CN110290806A - 用于诱导免疫应答的新型方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及诱导免疫应答的方法，尤其是用于辅助针对抗原的免疫应答的方法，其包括分开施用皂苷和TLR4激动剂。

Description

用于诱导免疫应答的新型方法
技术领域
本发明涉及诱导免疫应答的方法，尤其是用于辅助针对抗原的免疫应答的方法，其包括分开施用皂苷和TLR4激动剂。
发明背景
在疫苗中包括佐剂以改善体液和细胞免疫应答，特别是在低免疫原性亚单位疫苗的情况下。与病原体的自然感染类似，佐剂依赖于先天性免疫系统的活化以促进持久的适应性免疫。由于多种先天性免疫途径的同时活化是自然感染的特征，佐剂可以组合多种免疫刺激剂以促进对疫苗接种的适应性免疫应答。
佐剂系统01 (AS01)是基于脂质体的佐剂，其含有两种免疫刺激剂，3-O-脱酰基-4'-单磷酰脂质A(3D-MPL)和QS-21 (Garcon和Van Mechelen, 2011)。TLR4激动剂3D-MPL是来自明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)的脂多糖的无毒衍生物。QS-21是从南美树皂树(Quillaja saponaria) Molina的树皮提取的天然皂苷分子(Kensil等人，1991；Ragupathi等人，2011)。在最近开发的疟疾疫苗RTS,S (Mosquirix®)和带状疱疹HZ/su疫苗(Shingrix®)中，以及针对病原体诸如带状疱疹(HZ/su)、人免疫缺陷病毒和结核分枝杆菌开发的多种候选疫苗中包括AS01。在这些候选疫苗的临床前和临床评估期间，始终观察到抗原特异性抗体和CD4+ T细胞免疫。AS01一致地产生针对疫苗接种的细胞免疫应答的能力使其与通常主要促进对疫苗接种的体液应答的其他佐剂分开(Black等人, 2015;Garcon和Van Mechelen, 2011)。同时，AS01佐剂化的疫苗在攻击群体诸如婴儿(用RTS,S)和老年人(用HZ/su)中有效地促进疫苗接种的免疫原性和效力。
AS01注射导致动物模型中先天性免疫的快速和瞬时活化。免疫后，嗜中性粒细胞和单核细胞被迅速募集至引流淋巴结(dLN)。此外，AS01诱导MHCII高树突细胞(DC)的募集和活化，这是T细胞活化所必需的(Didierlaurent A.M.等人, 2014)。一些数据也可用于AS01的组分的作用机制。3D-MPL经由TLR4信号传导，刺激NF-κB转录活性和细胞因子产生，并直接活化人和小鼠两者中的抗原呈递细胞(APC)(De Becker等人, 2000; Ismaili等人,2002; Martin等人, 2003; Mata-Haro等人, 2007)。QS-21促进小鼠中的高抗原特异性抗体应答和CD8+ T-细胞应答(Kensil和Kammer, 1998; Newman等人, 1992; Soltysik等人,1995)和人类中的抗原特异性抗体应答(Livingston等人, 1994)。由于其物理特性，认为QS-21可能在体内充当危险信号(Lambrecht等人, 2009; Li等人, 2008)。尽管已显示QS-21活化ASC-NLRP3炎性体和随后的IL-1β/IL-18释放(Marty-Roix, R.等人，2016)，但参与皂苷的佐剂作用的确切分子途径尚未清楚地定义。
已显示3D-MPL和QS21在诱导免疫应答中协同起作用(Coccia等人 2016)。此外，已显示提供两种免疫刺激剂的方式是影响诱导的应答的质量的重要因素，其中AS01中3D-MPL和QS21的脂质体呈递提供比基于AS02的水包油乳剂更高的功效。(Dendouga等人 2012)。
尽管自首次描述TLR4激动剂3D-MPL和皂苷QS21的组合(参见例如国际专利申请WO96/33739)以来过去超过二十年，但迄今为止，本领域技术人员仅通过TLR4激动剂和皂苷的共同配制实现了此类免疫刺激剂的组合的协同益处。
仍然需要新的免疫方法，其是目前方法的替代方案或相对于目前方法提供益处，是高度有效的，安全的，方便配制的，成本有效的，持久的并且诱导广谱的交叉反应性免疫应答。
发明概述
现在已令人惊讶地发现，不需要TLR4激动剂和皂苷的共制剂，TLR4激动剂和皂苷可以分开施用而基本上不损害用共制剂已看到的协同佐剂效果。
因此，提供了TLR4激动剂，其与皂苷一起用作佐剂，其中TLR4激动剂与皂苷分开施用。还提供了皂苷，其与TLR4激动剂一起用作佐剂，其中皂苷与TLR4激动剂分开施用。
本发明另外提供了TLR4激动剂在制备用于与皂苷一起使用的佐剂中的用途，其中TLR4激动剂与皂苷分开施用。进一步，提供了皂苷在制备用于与TLR4激动剂一起使用的佐剂中的用途，其中皂苷与TLR4激动剂分开施用。
还提供了使用TLR4激动剂和皂苷诱导受试者中的免疫应答的方法，其特征在于TLR4激动剂和皂苷分开施用于受试者。提供了使用TLR4激动剂和皂苷诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)向所述受试者施用所述TLR4激动剂；
(ii)向所述受试者施用所述皂苷；
其中步骤可以以任一顺序进行，并且所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用。
使用TLR4激动剂和皂苷辅助受试者的针对抗原的免疫应答的方法也形成本发明的一个方面，其特征在于TLR4激动剂和皂苷分开施用于受试者。提供了使用TLR4激动剂和皂苷辅助受试者的针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)向所述受试者施用所述TLR4激动剂；
(ii)向所述受试者施用所述皂苷；
(iii)向所述受试者施用所述抗原；
其中步骤可以以任何顺序进行，所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用，并且抗原可以任选地与TLR4激动剂、皂苷共同配制或与TLR4激动剂和皂苷中的每一种共同配制。
本发明还提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；和(ii)包含皂苷的第二组合物。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。
提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；(ii)包含皂苷的第二组合物；和(iii)指示分开施用TLR4激动剂和皂苷的说明书。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。
本发明还提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；(ii)包含皂苷的第二组合物；和(iii)包含抗原的第三组合物。
提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；(ii)包含皂苷的第二组合物；(iii)包含抗原的第三组合物；和(iv)指示分开施用TLR4激动剂和皂苷的说明书。
另外提供了多室注射器，其包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室含有包含TLR4激动剂的第一组合物，且所述第二隔室含有包含皂苷的第二组合物，所述第一和第二组合物可依次或同时(尽管分开)施用于受试者。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。或者，所述多室注射器可以包含第三隔室，其含有包含抗原的第三组合物。
还提供了试剂盒，其包含：(i)含有包含TLR4激动剂的组合物的第一注射器；和(ii)含有包含皂苷的组合物的第二注射器。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。
进一步提供了试剂盒，其包含：(i)含有包含TLR4激动剂的组合物的第一注射器；(ii)含有包含皂苷的组合物的第二注射器；和(iii)含有包含抗原的组合物的第三注射器。
为了完全获得本发明的益处，TLR4激动剂应当在基本上不含皂苷的组合物中施用。另外，皂苷应当在基本上不含TLR4激动剂的组合物中施用。
附图简述
图1：在小鼠中施用单独的gE抗原或施用gE抗原与分开或共同配制的3D-MPL和QS21后注射后6小时dLN中的IFNγ水平。
图2：在小鼠中施用gE抗原与分开或共同配制的3D-MPL和QS21后的IFNγ水平。
图3：在小鼠中分开施用gE抗原和分开或共同配制的3D-MPL和QS21后的CD4 T细胞应答。
图4：在小鼠中施用gE抗原和分开或共同配制的3D-MPL和QS21后的CD4 T细胞应答的比率。
图5：在小鼠中施用gE抗原和分开或共同配制的3D-MPL和QS21后的抗体应答。
图6：在小鼠中施用gE抗原和分开或共同配制的3D-MPL和QS21后的抗体应答的比率。
序列标识符的描述
SEQ ID No. 1：RTS多肽序列
SEQ ID No. 2：结核分枝杆菌H37Rv菌株Rv1196多肽序列
SEQ ID No. 3：结核分枝杆菌H37Rv菌株Rv0125多肽序列
SEQ ID No. 4：M72融合多肽序列
SEQ ID No. 5：M72-2his融合多肽序列
SEQ ID No. 6：水痘带状疱疹病毒截短的gE多肽序列
SEQ ID No. 7：构象约束的RSV PreF抗原多肽序列
SEQ ID No. 8：HIV TV1 gp120多肽序列
SEQ ID No. 9：HIV 1086.C gp120多肽序列。
详述
已令人惊讶地发现，不需要共同配制TLR4激动剂和皂苷。TLR4激动剂和皂苷可以分开施用而基本上不损害佐剂效果。因此，本发明能够实现基于TLR4和皂苷组分的分开制剂的替代施用方法，所述方法在诸如对于特定疫苗存在共同配制困难(例如制剂的稳定性或克服其他抗原/佐剂不相容性)的情况下是有利的。
因此，提供了TLR4激动剂，其与皂苷一起用作佐剂，其中TLR4激动剂与皂苷分开施用。还提供了皂苷，其与TLR4激动剂一起用作佐剂，其中皂苷与TLR4激动剂分开施用。
本发明另外提供了TLR4激动剂在制备用于与皂苷一起使用的佐剂中的用途，其中TLR4激动剂与皂苷分开施用。进一步，提供了皂苷在制备用于与TLR4激动剂一起使用的佐剂中的用途，其中皂苷与TLR4激动剂分开施用。
还提供了使用TLR4激动剂和皂苷诱导受试者中的免疫应答的方法，其特征在于将TLR4激动剂和皂苷分开施用于受试者。提供了使用TLR4激动剂和皂苷诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)向所述受试者施用所述TLR4激动剂；
(ii)向所述受试者施用所述皂苷；
其中步骤可以以任一顺序进行，所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用。
使用TLR4激动剂和皂苷辅助受试者的针对抗原的免疫应答的方法也形成本发明的一个方面，其特征在于将TLR4激动剂和皂苷分开施用于受试者。提供了使用TLR4激动剂和皂苷辅助受试者的针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)向所述受试者施用所述TLR4激动剂；
