CN110302245A - 一种具有抗敏修复功效的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物，所述中药组合物的制备原料包括积雪草、蛇床子、黄芩、山金车花、洋甘菊和甘草。本发明所述的中药组合物以积雪草为君药，黄芩和蛇床子为臣药，山金车花和洋甘菊为佐药，甘草为使药，各中药组分之间相互配合、协同增效，能够实现抗过敏的同时修复皮肤屏障。

Description

一种具有抗敏修复功效的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于化妆品领域，涉及一种具有抗敏修复功效的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
由于环境以及不规律的生活方式使得众多人群的皮肤愈加脆弱，导致皮肤的免疫力下降无法抵御外界的刺激，特别是在秋冬季节，皮肤干燥，很多人会表现出皮肤瘙痒等皮肤过敏症状，肌肤就会频繁地出现泛红、瘙痒、刺痛和红疹等过敏现象。
过敏反应的发生过程通常可分为致敏、发敏和效应三个阶段。过敏反应发生是因为机体首先接触过敏原(抗原)如药物、粉尘等后，产生大量IgE抗体(反应素)，这种亲细胞性抗体与体内的肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞相结合，使机体致敏。当变应原再次进入机体后交联肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的IgE，刺激这些细胞脱颗粒，释放生物活性介质，使机体处于发敏状态。在效应阶段，释放的生物活性介质作用于效应器官，快速引起支气管平滑肌痉挛，毛细血管扩张，通透性增加，导致哮喘、皮疹、腹泻、休克等局部或全身性过敏反应。其中在效应阶段释放的生物活包括两类，另一类是预先形成储备在颗粒内的介质，主要为血管活性胺(组胺和一羟色胺)和蛋白酶(激肽原酶和缓激肽类)；一类是细胞活化后新合成的介质，主要有前列腺素D2(PGD2)、白三烯、多种细胞因子及趋化因。这些化学物质和多肽类成分可引起各种与过敏相关的局部和全身的病理生理变化。皮肤过敏反应的发生可能是机体内过敏反应的表征，也可能是过敏原直接作用于皮肤及皮肤黏膜处导致的直接刺激性和其他类型过敏性皮炎，皮肤过敏可能局限于接触位，也可以向周围或远隔部位扩散。
目前在化妆品中为了降低皮肤过敏性物质对皮肤的刺激性，化妆品配方中往往需要加入抗敏剂。常用的化妆品抗敏剂有甘草酸二钾、ɑ-红没药醇、马齿笕提取物等。但是这些抗敏剂均具有一定的缺陷，如甘草酸二钾会增加化妆品中的离子含量，使化妆品不稳定；ɑ-红没药醇本身就有刺激性，抗敏效果一般；据报道马齿苋提取物具有光敏反应，存在安全风险；而且单种中药使用效果不佳，人体过敏是个复杂的过程，经常是全身性多环节的反应，单味药材也没有根本上解决皮肤脆弱的问题。
CN105963342A公开了一种抗过敏的复合黄酮组合物及其制备方法和应用，其包括如下重量份数的成分：甘草1～50份、洋甘菊1～90份、防风5～80份，三种不同结构类型的活性黄酮进行复配，虽然在一定程度上抗过敏，但是其抗过敏能力较低，且对肌肤屏障修复的能力较差。
CN107213445A公开了一种抗敏组合物及其制备方法与应用，其包括如下质量百分含量的组分：洋甘菊15～25％，生姜25～36％，甘草1～10％，积雪草1～10％，吐温-20 2～15％，该抗敏组合物可减少过敏反应，但其修复皮肤屏障功能较差、保湿性能差。
CN108403570A公开了一种对湿疹引起的皮肤瘙痒有改善效果的体用凝露，制备原料由以下组分组成：胀果甘草根提取物、黄芩根提取物、苦参根提取物、积雪草提取物、虎杖根提取物、茶叶提取物、光果甘草根提取物、库拉索芦荟叶汁粉、金黄洋甘菊提取物、甘油、丁二醇、PVM/MA癸二烯交联聚合物等，其成分复杂，抗过敏效果一般，对肌肤的修复效果性能较差。
因此，开发一种抗过敏的同时，还具有修复皮肤屏障功效的中药组合物是目前研究的重点。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物，所述中药组合物不仅具有抗过敏的功效，还具有极强的修复皮肤屏障的能力。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种具有抗过敏功效的中药组合物，所述中药组合物的制备原料包括积雪草、蛇床子、黄芩、山金车花、洋甘菊和甘草。
本发明所述具有抗过敏功效的中药组合物结合中药组方君臣佐使的遣方原则与皮肤过敏相关病理，实现量肤选材，有的放矢。本发明中各中药的性味和功效如下：
积雪草为君药：中医认为洋甘菊味苦、辛，性寒。具有清热利湿，解毒消肿之功效；现代中医学实验表明积雪草能抑制纤维组织增生促进皮肤生长，积雪草苷能治疗皮肤溃疡，局部白细胞增多、结缔组织血管网增生、粘液分泌增加、毛及尾的生长加速，有促进皮肤创伤愈合和皮肤修复的作用等，而且对敏感皮肤具有良好的舒缓作用和治疗皮肤病的效果。
