人使用其的说明。
识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物可用作抗肿瘤治疗中的佐剂。
本发明的第八方面涉及识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物用于增强分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的抗癌剂在表达O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂的细胞中的细胞内摄取的用途。
在某些实施方式中，识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物用于增强分子量在10kDa至15kDa的范围内的抗癌剂的细胞内摄取。
也在某些实施方式中，识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物用于增强分子量在80kDa至200kDa的范围内的抗癌剂的细胞内摄取。
也在某些实施方式中，识别OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物用于增强分子量在120道尔顿至800道尔顿的范围内的抗癌剂的细胞内摄取。
提供下述实施例是为了表明和进一步阐释本发明的某些优选实施方式和方面，而不应解释为限制其范围。
实施例
1.用抗OAcGD2 mAb 8B6处理成神经细胞瘤和胶质母细胞瘤细胞诱导细胞膜内的孔形成
用500 000 IMR5、LAN-1或DUASOII细胞/孔包被培养皿(6孔)24小时，然后用抗OAcGD2 mAb 8B6(鼠，IgG3)或同种型匹配的阴性对照小鼠IgG3(CTRL-)温育。然后，向每个孔中添加40μg/ml的抗体，30分钟。将上清液旋转离心(spin down)，并利用机械强度(不含胰蛋白酶)将细胞从其载体上分离并旋转离心。用PBS冲洗后，在4℃下，将细胞用2％戊二醛固定在0.1mol/L的磷酸钠缓冲液(pH7.4)中1小时。用1％的OsO4进行固定15分钟。使用25％、50％、75％和100％的乙醇在乙醇浴中进行脱水，每次浴15分钟。最后，将细胞放置在金属短柱上并通过扫描电子显微镜分析。
如图1所示，在用mAb 8B6处理30分钟后，IMR5(图B)、LAN-1(图D)和DUASOII(图F)细胞膜中出现孔形成。测定三种细胞类型的细胞和孔径大小和直径。如图2-A所示，在IMR5中，由mAb 8B6诱导的孔的直径为约1.914μm，并且其表面为约2.877μm2。在该情况下，孔覆盖了细胞总表面的至少4％。对于LAN-1和DUASOII获得的结果非常相似。如图2-B和2-C所示，在LAN-1中，由mAb 8B6诱导的孔的直径为约1.760μm，并且其表面为约2.433μm2。在该情况下，孔覆盖了细胞总表面的至少0.7％。如图2-D和2-E所示，在DUASOII中，由mAb 8B6诱导的孔的直径为约1.459μm，并且其表面为约1.672μm2。在该情况下，孔覆盖了细胞总表面的至少2.8％。
而且，发明人确定较小的抗体浓度诱导了增加的碘化丙锭渗透。
2.用异维甲酸、拓扑替康或多柔比星治疗不影响成神经细胞瘤细胞系上的OAcGD2表达
我们早先报道了成神经细胞瘤细胞系中OAcGD2的表达(Alvarez-Rueda等，PLosOne 2011 6:e25220)。先前的研究表明，当暴露于视黄酸时，可能改变成神经细胞瘤细胞中GD2表达——OAcGD2的前体(Rebhan等，Neuroreport.1994 Apr 14；5(8):941-4以及Hettmer等，Br J Cancer.2004 Jul 19；91(2)：389-397)。因此，我们测试了抗癌剂暴露是否会影响mAb 8B6结合的水平。为此，我们用各自单一试剂处理研究的鼠和人成神经细胞瘤细胞系48小时，然后通过流式细胞术分析研究OAcGD2-表达。这些实验中使用的药物浓度显示在表1中。
表1：用于处理成神经细胞瘤细胞系的药物浓度。
通过流式细胞术测量的间接免疫荧光评估成神经细胞瘤细胞系上细胞表面OAcGD2-表达的分析。我们将96孔微量培养板中的5×105个细胞用mAb 8B6(Cerato等，Hybridoma 1997，16:307-316)或mAb 7H2(抗O-乙酰基GD3的小鼠单克隆用作阴性对照抗体)以10g/ml在PBS 1％-BSA中于4℃下温育60分钟。在与作为第二抗体的山羊抗小鼠IgG(VH+VL)的荧光素-异硫氰酸酯缀合F(ab')2片段(Jackson，Immunoresearch，Soham，UK)在4℃下反应60分钟后分析抗体结合。使用FACSCaliburTM流式细胞计数器(BD Biosciences，San Jose，CA，USA)和Cell QuestTM Pro软件(BD Biosciences)分析细胞荧光。记录10,000个细胞的相对荧光强度记为单参数直方图(对数标度，1024个通道和4倍频)，并计算每个直方图的平均荧光强度(MFI)。结果表示为通过将用抗原特异性mAb染色的细胞的流式细胞术MFI值除以用阴性对照mAb 7H2染色的相同细胞的MFI值计算的MFI比率。该方法允许比较一组内和不同组之间的多个测试样本。
如表2中所示，与未处理的细胞相比，与异维甲酸、拓扑替康或多柔比星一起温育48小时后，mAb 8B6在NXS2细胞上的结合水平保持不变。
当我们研究药物温育48小时后，mAb 8B6在IMR5、LAN-1和LAN-5细胞上的结合水平时，我们也观察到几乎没有变化(表2)。
表2：暴露于抗癌剂48小时后，成神经细胞瘤细胞系中OAcGD2的表达水平a
a将用抗OAcGD2 mAb 8B6染色的肿瘤细胞的几何平均荧光强度(MFI)标准化为用mAb 7H2-对照抗体染色的肿瘤细胞的MFI。数据表示为平均值±SD(n＝3)。
b处理过的细胞。
C这些实验中使用的抗癌剂浓度如表1所示。
3.在成神经细胞瘤细胞系中，抗OAcGD2 mAb 8B6与化疗药物显示出协同作用
为了测试抗OAcGD2 mAb 8B6是否可增强化疗，我们接下来表征了在四种不同成神经细胞瘤细胞系中，mAb 8B6与异维甲酸、拓扑替康和多柔比星的组合对肿瘤细胞存活的影响。
使用MTT细胞增殖试验试剂盒(Roche Diagnostic，Indianapolis，USA)评估抗癌剂的抗增殖活性。MTT测定基于通过形成紫色甲臜晶体的代谢活性细胞还原黄色四唑鎓MTT(3-(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)。用去污剂溶解紫色甲臜，并在570nm处用分光光度法定量。
将对数生长期的细胞接种到100μl完全培养基中的96孔(对于LAN-1和NXS2细胞为5×103；对于IMR5和LAN-5细胞为1×104)处理的平板中。使细胞在过夜温育期间附着，然后用测试剂处理。将测试剂在完全培养基中连续稀释，并以50/65μl的体积添加至每个孔，总的终体积为165μl/孔。将等量培养基体积添加至对照孔。使用三种条件：仅抗癌剂、仅mAb8B6、mAb 8B6+抗癌剂。将细胞暴露于测试剂48小时。暴露于测试剂后，将15μl的MTT试剂添加至每个孔。将平板放回培养箱中4小时。温育期后，将试剂盒提供的去污剂试剂(100μl)添加剂至所有孔。将平板用塑料包裹物包裹以防止蒸发并使其在室温下在黑暗中静置过夜。第二天使用iMarkTM微板吸光度读数器(Bio-Rad)测量570nm处的吸光度。一式四份进行测定，并且实验重复三次。
使用软件(ComboSyn，Paramus，NJ，USA)，将吸光度值转换为对照百分比并针对测试剂浓度绘制半最大效应浓度(EC50)计算。是由Chou和Martin开发的用于PC的计算机软件(2005，CompuSyn for Drug Combinations：PC Software andUser’s Guide：A Computer Program for Quantitation of Synergism and Antagonismin Drug Combinations，and the Determination of IC50 and ED50 and LD50Values.ComboSyn，Paramus，NJ)，其可用于利用中值效应方程的单一药物的剂量效应分析，并且可用于利用中值效应方程和组合指数方程的多种药物组合。通过软件使用的中值效应方程源于平衡稳态下的质量作用定律原理。术语半最大效应浓度(EC50)是指在指定的暴露时间后在基线和最大值之间诱导响应的药物，抗体的浓度。通过将每个测试孔的吸光度值除以无药物对照平均值并乘以100来计算对照值的百分比。
使用软件分析组合数据以计算组合指数值从而评估协同作用。受影响的分数(Fa)使用下式从对照百分比计算：1-对照百分比/100)，其中1对应于100％效果，而0对应于无效果。将组合测试的化合物的剂量、分数和摩尔比输入软件中以评估协同作用的存在/不存在。指定对化合物抑制50％细胞增殖的水平进行评级的组合指数值。低于1的CI值表示存在协同作用，而高于1的CI值表示拮抗作用。等于1的CI50值表示加性效应。参见Chou，PHARMACOL.REV.，58(3):621-81(2006)。
NXS2细胞在含有10％热灭活的胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM 4.5g/L葡萄糖中于37℃在5％CO2中生长。IMR5、LAN-1和LAN-5细胞在含有10％热灭活的胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640中于37℃在5％CO2中生长。
当我们测试成神经细胞瘤细胞系NXS2、IMR5、LAN-1和LAN-5时，我们发现了类似的观察结果。对于两种试剂组合(即抗癌剂和mAb 8B6)，每种测试的化疗药物的计算的EC50值显著较低(p<0.05，表3)。
表3：在成神经细胞瘤细胞系中与mAb 8B6温育后药物细胞毒性的增强a
aEC50浓度显示为3次独立实验的平均值。
b抗-OAcGD2 mAb 8B6以40μg/ml的浓度与化疗组合。
