CN110302191A - 一种基于复视明胶囊的药物组合物及其在治疗糖尿病眼病中的应用 - Google Patents

一种基于复视明胶囊的药物组合物及其在治疗糖尿病眼病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种基于复视明胶囊的药物组合物及其在治疗糖尿病眼病中的应用，本发明通过前期对复视明胶囊指纹图谱的研究，确定8种有效成分，并对其进行优化获得一种药物组合物。按重量份计，所述药物组合物包含如下有效成分组成：2.0‑3.0份5‑HMF，8.0‑10.0份葛根素，5.0‑8.0份3’‑甲氧基葛根素，4.0‑6.0份大豆苷，0.3‑0.5份芒柄花苷，1.0‑1.5份大豆苷元，0.6‑1.0份橙黄决明素，1.4‑2.0份藁本内酯。本发明药物组合物在降低糖尿病大鼠视网膜变薄方面的作用与阳性药(羟苯磺酸钙)和复视明胶囊相当。

Description

一种基于复视明胶囊的药物组合物及其在治疗糖尿病眼病中 的应用
技术领域
本发明属于药学领域，具体涉及一种基于复视明胶囊的药物组合物及其在治疗糖尿病眼病中的应用。
背景技术
复视明胶囊的处方是第四军医大学西京医院院内制剂临床经验方，具有益气活血、滋阴补肾、通络明目的功效，主要用于气虚血瘀、肝肾不足、脉络阻滞所致糖尿病之眼底视网膜病变。由于复视明胶囊成分复杂，一般条件下各化学成分分离度低，目前对复视明胶囊活性成分的研究报道较少，近期申请人通过对复视明胶囊HPLC色谱条件的优化，确定了复视明胶囊的HPLC指纹图谱共有模式，标定了33个共有峰，相似度为0.994～1.000；并测定了复视明胶囊中5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯的含量。并对8种成分药物组合物的药理活性进行了初步评价。为了进一步优化药物组合物的组成，提高药效，本申请基于复视明胶囊，提供一种优化药物组合物。
发明内容
本发明提供一种药物组合物，其特征在于按重量份计，所述药物组合物包含如下有效成分组成：
2.0-3.0份5-HMF，8.0-10.0份葛根素，5.0-8.0份3’-甲氧基葛根素，4.0-6.0份大豆苷，0.3-0.5份芒柄花苷，1.0-1.5份大豆苷元，0.6-1.0份橙黄决明素，1.4-2.0份藁本内酯。
上述药物组合物，进一步优选包含如下有效成分组成：
2.24±0.20份5-HMF，9.68±0.23份葛根素，6.68±0.12份3’-甲氧基葛根素，5.47±0.08份大豆苷，0.37±0.05份芒柄花苷，1.20±0.11份大豆苷元，0.83±0.04份橙黄决明素，1.60±0.05份藁本内酯。
本发明提供一种药物组合物，其特征在于按重量份计，所述药物组合物由如下有效成分组成：
2.0-3.0份5-HMF，8.0-10.0份葛根素，5.0-8.0份3’-甲氧基葛根素，4.0-6.0份大豆苷，0.3-0.5份芒柄花苷，1.0-1.5份大豆苷元，0.6-1.0份橙黄决明素，1.4-2.0份藁本内酯。
本发明的另一实施方案提供上述药物组合物在预防和/或治疗糖尿病眼病(尤其是糖尿病视网膜病变)中的应用。尤其是在制备预防和/或治疗糖尿病眼病(尤其是糖尿病视网膜病变)药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述药物组合物，其特征在于该药物组合物还可包括适量的药学上可接受的药用辅料(例如药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，包括增溶剂、表面活性剂、成膜剂、抗氧剂、稳定剂、粘合剂、润滑剂等)。该药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂，优选片剂、胶囊、注射剂(含粉针剂)、滴丸剂、乳膏或喷雾剂，包括缓释片剂、缓释胶囊、缓释注射剂。
与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明提供了一种复视明胶囊优化药物组合物，该药物组合物明确了8种有效成分，并对8种有效成分的比例做了明确的限定，有助于对药物质量的控制及毒副作用的研究；(2)本发明提供的复视明胶囊优化药物组合物，与阳性药(羟苯磺酸钙)和复视明胶囊在降低糖尿病大鼠视网膜变薄方面的作用相当，本发明既优化了复视明胶囊的组分(明确组成)，又保持了其药效，取得了有益效果。
附图说明
图1是不同流动相得到的复视明胶囊的HPLC图；乙腈-水流动相体系(A)、甲醇-0.3％磷酸水流动相体系(B)和甲醇-水流动相体系(C)色谱图比较(检测波长270nm)。