黄芩和蛇床子为臣药：中医认为黄芩味苦、性寒。有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效；可降低毛细血管通透性，可用于热毒火邪浸淫皮肤之疮痈毒肿等证。中医认为蛇床子性味：性温，味苦。有燥湿，祛风，杀虫，温肾壮阳的功效；现代中医学实验表明蛇床子素具有良好的抗炎和抗过敏作用，而且对于湿疹、痒疹以及荨麻疹等皮肤瘙痒等症状具有很好的治疗效果，但这些皮肤病辨证以血热湿热为多，因此蛇床子与黄芩同用为臣药，既能抗过敏，又能抗变态反应。从而可辅助君药发挥功效，起到清热解毒，抗敏止痒，祛风止痉，活血生肌，修复皮肤过敏问题，促使皮肤屏障功能恢复。
山金车花和洋甘菊为佐药：中医认为山金车花味甘，性凉，入肺，肝经。能活血化瘀，消炎止痛，缓解风湿，消肿，有效治疗创伤、瘀伤愈合和皮肤过敏等功效；现代中医学实验表明可增强皮肤细胞新陈代谢，修复皮肤屏障等作用。中医认为洋甘菊性味微苦、甘香，能明目、退肝火，治疗失眠，降低血压，可增强活力、提神。现代皮肤科学试验结果表明，洋甘菊富含黄酮类活性成分，具有抗氧化、修复血管和恢复血管弹性、消炎、抗变应性、和抗病毒的功效，具有良好的舒敏、修护敏感肌肤、增强皮肤屏障，减少细红血丝、减少发红、调整肤色不均等作用。山金车花和洋甘菊为佐药可以配合君、臣药以加强治疗作用。
甘草为使药：中医认为味甘，性平。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效。其对人体作用广泛，所含之甘草素在水解为甘草次酸，有类似肾上腺皮质激素和盐皮质激素的抑制炎症、抗过敏作用，同时具有抗炎、抗氧化、修复受损肌肤等多重功效，此外还能够协同调节中药组合物的毒副作用，降低中药成分的刺激性。
以上六种中药成分合用，具有协同增效的作用，能够很好的清热解毒、消肿、止痒、活血、生肌、修复以及消炎，从而达到抗过敏和皮肤屏障修复的二合一功效；此外本申请所述中药组合物还具有保湿、美白淡斑、抗衰老、淡化痘印的功效。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草5-30％、蛇床子5-30％、黄芩5-30％、山金车花5-30％、洋甘菊5-30％和甘草5-30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料中积雪草的重量百分比为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料中蛇床子的重量百分比为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料中黄芩的重量百分比为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料中山金车花的重量百分比为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料中洋甘菊的重量百分比为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料中甘草的重量百分比为5-30％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草20-30％、蛇床子15-20％、黄芩15-20％、山金车花10-20％、洋甘菊10-20％和甘草5-15％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草20％、蛇床子20％、黄芩20％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草10％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草30％、蛇床子20％、黄芩15％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草10％。
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草25％、蛇床子15％、黄芩15％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草15％。
第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述具有抗敏修复功效的中药组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行提取，得到提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物。
优选地，步骤(1)所述的混合粉末的目数为80-200目，例如可以是80目、90目、100目、110目、120目、130目、140目、150目、160目、170目、180目、190目、200目。
优选地，步骤(2)所述混合粉末与溶剂的质量比为1:(2-20)，例如可以是1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20。
优选地，步骤(2)所述溶剂包括水、丁二醇、丙二醇或乙醇中的任意一种或至少两种的混合物，优选为水和/或乙醇。