最后，我们计算了中值组合指数值，以表征所有测试组合的效果。我们发现，在所有测试组合中，中值组合指数值显著小于1.0(p<0.05)，表明协同相互作用(见表4)。异维甲酸和mAb 8B6的组合给出的组合指数值在0.33至0.81的范围内(NXS2＝0.74，IMR 5＝0.81，LAN-1＝0.47，LAN-5＝0.33)(表4)。拓扑替康显示出更强的协同作用，其组合指数值在0.28至0.60的范围内(NXS2＝0.60，IMR 5＝0.50，LAN-1＝0.58，LAN-5＝0.28)(表4)。与多柔比星的组合在测试的成神经细胞瘤细胞系中产生最强的协同作用，其组合指数值等于或小于0.30(NXS2＝0.30，IMR 5＝0.10，LAN-1＝0.05，LAN-5＝0.16)(表4)。这些数据表明，当与抗OAcGD2 mAb 8B6一起使用时，化疗的抗成神经细胞瘤功效更有效。
表4：组合指数值
*0.05-0.90＝协同作用；0.9-1.10，加性作用；1.10-10，拮抗作用。
还在LAN-1成神经细胞瘤细胞系上测定了抗OAcGD2 mAb 8B6与其他抗癌剂的组合。在该实验中，使用流式细胞术(用535nm激光激发)检测在存在mAb 8B6或CTRL-(IgG)的情况下在细胞内并入5-FU、顺铂和多柔比星。将抗癌剂和mAb在37℃下温育30分钟。阳性对照(皂苷0.05％)显示在LAN-1细胞中化疗的最大并入。
如图3所示，当与mAb 8B6一起温育时，与单独的抗癌剂和CTRL-(lgG)温育的相同细胞相比，更多细胞对于5-FU(图A)、顺铂(图B)在1.52μM时和多柔比星(图C)在4.7μM时呈阳性。此外，当与mAb c8B6.14b和mAb c8B6.15b一起温育时，与单独的抗癌剂和CTRL-(IgG)温育的相同细胞相比，更多的细胞对于多柔比星(图D)在4.7μM时呈阳性。
所有这些结果清楚地阐释了抗OAcGD2 mAb 8B6促进抗癌剂在肿瘤细胞中的渗透。
4.胶质母细胞瘤原代细胞中，抗OAcGD2 mAb 8B6与替莫唑胺(TMZ)显示协同作用
为了测试mAb 8B6是否可以增强化疗，我们接下来表征了在六种不同的胶质母细胞瘤原代细胞中mAb 8B6与替莫唑胺组合对肿瘤细胞活力的影响。
从组织学诊断为GBM的患者收集肿瘤样品。在手术切除时获取肿瘤，并在使用gentleMACsTM离解器(Miltenyi)根据制造商的说明解离肿瘤后立即进行培养。按照机构审查委员会批准的方案进行所有样品收集和分析，并且所有患者或其监护人均提供书面知情同意书(Comité de Protection des Personnes Ouest IV，protocol#DC-2012-1555)。在确定的培养基中将细胞维持在5％CO2和95％湿度的气氛中(DMEM/Ham F12，包含2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、B27补充剂、N2补充剂、2μg/ml肝素、40ng/mlβ-FGF和40ng/ml EGF)以形成神经球。
将生长对数期的细胞接种到100μl完全培养基中的96孔(对于AMBMa、DUGAn、DUASOII、GLIO 5、GUITh和HARCI胶质母细胞瘤，细胞为1×104)处理的平板中。使细胞在过夜温育期间附着，然后在用测试剂处理。将测试剂在完全培养基中连续稀释，并以50/65μl的体积添加至每个孔，总的终体积为165μl/孔。将等量培养基体积添加至对照孔。使用三种条件：仅替莫唑胺、仅mAb 8B6、mAb 8B6+替莫唑胺。将细胞暴露于测试剂72小时。暴露于测试剂后，将15μl的MTT试剂添加至每个孔。将平板放回培养箱中4小时。温育期后，将试剂盒提供的去污剂试剂(100μl)添加至所有孔。将平板用塑料包裹物包裹以防止蒸发并使其在室温下在黑暗中静置过夜。第二天使用iMarkTM微板吸光度读数器(Bio-Rad)测量570nm处的吸光度。一式四份进行测定，并且实验重复三次。
使用MTT测定测量细胞活力，并如先前公开的那样计算半最大效应浓度(EC50)。结果如下表5所示。当我们测试胶质母细胞瘤原代细胞AMBMa、DUGAn、DUASOII、GLIO 5、GUITh和HARCl时，我们发现了类似的观察结果。对于两种试剂组合(即替莫唑胺和mAb 8B6)的每种测试化疗药物的计算EC50值均较低。
表5：在胶质母细胞瘤原代细胞中与mAb 8B6温育后化疗药物细胞毒性的增强a
aEC50浓度显示为3次独立实验的平均值。
b浓度为40μg/ml的抗OAcGD2 mAb 8B6与化疗组合。
最后，我们计算了中值组合指数值，以表征测试的TMZ和抗OAcGD2 mAb 8B6组合的效果。我们发现，在所有测试组合中，中值组合指数值显著小于1.0(p<0.05)，表明协同相互作用(参见表6)。TMZ和mAb 8B6的组合给出的组合指数值在0.27至0.66的范围内(GUITh＝0.66，DUGAn＝0.58，AMBMa＝0.27和HARCI＝0.30，GLIO 5＝0.41且DUASOII＝0.65)(表6)。这些数据表明，当与抗OAcGD2 mAb 8B6一起使用时，TMZ的抗胶质母细胞瘤功效更有效。
表6：胶质母细胞瘤原代细胞中的组合指数值
细胞系 组合 组合指数50值*
AMBMa 8B6+替莫唑胺 0.27
DUGAn 8B6+替莫唑胺 0.58
DUASOII 8B6+替莫唑胺 0.65
GLIO 5 8B6+替莫唑胺 0.41
GUITh 8B6+替莫唑胺 0.66
HARCl 8B6+替莫唑胺 0.30
*0.05-0.90＝协同作用；0.9-1.10，加性作用；1.10-10，抗结作用。
5.其他类型的癌症中，抗OAcGD2 mAb 8B6与化疗药物显示出协同作用
为了测试抗OAcGD2 mAb 8B6是否不仅仅可在成神经细胞瘤和胶质母细胞瘤中增强化疗，将黑素瘤(M21细胞)、乳腺癌(过表达OAcGD2神经节苷脂的MDA-MB-231细胞)、小细胞肺癌(H524细胞)、胶质母细胞瘤(DUGAn细胞)和尤因氏肉瘤(TC71细胞)的示意性的细胞系与多柔比星(0.26μM，除了MDA-MB-231细胞，其中多柔比星的浓度为0.18μM；和DUGAn细胞，其中多柔比星的浓度是1μM)和mAb 8B6或CTRL-(IgG)的特定组合温育30分钟。如先前在实施例的部分3中公开的，使用流式细胞术来评估多柔比星阳性细胞的数量。
如图4所示，在所有类型癌症中，抗OAcGD2 mAb 8B6显著增加了多柔比星阳性细胞的百分比。更具体而言，对于M21黑素瘤细胞系(图A)，观察到多柔比星阳性细胞增加6倍，对于TC71尤因氏肉瘤细胞系(图D)，观察到多柔比星阳性细胞增加超过2倍，对于MDA-MB-231乳腺癌细胞系(图B)，观察到多柔比星阳性细胞几乎增加了两倍，对于H524小细胞肺癌细胞系(图C)，观察到多柔比星阳性细胞增加了1.5倍，对于DUGAn胶质母细胞瘤细胞(图E)，多柔比星阳性细胞增加了1.16倍。
总之，这些结果证明抗OAcGD2 mAb 8B6促进抗癌剂在几种类型的癌症，尤其具有表达O-乙酰化GD2神经节苷脂的细胞的癌症中的渗透。
6.抗OAcGD2 8B6mAb增强小鼠成神经细胞瘤肝转移模型中化疗药物的抗肿瘤活性
6.1–鼠肿瘤模型
在先前由Lode等人描述的A/J小鼠中的鼠NXS2成神经细胞瘤实验性肝转移模型中测定抗OAcGD2 mAb 8B6和化疗的抗成神经细胞瘤功效(J Natl Cancer Inst 1997，89：1586-1594)。该研究严格按照法国农业部实验动物护理和使用指南中的建议进行。该方案获得Région Pays de la Loire动物实验伦理委员会的批准。将小鼠圈养在UTE-UN动物设施(Nantes，法国)。从Harlan Laboratories(Gannat，法国)获得雌性和雄性A/J小鼠(6-8周龄)。我们通过尾静脉在PBS中接种2.5×105个肿瘤细胞。我们将小鼠分成9组，每组10只小鼠：1)载剂处理组；2)对照抗体处理组；3)抗OAcGD2 mAb 8B6处理组；4)异维甲酸处理组；5)拓扑替康处理组；6)多柔比星处理组；7)异维甲酸+mAb 8B6处理组；8)拓扑替康+mAb 8B6处理组；和9)多柔比星+mAb 8B6处理组。在肿瘤细胞注射后第3天开始抗OAcGD2 mAb 8B6处理。小鼠通过静脉内注射每周两次接受25μgm Ab8B6，连续3周(第3、7、10、14、17和21天；总剂量＝150g)。异维甲酸以口服稀释给药，每日10mg/kg，连续2周(第10-14天和第17-21天)。PBS中稀释的拓扑替康通过腹膜内注射给药，每天0.36mg/kg，持续一周(第10-14天)。多柔比星通过腹膜内注射给药，每天1mg/kg，持续两周(第10-14天和第17-21天)。接种后28天处死小鼠，并通过新鲜样品的肝脏重量以及肝转移数评估抗肿瘤功效。
6.2–结果
为了扩展我们在体外获得的观察结果，我们接下来评估了mAb 8B6/化疗组合体内的潜在治疗效果。我们使用Alvarez-Rueda等人公开的小鼠NXS2成神经细胞瘤实验性肝转移模型进行体内研究(ALVAREZ-RUEDA等，PLoS One 2011，vol.6(9)，p:e25220)。如先前在文献中报道的，以低剂量给予抗癌剂以最小化相关的副作用。NSX2肿瘤细胞静脉内接种三天后，如前所述，将10只小鼠分配给单一试剂或mAb 8B6和抗癌剂的组合治疗。在肿瘤细胞接种后第28天，我们测定了小鼠安乐死后的肝转移数和肝脏重量。我们在该研究中使用的mAb 8B6的剂量(累积剂量＝150μg)产生NXS2肝转移的显著减少，如通过与载剂处理的小鼠相比的肝脏重量所示。与载剂处理组为2.5±0.18g相比，mAb 8B6处理组的平均肝脏重量为1.5±0.15g(p<0.05，图5)。证实了抗OAcGD2 mAb 8B6治疗的特异性，因为用等量的非特异性抗体治疗完全无效(平均肝脏重量＝2.5±0.18g，与载剂治疗的小鼠相比p>0.05，数据未显示)。抗体8B6与异维甲酸组合(10mg/kg，口服，每周5次，持续2周)，导致异维甲酸抑制NXS2转移生长的显著敏化(p<0.05，图5图A)。异维甲酸+mAb 8B6处理组的平均肝脏重量为1.0±0.06g，并且异维甲酸处理组为2.0±0.24g。与拓扑替康(1.22±0.09g)或单独的mAb8B6相比，拓扑异构酶I拓扑替康抑制剂(0.36mg/kg，腹膜内注射，每周5次，持续1周)加mAb8B6的组合也显著降低肝脏重量(0.9±0.03g)(p<0.05，图5图B)。与用多柔比星(1.75±0.09g)或单独的mAb 8B6处理相比，蒽环类抗生素多柔比星(1mg/kg，腹腔内注射，每周5次，连续2周)的组合导致肝脏重量显著减少(1.33±0.12g)(p<0.05，图5图C)。mAb 8B6与异维甲酸或拓扑替康的组合在所测试的三种组合方案中产生最强的治疗功效(图5)。