(ii)向所述受试者施用所述皂苷；
(iii)向所述受试者施用所述抗原；
其中步骤可以以任何顺序进行，所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用，并且抗原可以任选地与TLR4激动剂、皂苷共同配制或与TLR4激动剂和皂苷中的每一种共同配制。
本发明还提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；和(ii)包含皂苷的第二组合物。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。
提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；(ii)包含皂苷的第二组合物；和(iii)指示分开施用TLR4激动剂和皂苷的说明书。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。
本发明还提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；(ii)包含皂苷的第二组合物；和(iii)包含抗原的第三组合物。
提供了试剂盒，其包含：(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；(ii)包含皂苷的第二组合物；(iii)包含抗原的第三组合物；和(iv)指示分开施用TLR4激动剂和皂苷的说明书。
另外提供了多室注射器，其包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室含有包含TLR4激动剂的第一组合物，且所述第二隔室含有包含皂苷的第二组合物，所述第一和第二组合物可依次或同时(尽管分开)施用于受试者。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。或者，所述多室注射器可以包含第三隔室，其含有包含抗原的第三组合物。
还提供了试剂盒，其包含：(i)含有包含TLR4激动剂的组合物的第一注射器；和(ii)含有包含皂苷的组合物的第二注射器。抗原可以存在于第一或第二组合物中，或存在于第一和第二组合物两者中。
进一步提供了试剂盒，其包含：(i)含有包含TLR4激动剂的组合物的第一注射器；(ii)含有包含皂苷的组合物的第二注射器；和(iii)含有包含抗原的组合物的第三注射器。
定义
受试者
本发明的方法和用途通常意欲用于哺乳动物受试者，尤其是人受试者。所述受试者可以是野生或驯养动物。哺乳动物受试者包括例如猫、狗、猪、绵羊、马或牛。在本发明的一个实施方案中，所述受试者是人。
待使用本发明的方法治疗的受试者可以是任何年龄的。
在一个实施方案中，所述受试者是人类婴儿(最多达12个月龄)。在一个实施方案中，所述受试者是人类儿童(小于18岁)。在一个实施方案中，所述受试者是成人(年龄18-59岁)。在一个实施方案中，所述受试者是老年人(年龄60岁或更高)。
分开施用
术语‘分开施用’不包括TLR4激动剂和皂苷的共制剂，但包括同时施用和依次施用单独配制的TLR4激动剂和皂苷。
施用位置
期望地将TLR4激动剂和皂苷施用于具有足够空间接近性的位置，使得它们的协同佐剂效果基本上不受损。
TLR4激动剂和皂苷可以经由各种合适的途径施用，包括肠胃外施用，诸如肌肉内或皮下施用。TLR4激动剂和皂苷可以经由不同途径施用。合适地，TLR4激动剂和皂苷经由相同途径(尤其是肌肉内)施用。
当还提供抗原时，抗原、TLR4激动剂和皂苷可以经由不同途径施用。合适地，TLR4激动剂、皂苷和抗原经由相同途径(尤其是肌肉内)施用。
期望地将TLR4激动剂和皂苷施用于引流至同一淋巴结的位置，诸如同一肢，尤其是同一肌肉。
合适地，将TLR4激动剂和皂苷肌肉内施用于相同的肌肉。
在某些实施方案中，将TLR4激动剂和皂苷施用于相同位置。
如果还提供抗原，则合适地将TLR4激动剂、皂苷和抗原施用于引流至同一淋巴结的位置，诸如同一肢，尤其是同一肌肉，特别是同一位置。
当还提供抗原时，合适地将TLR4激动剂、皂苷和抗原肌肉内施用于相同的肌肉。
施用位置的空间分离可以是至少5 mm，诸如至少1 cm。施用位置的空间分离可以分开小于10 cm，诸如小于5 cm。
施用时机
期望地将TLR4激动剂和皂苷以足够时间接近性施用，使得它们的协同佐剂效果基本上不受损。TLR4激动剂和皂苷可以在彼此的6小时内施用。合适地，TLR4激动剂和皂苷在彼此的2小时内施用，尤其是在彼此的1小时内，诸如在30分钟内，且特别是在15分钟内(例如在5分钟内)施用。
如果延迟地施用TLR4激动剂和皂苷，可以首先施用TLR4激动剂，且然后施用皂苷，或者，合适地首先施用皂苷，且然后施用TLR4激动剂。
当还提供抗原时，合适地，TLR4激动剂、皂苷和抗原都在彼此的6小时内施用。合适地，TLR4激动剂、皂苷和抗原在彼此的2小时内施用，尤其是在1小时内，诸如在30分钟内，且特别是在15分钟内(例如在5分钟内)施用。
期望地，TLR4激动剂和皂苷在没有有意延迟的情况下施用(考虑到多次施用的实用性)。如果还提供抗原，则合适地，TLR4激动剂、皂苷和抗原在没有有意延迟的情况下施用(考虑到多次施用的实用性)。
施用TLR4激动剂和皂苷之间的延迟可以是至少5秒，诸如10秒，且尤其是至少30秒。
施用方案
用于建立强烈和持久免疫力的方法经常通常包括添加重复疫苗接种，即通过施用一个或多个进一步剂量的抗原来加强免疫应答。此类进一步施用可以用相同的疫苗(同源加强)或用不同的疫苗(异源加强)进行。
本发明可以作为同源或异源引发/加强方案的一部分应用，作为引发或加强疫苗接种。
施用结果
TLR4激动剂和皂苷可以分开施用而基本上不损害已用共制剂看到的协同佐剂效果。合适地，在本发明的方法之后观察到的免疫应答是用共制剂观察到的应答的至少50%，诸如至少60%，合适地至少70%，特别是至少80%，且尤其是至少90%。期望地，在本发明的方法之后观察到的免疫应答不劣于用共制剂观察到的应答。
在一个实施方案中，观察到的免疫应答是先天性IFNγ产生(诸如实施例1中所述)。在另一个实施方案中，观察到的免疫应答是抗体应答(诸如实施例2中所述)。在第三个实施方案中，观察到的免疫应答是CD4 T细胞应答(诸如实施例2中所述)。
TLR4激动剂
TLR4激动剂的合适实例是脂多糖，合适地脂质A的无毒衍生物，特别是单磷酰脂质A，且更特别是3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A (3D-MPL)。
3D-MPL由GlaxoSmithKline Biologicals N.A.以名称“MPL”销售，并且在整个文件中称为3D-MPL。参见，例如，美国专利号4,436,727；4,877,611；4,866,034和4,912,094。3D-MPL可以根据GB 2 220 211 A中描述的方法生产。化学上，其为3-脱酰基单磷酰脂质A与4、5或6个酰化链的混合物。在本发明的上下文中，小颗粒3D-MPL可用于制备水性佐剂组合物。小颗粒3D-MPL具有的粒径使得其可以无菌过滤通过0.22μm过滤器。此类制备物描述于WO94/21292中。合适地，粉末状3D-MPL用于制备用于本发明中的水性佐剂组合物。
可以使用的其他TLR4激动剂是烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)，诸如WO98/50399或美国专利号6,303,347中描述的那些(还描述了用于制备AGP的方法)。其他AGP如美国专利号6,764,840中所述。一些AGP是TLR4激动剂，且一些是TLR4拮抗剂。
可用于本发明中的其他TLR4激动剂包括吡喃葡糖基脂质佐剂(GLA)，诸如描述于WO2008/153541或WO2009/143457，或文献文章Coler RN等人 (2011) Development andCharacterization of Synthetic Glucopyranosyl Lipid Adjuvant System as aVaccine Adjuvant. PLoS ONE 6(1): e16333. doi:10.1371/journal.pone.0016333和Arias MA等人 (2012) Glucopyranosyl Lipid Adjuvant (GLA), a Synthetic TLR4Agonist, Promotes Potent Systemic and Mucosal Responses to IntranasalImmunization with HIVgp140. PLoS ONE 7(7): e41144. doi:10.1371/journal.pone.0041144。WO2008/153541或WO2009/143457通过引用并入本文，用于定义可用于本发明中的TLR4激动剂的目的。
TLR4激动剂，诸如脂多糖，诸如3D-MPL，可以以每个人剂量1至100μg的量使用。3D-MPL可以以约50 µg的水平使用。合适范围的实例是40-60μg，合适地45-55μg或49-51μg，诸如50μg。在一个进一步实施方案中，人剂量包含约25μg的水平的3D-MPL。较低范围的实例包括20-30μg，合适地22-28μg或24-26μg，诸如25μg。意欲用于儿童的人剂量与意欲用于成人的那些相比可能减少(例如减少50%)。
合适地，分离用于本发明中的TLR4激动剂。“分离的”天然存在的TLR4激动剂是从其原始环境移取的TLR4激动剂。例如，与天然系统中的共同存在的材料中的一些或全部分开(例如以至少50%、诸如至少80%、尤其是至少90%且特别是至少95%(诸如，至少99%)纯w/w的形式提供。
皂苷
用于本发明中的合适的皂苷是Quil A及其衍生物。Quil A是分离自南美树皂树(Quillaja saponaria)Molina的一种皂苷制备物，并且首次由Dalsgaard等人于1974描述为具有佐剂活性(“Saponin adjuvants”, Archiv. für die gesamte Virusforschung，vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p. 243-254)。Quil A的纯化级分已通过HPLC分离，其保留佐剂活性，而没有与Quil A相关的毒性(参见例如EP0362279)。一般感兴趣的级分包括QS7、QS17、QS18和QS21，例如QS7和QS21 (也称为QA7和QA21)。QS21是尤其感兴趣的皂苷。
在本发明的某些实施方案中，皂苷是皂树(Quillaja saponaria)Molina quil A的衍生物，合适地是Quil A的免疫活性级分，诸如QS7、QS17、QS18或QS21，尤其是QS21。
最佳地在反应原性较低的组合物中提供皂苷，其中其被外源甾醇、诸如胆固醇猝灭，并且在如本文所定义的脂质体制剂中提供。存在其中QS21被外源胆固醇猝灭的反应原性较低的组合物的几种特定形式。皂苷/甾醇在脂质体制剂结构中呈现。用于获得脂质体制剂中的皂苷/甾醇的方法描述于WO96/33739，尤其是实施例1中。