优选地，所述乙醇的体积比浓度为10-95％，例如可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％。
优选地，步骤(2)所述提取为高压均质提取。
优选地，所述高压均质提取的时间为5-30min，例如可以是5min、8min、10min、12min、14min、15min、17min、19min、21min、23min、25min、27min、29min、30min。
优选地，所述高压均质提取的压强为10-30MPa，例如可以是10MPa、12MPa、14MPa、16MPa、18MPa、20MPa、22MPa、24MPa、26MPa、28MPa、30MPa。
优选地，步骤(3)所述浓缩为经反渗透膜浓缩；
优选地，步骤(3)所述浓缩的压力为5-30bar，例如可以是5bar、6bar、7bar、8bar、9bar、10bar、11bar、12bar、13bar、14bar、15bar、16bar、17bar、18bar、19bar、20bar、21bar、22bar、23bar、24bar、25bar、26bar、27bar、28bar、29bar、30bar。
优选地，所述制备方法中步骤(3)后还包括步骤(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物进行洗脱和二次浓缩，得到二次浓缩液后，再向二次浓缩液中加入溶剂溶解、过滤。
优选地，步骤(4)所述洗脱步骤具体为：将浓缩液上大孔树脂水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液。
优选地，所述大孔树脂型号为D101或AB-8中任意的一种。
优选地，所述乙醇的体积比浓度为30-85％，例如可以是30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％。
优选地，步骤(4)所述二次浓缩为减压浓缩。
优选地，步骤(4)所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述中药组合物各组分原料总质量的质量比为(0.1-1):1，例如可以是0.1:1、0.2:1、0.3:1、0.4:1、0.5:1、0.6:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1、1:1。
优选地，步骤(4)所述溶剂为丁二醇。
优选地，步骤(4)所述溶剂与二次浓缩液的质量比为1:(0.5-2)，例如可以是1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2，优选为1:1。
优选地，所述中药组合物的制备方法具体包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到80-200目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行高压均质提取，得到提取液，所述混合粉末和溶剂的质量比为1:(2-20)，所述高压均质提取的时间为5-30min，所述高压均质提取的压强为10-30MPa；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤收集滤液，滤液在5-30bar下经反渗透膜浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上大孔树脂水洗，再用30-85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，再进行二次浓缩，得到二次浓缩液，所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为(0.1-1):1；最后加入溶剂溶解，所述溶剂与二次浓缩液的质量比为1:(0.5-2)，过滤。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的具有抗敏修复功效的中药组合物在制备化妆品中的应用。
第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品包括如第一方面所述的具有抗过敏功效的中药组合物。
优选地，所述具有抗敏修复功效的中药组合物的添加量为化妆品总重量的0.05-20％，例如可以是0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％，优选为0.1-10％；
优选地，所述化妆品包括面膜、乳液、护肤霜、柔肤水、精华液、补水霜、化妆水或BB霜中的任意一种。
在含有本发明所述中药组合物物的基础上，可以根据需要适当地添加化妆品的通常成分，如保湿剂、润肤剂、水、乳化剂、抗氧化剂、香精等基质成分。对于化妆品的种类没有特别限制，可以为水剂、乳液、膏霜等。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述的中药组合物以积雪草为君药，黄芩和蛇床子为臣药，山金车花和洋甘菊为佐药，甘草为使药；各中药组分之间配伍合理，具有协同增效作用，不仅具有抗过敏的功效，对透明质酸酶的抑制率在90％以上，还具有极强的修复皮肤屏障的能力。