体重减轻用作健康监测的敏感标记。因此，我们对治疗期间的体重进行了平行分析。我们观察到没有体重减轻(图6)，表明在用mAb 8B6、异维甲酸、异维甲酸+mAb 8B6、拓扑替康或拓扑替康+mAb 8B6处理的小鼠中没有治疗相关的毒性。与仅接受mAb 8B6的那些小鼠相比，接受多柔比星或多柔比星加mAb 8B6的小鼠在第17天后显示出体重减轻。但是，与非多柔比星组相比，用多柔比星治疗的两组之间的体重差异在治疗期间不显著(p>0.05)。这些观察结果表明，与抗癌剂加mAb 8B6的组合比单独的任一种试剂具有更有效的体内抗肿瘤功效，且没有可检测的毒性。
7.在难治的胶质母细胞瘤模型中，抗OAcGD2 8B6mAb恢复化疗药物的抗癌效果
7.1–材料和方法
7.1.1-药理学试剂
如前所述获得抗OAcGD2 mAb 8B6和同种型对照抗体(CTRL)。替莫唑胺(TMZ)购自Interchim(法国)。用DMSO重构TMZ，并将等分试样储存在-20℃下。与TMZ溶液相同的最终百分比的DMSO用作所有研究的载剂对照。
7.1.2-细胞培养。
患者来源的胶质母细胞瘤GBM-10细胞在含有1％青霉素和链霉素的DMEM/Ham F12中作为神经球维持，补充有L-谷氨酰胺、B27、N2补充剂和肝素(2μg/ml)，以及分别临时添加的另外的生长因子β-FGF(40ng/ml)和EGF(40ng/ml)。培养试剂获自Gibco LifeTechnologies(Waltham，MA)。所有细胞类型均保持早期传代，并通过PCR常规检测支原体。
7.1.3-GBM10细胞中的O-乙酰基-GD2表达。
通过流式细胞术测量的间接免疫荧光进行GBM细胞中OAcGD2表达的分析。用冷PBS冲洗细胞，用PFA 4％(Electron Microscopy Sciences，Hatfield，PA)在4℃下固定10分钟，然后用mAb 8B6(10μg/ml)温育45分钟。通过与山羊抗小鼠IgG的荧光素异硫氰酸酯标记的F(ab')2片段(Jackson Immunoresearch，Soham，UK)在4℃下温育60分钟来检测抗体8B6结合。用对照IgG进行单独的实验。使用FACSCanto流式细胞计数器(BD Biosciences，SanJose，CA，USA)和FlowJo软件(Flowjo LLC，Oregon，OR，USA)分析细胞荧光。结果用MFI比率表示。
7.1.4–有限稀释分析。
对于有限稀释测定，解离GBM肿瘤，并以103个细胞/mL的初始浓度接种分离的细胞，在96孔板中进行连续稀释。将细胞培养15天，之后计算每个细胞铺板密度不含神经球的孔的分数，并用ELDA软件(ELDA，Linz，Austria)分析数据以定量样品中的胶质母细胞瘤干细胞的频率(GSC)和各种处理的影响。
7.1.4-胶质母细胞瘤异种移植小鼠模型。
根据制度指南(Agreement#00186.02；Regional ethics committee of the Paysde la Loire，法国)，购自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)的NSG(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠在SPF状态下在南特大学(UTE，SFR F.Bonamy)的动物设施中繁殖并在6-12周龄时使用。在第0天皮下注射GBM-10细胞(1×106于100μl Matrigel中，Corning，Corning，NY，USA)。在第12、22和32天以0.05mg/小鼠的单剂量通过腹膜内注射TMZ。
7.2–结果
从TMZ化疗后复发性GBM-10细胞中分离TMZ难治GBM-10细胞(GBM-10TMZR)(图7图A)。如材料和方法部分中所述，通过流式细胞术分析测定O-乙酰基-GD2表达水平。结果显示，与从未治疗的小鼠分离的GBM-10细胞相比，TMZ化疗后O-乙酰基GD2表达仍然存在(图7图B)。
接下来通过有限稀释试验确定TMZ难治水平，并在肿瘤异种移植物中表达成胶质母细胞瘤癌症干细胞频率。结果表明TMZ化疗后干细胞频率增加(图7图C和D)。实际上，在未治疗的小鼠中，TMZ暴露或mAb 8B6暴露都降低了干细胞存活(图7图C)。更重要的是，由两种试剂组合(TMZ+8B6)诱导的效果显著高于分别用作单一疗法的两种试剂。
TMZ化疗在从复发性GBM-10异种移植物中分离的GBM-10细胞中抑制干细胞存活的效率低得多(图7图D)。令人吃惊的是，两种试剂组合(TMZ+8B6)能够降低GSC存活率。
序列表
<110> OGD2药物
<120> 抗 O-乙酰化GD2神经节苷脂抗体改善药物治疗潜力的用途
<130> ATL-B-0006-PCT1
<150> EP16002576.3
<151> 2016-12-05
<160> 50
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 第三人源化VL序列的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
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<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 1
Xaa Val Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Arg Xaa Ser Gln Ser Xaa Xaa Lys Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Trp Xaa Xaa Gln Xaa Pro Gly Xaa Xaa
35 40 45
Pro Xaa Xaa Leu Ile Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Arg Xaa Xaa Gly Xaa Pro
50 55 60
Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Xaa Ile
65 70 75 80
Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Asp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Cys Xaa Gln Ser
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 2
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 第三人源化VH序列的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<222> (60)..(60)
<223> X= T或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (63)..(63)
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<220>
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
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20 25 30
Tyr Met Xaa Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Xaa Xaa Xaa Arg Asn Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Xaa Xaa Lys Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Xaa Xaa Glu Asp Thr Ala Xaa Tyr
85 90 95
Tyr Cys Xaa Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Xaa Xaa Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 第二人源化VL序列的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X=D或E
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> X=L或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> X=S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> X=P或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> X=V或L或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> X=S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> X=L或P或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> X=D或Q或E