皂苷，诸如QS21，可以以每个人剂量1至100μg的量使用。QS21可以以约50 µg的水平使用。合适范围的实例是40-60μg，合适地45-55μg或49-51μg，诸如50μg。在一个进一步实施方案中，人剂量包含约25μg的水平的QS21。较低范围的实例包括20-30μg，合适地22-28μg或24-26μg，诸如25μg。意欲用于儿童的人剂量与意欲用于成人的那些相比可能减少(例如减少50%)。
TLR4激动剂与皂苷的重量比合适地为1:5至5:1，合适地1:1。例如，在3D-MPL以每剂量50μg或25μg的量使用的情况下，则合适地QS21也可以以每剂量(例如人剂量)50μg或25μg的量使用。
合适地，分离用于本发明中的皂苷。“分离的”天然存在的皂苷是从其原始环境移取的皂苷。例如，与天然系统中的共同存在的材料中的一些或全部分开(例如以至少50%、诸如至少80%、尤其是至少90%且特别是至少95%(诸如，至少99%)纯w/w的形式提供。
脂质体
皂苷和/或TLR4激动剂可以与任何合适的载体一起配制。皂苷和TLR4激动剂可以与不同的载体一起配制，或者一种可以与载体一起配制且另一种不与载体一起配制。
皂苷合适地与脂质体一起配制。任选地，TLR4激动剂和皂苷与脂质体一起配制。
脂质体大小可以从30nm至几μm变化，这取决于磷脂组成和用于其制备的方法。在本发明的具体实施方案中，脂质体大小将在50nm至500nm的范围内，且在进一步的实施方案中，在50nm至200nm的范围内。最佳地，脂质体应当是稳定的并且具有~100nm的直径以允许通过过滤进行除菌。
术语‘脂质体’是本领域中是众所周知的，并且定义一般类别的囊泡，其包含围绕水性空间的一个或多个脂质双层。因此，脂质体由一个或多个脂质和/或磷脂双层组成，并且可以在其结构中含有其他分子，诸如蛋白或碳水化合物。因为存在脂质相和水相两者，脂质体可以包封或捕获水溶性材料、脂溶性材料和/或两亲性化合物。
如本文所用，‘基于中性脂质体的佐剂’意味着佐剂包含用于呈递所包括的免疫增强剂的中性脂质体。
脂质体的结构完整性可以通过方法诸如测量脂质体的大小和多分散性的动态光散射(DLS)，或通过用于分析脂质体结构的电子显微镜来评价。在一个实施方案中，平均粒径(通过光子关联光谱法)在95和120nm之间，和/或，多分散性指数(通过光子关联光谱法)不大于0.2。在另一个实施方案中，平均粒径(通过光子关联光谱法)在95和120nm之间，和/或，多分散性指数(通过光子关联光谱法)不大于0.3。
意欲用于本发明的脂质体可以含有中性脂质或基本上由中性脂质组成。“中性脂质”被理解为脂质的总净电荷为(近似)零。脂质因此可以是总体非离子的，或者可以是两性离子的。在一个实施方案中，所述脂质体包含两性离子脂质。合适的脂质的实例是磷脂，诸如磷脂酰胆碱物质。在一个实施方案中，所述脂质体含有磷脂酰胆碱作为脂质体形成脂质，其在室温下合适地是非结晶的。此类非结晶磷脂酰胆碱脂质的实例包括蛋黄磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)或二月桂基磷脂酰胆碱(DLPC)。在一个具体实施方案中，本发明的脂质体含有DOPC，或基本上由DOPC组成。所述脂质体还可含有有限量的带电脂质，其增加由饱和脂质构成的脂质体的脂质体-皂苷结构的稳定性。在这些情况下，带电脂质的量合适地为脂质体组合物的1-20% w/w，优选5-10% w/w。此类带电脂质的合适实例包括磷脂酰甘油和磷脂酰丝氨酸。合适地，中性脂质体将含有小于5% w/w带电脂质，诸如小于3% w/w或小于1% w/w带电脂质。
意欲用于本发明的脂质体可以进一步包含甾醇。合适的甾醇包括β-谷甾醇、豆甾醇、麦角甾醇、麦角钙化醇和胆固醇。在一个具体实施方案中，所述脂质体制剂包含胆固醇作为甾醇。这些甾醇是本领域中众所周知的，例如在Merck Index，第11版，第341页中公开了胆固醇作为在动物脂肪中发现的天然存在的甾醇。甾醇与磷脂的比率为1-50% (mol/mol)，合适地20-25%。
皂苷：甾醇的比率通常为约1:100至1:1 (w/w)，合适地1:10至1:1 (w/w)，且优选地1:5至1:1 (w/w)。合适地，存在过量的甾醇，皂苷：甾醇的比率为至少1:2 (w/w)。在一个实施方案中，皂苷：甾醇的比率为1:5 (w/w)。在一个实施方案中，所述甾醇是胆固醇。
脂质体的量(脂质和甾醇的重量)通常在每人剂量组合物0.1 mg至10 mg，尤其是每人剂量组合物0.5 mg至2 mg的范围内。
在一个尤其合适的实施方案中，本发明中使用的脂质体包含DOPC和甾醇，尤其是胆固醇(诸如基本上由其组成)。因此，在一个具体实施方案中，本发明中使用的组合物包含脂质体形式的QS21，其中所述脂质体包含DOPC和甾醇，尤其是胆固醇。
如果TLR4激动剂与脂质体一起配制，则这些可以与和皂苷一起使用的脂质体相同或不同。因此，TLR4激动剂(诸如3D-MPL)可以与包含DOPC和甾醇、尤其是胆固醇的脂质体一起配制。
抗原
本发明的组合物、试剂盒和方法可以包括免疫原或抗原。在一些实施方案中，本发明的组合物、试剂盒和方法可以包括编码免疫原或抗原的多核苷酸。
术语免疫原意指能够激发免疫应答的多肽。合适地，所述免疫原是包含至少一个B或T细胞表位的抗原。激发的免疫应答可以是抗原特异性B细胞应答，其产生中和抗体。激发的免疫应答可以是抗原特异性T细胞应答，其可以是全身性应答和/或局部应答。抗原特异性T细胞应答可以包含CD4+ T细胞应答，诸如涉及表达多种细胞因子(例如IFNγ、TNFα和/或IL2)的CD4+ T细胞的应答。可替代地或额外地，所述抗原特异性T细胞应答包含CD8+ T细胞应答，诸如涉及表达多种细胞因子(例如IFNγ、TNFα和/或IL2)的CD8+ T细胞的应答。
所述抗原可以源自(诸如获得自)感染人和非人脊椎动物的人或非人病原体，包括例如细菌、真菌、寄生微生物或多细胞寄生虫，或癌细胞或肿瘤细胞。
在一个实施方案中，所述抗原是重组蛋白，诸如重组原核蛋白。
在一个实施方案中，所述抗原源自疟原虫属(诸如恶性疟原虫(Plasmodium falciparum))，分枝杆菌属(诸如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(TB))，水痘带状疱疹病毒(VZV)，人呼吸道合胞病毒，人免疫缺陷病毒(HIV)，莫拉氏菌属(诸如卡他莫拉氏菌(Moraxella catarrhalis))或不可分型的流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)(ntHi)。
所述抗原可以包含源自引起疟疾的寄生虫(诸如恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)或间日疟原虫(Plasmodium vivax))的制备物，或由其组成。
在一个实施方案中，所述抗原可以是恶性疟原虫环子孢子(CS)蛋白或其变体。CS蛋白的合适变体可以是这样的变体，其中CS蛋白的部分呈具有来自乙型肝炎的表面抗原S(HBsAg)的杂合蛋白的形式。CS变体抗原可以例如呈包含CS蛋白的基本上所有C-末端部分、CS蛋白免疫显性区的四个或更多个串联重复和HBsAg的杂合蛋白的形式。所述杂合蛋白可以包含含有至少160个氨基酸并且与CS蛋白的C-末端部分基本上同源、但缺乏疏水性锚定序列的序列。CS蛋白可缺乏来自C末端的最后12个氨基酸。进一步，其可含有4个或更多个，例如10个或更多个Asn-Ala-Asn-Pro四肽(NANP)重复基序。
用于本发明中的杂合蛋白可以是这样的蛋白，其包含经由线性接头连接至HBsAg的N-末端的同框融合的源自株系NF54的基本上对应于恶性疟原虫克隆3D7的氨基酸207-395的恶性疟原虫的CS蛋白的一部分。所述接头可以包含来自HBsAg的preS2的一部分。适合用于本发明中的CS构建体概述于WO93/10152，其在美国被授予为美国专利号5,928,902和6,169,171，其两者通过引用并入，用于描述用于本发明中的合适蛋白的目的。
用于本发明中的特定杂合蛋白是称为RTS的杂合蛋白(SEQ ID No. 1，也描述于WO2015/150568、WO93/10152(其中其表示为RTS*)和WO98/05355，其由以下组成：
- 甲硫氨酸残基
- 三个氨基酸残基，Met Ala Pro
- 一段189个氨基酸，其代表恶性疟原虫株系3D7的CS蛋白的氨基酸207至395
- 甘氨酸残基
- 四个氨基酸残基，Pro VaI Thr Asn，其代表乙型肝炎病毒(adw血清型)preS2蛋白的四个羧基末端残基，和
- 一段226个氨基酸，其由核苷酸1653至2330编码，并指定乙型肝炎病毒(adw血清型)的S蛋白。
RTS可以呈RTS,S混合颗粒的形式。RTS,S颗粒包含两种多肽RTS和S，其可以同时合成并自发形成复合微粒结构(RTS,S)。
所述抗原可以包含源自分枝杆菌属、诸如牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)或结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、尤其是结核分枝杆菌的制备物，或由其组成。
结核病领域中感兴趣的抗原包括Rv1196和Rv0125。Rv1196(例如在Dillon等人Infection and Immunity 1999 67(6):2941-2950中以名称Mtb39a描述)是高度保守的，其在H37Rv、C、Haarlem、CDC1551、94-M4241A、98-R604INH-RIF-EM、KZN605、KZN1435、KZN4207、KZNR506菌株间具有100%序列同一性，F11菌株具有单点突变Q30K(大多数其他临床分离物与H37Rv具有超过90%的同一性)。Rv0125(例如，在Skeiky等人 Infection and Immunity1999 67(8):3998-4007中通过名称Mtb32a描述)也是高度保守的，其在许多菌株间具有100%序列同一性。全长Rv0125包括被切割以提供成熟蛋白的N-末端信号序列。
在一个实施方案中，所述抗原源自Rv1196，诸如包含，诸如由以下组成：与SEQ IDNo:2具有至少70%同一性，诸如至少80%，尤其是至少90%，特别是至少95%，例如至少98%，诸如至少99%同一性的序列。典型的Rv1196相关抗原将包含(诸如由其组成)具有少量缺失、插入和/或取代的SEQ ID No:2的衍生物。实例是具有在0-5个位置的最多达5个残基的缺失，在0-5个位置的最多达5个残基的插入和最多达20个残基的取代的那些。Rv1196的其他衍生物是包含(诸如由其组成) SEQ ID No:2的片段的那些，所述片段长度为至少200个氨基酸，诸如长度为至少250个氨基酸，尤其是长度为至少300个氨基酸，特别是长度为至少350个氨基酸。