(2)本发明所述的中药组合物可添加到化妆品中，具有极强的皮肤屏障修复功效：使用添加本发明所述中药组合物的化妆品四周后皮肤水分散失率为5-6％，四周后皮肤弹性增加率在8-9％。
(3)本发明所述的中药组合物尤其适用于修复因化妆品伤害、环境伤害以及不规律的生活方式导致的皮肤红肿、干燥脱屑、瘙痒、刺痛和红疹等过敏现象。
附图说明
图1为实施例1制备的中药组合物对透明质酸酶活性的抑制率示意图。
图2为实验例1制备的中药组合物在不同浓度下对红细胞中血红蛋白的溶血率曲线图。
图3为应用实施例2和应用对比例14制备的乳液的水分经皮肤散失测试结果图。
图4为应用实施例2和应用对比例14制备的乳液的皮肤弹性增加率结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅰ)，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草20％、蛇床子20％、黄芩20％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到100目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入体积分数为50％的乙醇溶液进行高压均质提取，得到提取液，所述混合粉末和溶剂的质量比为1:10，所述高压均质提取的时间为20min，所述高压均质提取的压强为20MPa；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤并收集滤液，滤液在20bar下经反渗透膜浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上AB-8型大孔树脂水洗，再用85％的乙醇洗脱3次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例2
本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅱ)，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草30％、蛇床子20％、黄芩15％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草10％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到150目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入体积分数为70％的乙醇溶液进行高压均质提取，得到提取液，所述混合粉末和溶剂的质量比为1:15，所述高压均质提取的时间为5min，所述高压均质提取的压强为30MPa；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤并收集滤液，滤液在5bar下经反渗透膜浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上D101型大孔树脂水洗，再用30％的乙醇洗脱5次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例3
本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅲ)，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草25％、蛇床子15％、黄芩15％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草15％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到100目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入纯水进行高压均质提取，得到提取液，所述混合粉末和纯水的质量比为1:20，所述高压均质提取的时间为30min，所述高压均质提取的压强为10MPa；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤并收集滤液，滤液在30bar下经反渗透膜浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上AB-8型大孔树脂水洗，再用70％的乙醇洗脱5次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为1:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例4
本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅳ)，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草25％、蛇床子15％、黄芩15％、山金车花20％、洋甘菊20％和甘草5％。