图2是不同浓度甲醇溶液提取复视明胶囊内容物的HPLC图；70％甲醇(A)、80％甲醇(B)、90％甲醇(C)、100％甲醇(D)。
图3是10批复视明胶囊样品的HPLC指纹图谱(A)和混合对照品的HPLC图(B)；注：峰5：5-HMF；峰11：葛根素；峰12：3’-甲氧基葛根素；峰15：大豆苷；峰21：芒柄花苷；峰23：大豆苷元；峰29：橙黄决明素；峰30：藁本内酯。
图4是复视明胶囊HPLC指纹图谱的共有模式图；注：峰5：5-HMF；峰11：葛根素；峰12：3’-甲氧基葛根素；峰15：大豆苷；峰21：芒柄花苷；峰23：大豆苷元；峰29：橙黄决明素；峰30：藁本内酯。
图5是给药6周后视网膜厚度变化图；A：视网膜外核层厚度；B：视网膜内核层厚度；C：视网膜整体厚度；n＝8；与Control组比较，**P＜0.01；与DM组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
图6是给药6周后视网膜ALDH2和IL-1免疫组化染色结果图(n＝4)。
图7是给药6周后视网膜ALDH2免疫荧光染色结果图；免疫荧光染色典型图及各组结果比较；n＝4；与Control组比较，**P＜0.01；与DM组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1指纹图谱的建立
1.仪器、材料与试剂
1.1仪器与材料
1.2药品与试剂
复视明胶囊(西安乐健生物科技有限公司，批号：20180506、20180507、20180508、20180605、20180508、20180509、20180607、20180608、20180609、20180610，规格：400mg/粒)(S1～S10)；5-羟甲基糠醛对照品(批号：111626-201610，纯度：99.2％)、葛根素对照品(批号：110752-201615，纯度：95.4％)、大豆苷对照品(批号：111738-201603，纯度：93.3％)、橙黄决明素对照品(批号：111900-201605，纯度：98.3％)、藁本内酯对照品(批号：111737-201608，纯度：99.2％)均购自中国食品药品检定研究院。芒柄花苷对照品(批号：486-62-4，纯度：98.0％)、3’-甲氧基葛根素对照品(批号：117047-07-1，纯度：98.0％)和大豆苷元对照品(批号：486-66-8，纯度：98.0％)均购自宝鸡辰光生物科技有限公司。实验用甲醇为色谱纯，水为纯化水。
2.实验方法与结果
2.1混合对照品溶液的配制
取对照品5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯，用精密天秤取适量(表1)，并置于同一20mL量瓶中。用甲醇溶液定容至刻度线，摇匀，即得。
表1 8种成分混合对照品的配制
2.2色谱条件
2.2.1流动相的选择
为了选择最佳流动相体系，我们对乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.3％磷酸水三种流动相体系的色谱图进行了对比分析。如图1所示，乙腈-水作为流动相时(图1A)，色谱峰峰分离效果不佳，在检测波长270nm下基线不平稳；甲醇-水作为流动相时(图1C)，色谱峰分离度较好；而若向水相加入0.3％的磷酸，甲醇为有机相(图1B)，色谱峰分离效果稍欠佳。故，最终选择甲醇-水作为流动相体系建立复视明胶囊指纹图谱。
2.2.2色谱条件的建立
色谱柱为Phenomenex Luna C18(250mm×4.5mm,5μm)，柱温为35℃，进样量10μL，检测波长270nm；流动相A为甲醇溶液,流动相B为水；体积流量1.0mL/min；如表2所示，进行梯度程序洗脱。
表2梯度洗脱程序
2.3供试品溶液制备
2.3.1供试品溶液制备预实验
前期预实验证明甲醇溶液能够较好地对样品成分进行提取，为了选择最合适的甲醇浓度，并根据复视明的制备工艺，选择了4个甲醇浓度对复视明胶囊内容物进行处理，探讨最佳提取浓度。取同一批复视明胶囊内容物2g，精密称定，分别置于编号为1、2、3、4的四个具塞锥形瓶中(见表3)。1、2、3、4号锥形瓶中，分别精密加入20mL 70％甲醇、80％甲醇、90％甲醇溶液和100％甲醇。密塞，称定质量。超声处理40min后，放置冷却，再次称定质量并用甲醇补足失重，过滤，取续滤液，过0.22μm滤膜，供液相色谱测定。
我们采用70％、80％、90％和100％浓度甲醇对复视明胶囊内容物进行超声提取，并比较4者图谱(图2)。由图2可知，4种浓度提取指纹图谱分离度无明显差异，且100％甲醇提取基线最平稳，因此选择100％甲醇进行供试品的制备较为合理。