在一个实施方案中，所述抗原源自Rv0125，诸如包含(诸如由其组成)与SEQ IDNo:3具有至少70%同一性，诸如至少80%，尤其是至少90%，特别是至少95%，例如至少98%，诸如至少99%同一性的序列。典型的Rv0125相关抗原将包含(诸如由其组成)具有少量缺失、插入和/或取代的SEQ ID No:3的衍生物。实例是具有在0-5个位置的最多达5个残基的缺失，在0-5个位置的最多达5个残基的插入和最多达20个残基的取代的那些。Rv0125的其他衍生物是包含(诸如由其组成) SEQ ID No:3的片段的那些，所述片段长度为至少150个氨基酸，诸如长度为至少200个氨基酸，尤其是长度为至少250个氨基酸，特别是长度为至少300个氨基酸。Rv0125的具体衍生物是包含(诸如由其组成) SEQ ID No:3的片段(其对应于SEQ IDNo:3的残基1-195)的那些。Rv0125的另外的免疫原性衍生物是包含(诸如由其组成) SEQID No:3的片段(其对应于SEQ ID No:3的残基192-323)的那些。特别优选的Rv0125相关抗原是SEQ ID No:3的衍生物，其中催化三联体的至少一个(例如一个、两个或甚至全部三个)已被取代或缺失，使得蛋白酶活性已降低且更容易产生蛋白 - 催化性丝氨酸残基可被缺失或取代(例如被丙氨酸取代)和/或催化性组氨酸残基可被缺失或取代和/或取代的，催化性天冬氨酸残基可被缺失或取代。特别感兴趣的是SEQ ID No:3的衍生物，其中催化性丝氨酸残基已被取代(例如被丙氨酸取代)。还感兴趣的是Rv0125相关抗原，其包含(诸如由其组成)与SEQ ID No:3具有至少70%同一性，诸如至少80%，尤其是至少90%，特别是至少95%，例如至少98%，诸如至少99%同一性的序列，且其中催化三联体的至少一个已被取代或缺失，或者包含(诸如由其组成) SEQ ID No:3的片段的那些，所述片段长度为至少150个氨基酸，诸如长度为至少200个氨基酸，尤其是长度为至少250个氨基酸，特别是长度为至少300个氨基酸，且其中催化三联体的至少一个已被取代或缺失。Rv0125的另外的免疫原性衍生物是包含(诸如由其组成) SEQ ID No:3的片段(其对应于SEQ ID No:3的残基192-323)的那些，其中催化三联体的至少一个(例如一个、两个或甚至全部三个)已被取代或缺失。Rv0125的具体免疫原性衍生物是包含(诸如由其组成) SEQ ID No:3的片段(其对应于SEQ ID No:3的残基1-195)的那些，其中催化性丝氨酸残基(SEQ ID No:3的位置176)已被取代(例如被丙氨酸取代)。
合适地，所述抗原将包含这样的序列，诸如由其组成：所述序列与SEQ ID No. 4具有至少70%同一性，诸如至少80%，尤其是至少90%，特别是至少95%，诸如至少98%，例如至少99%同一性。典型的M72相关抗原将包含(诸如由其组成)具有小量缺失、插入和/或取代的SEQ ID No:4的衍生物。实例是具有在0-5个位置的最多达5个残基的缺失、在0-5个位置的最多达5个残基的插入和最多达20个残基的取代的那些。M72的其他衍生物是包含(诸如由其组成) SEQ ID No:4的片段的那些，所述片段长度为至少450个氨基酸，诸如长度为至少500个氨基酸，诸如长度为至少550个氨基酸，诸如长度为至少600个氨基酸，诸如长度为至少650个氨基酸或长度为至少700个氨基酸。由于M72是从两个单独抗原Rv0125和Rv1196衍生的融合蛋白，至少450个残基的任何片段将包含多个来自全长序列的表位(Skeiky等人J.Immunol. 2004 172:7618-7628; Skeiky Infect. Immun. 1999 67(8):3998-4007;Dillon Infect. Immun. 1999 67(6):2941-2950)。
M72相关抗原将包含(诸如由其组成)与SEQ ID No. 4具有至少70%同一性、诸如至少80%、尤其是至少90%、特别是至少95%、诸如至少98%、例如至少99%同一性的序列。
典型的M72相关抗原将包含(或由其组成)具有少量缺失、插入和/或取代的SEQ IDNo:4的衍生物。实例是具有在0-5个位置的最多达5个残基的缺失，在0-5个位置的最多达5个残基的插入和最多达20个残基的取代。
在具体实施方案中，M72相关抗原将包含SEQ ID No.4的残基2-723，例如包含(或由其组成)SEQ ID No.4或包含(或由其组成)SEQ ID No.5。
可根据本发明采用的一种另外的抗原是结核抗原Rv1753及其变体，诸如WO2010010180中所述，例如选自WO2010010180的Seq ID No:1和2-7、尤其是Seq ID No:1的Rv1753序列。结核病领域中另一种目标抗原是Rv2386及其变体，诸如WO2010010179中所述，例如选自WO2010010179的Seq ID No:1和2-7、尤其是Seq ID No:1的Rv2386序列。结核病领域中的其他目标抗原包括Rv3616及其变体，诸如WO2011092253中所述，例如选自WO2011092253的Seq ID No:1和2-7的天然Rv3616序列或修饰的Rv3616序列，诸如选自WO2011092253的Seq ID No:161-169、179和180、尤其是SEQ ID No:167的那些。额外的目标抗原是HBHA，诸如WO97044463、WO03044048和WO2010149657中所述。前述专利申请WO2010010180、WO2010010179、WO2011092253、WO97044463、WO03044048和WO2010149657通过引用以其整体并入本文，用于定义可用于本发明中的抗原的目的。
其他目标抗原是包含以下(或由以下组成)的那些：Rv1174，也称为DPV，诸如WO2010010177的SEQ ID No 8中所述；Rv1793，也称为MTI或Mtb9.9，诸如WO2010010177的SEQ ID No 10中所述；Rv2087，也称为MSL或Mtb9.8，诸如WO2010010177的SEQ ID No 9中所述；Rv3616，也称为HTCC1或Mtb40，诸如WO2010010177的SEQ ID No 1和2-7或WO2011092253的SEQ ID No 161-169、179或180中所述；和/或Rv3874，也称为CFP10或Tb38.1，诸如WO2010010177的SEQ ID No 9中所述；或免疫原性部分(诸如来自其的至少20、50、75或100个残基)或其变体(诸如与其具有至少70%、80%、90%或95%同一性)。(WO2010010177和WO2011092253通过引用以其整体并入本文，用于定义可用于本发明中的抗原的目的)。
结核抗原最适合以多肽的形式使用，但可以可替代地以编码所述多肽的多核苷酸的形式提供。
可根据本发明采用的一种另外的抗原源自水痘带状疱疹病毒(VZV)。用于本发明中的VZV抗原可以是任何合适的VZV抗原或其免疫原性衍生物，合适地是纯化的VZV抗原。
在一个实施方案中，所述VZV抗原是VZV糖蛋白gE(也称为gp1)或其免疫原性衍生物。野生型或全长gE蛋白由623个氨基酸组成，所述623个氨基酸包含信号肽、所述蛋白的主要部分、疏水锚定区域(残基546-558)和C-末端尾巴。在一个方面，使用gE C-末端截短体(也被称作截短的gE或gE截短体)，其中所述截短在羧基末端除去总氨基酸残基的4-20%。在一个进一步方面，所述截短的gE缺乏羧基末端锚定区域(合适地是野生型序列的近似氨基酸547-623)。在一个进一步方面，gE是具有SEQ ID NO. 6的序列的截短的gE。
在EP0405867和其中的参考文献中描述了gE抗原，其无锚衍生物(其也是免疫原性衍生物)及其生产[也参见Vafai A., Antibody binding sites on truncated forms ofvaricalla-zoster virus gpI(gE) glycoprotein, Vaccine 1994 12:1265-9]。EP192902也描述了gE及其生产。Haumont等人 Virus Research (1996) vol 40, p199 -204（通过引用完整地并入本文）也描述了截短的gE。在WO2006/094756中描述了适合用于根据本发明的用途的佐剂化的VZV gE组合物，即与佐剂组合的羧基末端截短的VZV gE，所述佐剂包含QS21、3D-MPL和脂质体（进一步含有胆固醇）。Leroux-Roels I.等人 (J. Infect. Dis.2012,206: 1280-1290)报道了评估佐剂化的VZV截短的gE亚单位疫苗的I/II期临床试验。
所述抗原可以包含源自人呼吸道合胞病毒(RSV)的制备物或由其组成。在某些有利的实施方案中，多肽抗原是来自RSV的F蛋白多肽抗原。在的背景下构象约束的F多肽抗原尤其适合作为多肽抗原组分。先前已描述了呈融合前(PreF)和融合后(PostF)构象的构象约束的F蛋白。此类构象约束的F蛋白通常包含工程改造的RSV F蛋白胞外域。F蛋白胞外域多肽是RSV F蛋白的一部分，其包括RSV F蛋白的细胞外结构域的全部或部分，并且缺乏功能性(例如，通过缺失或取代)跨膜结构域，其可以表达，例如，在细胞培养物中以可溶性(不附着于膜)的形式表达。
在融合前构象中构象约束的示例性F蛋白抗原在本领域已经描述并且详细公开于例如美国专利号8,563002 (WO2009079796)；美国公开专利申请号US2012/0093847(WO2010/149745)；US2011/0305727 (WO2011/008974)；US2014/0141037、WO2012/158613和WO2014/160463，其各自通过引用并入本文，用于举例说明融合前F多肽(和核酸)及其产生方法的目的。通常，所述抗原呈多肽的三聚体的形式。提供融合前构象中的F蛋白的实例的额外出版物包括：McLellan等人, Science, Vol. 340: 1113-1117; McLellan等人,Science, Vol 342: 592-598,和Rigter等人, PLOS One, Vol. 8: e71072，其各自也可以在本文公开的免疫原性组合的背景中使用。
例如，在融合前构象中稳定的F蛋白多肽通常包括F蛋白(例如，可溶性F蛋白多肽)的胞外域，其包含至少一个稳定F蛋白的融合前构象的修饰。例如，所述修饰可以选自三聚化结构域的添加(通常至C末端)，弗林蛋白酶切割位点中的一个或多个的缺失(在氨基酸~105-109和~133-136)，pep27结构域的缺失，疏水结构域(例如，HRA和/或HRB)中的亲水性氨基酸的取代或添加。在一个实施方案中，构象约束的PreF抗原包含RSV F蛋白多肽的F2结构域(例如氨基酸1-105)和F1结构域(例如氨基酸137-516)，其没有间插的弗林蛋白酶切割位点，其中所述多肽进一步包含位于F1结构域的C-末端的异源三聚化结构域。任选地，PreF抗原还包含改变糖基化(例如，增加糖基化)的修饰，诸如在对应于RSV F蛋白的氨基酸~500-502的位置处取代一个或多个氨基酸。当存在寡聚化序列时，其优选为三聚化序列。合适的寡聚化序列是本领域中众所周知的，并且包括，例如，酵母GCN4亮氨酸拉链蛋白的卷曲螺旋，来自噬菌体T4 fibritin(“折叠子”)的三聚化序列，和流感HA的三聚体结构域。另外或可替代地，在融合前构象中构象约束的F多肽可以包括至少两个引入的半胱氨酸残基，其彼此非常接近并形成稳定融合前RSV F多肽的二硫键。例如，两个半胱氨酸可以在彼此的约10Å之内。例如，半胱氨酸可以在位置165和296或在位置155和290处引入。示例性PreF抗原由SEQ ID NO:7代表。