其制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到120目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入纯水进行高压均质提取，得到提取液，所述混合粉末和纯水的质量比为1:5，所述高压均质提取的时间为15min，所述高压均质提取的压强为15MPa；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤并收集滤液，滤液在15bar下经反渗透膜浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上AB-8型大孔树脂水洗，再用60％的乙醇洗脱5次，收集洗脱液，再进行减压浓缩，至所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为0.8:1；最后加入丁二醇溶解，所述丁二醇与二次浓缩液的质量比为1:1，过滤。
实施例5
同实施例1，本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅴ)，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草40％、蛇床子20％、黄芩20％、山金车花10％、洋甘菊5％和甘草5％，其它制备方法相同。
实施例6
同实施例1，本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅵ)，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草10％、蛇床子35％、黄芩35％、山金车花10％、洋甘菊5％和甘草5％，其它制备方法相同。
实施例7
同实施例1，本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅶ)，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草10％、蛇床子10％、黄芩5％、山金车花35％、洋甘菊35％和甘草5％，其它制备方法相同。
实施例8
同实施例1，本实施例提供一种具有抗敏修复功效的中药组合物(Ⅷ)，区别在于：所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草10％、蛇床子10％、黄芩10％、山金车花10％、洋甘菊10％和甘草50％，其它制备方法相同。
对比例1-12
本对比例1-12的中药提取物，由表1所示重量百分含量的组分制成，(即表中数字代表重量百分含量，例如100代表100％)，对比例1-12的制备方法实施例1所述中药组合物的制备方法相同。
表1
试验例1
透明质酸酶体外抑制试验测定抗过敏功效
1、实验原理
透明质酸是组织基质中限制水分和其他胞外物质扩散的成分，被透明质酸酶水解后，细胞间则变为非黏性，引起细胞脱颗粒和合成的新介质渗出，发挥生物效应，导致速发型过敏反应的发生。透明质酸酶是过敏反应的参与者，其与过敏有强相关性，因此常用受试物对透明质酸酶的一直成都来反映其对Ⅰ型超敏反应的缓解和改善作用。
2、试剂配制
(1)透明质酸酶：用醋酸缓冲溶液做溶剂配制浓度500u/mL透明质酸酶，要现配现用，不能过夜。
(2)透明质酸钾：用醋酸缓冲溶液做溶剂配制浓度0.5mg/mL透明质酸钾(3)缓冲溶液(Buffer)：溶液A(0.2mol/L醋酸，即11.55mL冰醋酸溶于1000mL蒸馏水中)4.8mL，溶液B(0.2mol/L的醋酸钠，即16.4克CH3COONa或者27.2克CH3COONa·3H2O溶于1000ml蒸馏水中)45.2mL，混合，稀释成100mL，配成pH＝5.6的醋酸缓冲液。
(4)乙酸丙酮溶液：50mL 1.0mol/L碳酸钠溶液和3.5mL乙酰丙酮溶液混合均匀。(临用现配)
(5)对二甲氨基苯甲醛(P-DAB)显色剂的配制：0.8g对二甲氨基苯甲醛和15mL HCl以及无水乙醇混合均匀使用。
(6)CaCl2溶液：2.5moL/L。
(7)NaOH溶液：5moL/L。
3、实验步骤：
取0.1mL CaCl2溶液(0.25mmol/L)和0.5mL透明质酸酶液(100U/mL)于37℃水浴反应20min；加入样品液0.5mL，保温20min；再加入0.5mL透明质酸钠溶液(0.5g/L)，反应30min后取出冷却5min；加入0.1mL氢氧化钠溶液(0.4mol/L)和0.5mL乙酰丙酮溶液(3.5mL乙酰丙酮溶于50mL的1.0mol/L碳酸钠溶液中)，沸水浴15min后立即转移至冰水浴5min；滴加1mL埃尔利希试剂(0.8g对-二甲基氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中)，并用3mL无水乙醇稀释，室温放置20min显色，于540nm处测定其吸光度，并以质量分数为5％的甘草酸二钾溶液为阳性对照品。按照以下公式计算对透明质酸酶抑制率：
透明质酸酶抑制率＝{[(A－B)－(C－D)]/(A-B)}×100％