表3不同浓度甲醇制备供试品
2.3.2供试品溶液制备方法
分别取10批复视明胶囊内容物各约2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中。分别精密加入20mL甲醇溶液，密塞，称定质量。超声处理40min后，放置冷却，再次称定质量并用甲醇补足失重，过滤，取续滤液，过0.22μm滤膜，供液相色谱测定。
2.4线性关系考察
精密吸取按“2.1”项下方法制备的混合对照品储备液0.5、1、1.5、2、2.5、5mL，分别置10mL量瓶中，以甲醇溶液定容至刻度线，摇匀，即得系列质量浓度的混合对照品溶液。进样体积为10μL，采用高效液相色谱仪记录色谱图。以峰面积积分值(Y)和对应对质量浓度(X)进行线性回归，求得回归方程，见表4。
表4 8种成分的线性关系
2.5方法学考察
2.5.1精密度试验
取同一供试品溶液,按以上色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果显示，5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯的峰面积的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为0.7％、0.6％、0.9％、1.1％、1.3％、0.8％、1.6％、1.2％；选取11号葛根素色谱峰为参照峰，计算得到各主要色谱峰相对保留时间的RSD均小于0.4％，表明实验设备的精密度良好。
2.5.2稳定性实验
取同一份供试品溶液,按项下色谱条件,分别在1、2、4、7、10天时间点进样。结果显示，5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯的峰面积的RSD分别为1.4％、1.6％、1.2％、1.9％、1.7％、1.1％、1.2％、1.3％；选取11号葛根素色谱峰为参照峰，计算得到各主要色谱峰相对保留时间的RSD均小于1.1％,表明所制得样品中的成分在10天内的稳定性良好。
2.5.3重复性实验
称取同一样品6份,平行测定,记录峰面积和保留时间。结果显示5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯的峰面积的RSD分别为0.6％、1.2％、0.7％、0.6％、0.5％、0.7％、1.2％、0.9％；选取11号葛根素色谱峰为参照峰，计算得到各主要色谱峰的相对保留时间的RSD均小于0.7％,表明实验的重复性良好。
2.6复视明胶囊指纹图谱的研究
2.6.1指纹图谱的建立与共有峰指认
取10批次复视明胶囊(S1～S10)按“2.3.2”项下方法平行制备供试品溶液。进样量为10μL，柱温为35℃，检测波长为270nm，按“2.2”项下色谱条件对供试品溶液和混合对照品溶液进行测定，记录色谱图(图3A)。采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.0版本)”软件，将实验数据导入，对10批复视明胶囊样品的色谱图进行匹配，得到对照图谱(图3B)。在10批样品中，共确定33个色谱峰为复视明胶囊的指纹图谱共有峰，且共有峰的峰面积占总峰面积的90％以上(图4)。通过样品色谱图与对照品色谱图中各峰的保留时间进行对比，可对其中的8个共有峰进行指认，确定5号峰为5-HMF，11号峰为葛根素，12号峰为3’-甲氧基葛根素，15号峰为大豆苷，21号峰为芒柄花苷，23号峰为大豆苷元，29号峰为橙黄决明素，30号峰为藁本内酯(图3)。
2.6.2指纹图谱相似度分析
将所得到的10个批次复视明胶囊的指纹图谱导入药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.0版本)”软件，对10个批次样品的相似度进行分析，各样品之间的相似度均大于0.967，以S1样品图谱作为参照图谱(图3)，进行相似度计算，10批复视明胶囊相似度分别为分别为0.998、0.988、0.994、0.999、0.987、0.996、0.992、0.990、0.998、1.000，均大于0.98，相似度良好。因此，从整体化学谱峰信息表明，10个批次复视明胶囊样品的质量相对稳定。结果表明，不同批次的复视明胶囊特征成分各自相似度较高、化学组成一致性较好、质量比较稳定。
2.7加样回收率试验