所述抗原可以包含源自HIV的制备物或由其组成。所述抗原可以是HIV蛋白，诸如HIV包膜蛋白。例如，所述抗原可以是HIV包膜gp120多肽或其免疫原性片段。
一种合适的抗原是公开申请WO 2008/107370的SEQ ID NO:8的HIV进化枝B gp120多肽(或该多肽的免疫原性片段)。WO 2008/107370的SEQ ID NO:8通过引用并入本申请中。
合适的抗原还包括包含公开申请WO 2015/036061的SEQ ID NO:1的V1V2区域的多肽，或SEQ ID NO:1的V1V2区域的免疫原性衍生物或片段。此外，包含WO 2015/036061的SEQID NO:5的V1V2区域的多肽或SEQ ID NO:5的V1V2区域的免疫原性衍生物或片段可以用作合适的抗原。WO2015/036061的SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:5通过引用并入。
在另一个实施方案中，所述抗原可以包含两种或更多种不同的HIV包膜gp120多肽抗原(或这些多肽的免疫原性片段)。合适的抗原包括HIV进化枝C gp120多肽抗原，包括TV1gp120 (SEQ ID No:8)和1086.C gp120 (SEQ ID No:9)。
其他合适的HIV抗原包括Nef、Gag和Pol HIV蛋白及其免疫原性片段。
所述组合物可以包含不可分型的流感嗜血杆菌抗原，其例如选自：Fimbrin蛋白[(US 5766608 - Ohio State Research Foundation)]和包含来自其的肽的融合体[例如，LB1(f)肽融合体；US 5843464 (OSU)或WO 99/64067]; OMP26 [WO 97/01638 (Cortecs)];P6 [EP 281673 (State University of New York)]; TbpA和/或TbpB; Hia; Hsf;Hin47; Hif; Hmw1; Hmw2; Hmw3; Hmw4; Hap; D15 (WO 94/12641); 蛋白D (EP594610); P2; 和P5 (WO 94/26304); 蛋白E (WO07/084053)和/或PilA (WO05/063802)。所述组合物可以包含卡他莫拉氏菌蛋白抗原，其例如选自：OMP106 [WO 97/41731 (Antex)& WO 96/34960 (PMC)]; OMP21; LbpA和/或LbpB [WO 98/55606 (PMC)]; TbpA和/或TbpB[WO 97/13785 & WO 97/32980 (PMC)]; CopB [Helminen ME, 等人 (1993) Infect.Immun. 61:2003-2010]; UspA1和/或UspA2 [WO 93/03761 (University of Texas)];OmpCD; HasR (PCT/EP99/03824); PilQ (PCT/EP99/03823); OMP85 (PCT/EP00/01468);lipo06 (GB 9917977.2); lipo10 (GB 9918208.1); lipo11 (GB 9918302.2); lipo18(GB 9918038.2); P6 (PCT/EP99/03038); D15 (PCT/EP99/03822); OmplA1 (PCT/EP99/06781); Hly3 (PCT/EP99/03257); 和OmpE。
在一个实施方案中，所述组合物可以包含不可分型的流感嗜血杆菌(NTHi)蛋白抗原和/或卡他莫拉氏菌蛋白抗原。所述组合物可以包含来自流感嗜血杆菌的蛋白D (PD)。蛋白D可以如WO91/18926中所述。所述组合物可以进一步包含来自流感嗜血杆菌的蛋白E(PE)和/或Pilin A (PilA)。蛋白E和Pilin A可以如WO2012/139225中所述。蛋白E和PilinA可以作为融合蛋白呈现；例如，如WO2012/139225中所述的LVL735。例如，所述组合物可以包含三种NTHi抗原(PD、PE和PilA，其中最后两种组合为PEPilA融合蛋白)。所述组合物可以进一步包含来自卡他莫拉氏菌的UspA2。UspA2可以如WO2015125118中所述，例如WO2015125118中描述的MC-009 ((M)(UspA2 31-564)(HH))。例如，所述组合物可以包含三种NTHi抗原(PD、PE和PilA，其中最后两种组合为PEPilA融合蛋白)和一种卡他莫拉氏菌抗原(UspA2)。
可以提供多种抗原。例如，可以提供多种抗原以强化激发的免疫应答(例如以确保强烈的保护)，可以提供多种抗原以拓宽免疫应答(例如以确保针对一系列病原体菌株或在大部分受试者群体中的保护)或可以提供多种抗原以目前激发针对许多病症的免疫应答(由此简化施用方案)。在提供多种抗原的情况下，这些可以是不同的蛋白，或者可以呈一种或多种融合蛋白的形式。
抗原可以与TLR4激动剂和皂苷分开提供，或者抗原可以与TLR4激动剂、皂苷一起在共制剂中提供，或与TLR4激动剂一起在共制剂中提供，以及还与皂苷一起在共制剂中提供。在提供多种抗原的情况下，这些中的一些或全部可以与TLR4激动剂和皂苷分开提供，或者一些或全部可以与TLR4激动剂、皂苷一起在共制剂中提供，或与TLR4激动剂一起在共制剂中提供，以及还与皂苷一起在共制剂中提供。任选地，与和皂苷共同配制的一种或多种那些抗原不同的一种或多种抗原可以与TLR4激动剂共同配制。
抗原可以以每个人剂量0.1至100μg的量提供。
另外的赋形剂
TLR4激动剂、皂苷和(适当时)抗原合适地以基本上水性的液体制备物的形式提供。
合适地，本发明中使用的组合物具有0.05 ml至1 ml，诸如0.1至0.5 ml的人剂量体积，尤其是约0.5 ml或0.7 ml的剂量体积。所用组合物的体积可以取决于递送途径和位置，其中通过皮内途径给予较小剂量或TLR4激动剂和皂苷两者是否均在相同位置递送。
在一个进一步实施方案中，将缓冲剂添加至组合物中。鉴于组合物的组分和用于施用于受试者的必要适合性，调节液体制备物的pH。合适地，液体混合物的pH为至少4，至少5，至少5.5，至少5.8，至少6。液体混合物的pH可以为小于9，小于8，小于7.5或小于7。在其他实施方案中，液体混合物的pH为4至9，5至8，诸如5.5至8。
适当的缓冲液可以选自乙酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、马来酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐和TRIS。在一个实施方案中，所述缓冲剂是磷酸盐缓冲剂，诸如Na/Na2PO4、Na/K2PO4或K/K2PO4。
所述缓冲剂可以以至少6 mM、至少10 mM或至少40 mM的量存在于液体混合物中。所述缓冲剂可以以小于100 mM、小于60 mM或小于40 mM的量存在于液体混合物中。
众所周知的是，对于胃肠外施用，溶液应当具有药学上可接受的重量摩尔渗透压浓度，以避免细胞变形或裂解。药学上可接受的重量摩尔渗透压浓度将通常意味着溶液将具有近似等渗或轻度高渗的重量摩尔渗透压浓度。合适地，本发明的组合物当重构时将具有250至750 mOsm/kg范围内的重量摩尔渗透压浓度，例如，重量摩尔渗透压浓度可以在250至550 mOsm/kg的范围内，诸如280至500 mOsm/kg的范围内。
可以根据本领域中已知的技术，诸如通过使用商业上获得的渗压计，例如从Advanced Instruments Inc. (USA)可获得的Advanced® Model 2020测量重量摩尔渗透压浓度。
“等渗剂”是生理上可耐受的并赋予制剂合适涨度以防止跨越与制剂接触的细胞膜的水的净流动的化合物。在一些实施方案中，用于组合物中的等渗剂是盐(或盐的混合物)。然而，在其他实施方案中，所述组合物包含非离子等渗剂，并且组合物中的氯化钠的浓度小于100 mM，诸如小于80 mM，例如小于50 mM，诸如小于40 mM，小于30mM，且特别是小于20 mM。组合物中的离子强度可以小于100 mM，诸如小于80 mM，例如小于50 mM，诸如小于40mM或小于30 mM。
在一个具体实施方案中，所述非离子等渗剂是多元醇，诸如山梨糖醇。山梨糖醇的浓度可以是例如约3%至约15% (w/v)，诸如约4%至约10% (w/v)。包含免疫活性皂苷级分和TLR4激动剂的佐剂(其中等渗剂是盐或多元醇)已描述于WO2012/080369中。
本发明可以应用于治疗或预防与一种或多种上述抗原相关的疾病或病症。在一个实施方案中，所述疾病或病症选自疟疾、结核病、COPD、HIV和疱疹。
为了完全获得本发明的益处，TLR4激动剂应当在基本上不含皂苷的组合物中施用。合适地，包含TLR4激动剂的组合物将含有每个人剂量少于1μg的皂苷，尤其是少于0.5μg的皂苷，特别是少于0.1μg的皂苷(例如不含皂苷)。在某些实施方案中，3D-MPL在组合物中提供，所述组合物含有每个人剂量少于1μg的皂苷，尤其是少于1μg的皂苷，特别是少于0.1μg的皂苷(例如不含皂苷)。在某些实施方案中，3D-MPL在组合物中提供，所述组合物含有每个人剂量少于1μg的QS21，尤其是少于0.5μg的QS21，特别是少于0.1μg的QS21(例如不含QS21)。
另外，皂苷应当在基本上不含TLR4激动剂的组合物中施用。合适地，包含皂苷的组合物将含有每个人剂量少于1μg的TLR4激动剂，尤其是少于0.5μg的TLR4激动剂，特别是少于0.1μg的TLR4激动剂(例如不含TLR4激动剂)。在某些实施方案中，QS21在组合物中提供，所述组合物含有每个人剂量少于1 μg的TLR4激动剂，尤其是少于0.5 μg的TLR4激动剂，特别是少于0.1 μg的TLR4激动剂(例如不含TLR4激动剂)。在某些实施方案中，QS21在组合物中提供，所述组合物含有每个人剂量少于1μg的3D-MPL，尤其是少于0.5μg的3D-MPL，特别是少于0.1μg的3D-MPL(例如不含3D-MPL)。
合适地，用于本发明中的组合物不包含铝盐颗粒。
多室注射器
多室注射器的使用提供了用于分开施用TLR4激动剂和皂苷的便利方法。多室注射器可以配置成提供TLR4激动剂和皂苷的同时、但分开的递送，或者它们可以配置成提供依次递送(以任一顺序)。
在其他构型中，一种要素可以在一个室中以干燥形式(例如，冷冻干燥的)提供，并且在施用前进一步由包含在另一个室中的稀释剂重构。
多室注射器的实例可见于诸如WO2016172396的公开内容中，尽管一系列其他构型也是可能的。
本申请中所有参考文献(包括专利申请和授权专利)的教导通过引用完全并入本文。定义为“包含”某些要素的组合物或方法或过程应理解为涵盖(分别)由那些要素组成的组合物、方法或过程。如本文所用，‘基本上由......组成’意指可以存在额外的组分，条件是它们不改变总体特性或功能。
将通过参考以下非限制性实施例进一步描述本发明：