式中：A——对照溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；B——对照空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；C——样品溶液吸光度；D——样品空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。
4、透明质酸酶体外抑制实验结果
对实施例1-8制备的中药组合物、5％的甘草酸二钾溶液为阳性对照以及对比例1-12制得的中药取物进行透明质酸酶抑制率测试，其中透明质酸酶抑制率具体测试结果如表2所示，实施例1制备的中药组合物对透明质酸酶活性的抑制率如图1所示。
表2
实施例1-8的测试结果表明，本发明所述具有抗敏修复功效的中药组合物对透明质酸酶具有良好的抑制作用，其对透明质酸酶抑制率均达到90％以上，在同质量浓度下对透明质酸酶抑制率也均高于甘草酸二钾，这说明本发明所述中药组合物有较强抗过敏功效。同时通过对比例1-12的测试结果可知，单一中药提取物或缺少其中任意一种组分的中药提取物，对于抑制透明质酸酶的能力均低于本发明所述的中药组合物，这进一步说明本发明所述中药组合物的六种中药组份配伍合理，具有协同增效作用，对透明质酸酶抑制明显，能够大大提升肌肤的抗过敏能力。
试验例2
红细胞溶血实验
红细胞溶血实验是兔眼刺激性实验(Draize test)替代方法之一，基本原理是通过测定血红蛋白溶出量及变性程度来评价化学品对眼组织细胞的损伤。国际上主要将RBC实验用于评价化妆品及原料等化学品的眼刺激性研究。
对实施例1-8制备的中药组合物和对比例1-12制备的中药提取物进行红细胞溶血实验，本实验依照欧洲替代方法验证中心(ECVAM)的RBC实验测试方法及分级标准。[ECVAM.ECVAM DB-ALM:INVITOX Protoco,Red blood cells test system.INVITOXNo.37.Ispra.Italy:ECVAM,1994.]，ECVAM化妆品产品RBC实验刺激性分级标准如表3所示：
表3
实施例1-8所制备的中药组合物以及对比例1-12制得的中药提取物的红细胞溶血实验结果如表4所示，其中HD50为50％红细胞发生溶血时的样品浓度，DI为蛋白质变性指数，L/D为HD50与DI的比值。
表4
由表4的红细胞溶血实验结果可知，本发明实施例1-8所制备的中药组合物刺激性分级为无刺激，说明本发明所述的中药组合物均具有温和无刺激的特点，且实施例1-8所制备的中药组合物的50％红细胞发生溶血时的样品浓度HD50范围在110900-130000mg/L之间，远远大于对比例1-12制得的中药提取物的HD50，同时蛋白质变性指数DI范围在0.20-0.32％之间，亦明显小于对比例1-12制得的中药提取物，说明本发明所述的六种中药组合配伍科学合理，协同增效后能够显著降低各中药的毒副作用和刺激性的目的。
实验例1制备的中药组合物在不同浓度下对红细胞中血红蛋白的溶血率曲线图如图2所示，从图2可以看出，实施例1制备中药组合物的浓度在10％以下呈不溶血。
应用实施例1
本应用实施例提供一种含有实施例1制备的中药组合物的面膜配方，由表5所示重量百分含量的组分制成(即表中数字代表重量百分含量，例如5代表5％)：
表5
本应用实施例面膜的制备方法：将香精与香精增溶剂混合均匀，制得增溶香精。将表5中其余物质溶解于80℃水中，搅拌冷却至45℃时加入增溶香精，冷却至室温，即可制得面膜液。将敷脸面膜专用无纺布用面膜液浸湿，即可制得敷脸用抗过敏、修复面膜。
应用实施例2
本应用实施例提供一种含有实施例1制备的中药组合物的乳液配方，由表6所示重量百分含量的组分制成(即表中数字代表重量百分含量，例如5代表5％)：
表6
本应用实施例乳液的制备方法：将A组分各成分在80℃溶解混合均匀，B组分各成分80℃溶解混合均匀，乳化前将C加入B组分，乳化时A组分加入B组分并均质5min，降温至50℃时加入D并均质2min，陈化24h后包装，即可。
应用实施例3
本应用实施例提供一种含有实施例1制备的中药组合物的护肤霜配方，由表7所示重量百分含量的组分制成(即表中数字代表重量百分含量，例如5代表5％)：
表7
本应用实施例护肤霜的制备方法：将A组分各成分在80℃溶解混合均匀，B组分各成分在80℃溶解混合均匀，环聚二甲基硅氧烷乳化前加入B组分，乳化时B组分加入A组分并均质5分钟，降温至50℃时加入C组分并均质2分钟，陈化24h后包装，即可。
应用对比例1-13
本应用对比例1-13的面膜，由表8所示重量百分含量的组分制成(即表中数字代表重量百分含量，例如5代表5％)，应用对比例1-13的制备方法与应用实施例1所述面膜的制备方法相同。
表8
应用对比例14-26
本应用对比例14-26的乳液，由表9所示重量百分含量的组分制成(即表中数字代表重量百分含量，例如5代表5％)，应用对比例14-26乳液的制备方法与应用实施例3所述乳液的制备方法相同。
表9
试验例3
皮肤刺激性的人体评价实验
将应用实施例1与应用对比例1-13进行人体使用评价。选取志愿者100名为例，男女各半，每晚贴脸一次，揭开面膜后半个小时，按照表10标准进行检查。共进行了10天实验，皮肤刺激性的人体评价实验测试结果如表11所示。
表10
表11