取同一已知含量复视明胶囊样品(S3)2g，精密称定6份，分别置于具塞锥形瓶中，精密量取“2.1”项下混合对照品溶液1.5mL置于以上6份样品中，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，再按照“2.2”项下色谱条件进行测定，记录色谱图并计算加样回收率。结果5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯回收率分别为98.2％、101.1％、99.3％、101.3％、100.5％、98.8％、97.7％、102.36％，RSD分别为0.7％、1.3％、0.9％、1.4％、1.4％、1.0％、1.1％、0.9％。
2.8样品含量测定
取10批样品，分别按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，每批3份，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品中5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素、藁本内酯的含量，结果见表5。
表5复视明胶囊中8种成分测定结果(n＝3，mg/g)
实施例2 8种成分药物组合物的药效学研究
1.仪器、材料与试剂
1.1仪器与材料
1.2药品与试剂
复视明胶囊药粉，由空军军医大学药物研究所提供，批号20170301。羟苯磺酸钙胶囊为市购产品，批号：20161104，贵州天安药业股份有限公司生产，批准文号：国药准字H20010481。5-羟甲基糠醛对照品(批号：111626-201610，纯度：99.2％)、葛根素对照品(批号：110752-201615，纯度：95.4％)、大豆苷对照品(批号：111738-201603，纯度：93.3％)、橙黄决明素对照品(批号：111900-201605，纯度：98.3％)、藁本内酯对照品(批号：111737-201608，纯度：99.2％)均购自中国食品药品检定研究院。芒柄花苷对照品(批号：486-62-4，纯度：98.0％)、3’-甲氧基葛根素对照品(批号：117047-07-1，纯度：98.0％)和大豆苷元对照品(批号：486-66-8，纯度：98.0％)均购自宝鸡辰光生物科技有限公司。实验用甲醇为色谱纯，水为纯化水。链脲佐菌素(STZ)和戊巴比妥钠购自美国Sigma公司。ALDH2抗体和IL-1抗体分别从美国Abcam公司和武汉赛维尔生物科技有限公司购入。
1.3实验动物
健康的SD(Suprague Daeley，SD)大鼠，SPF级，雄性，体质量200.0±20.0g，7～8周龄左右，购自空军军医大学实验动物中心，许可证号：scxk(军)字No.2014270138S号。本实验中，动物的饲养及处理等各项操作均遵循空军军医大学动物伦理委员会的相关条款，并符合视觉与眼科研究协会(The Association for Research in Vision andOphthalmology，ARVO)相关规定。
2方法
2.1实验用试剂的配制
1)麻醉剂：1％戊巴比妥钠粉末用蒸馏水配制成溶液，4℃保存待用，2周更换一次。
2)柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液：取4.2g柠檬酸，5.88g柠檬酸钠，分别溶于200mL双蒸水中，二者以1:1或1:1.32混合，调PH，用PH酸性试纸测得PH值在4.2-4.5范围中，即得。
3)10mg/mL STZ溶液：取1g STZ粉末溶解于100mL上述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，现配现用，冰浴，避光。
4)药物组合物试药A：精密称取5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素和藁本内酯，用生理盐水配制成质量浓度各为0.448mg/mL、1.936mg/mL、1.336mg/mL、1.094mg/mL、0.074mg/mL、0.240mg/mL、0.166mg/mL和0.320mg/mL的混合混悬液，混匀，现配现用；相当于按重量份计处方：2.24份5-HMF，9.68份葛根素，6.68份3’-甲氧基葛根素，5.47份大豆苷，0.37份芒柄花苷，1.20份大豆苷元，0.83份橙黄决明素，1.60份藁本内酯。
药物组合物试药B：精密称取5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素和藁本内酯，用生理盐水配制成质量浓度各为0.400mg/mL、1.600mg/mL、1.000mg/mL、0.800mg/mL、0.060mg/mL、0.200mg/mL、0.120mg/mL和0.280mg/mL的混合混悬液，混匀，现配现用；相当于按重量份计处方：2.0份5-HMF，8.0份葛根素，5.0份3’-甲氧基葛根素，4.0份大豆苷，0.3份芒柄花苷，1.0份大豆苷元，0.6份橙黄决明素，1.4份藁本内酯。