实施例1：分开的TLR4激动剂和皂苷制剂对小鼠中的先天性免疫应答的影响的研究
目标
脂质体佐剂系统AS01在注射后非常早地诱导特定的引流淋巴结特征。先天性IFNg (i-IFNg)是由先天性引流淋巴结细胞产生的IFNg，其在小鼠中在用AS01注射后约6小时达到峰值，并且当在脂质体中共同配制3D-MPL和QS21时由3D-MPL和QS21之间的协同作用产生。因此，在小鼠中注射后6小时检测到的IFNg可以是区分佐剂系统AS01完整性的关键参数。先天性特征被认为对AS01佐剂效应是关键的。在人血清中，先天性IFNg特征存在于用AS01B-佐剂化的疫苗免疫的患者中，并且其为保护的标志(MAL-027)。
该研究的目的是评价是否需要TLR4激动剂3D-MPL和皂苷QS21的共制剂以维持观察到的i-IFNg特征。为此，以用在脂质体中共同配制的3D-MPL和QS21或配制的分开的3D-MPL和QS21佐剂化的水痘带状疱疹病毒gE抗原肌肉内免疫小鼠。注射后6小时收集髂淋巴结，通过ELISA评估IFNg含量。
材料和方法
研究设计的概览
将小鼠圈养于无病原体的设施中，并且在GSK动物使用和护理委员会批准的方案下进行动物研究。
在该研究中使用的小鼠是C57BL/6品系的6-8周龄雌性，将它们分成3组。小鼠全部肌肉内注射于左右腓肠肌中。对于组1(“组合的”脂质体制剂)，每只小鼠(n=20)接受用1/125人剂量的AS01B配制的5μg重组gE (Haumont等人1996; Dendouga等人2012; Fochesato等人2016)，所述1/125人剂量的AS01B对应于40μl的总体积中的0.4μg 3D-MPL和0.4μgQS21(每侧肌肉的注射体积=20μl，其使用两个注射器施用，每次10μl)。在评估“分开的”脂质体制剂的组(组2)中，每只小鼠(n=20)在每侧肌肉(右和左)中接受1个注射器的含有3D-MPL (0.4 µg 3D-MPL)和gE (1.25 µg)的10μl和1个注射器的含有QS21 (0.4 µg)和gE(1.25 µg)的10μl。在组3(“抗原”制剂)中，每只小鼠(n=5)接受总体积为40µl/动物的单独的缓冲液中的gE抗原(5μg/动物)，使用4个注射器施用，每次10μl。
为了在同一部位用两个注射器注射，将小鼠在注射部位进行染色。每次注射之间的时机保持最小，通常小于30秒。
对于研究设计的概述，参见表1。
表1 - 研究设计的概述
免疫读出值
DLN收集和快速冷冻样品的样品处理
为了评价促炎性IFNg产生，在免疫后6小时收集左髂淋巴结和右髂淋巴结。
将从引流淋巴解剖的组织样品单独在含有抗蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich)的1 mL (0.5mL/dLN) PBS中均质化。将匀浆通过离心澄清并储存在-70℃直至分析。
ELISA小鼠IFN-g
设计Quantikine小鼠IFN-γ免疫测定(R&D systems MIF00)以测量小鼠血清和组织匀浆中的小鼠IFNg。使用天然小鼠IFNg获得的结果显示剂量-应答曲线，其平行于使用重组试剂盒标准品获得的标准曲线。仔细地遵循完整的测定程序，并且可以如下所述进行概述。
提供用捕获抗体预包被的微孔板。添加血清或组织匀浆样品(或标准品)。在室温下孵育2小时后，样品中存在的IFNg被固定的抗体结合。洗掉未结合的材料(5次洗涤，提供洗涤缓冲液)。添加第二HRP标记的抗体(检测抗体)并在室温下孵育2小时以结合捕获的IFNg。用另外5次洗涤洗掉未结合的检测抗体。然后将四甲基联苯胺(TMB)底物溶液添加至孔中并在室温下孵育30分钟(避光)。停止显色，并测量450 nm处的颜色吸光度(E-MaxReader)。使用softmax-pro软件计算结果。
对于统计分析，将包括组因素的方差模型的分析拟合在组1和组2的对数转换的IFNg量度上。从该模型推导最小二乘平均值和组差异。在反向转换后，报告具有95%置信区间的几何平均值以及几何平均值比率。
结果
数据图示表示在图1和2中。未佐剂化组的值都低于检测限值。对于每组估计的几何平均值概述于表2中。3D-MPL和QS21的共同配制和分开施用之间的比较概述于表3中。
表2-通过ANOVA模型估计的IFNg的几何平均值(具有95%置信区间)
表3-获得的IFNg应答之间的比较
结论
已经表明，在测试条件下，分开的制剂不劣于共制剂。
实施例2：分开的TLR4激动剂和皂苷制剂对小鼠中的适应性免疫应答的影响的研 究
目标
鉴于实施例1中的在施用分开配制的组分后观察到的先天性免疫应答不劣于共同配制的组分的阳性发现，延展工作以研究对适应性免疫应答的任何影响。为此，以一定范围的剂量用以共同配制的3D-MPL和QS21或以分开的3D-MPL和QS21佐剂化的水痘带状疱疹病毒gE抗原肌肉内免疫小鼠。然后定量激发的T细胞和抗体应答。
材料和方法
研究设计的概览
将小鼠圈养于无病原体的设施中，并且在GSK动物使用和护理委员会批准的方案下进行动物研究。
在该研究中使用的小鼠是C57BL/6品系的6-8周龄雌性，将它们分成11组，每组5只小鼠。在第0天和第14天，小鼠全部肌肉内注射于左右腓肠肌中。在第21天取血清和脾组织的样品，用于分别测量gE特异性体液和T细胞(Th1 CD4和CD8)应答。
表4 - 研究设计的概述
对于每组，每次施用20μl的总体积。这由以下组成：向左侧肌肉中注射2次分开的制剂(对于分开的3D-MPL和QS21)或相同的制剂(共同配制的和对照PBS)。为了在同一部位用两个注射器注射，将小鼠在注射部位进行染色。两次注射之间的时机保持最小，小于30秒。
免疫读出值
在PII第7天收集脾脏和处理样品用于细胞悬浮和细胞内细胞因子染色(ICS)
将脾脏收集在RPMI培养基中并使用陶瓷组织研磨机(均质化器)使用两次上下冲程进行解离。将均质化的样品转移至15 ml圆底聚丙烯管中。通过过滤通过100μm尼龙细胞过滤器来除去纤维材料。然后将细胞洗涤，计数并以每ml 10*7个细胞重悬浮。
ICS(细胞内细胞因子染色)是允许基于细胞因子产生定量抗原特异性T淋巴细胞的技术。
将淋巴细胞在体外在分泌抑制剂(布雷菲德菌素A)存在的情况下用gE肽再次刺激过夜。然后这些细胞通过使用荧光抗体(细胞外染色：CD4、CD8，细胞内染色：TNFα、IFNg和IL2)的常规免疫荧光程序进行处理。
结果表示为CD4和CD8 T-细胞群中细胞因子阳性细胞的频率。该分析聚焦于表达至少两种细胞因子的细胞。
PII第7天对血清的ELISA gE
通过ELISA测量抗-gE(VZV)总IgG。将96孔板在4℃下用抗原包被过夜。然后洗涤板并用饱和缓冲液在37℃下饱和1小时。之后，添加100μl稀释的小鼠血清或标准品或对照，并在37℃下孵育1小时。洗涤之后，将板在37℃下与100μl抗小鼠IgG-HRP一起孵育1小时。洗涤之后，每孔添加100μl TMB，并将板在室温下避光保持15分钟。为了停止反应，每孔添加100μl的H2SO4 0.4N。通过Elisa读板器在450/630 nm的波长下读取吸光度。使用Softmax-pro软件计算结果。
结果
1.T-细胞应答：gE特异性CD4+ T细胞应答
数据图示表示在图3和4中。每组的几何平均值概述于表5中。共制剂与分开制剂的比较概述于表6中。
表5-表达至少2种细胞因子的CD4+：几何平均值和它们的95% CI(按组)
方法 剂量 N 几何平均值 95% CI – 下限 95% CI – 上限
共同配制的 0.05 5 0.33 0.21 0.54
共同配制的 0.1 5 0.40 0.29 0.56
共同配制的 0.2 5 0.52 0.42 0.64
共同配制的 0.4 5 0.44 0.32 0.60
共同配制的 1 5 0.48 0.31 0.75
分开的 0.05 5 0.23 0.12 0.42
分开的 0.1 5 0.29 0.16 0.53
分开的 0.2 5 0.43 0.36 0.52
分开的 0.4 5 0.45 0.36 0.57
分开的 1 5 0.45 0.34 0.61
表6-表达至少2种细胞因子的CD4+：几何平均值比率和它们的95%Cs(按剂量的制 剂剂量的比较)
比较 几何平均值比率 95% CI – 下限 95% CI – 上限
以剂量0.05的分开的/共同配制的 0.68 0.35 1.31
以剂量0.1的分开的/共同配制的 0.72 0.40 1.31
以剂量0.2的分开的/共同配制的 0.83 0.66 1.05
以剂量0.4的分开的/共同配制的 1.03 0.74 1.42
以剂量1的分开的/共同配制的 0.94 0.60 1.48
在该实验中，gE特异性CD4+ T细胞频率随着免疫刺激剂的剂量而增加，直至剂量为0.2μg(每只动物1/250HD)，然后达到平台期。对于分开制剂和共制剂均观察到这种情况(参见表6)。此外，当观察分开的/共同配制的CD4+ T细胞频率的几何平均值比率时，两种配制方法在1、0.4和0.2 µg的剂量下诱导相当的应答。最低剂量(0.1和0.05 µg)看起来略有差异(参见表6)。
2.抗体应答：抗-gE IgG水平
数据图示表示在图5和6中。每组的几何平均值概述于表7中。共制剂与分开制剂的比较概述于表8中。
表7-抗体应答：几何平均值和它们的95% CI(按组)
方法 剂量 N 几何平均值 95% CI –下限 95% CI – 上限
共同配制的 0.05 5 5642.86 3223.63 9877.64
共同配制的 0.1 5 9824.45 4768.72 20240.18
共同配制的 0.2 5 8708.63 5712.27 13276.73
共同配制的 0.4 5 13041.60 10126.89 16795.23
共同配制的 1 5 17620.54 15231.37 20384.46
分开的 0.05 5 3514.16 2200.79 5611.32
分开的 0.1 5 5920.71 3603.14 9728.96
分开的 0.2 5 7436.33 5600.54 9873.86
分开的 0.4 5 13624.91 8850.08 20975.86
分开的 1 5 17129.23 11845.40 24770.00
表8-抗体应答：几何平均值比率和它们的95%Ci
(按剂量的制剂剂量的比较)
比较 几何平均值比率 95% CI – 下限 95% CI – 上限
以剂量0.05的分开的/共同配制的 0.62 0.34 1.15
以剂量0.1的分开的/共同配制的 0.60 0.29 1.27
以剂量0.2的分开的/共同配制的 0.85 0.55 1.32
以剂量0.4的分开的/共同配制的 1.04 0.68 1.61
以剂量1的分开的/共同配制的 0.97 0.68 1.40
结果表明，gE特异性IgG水平随着免疫刺激剂的剂量增加。对于分开施用和共同配制的施用均观察到这种情况(参见表8)。此外，当观察分开的/共同配制的IgG水平的几何平均值比率时，看起来两种制剂在1、0.4和0.2 μg的剂量下诱导相似的抗体应答。最低剂量(0.1和0.05 µg)看起来略有差异(参见表9)。
结论
总之，TLR4激动剂和皂苷的分开施用不会导致观察到的细胞和抗体应答的显著变化。
参考文献
序列表
<110> GlaxoSmithKline Biologicals S.A.