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> X=Q或P或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> X=A或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> X=S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> X=I或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> X=S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> X=S或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> X=L或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> X=L或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> X=N或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> X=N或Q或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> X=G或A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> X=N或Y或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (36)..(36)
<223> X=N或T或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (37)..(37)
<223> X=F或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (39)..(39)
<223> X= H或N或S或A或D或Y或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (41)..(41)
<223> X=Y或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (42)..(42)
<223> X=L或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (44)..(44)
<223> X=K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (47)..(47)
<223> X=Q或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (48)..(48)
<223> X=S或A或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (50)..(50)
<223> X=K或Q或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (51)..(51)
<223> X=L或R或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (55)..(55)
<223> X=K或G或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (56)..(56)
<223> X= V或A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (58)..(58)
<223> X= N或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (60)..(60)
<223> X= L或D或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (61)..(61)
<223> X=S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (63)..(63)
<223> X=V或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (65)..(65)
<223> X=D或A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (75)..(75)
<223> X=Y或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (79)..(79)
<223> X=K或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (81)..(81)
<223> X=S或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (82)..(82)
<223> X=R或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (83)..(83)
<223> X=V或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (84)..(84)
<223> X=E或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (85)..(85)
<223> X=A或P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (88)..(88)
<223> X=L或V或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (89)..(89)
<223> X=G或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (90)..(90)
<223> X=V或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (92)..(92)
<223> X=Y或F
<220>
<221> misc_feature
<222> (94)..(94)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (96)..(96)
<223> X=S或G或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (97)..(97)
<223> X=T或Y或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (98)..(98)
<223> X=H或Q或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (98)..(98)
<223> X=H或Q或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (99)..(99)
<223> X= I或W或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (100)..(100)
<223> X= P或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (105)..(105)
<223> X=G或Q
<400> 3
Xaa Val Val Met Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Arg Xaa Ser Gln Ser Xaa Xaa Lys Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Trp Xaa Xaa Gln Xaa Pro Gly Xaa Xaa
35 40 45
Pro Xaa Xaa Leu Ile Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Arg Xaa Xaa Gly Xaa Pro
50 55 60
Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Xaa Ile
65 70 75 80
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Asp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Cys Xaa Gln Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 4
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL15
<400> 4
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Lys Asn
20 25 30
Gln Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 5
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL16
<400> 5
Glu Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Lys Asn
20 25 30
Gln Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Thr Gly Ile Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 6
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL17
<400> 6