药物组合物试药C：精密称取5-HMF、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷芒柄花苷、大豆苷元、橙黄决明素和藁本内酯，用生理盐水配制成质量浓度各为0.600mg/mL、2.000mg/mL、1.600mg/mL、1.200mg/mL、0.100mg/mL、0.300mg/mL、0.200mg/mL和0.400mg/mL的混合混悬液，混匀，现配现用；相当于按重量份计处方：3.0份5-HMF，10.0份葛根素，8.0份3’-甲氧基葛根素，6.0份大豆苷，0.5份芒柄花苷，1.5份大豆苷元，1.0份橙黄决明素，2.0份藁本内酯。
5)复视明试药：精密称取复视明胶囊内容物，用生理盐水配制成质量浓度为0.2g/mL的混悬液，混匀，现配现用。
6)羟苯磺酸钙试药：精密称取羟苯磺酸钙胶囊内容物，用生理盐水配制成质量浓度为0.08g/mL的混悬液，混匀，现配现用。
2.2糖尿病视网膜病大鼠模型制备及分组
2.2.1造模方法
SD雄性大鼠适应性饲养5天后，进行糖尿病模型的制备。大鼠禁食12小时(自由饮水)后，按照55mg/kg体重，单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(Sigma，美国)，诱导糖尿病大鼠模型。注射STZ 72小时后，采用ACCU-CHEK Performa血糖仪(Roche,Germany)测定大鼠血糖水平，将血糖水平高于16.7mmol/L的大鼠视为糖尿病造模成功。造模成功率为80％(48/60)。未达到血糖标准大鼠腹腔注射过量戊巴比妥钠处死排除实验。
2.2.2分组及给药
糖尿病模型建立8周后，将48只糖尿病大鼠，随机分为6组，即模型组(n＝8，DM)、阳性组(n＝8，CaD)、复视明组(n＝8，FSM)、药物组合物A组(n＝8，Compositions A)、药物组合物B组(n＝8，Compositions B)、药物组合物C组(n＝8，Compositions C)。其中，阳性药物为羟苯磺酸钙胶囊(CaD)。另外选取年龄匹配的8只正常大鼠，作为空白对照组(Control)。复视明胶囊剂量由临床剂量换算[计算方法：临床剂量×6.25(换算系数)/60kg(成人体重)＝用药剂量]，预实验结果验证，并参考急性毒性实验无法测得半数致死量的实验结果，综合而得。羟苯磺酸钙胶囊剂量是根据临床用药剂量换算而得。给药方式为灌胃给药，每日一次，持续给药6周。在整个实验过程中，对大鼠进行体重和血糖的监测。具体分组及药物干预情况如下：
1)空白对照组(Control)：生理盐水，2.5mL/kg。
2)模型组(DM)：生理盐水，2.5mL/kg。
3)羟苯磺酸钙阳性组(DM+CaD)：羟苯磺酸钙胶囊，0.2g/kg。
4)复视明组(DM+FSM)：复视明胶囊，0.5g/kg。
5)药物组合物A(或B或C)组(DM+Compositions A or B or C)：药物组合物试药A(或B或C)，2.5mL/kg。
2.3视网膜光学相干断层扫描(optical coherence tomography，OCT)检测
方法：采用OCT图像观察药物干预6周后(糖尿病总病程14周)糖尿病大鼠模型视网膜的结构变化。大鼠麻醉后，使用0.5％托吡卡胺滴眼液散瞳，并使用羟基乙基纤维素凝胶滴眼。将大鼠置于小动物支撑台上，通过灵活调节支撑台的位置和角度，并配合OCT设备试验台的位置和角度，进行成像对焦。使用小动物眼底成像系统(OPTO-RIS，OptoProbe，加拿大)，和4D-ISOCT眼科超显微成像系统(ISOCT，OptoProbe，加拿大)，选取视盘位于中心的位置，进行大鼠眼底照相和视网膜OCT成像。之后，按照1mL/100g体重，大鼠腹腔注射10％荧光素钠，将大鼠置于小动物支撑台上，调节角度，运用小动物眼底成像系统(Optoprobe，加拿大)进行视网膜对焦和成像，观察视网膜血管，取视盘于中央的图像进行保存。
结果：经过6周的药物干预(糖尿病总病程14周)，对各组大鼠眼球组织切片行HE病理染色。如图5所示，与Control组相比，糖尿病大鼠视网膜总体厚度、外核层厚度和内核层厚度变薄(P<0.05)。与DM组比较，DM+CaD组、DM+FSM组和DM+Compositions A组显著减少视网膜厚度的变薄(P<0.05)。同时，各治疗组间无显著性差异。DM+Compositions B、C组减少视网膜厚度变薄的效果与DM+Compositions A组一致。
2.4视网膜中抗氧化与抗炎指标检测