<120> 用于诱导免疫应答的新型方法
<130> VB65981 FF
<150> GB1621686.3
<151> 2016-12-20
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 424
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> RTS
<400> 1
Met Met Ala Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala
1 5 10 15
Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala
20 25 30
Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala
35 40 45
Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala
50 55 60
Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Lys
65 70 75 80
Asn Asn Gln Gly Asn Gly Gln Gly His Asn Met Pro Asn Asp Pro Asn
85 90 95
Arg Asn Val Asp Glu Asn Ala Asn Ala Asn Ser Ala Val Lys Asn Asn
100 105 110
Asn Asn Glu Glu Pro Ser Asp Lys His Ile Lys Glu Tyr Leu Asn Lys
115 120 125
Ile Gln Asn Ser Leu Ser Thr Glu Trp Ser Pro Cys Ser Val Thr Cys
130 135 140
Gly Asn Gly Ile Gln Val Arg Ile Lys Pro Gly Ser Ala Asn Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Glu Leu Asp Tyr Ala Asn Asp Ile Glu Lys Lys Ile Cys Lys
165 170 175
Met Glu Lys Cys Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn Ser Ser Ile Gly
180 185 190
Leu Gly Pro Val Thr Asn Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly
195 200 205
Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu
210 215 220
Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser
245 250 255
Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp
260 265 270
Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys
275 280 285
Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val
290 295 300
Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Asn Thr Gly Pro Cys Lys
305 310 315 320
Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys
325 330 335
Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser
340 345 350
Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe
355 360 365
Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu
370 375 380
Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly
385 390 395 400
Pro Ser Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile
405 410 415
Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile
420
<210> 2
<211> 391
<212> PRT
<213> 结核分枝杆菌
<400> 2
Met Val Asp Phe Gly Ala Leu Pro Pro Glu Ile Asn Ser Ala Arg Met
1 5 10 15
Tyr Ala Gly Pro Gly Ser Ala Ser Leu Val Ala Ala Ala Gln Met Trp
20 25 30
Asp Ser Val Ala Ser Asp Leu Phe Ser Ala Ala Ser Ala Phe Gln Ser
35 40 45
Val Val Trp Gly Leu Thr Val Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Ala Gly
50 55 60
Leu Met Val Ala Ala Ala Ser Pro Tyr Val Ala Trp Met Ser Val Thr
65 70 75 80
Ala Gly Gln Ala Glu Leu Thr Ala Ala Gln Val Arg Val Ala Ala Ala
85 90 95
Ala Tyr Glu Thr Ala Tyr Gly Leu Thr Val Pro Pro Pro Val Ile Ala
100 105 110
Glu Asn Arg Ala Glu Leu Met Ile Leu Ile Ala Thr Asn Leu Leu Gly
115 120 125
Gln Asn Thr Pro Ala Ile Ala Val Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met
130 135 140
Trp Ala Gln Asp Ala Ala Ala Met Phe Gly Tyr Ala Ala Ala Thr Ala
145 150 155 160
Thr Ala Thr Ala Thr Leu Leu Pro Phe Glu Glu Ala Pro Glu Met Thr
165 170 175
Ser Ala Gly Gly Leu Leu Glu Gln Ala Ala Ala Val Glu Glu Ala Ser
180 185 190
Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gln Leu Met Asn Asn Val Pro Gln Ala Leu
195 200 205
Gln Gln Leu Ala Gln Pro Thr Gln Gly Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu
210 215 220
Gly Gly Leu Trp Lys Thr Val Ser Pro His Arg Ser Pro Ile Ser Asn
225 230 235 240
Met Val Ser Met Ala Asn Asn His Met Ser Met Thr Asn Ser Gly Val
245 250 255
Ser Met Thr Asn Thr Leu Ser Ser Met Leu Lys Gly Phe Ala Pro Ala
260 265 270
Ala Ala Ala Gln Ala Val Gln Thr Ala Ala Gln Asn Gly Val Arg Ala
275 280 285
Met Ser Ser Leu Gly Ser Ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly
290 295 300
Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala Ser Val Gly Ser Leu Ser Val
305 310 315 320
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325 330 335
Ala Leu Pro Leu Thr Ser Leu Thr Ser Ala Ala Glu Arg Gly Pro Gly
340 345 350
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355 360 365
Gly Gly Leu Ser Gly Val Leu Arg Val Pro Pro Arg Pro Tyr Val Met
370 375 380
Pro His Ser Pro Ala Ala Gly
385 390
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<211> 323
<212> PRT
<213> 结核分枝杆菌
<400> 3
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1 5 10 15
Pro Leu Asp Pro Ser Ala Met Val Ala Gln Val Gly Pro Gln Val Val
20 25 30
Asn Ile Asn Thr Lys Leu Gly Tyr Asn Asn Ala Val Gly Ala Gly Thr
35 40 45
Gly Ile Val Ile Asp Pro Asn Gly Val Val Leu Thr Asn Asn His Val
50 55 60
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65 70 75 80
Thr Tyr Gly Val Asp Val Val Gly Tyr Asp Arg Thr Gln Asp Val Ala
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165 170 175
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180 185 190
Ala Ala Ser Asp Asn Phe Gln Leu Ser Gln Gly Gly Gln Gly Phe Ala
195 200 205
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210 215 220
Gly Gly Ser Pro Thr Val His Ile Gly Pro Thr Ala Phe Leu Gly Leu
225 230 235 240
Gly Val Val Asp Asn Asn Gly Asn Gly Ala Arg Val Gln Arg Val Val
245 250 255
Gly Ser Ala Pro Ala Ala Ser Leu Gly Ile Ser Thr Gly Asp Val Ile
260 265 270
Thr Ala Val Asp Gly Ala Pro Ile Asn Ser Ala Thr Ala Met Ala Asp
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Pro Pro Ala
<210> 4
<211> 723
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> M72
<400> 4
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1 5 10 15
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20 25 30
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100 105 110
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165 170 175
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180 185 190
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260 265 270
Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met Trp Ala Gln Asp Ala Ala Ala Met Phe
275 280 285
Gly Tyr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Leu Leu Pro Phe
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Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
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675 680 685
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725
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<213> 水痘带状疱疹
<400> 6
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500 505 510
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Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Ile Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly
530 535 540
Leu Ala
545
<210> 7
<211> 514
<212> PRT
<213> 呼吸道合胞病毒
<400> 7
Met Glu Leu Leu Ile Leu Lys Thr Asn Ala Ile Thr Ala Ile Leu Ala
1 5 10 15
Ala Val Thr Leu Cys Phe Ala Ser Ser Gln Asn Ile Thr Glu Glu Phe
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35 40 45
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser
145 150 155 160
Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile
165 170 175
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225 230 235 240
Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr
245 250 255
Ser Ile Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln
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275 280 285
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325 330 335
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Glu Lys Leu His Asn Val Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys
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Ile Tyr His Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly
500 505 510
Glu Ala
<210> 8
<211> 488
<212> PRT
<213> 人免疫缺陷病毒
<400> 8
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Ile Gln Phe Lys Pro His Ala Gly Gly Asp Leu Glu Ile Thr Met His
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Ser Phe Asn Cys Arg Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Ser Asn Leu
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Gly Asn Ile Thr Cys Arg Ser Asn Ile Thr Gly Ile Leu Leu Thr Arg
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Gly Gly Asp Met Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys
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Val Val Glu Ile Lys Pro Leu Gly Ile Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg
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Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Arg
485
<210> 9
<211> 469
<212> PRT
<213> 人免疫缺陷病毒
<400> 9
Ser Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala Lys
1 5 10 15
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Ala His Cys Asn Ile Asn Glu Ser Lys Trp Asn Asn Thr Leu Gln Lys
290 295 300
Val Gly Glu Glu Leu Ala Lys His Phe Pro Ser Lys Thr Ile Lys Phe
305 310 315 320
Glu Pro Ser Ser Gly Gly Asp Leu Glu Ile Thr Thr His Ser Phe Asn
325 330 335
Cys Arg Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Ser Asp Leu Phe Asn Gly
340 345 350
Thr Tyr Arg Asn Gly Thr Tyr Asn His Thr Gly Arg Ser Ser Asn Gly
355 360 365
Thr Ile Thr Leu Gln Cys Lys Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln
370 375 380
Glu Val Gly Arg Ala Ile Tyr Ala Pro Pro Ile Glu Gly Glu Ile Thr
385 390 395 400
Cys Asn Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Leu Arg Asp Gly Gly Gln
405 410 415
Ser Asn Glu Thr Asn Asp Thr Glu Thr Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp
420 425 430
Met Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Glu
435 440 445
Ile Lys Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Glu Ala Lys Arg Arg Val Val
450 455 460
Glu Arg Glu Lys Arg
465

Claims (72)

1.TLR4激动剂，其与皂苷一起用作佐剂，其中所述TLR4激动剂与所述皂苷分开施用。
2.皂苷，其与TLR4激动剂一起用作佐剂，其中所述皂苷与所述TLR4激动剂分开施用。
3.TLR4激动剂在制备用于与皂苷一起使用的佐剂中的用途，其中所述TLR4激动剂与所述皂苷分开施用。