Glu Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Lys Asn
20 25 30
Gln Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Thr Gly Ile Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 7
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL18
<400> 7
Glu Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Lys Asn
20 25 30
Gln Ala Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Thr Gly Ile Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 8
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 第二人源化VH序列的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X=E或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> X=V或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> X=Q或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> X= G或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> X= A或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> X= T或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (48)..(48)
<223> X= L或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (49)..(49)
<223> X= G或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (57)..(57)
<223> X= G或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (63)..(63)
<223> X= N或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (64)..(64)
<223> X= P或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (77)..(77)
<223> X= S或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (79)..(79)
<223> X= S或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (80)..(80)
<223> X= I或S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (81)..(81)
<223> X= L或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (89)..(89)
<223> X= R或K或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (90)..(90)
<223> X= T或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (95)..(95)
<223> X= V或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (114)..(114)
<223> X= T或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (115)..(115)
<223> X= L或V
<400> 8
Xaa Val Gln Leu Xaa Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Xaa Pro Gly Xaa
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Xaa Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Xaa Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Xaa Tyr Thr Thr Glu Tyr Xaa Xaa
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Xaa Lys Xaa Xaa
65 70 75 80
Xaa Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Xaa Xaa Glu Asp Thr Ala Xaa Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Xaa Xaa Thr Val Ser Ser
115
<210> 9
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH19
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH20
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH21
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 第一人源化VL序列的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X = D或E
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> X = V或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> X = L或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> X = S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> X = P或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> X = V或L或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> X = S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> X = L或P或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> X = D或Q或E
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> X =Q或P或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> X = A或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> X = S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> X = I或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> X = S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (42)..(42)
<223> X = L或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (44)..(44)
<223> X = K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (47)..(47)
<223> X = Q或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (48)..(48)
<223> X = S或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (50)..(50)
<223> X = K或Q或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (61)..(61)
<223> X = S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (63)..(63)
<223> X = V或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (65)..(65)
<223> X =D或A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (75)..(75)
<223> X =Y或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (79)..(79)
<223> X =K或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (82)..(82)