于药物干预6周后(糖尿病总病程14周)，随机取4只大鼠，过量戊巴比妥钠麻醉，取眼球，分离出视网膜组织。按照试剂盒的说明书，进行眼球组织切片IL-1免疫组化染色。二甲苯脱蜡后，柠檬酸-柠檬酸钠抗原热修复5min(微波炉高火10min)，3％H2O2灭火内源性过氧化氢酶10min，5％BSA室温封闭2h，1:200小鼠单克隆抗体IL-1于4℃冰箱过夜，PBS洗涤3×5min，1:500山羊抗小鼠二抗室温孵育2h，DAB显色5min，苏木精复染细胞核15min，充分冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯通透，中性树脂封片，之后于光学显微镜下观察黄褐色沉积。
按照试剂盒的说明书，于老年糖尿病大鼠模型建立的第1d、7d和30d时(n＝4)，进行眼球组织切片免疫荧光染色。70℃下烤20min后，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，PBS溶液(PBS:0.1mM，pH＝7.2)3×5min清洗；将切片置于柠檬酸-柠檬酸钠抗原修复液中，放入微波炉中加热，进行抗原修复，冷却至室温，PBS溶液3×5min清洗；1％胎牛血清(BSA)封闭1h，以阻断非特异性标记后，ALDH2一抗(1:100；#Ab108306,Abcam,Cambridge,MA)4℃冰箱中孵育过夜，未进行一抗孵育的切片作为空白对照；取出切片，PBS溶液3×5min清洗，荧光二抗(1:1000)室温孵育1h，PBS溶液3×5min清洗；100ng/mL DAPI室温孵育10min着染细胞核，PBS溶液3×5min清洗，50％甘油封片。运用荧光显微镜(BX53,Olympus,Japan)进行拍照，400倍下进行视网膜内阳性细胞计数。
IL-1和ALDH2的表达
药物干预6周后(糖尿病总病程14周)，采用免疫组化染色法和免疫荧光染色法分别来观察视网膜中IL-1和ALDH2的表达水平。如图6-7所示，IL-1在视网膜多层中均有表达，而ALDH2主要表达于视网膜新陈代谢活跃的外核层(ONL)、内核层(INL)以及神经节细胞层等位置。与Control组相比，DM组大鼠视网膜中IL-1的表达水平升高，而ALDH2的表达水平下降(P<0.05)。与DM组比较，DM+CaD组、DM+FSM组和DM+Compositions B组明显增加了ALDH2的表达水平(P<0.05)，同时抑制了IL-1表达水平的升高。DM+Compositions A、C组实验结果与DM+Compositions B组一致，基本与阳性药效果相当。
本发明涉及的统计分析方法，实验数据均使用SPSS 19.0版软件(IBM,Chicago,IL,USA)进行统计分析。测得数据呈正态分布，表示为平均值±标准差。两组数据统计采用独立样本t检验，多组数据统计采用单因素方差分析(ANOVA)，组间比较采用LSD-t检验(方差齐性时)或Dunnett’s T3检测(方差不齐时)。P<0.05，则认为差异具有统计学意义。统计图表由Graphpad Prism 7(GraphPadSoftware,US)软件制作。

Claims (7)

1.一种药物组合物，其特征在于按重量份计，所述药物组合物包含如下有效成分组成：
2.0-3.0份5-HMF，8.0-10.0份葛根素，5.0-8.0份3’-甲氧基葛根素，4.0-6.0份大豆苷，0.3-0.5份芒柄花苷，1.0-1.5份大豆苷元，0.6-1.0份橙黄决明素，1.4-2.0份藁本内酯。
2.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于包含如下有效成分组成：
2.24±0.20份5-HMF，9.68±0.23份葛根素，6.68±0.12份3’-甲氧基葛根素，5.47±0.08份大豆苷，0.37±0.05份芒柄花苷，1.20±0.11份大豆苷元，0.83±0.04份橙黄决明素，1.60±0.05份藁本内酯。
3.权利要求1-2任一项所述的药物组合物在预防和/或治疗糖尿病眼病中的应用。
4.权利要求3所述的应用，其特征在于所述糖尿病眼病选自糖尿病视网膜病变。
5.权利要求1-2任一项所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还可包括适量的药学上可接受的药用辅料(例如药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，包括增溶剂、表面活性剂、成膜剂、抗氧剂、稳定剂、粘合剂、润滑剂等)。
6.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