由表11的测试结果可知，没有添加本发明的中药组合物的应用对比例1的制备的面膜存在较强的过敏现象，而添加了本发明的中药组合物的应用实施例1制备的面膜没有出现过敏现象。说明本发明所述中药组合物添加入面膜产品具有温和无刺激及良好的抗过敏效果。此外，应用对比例2-7添加单一中药提取物的面膜或应用对比例8-13添加缺少任一种中药成分的面膜，都在不同程度上出现了过敏人群，这说明了本发明所述各中药成分配伍合理，具有协同增效作用，可以极大缓解化妆品中化学成分对肌肤带来的损伤，添加入化妆品后表现出良好的抗过敏性和修复损伤的功效。
试验例4
皮肤屏障修护功能和恢复弹性的功能评价
1、实验原理
水分经皮肤散失(TEWL)对评估皮肤水分保护层的功能是非常重要的参数，在国际上已经得到了广泛的认可。皮肤保护层越完好，水分的含量就会越高，皮肤水分流失TEWL的数值就越低。它可以表征测试样品的皮肤屏障修护功能，其值越小，水分散失越少，皮肤修护能力越强；反之，皮肤修护能力越弱。由特定实验人群组成受试群体，使用水分经皮肤散失测试仪Tewameter TM300和皮肤弹性测试仪Cutometer dual MPA 580。选用产品测试样品应用实施例2所制备的乳液与应用对比例14-26所制备的乳液。分别测试受试者在使用前后的水分经皮肤散失(TEWL)和皮肤弹性，从而验证其是否具有显著的保湿功效和改善皮肤的功能。
2、实验方法
测试前经专业人员培训过的健康受试者30名(男女各15名)，年龄在20～30岁，所有受试者均无皮肤或系统性疾患史，受试部位无异常，且受试期间不涂抹任何与实验无关的药物或者化妆品。测试场所室温(25±1)℃，相对湿度(40±5)％，测试前受试者应保持机体为稳定状态。使用35℃左右的清水擦拭受试者双臂后，于测试环境下静坐30min后开始测试，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。
在受试者手臂内侧距手掌基部5cm处，标记受测区域(4cm×4cm)，同一手臂可同时标记多个区域(间隔1cm)，测试样品均随机分布。受试者连续四周在实验部位涂抹上述测试样品为应用实施例2所制备的乳液与应用对比例14-26所制备的乳液。统计受试者实验部位每次测得的3个平均数值，分析其皮肤各项指标变化规律。
3、实验结果
水分经皮肤散失(TEWL)数据结果如表12所示：
表12
由表3数据可知，使用应用实施例2的添加本发明所述中药组合物的乳液四周后皮肤的水分散失仍在6％以下，而使用添加应用实施例15-19的添加单一中药提取物的乳液四周后皮肤的水分散失在9.2-11.5％之间，使用添加应用实施例20-26缺少任意一种中药组分的乳液四周后皮肤水分散失在7.2-9.0％之间，均高于应用实施例2的水分散失，这就说明本发明所述中药组合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，在抗过敏的基础上，还具有良好的皮肤修护屏障能力效果。
皮肤弹性测试结果如表13所示：
表13
由表3中的测试数据可知，使用应用实施例2的添加本发明所述中药组合物的乳液四周后皮肤弹性增加率在8％以上，而使用应用实施例15-19添加单一中药提取物的乳液四周后皮肤弹性增加率在5.1-5.4％之间，使用应用实施例20-26缺少任意一种中药组分的乳液四周后皮肤弹性增加率在5.1-6.7％之间，均低于应用实施例2的皮肤弹性增加率，这就说明本发明所述中药组合物各组分配伍合理，具有协同增效作用，在抗过敏的基础上，还具有良好的皮肤修护屏障能力效果。
涂抹应用实施例2和应用对比例14的乳液水分经皮肤散失(TEWL)数据结果如图3所示，4周内，涂抹应用实施例2含本发明所述的中药组合物的乳液样品，水分经皮肤散失(TEWL)先下降后略有回升，但是较初始值都有明显降低；而涂抹应用对比例14不含任何中药提取物的乳液样品水分经皮肤散失(TEWL)无明显降低。说明本发明所述中药组合物添加入化妆品后，具有良好的皮肤修护屏障能力效果，可以提升肌肤抵御能力，对皮肤起到保护作用。
涂抹应用实施例2和应用对比例14的乳液皮肤弹性测试数据如图4所示，4周内，涂抹应用对比例14不含任何中药提取物的乳液样品与涂抹应用实施例2含本发明所述的中药组合物的乳液样品，受试者皮肤弹性的均有增加，其变化趋势大致相同，均为曲折上升，在测试结束第四周时达到最高值，但是应用实施例2涂抹含本申请所述中药组合物的乳液样品受试者不同时间的皮肤弹性增加率远远高于应用对比例14，能明显增加皮肤弹性。说明本发明所述中药组合物添加入化妆品后，增强肌肤弹性的功能。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的具有抗敏修复功效的中药组合物，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种具有抗敏修复功效的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料包括积雪草、蛇床子、黄芩、山金车花、洋甘菊和甘草。
2.根据权利要求1所述具有抗敏修复功效的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草5-30％、蛇床子5-30％、黄芩5-30％、山金车花5-30％、洋甘菊5-30％和甘草5-30％；