<223> X = R或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (83)..(83)
<223> X = V或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (84)..(84)
<223> X = E或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (85)..(85)
<223> X = A或P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (88)..(88)
<223> X = L或V或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (89)..(89)
<223> X = G或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (90)..(90)
<223> X = V或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (92)..(92)
<223> X = Y或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (105)..(105)
<223> X = G或Q
<400> 12
Xaa Val Xaa Met Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Xaa Gln Xaa Pro Gly Xaa Xaa
35 40 45
Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Xaa Gly Xaa Pro
50 55 60
Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Xaa Ile
65 70 75 80
Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Asp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 13
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 第一人源化VH序列的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> X = E或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> X = Q或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> X = G或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> X = A或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (77)..(77)
<223> X = S或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (79)..(79)
<223> X = S或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (80)..(80)
<223> X = I或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (89)..(89)
<223> X = R或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (90)..(90)
<223> X = T或A
<400> 13
Xaa Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Xaa Pro Gly Xaa
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Thr Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Xaa Lys Xaa Xaa
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Xaa Xaa Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 14
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 15
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Leu Pro Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Arg Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1_VH
<400> 16
Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Thr
1 5 10
<210> 17
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2_VH
<400> 17
Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3_VH
<400> 18
Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 19
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR1_VL
<400> 19
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn Asn Gly Asn Thr Phe Leu His
1 5 10 15
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR2_VL
<400> 20
Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR3_VL
<400> 21
Ser Gln Ser Thr His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv 接头
<400> 22
Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 23
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv 接头
<400> 23
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 24
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv 接头
<400> 24
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 25
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ((G4S)3 接头
<400> 25
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD19 接头
<400> 26
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 27
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 18聚体
<400> 27
Gly Gly Ser Ser Arg Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly
<210> 28
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> (G4S)4 接头
<400> 28
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 29
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 29
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 30
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 30
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 31
Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe
1 5 10
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 32
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 33
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 33
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 34
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL1
<400> 34
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 35
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL2
<400> 35
Glu Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Thr Gly Ile Pro