7.权利要求6所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的剂型优选片剂、胶囊、注射剂(含粉针剂)、滴丸剂、乳膏或喷雾剂，包括缓释片剂、缓释胶囊、缓释注射剂。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110196299A (zh) * 2019-07-09 2019-09-03 西安乐健生物科技有限公司 复视明胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003035086A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Thomas Brian Champman Formulation
CN101032550A (zh) * 2006-06-16 2007-09-12 成都中医药大学 治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其制备方法和用途
EP1897450A1 (de) * 2006-09-07 2008-03-12 Dr. Gerhard Mann Chem.-pharm. Fabrik GmbH Alpha-Liponsäure enthaltende Zusammensetzung
CN102008627A (zh) * 2010-12-14 2011-04-13 曹素兰 治疗糖尿病性视网膜病变的中药制剂
CN103919935A (zh) * 2014-03-21 2014-07-16 西安乐健生物科技有限公司 一种复方明目中药制剂及制备方法
CN106932509A (zh) * 2017-01-10 2017-07-07 广州中医药大学第附属医院 芪葛颗粒指纹图谱及其构建方法
CN110196299B (zh) * 2019-07-09 2022-07-19 西安乐健生物科技有限公司 复视明胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003035086A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Thomas Brian Champman Formulation
CN101032550A (zh) * 2006-06-16 2007-09-12 成都中医药大学 治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其制备方法和用途
EP1897450A1 (de) * 2006-09-07 2008-03-12 Dr. Gerhard Mann Chem.-pharm. Fabrik GmbH Alpha-Liponsäure enthaltende Zusammensetzung
CN102008627A (zh) * 2010-12-14 2011-04-13 曹素兰 治疗糖尿病性视网膜病变的中药制剂
CN103919935A (zh) * 2014-03-21 2014-07-16 西安乐健生物科技有限公司 一种复方明目中药制剂及制备方法
CN106932509A (zh) * 2017-01-10 2017-07-07 广州中医药大学第附属医院 芪葛颗粒指纹图谱及其构建方法
CN110196299B (zh) * 2019-07-09 2022-07-19 西安乐健生物科技有限公司 复视明胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
冯彬彬: "《中药药理与应用》", 30 November 2015, 中国中医药出版社 *
段金廒，陈士林: "《中药资源化学》", 30 September 2013, 中国中医药出版社 *
肖会敏等: "复视明胶囊的质量标准研究", 《中国药房》 *
赵余庆，吴春福: "《食疗与保健食品原料功能因子手册》", 31 March 2013, 中国医药科技出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110196299A (zh) * 2019-07-09 2019-09-03 西安乐健生物科技有限公司 复视明胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用

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