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草20-30％、蛇床子15-20％、黄芩15-20％、山金车花10-20％、洋甘菊10-20％和甘草5-15％。
3.根据权利要求1或2所述具有抗敏修复功效的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草20％、蛇床子20％、黄芩20％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草10％；
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草30％、蛇床子20％、黄芩15％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草10％；
优选地，所述中药组合物的制备原料按重量百分比包括：积雪草25％、蛇床子15％、黄芩15％、山金车花15％、洋甘菊15％和甘草15％。
4.根据权利要求1-3中任一项所述具有抗敏修复功效的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行提取，得到提取液；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤，滤液浓缩，得到所述中药组合物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的混合粉末的目数为80-200目。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述混合粉末与溶剂的质量比为1:(2-20)；
优选地，步骤(2)所述溶剂包括水、丁二醇、丙二醇或乙醇中的任意一种或至少两种的混合物，优选为水和/或乙醇；
优选地，所述乙醇的体积比浓度为10-95％；
优选地，步骤(2)所述提取为高压均质提取；
优选地，所述高压均质提取的时间为5-30min；
优选地，所述高压均质提取的压强为10-30MPa。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述浓缩为经反渗透膜浓缩；
优选地，步骤(3)所述浓缩的压力为5-30bar。
8.根据权利要求4-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中步骤(3)后还包括步骤(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物进行洗脱和二次浓缩，得到二次浓缩液，再向二次浓缩液中加入溶剂溶解、过滤；
优选地，步骤(4)所述洗脱步骤具体为：将浓缩液上大孔树脂水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；
优选地，所述大孔树脂型号为D101或AB-8中任意的一种；
优选地，所述乙醇的体积比浓度为30-85％；
优选地，步骤(4)所述二次浓缩为减压浓缩；
优选地，步骤(4)所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述中药组合物各组分原料总质量的质量比为(0.1-1):1；
优选地，步骤(4)所述溶剂为丁二醇；
优选地，步骤(4)所述溶剂与二次浓缩液的质量比为1:(0.5-2)，优选为1:1；
优选地，所述中药组合物的制备方法具体包括以下步骤：
(1)药材预处理：将所述中药组合物各组分原料粉碎，过筛后混合均匀得到80-200目的混合粉末；
(2)提取：向步骤(1)得到的混合粉末中加入溶剂进行高压均质提取，得到提取液，所述混合粉末和溶剂的质量比为1:(2-20)，所述高压均质提取的时间为5-30min，所述高压均质提取的压强为10-30MPa；
(3)浓缩：将步骤(2)得到的提取液过滤收集滤液，滤液在5-30bar下经反渗透膜浓缩，得到所述中药组合物；
(4)纯化：将步骤(3)得到的中药组合物上大孔树脂水洗，再用30-85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，再进行二次浓缩，得到二次浓缩液，所述二次浓缩液的质量与步骤(1)所述的中药组合物各组分原料的总质量的质量比为(0.1-1):1；最后加入溶剂溶解，所述溶剂与二次浓缩液的质量比为1:(0.5-2)，过滤。
9.一种如权利要求1-3中任一项所述的具有抗敏修复功效的中药组合物在制备化妆品中的应用。
10.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括如权利要求1-3中任一项所述的具有抗敏修复功效的中药组合物；
优选地，所述具有抗敏修复功效的中药组合物的添加量为化妆品总重量的0.05-20％，优选为0.1-10％；
优选地，所述化妆品包括面膜、乳液、护肤霜、柔肤水、精华液、补水霜、化妆水或BB霜中的任意一种。
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