50 55 60
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL3
<400> 36
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 37
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL4
<400> 37
Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 38
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL28BH
<400> 38
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Asn
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 39
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL30BH
<400> 39
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Lys Asn
20 25 30
Gln Gly Asn Thr Phe Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 40
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VL28Bs01/A2
<400> 40
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Lys Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Phe Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Thr His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 41
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH1
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH2
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Thr Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 201 VH3-11*01A
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 44
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH 72BCDR
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 72BH
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH49BCDR
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Arg Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 47
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH49BH
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Thr Ser Glu Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 48
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH72max
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 49
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH49B
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OGD201 VH49Bmax
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Val Ser Asn Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115

Claims (23)

1.一种用于将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中的方法，其包括使所述细胞与识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种多聚体抗体、其功能片段或衍生物，以有效增强所述细胞摄取所述抗癌剂的量和浓度接触，其中所述抗体在细胞膜内引起渗透性缺陷，比如孔形成。
2.一种用于将抗癌剂递送到表达OAcGD2神经节苷脂的细胞中的组合物，所述组合物包括：(i)至少一种抗癌剂，和(ii)识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种多聚体抗体、其功能片段或衍生物，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体增强肿瘤细胞对所述至少一种抗癌剂的摄取。
3.一种识别OAcGD2神经节苷脂的多聚体抗体、其功能片段或衍生物，其用途为将至少一种抗癌剂选择性递送到表达所述OAcGD2神经节苷脂的细胞中，以治疗和/或预防癌症。
4.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物包括a)具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的轻链可变区(VL)多肽和b)具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的重链可变区(VH)。
5.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物包括：
具有选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列的轻链可变区(VL)多肽：SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40；和/或
具有选自包括或由下述组成的组中的氨基酸序列的重链可变区(VH)：SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51。
6.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的抗体的所述功能片段为重链和轻链可变区(scFv)的单链片段的形式。
7.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的抗体的功能片段为嵌合抗原受体(CAR)的单链部分。
8.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的抗体、其功能片段或衍生物包括具有选自下述或由下述组成的组中的氨基酸序列的轻链可变区(VL)多肽：SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40，和/或具有选自下述或由下述组成的组中的氨基酸序列的重链可变区(VH)：SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51。
9.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物包括：
a)具有氨基酸序列SEQ ID NO:14的轻链可变区(VL)多肽；和
b)具有氨基酸序列SEQ ID NO:15的重链可变区(VH)。
10.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物包括：
a)重链，其包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18的三个重链互补区(CDR)，和来自免疫球蛋白重链的重链框架序列，和
b)轻链，其包括具有氨基酸序列SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21的三个轻链互补区(CDR)，和来自免疫球蛋白轻链的轻链框架序列。
11.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，所述抗体为免疫缀合物。
12.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述至少一种抗癌剂选自包括或由下述组成的组中：比如烷化剂的抗癌剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗体、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、皮质类固醇、激素或激素样药物、细胞因子、核苷类似物、如双链合成短RNA分子(miRNA)或合成DNA/RNA样寡核苷酸(ASO)的核酸。
13.根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述用途的所述抗体，其中所述至少一种抗癌剂自身不能穿过癌细胞的细胞膜。
14.根据权利要求3至13中任一项所述用途的所述抗体，其中表达所述OAcGD2神经节苷脂的癌症选自包括或由下述组成的组中：成神经细胞瘤、神经胶质瘤、成视网膜细胞瘤、尤因氏家族肿瘤、肉瘤(即，横纹肌肉瘤、骨肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和纤维肉瘤)、小细胞肺癌、乳腺癌、黑素瘤、转移性肾癌、头颈癌和血液癌症(即，白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和骨髓瘤)。
15.根据权利要求14所述用途的所述抗体，其中所述至少一种抗癌剂选自包括或由下述组成的组中：环磷酰胺、多柔比星、拓扑替康、依立替康、替莫唑胺(TMZ)、视黄酸(RA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟达拉滨、卡铂和顺铂。
16.根据权利要求3至15中任一项所述用途的所述抗体，其中所述至少一种抗癌剂为替莫唑胺、拓扑替康、依立替康、氟达拉滨、环磷酰胺或其混合物，并且所述表达OAcGD2神经节苷脂的癌症为成神经细胞瘤。
17.一种增加包括抗癌剂的表达OAcGD2神经节苷脂的癌症治疗的功效的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
18.一种增加患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者对抗癌剂的敏感性的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
19.一种预防或延迟患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者中对抗癌剂具有抗性的癌症的发展的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
20.一种鉴定(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种多聚体抗体、其功能片段或衍生物的协同组合的体外/离体方法，其包括下述步骤：
a)在体外用包括下述的组合物温育表达O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂的原代肿瘤细胞或癌细胞系细胞：分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，和(ii)识别OAcGD2神经节苷脂的至少一种抗体、其功能片段或衍生物，和
b)根据Chou和Talalay公开的方法测量CI50指数，其中低于1的CI50表示协同作用。
21.一种适于治疗表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的试剂盒，其包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种多聚体抗体、其功能片段或衍生物，和任选地(iii)药学上可接受的载体。
22.识别OAcGD2神经节苷脂的多聚体抗体、其功能片段或衍生物用于增强分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的抗癌剂在表达O-乙酰化形式的GD2神经节苷脂的细胞中的细胞内摄取的用途。
23.一种治疗患有表达OAcGD2神经节苷脂的癌症的患者的难治的或复发的癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的组合物，所述组合物包括：(i)分子量在100道尔顿至200,000道尔顿的范围内的至少一种抗癌剂，(ii)识别所述OAcGD2神经节苷脂的至少一种多聚体抗体、其功能片段或衍生物，其中所述癌症是难治的或在包括选自由下述组成的组中的一种或多种抗癌剂的一线癌症治疗后复发的：烷化剂、抗代谢分子、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和核苷类似物。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3269739A1 (en) * 2016-07-15 2018-01-17 OGD2 Pharma Humanized antibody against o-acetylated gd2 ganglioside (oacgd2)
CN110101685B (zh) * 2019-05-21 2021-03-30 河南大学 一种仿生纳米药物、其制备方法及应用
EP4322937A1 (en) * 2021-04-14 2024-02-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) New method to improve the anti-tumoral activity of macrophages
WO2022219080A1 (en) * 2021-04-14 2022-10-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method to improve nk cells cytotoxicity

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105339390A (zh) * 2013-04-29 2016-02-17 Ogd2药物 靶向o-乙酰化的gd2神经节苷脂作为针对癌症干细胞的新型治疗和诊断策略
CN106029698A (zh) * 2013-11-11 2016-10-12 Ogd2药物 具有促凋亡活性的抗gd2-o-乙酰化神经节苷脂的抗体

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5997856A (en) 1988-10-05 1999-12-07 Chiron Corporation Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins
US9334330B2 (en) * 2006-10-10 2016-05-10 Universite De Nantes Use of monoclonal antibodies specific to the O-acetylated form of GD2 ganglioside for the treatment of certain cancers
FR2906808B1 (fr) 2006-10-10 2012-10-05 Univ Nantes Utilisation d'anticorps monoclonaux specifiques de la forme o-acetylee du ganglioside gd2 dans le traitement de certains cancers
US10544201B2 (en) 2014-07-31 2020-01-28 Cellectis ROR1 specific multi-chain chimeric antigen receptor

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105339390A (zh) * 2013-04-29 2016-02-17 Ogd2药物 靶向o-乙酰化的gd2神经节苷脂作为针对癌症干细胞的新型治疗和诊断策略
CN106029698A (zh) * 2013-11-11 2016-10-12 Ogd2药物 具有促凋亡活性的抗gd2-o-乙酰化神经节苷脂的抗体

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MAHIUDDIN AHMED, NAI-KONG V. CHEUNG: "Engineering anti-GD2 monoclonal antibodies for cancer immunotherapy", 《FEBS LETTERS》 *
MAHIUDDIN AHMED, NAI-KONG V. CHEUNG: "Engineering anti-GD2 monoclonal antibodies for cancer immunotherapy", 《FEBS LETTERS》, 1 December 2013 (2013-12-01) *
NIDIA ALVAREZ-RUEDA ET AL.: "A Monoclonal Antibody to O-Acetyl-GD2 Ganglioside and Not to GD2 Shows Potent Anti-Tumor Activity without Peripheral Nervous System Cross-Reactivity", PLOS ONE, pages 2 *
TING-CHAO CHOU: "Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies", 《PHARMACOLOGICAL REVIEWS》 *
TING-CHAO CHOU: "Theoretical Basis, Experimental Design, and Computerized Simulation of Synergism and Antagonism in Drug Combination Studies", 《PHARMACOLOGICAL REVIEWS》, 31 December 2006 (2006-12-31) *
曹阳: "单克隆抗体C225与化疗药联合的不同序贯方案对大肠癌及肺癌细胞系抗瘤作用影响研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)医药卫生科技辑》 *
曹阳: "单克隆抗体C225与化疗药联合的不同序贯方案对大肠癌及肺癌细胞系抗瘤作用影响研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)医药卫生科技辑》, 15 October 2007 (2007-10-15), pages 7 - 15 *

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