4.皂苷在制备用于与TLR4激动剂一起使用的佐剂中的用途，其中所述皂苷与所述TLR4激动剂分开施用。
5.使用TLR4激动剂和皂苷辅助针对抗原的免疫应答的方法，其特征在于所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用。
6.使用TLR4激动剂和皂苷辅助受试者的针对抗原的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
(i) 向所述受试者施用所述TLR4激动剂；
(ii) 向所述受试者施用所述皂苷；
(iii) 向所述受试者施用抗原；
其中步骤可以以任何顺序进行，所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用，并且抗原可以任选地与所述TLR4激动剂、皂苷共同配制或与所述TLR4激动剂和皂苷中的每一种共同配制。
7.使用TLR4激动剂和皂苷诱导受试者中的免疫应答的方法，其特征在于所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用于受试者。
8.使用TLR4激动剂和皂苷诱导受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括以下步骤：
(i) 向所述受试者施用所述TLR4激动剂；
(ii) 向所述受试者施用所述皂苷；
其中步骤可以以任一顺序进行，所述TLR4激动剂和所述皂苷分开施用。
9.试剂盒，其包含：
(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；和
(ii)包含皂苷的第二组合物。
10.根据权利要求7所述的试剂盒，其进一步包含抗原。
11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述抗原存在于所述第一和/或第二组合物内。
12.试剂盒，其包含：
(i)包含TLR4激动剂的第一组合物；
(ii)包含皂苷的第二组合物；和
(iii)包含抗原的第三组合物。
13.多室注射器，其包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室含有包含TLR4激动剂的第一组合物，且所述第二隔室含有包含皂苷的第二组合物，所述第一和第二组合物可依次或同时施用于受试者。
14.根据权利要求13所述的多室注射器，其进一步包含至少一种抗原。
15.根据权利要求14所述的多室注射器，其进一步包含第三隔室，所述第三隔室含有包含所述至少一种抗原的第三组合物。
16.根据权利要求14所述的多室注射器，其中所述至少一种抗原存在于所述第一和/或第二组合物内。
17.权利要求1至16中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其用于施用于人受试者。
18.权利要求1至17中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂是脂多糖。
19.权利要求1至17中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂是脂质A的无毒衍生物。
20.权利要求19的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂是单磷酰脂质A。
21.权利要求20的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂是3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A。
22.权利要求18的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂是吡喃葡糖基脂质佐剂。
23.权利要求1至22中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中单个成人人剂量中的TLR4激动剂的量为1至100 µg，诸如40-60 µg或20-30 µg。
24.权利要求1至23中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷可获得自皂树(Quillaja saponaria)。
25.权利要求24的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷包含QS7、QS17、QS18和QS21中的一种或多种。
26.权利要求25的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷包含QS21。
27.权利要求25的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷由QS21组成。
28.权利要求1至27中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中单个成人人剂量中的皂苷的量为1至100 µg，诸如40-60 µg或20-30 µg。
29.权利要求28的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中单个成人人剂量中的TLR4激动剂的量为40-60 μg，诸如约50 μg，并且皂苷的量为40-60 μg，诸如约50 μg。
30.权利要求28的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中单个成人人剂量中的TLR4激动剂的量为20-30 μg，诸如约25 μg，并且皂苷的量为20-30 μg，诸如约25 μg。
31.权利要求1至30中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中肌肉内施用所述TLR4激动剂和皂苷。
32.权利要求1至31中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中将所述TLR4激动剂和皂苷施用于分开至少5 mm、诸如分开至少1 cm的位置。
33.权利要求1至32中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中将所述TLR4激动剂和皂苷施用于分开小于10 cm、诸如分开小于5 cm的位置。
34.权利要求1至33中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中将所述TLR4激动剂和皂苷施用于引流至相同淋巴结的位置。
35.权利要求1至34中一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中将所述TLR4激动剂和皂苷肌肉内施用于相同的肌肉。
36.权利要求1至35中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中将所述TLR4激动剂和皂苷施用于相同位置。
37.权利要求1至36中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂和皂苷在彼此的6小时内施用，诸如在彼此的2小时内，尤其是在彼此的1小时内，诸如在30分钟内，特别是在15分钟内(例如在5分钟内)施用。
38.权利要求1至37中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂和皂苷分开至少5秒，诸如10秒，且尤其是至少30秒施用。
39.权利要求1至38中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂在所述皂苷前施用。
40.权利要求1至39中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷在所述TLR4激动剂前施用。
41.权利要求37的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂和皂苷无延迟地施用。
42.权利要求1至41中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中提供抗原，并且其中所述TLR4激动剂、皂苷和抗原都在6小时内，诸如在2小时内，尤其是在1小时内，诸如在30分钟内，且特别是在15分钟内(例如在5分钟内)施用。
43.权利要求42的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中提供抗原，并且所述TLR4激动剂、皂苷和抗原都无延迟地施用。
44.权利要求1至43中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其用作引发疫苗接种。
45.权利要求1至43中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其用作加强疫苗接种。
46.权利要求1至45中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂不与脂质体一起配制。
47.权利要求1至45中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR4激动剂与脂质体一起配制。
48.权利要求1至47中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷与脂质体一起配制。
49.权利要求47或48的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中每个剂量含有0.1至10 mg，诸如0.5至2 mg脂质体。
50.权利要求47或48的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中每个剂量含有0.1至10 mg，诸如0.5至2 mg脂质体。
51.权利要求1至50中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中还提供一种或多种抗原。
52.权利要求51的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中一种或多种抗原与TLR4激动剂共同配制。
53.权利要求51或52的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中一种或多种抗原与所述皂苷共同配制。
54.权利要求1至53中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述TLR激动剂在基本上不含皂苷、诸如包含每个人剂量少于1μg的皂苷的组合物中提供。
55.权利要求1至54中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述皂苷在基本上不含TLR激动剂、诸如包含每个人剂量少于1μg的TLR激动剂的组合物中提供。
56.权利要求1至55中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中3D-MPL在基本上不含皂苷、诸如包含每个人剂量少于1μg的皂苷的组合物中提供。
57.权利要求1至56中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中QS21在基本上不含TLR激动剂、诸如包含每个人剂量少于1μg的TLR激动剂的组合物中提供。
58.权利要求1至57中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中TLR4激动剂在基本上不含QS21、诸如包含每个人剂量少于1μg的皂苷的组合物中提供。
59.权利要求1至58中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中皂苷在基本上不含3D-MPL、诸如包含每个人剂量少于1μg的3D-MPL的组合物中提供。
60.权利要求1至59中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中3D-MPL在基本上不含QS21、诸如包含每个人剂量少于1 μg的皂苷的组合物中提供。
61.权利要求1至60中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中QS21在基本上不含3D-MPL、诸如包含每个人剂量少于1μg的3D-MPL的组合物中提供。
62.权利要求1至61中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中观察到的免疫应答是用共制剂观察到的应答的至少50%，诸如至少60%，合适地至少70%，特别是至少80%，且尤其是至少90%。
63.权利要求1至62中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中观察到的免疫应答不劣于用共制剂观察到的应答。
64.权利要求1至63中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自感染人和非人脊椎动物的人或非人病原体，包括例如细菌、真菌、寄生微生物或多细胞寄生虫，或癌细胞或肿瘤细胞。
65.权利要求64的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自恶性疟原虫或间日疟原虫，诸如SEQ ID No 1的抗原。
66.权利要求64的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自分枝杆菌属，诸如衍生自SEQ ID No 2至5中的任一个。
67.权利要求64的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自水痘带状疱疹病毒，诸如SEQ ID No 6的抗原。
68.权利要求64的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自人呼吸道合胞病毒，诸如SEQ ID No 7的抗原。
69.权利要求64的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自HIV，诸如SEQ ID No 8或9的抗原。
70.权利要求64的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原源自不可分型的流感嗜血杆菌(NTHi)和/或卡他莫拉氏菌。
71.权利要求64至70中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中所述抗原作为多肽提供。
72.权利要求64至70中任一项的TLR4激动剂、皂苷、用途、方法、试剂盒或注射器，其中提供编码多肽抗原的多核苷酸。
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WO (1) WO2018114892A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023179588A1 (zh) * 2022-03-21 2023-09-28 厦门大学 截短的水痘-带状疱疹病毒囊膜糖蛋白gE

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180077180A (ko) 2015-11-06 2018-07-06 아쥬반스 테크놀로지스 인코포레이티드 트리테르펜 사포닌 유사체
CN114630671A (zh) * 2019-11-05 2022-06-14 佐剂技术公司 水痘带状疱疹
EP4237085A1 (en) 2020-10-28 2023-09-06 Sanofi Pasteur Liposomes containing tlr4 agonist, preparation and uses thereof
WO2023020993A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2023020994A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods
WO2024145204A1 (en) * 2022-12-29 2024-07-04 Q-Vant Biosciences, Inc. Modified qs-21 compositions and processes for producing the same and uses therefor

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0761231A1 (en) * 1992-06-25 1997-03-12 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine composition containing adjuvants
CN1956729A (zh) * 2004-05-21 2007-05-02 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
WO2015150568A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Novel methods for inducing an immune response

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4436727A (en) 1982-05-26 1984-03-13 Ribi Immunochem Research, Inc. Refined detoxified endotoxin product
US4866034A (en) 1982-05-26 1989-09-12 Ribi Immunochem Research Inc. Refined detoxified endotoxin
US4769239A (en) 1984-08-21 1988-09-06 Merck & Co., Inc. Vaccine against varicella-zoster virus
US4877611A (en) 1986-04-15 1989-10-31 Ribi Immunochem Research Inc. Vaccine containing tumor antigens and adjuvants
US5173294A (en) 1986-11-18 1992-12-22 Research Foundation Of State University Of New York Dna probe for the identification of haemophilus influenzae
CA1331443C (en) 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
CY1933A (en) 1989-06-27 1990-06-22 Smithkline Biolog Novel compounds
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
US5552146A (en) 1991-08-15 1996-09-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis
AU2927892A (en) 1991-11-16 1993-06-15 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Hybrid protein between cs from plasmodium and hbsag
US5928902A (en) 1992-02-27 1999-07-27 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Hybrid protein between CS from plasmodium and HBsAg
US6169171B1 (en) 1992-02-27 2001-01-02 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Hybrid protein between CS from plasmodium and HBSAG
GB9224584D0 (en) 1992-11-23 1993-01-13 Connaught Lab Use of outer membrane protein d15 and its peptides as vaccine against haempohilus influenzae diseases
PL178578B1 (pl) 1993-03-23 2000-05-31 Smithkline Beecham Biolog Zawiesina cząstek 3-0-deacylowanego monofosforylolipidu A i sposób jej wytwarzania oraz kompozycja szczepionki zawierającej antygen w połączeniu z 3-0-deacylowanym monofosforylolipidem A i sposób jej wytwarzania
ES2185658T3 (es) 1993-05-18 2003-05-01 Univ Ohio State Res Found Vacuna para la otitis media.
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6440425B1 (en) 1995-05-01 2002-08-27 Aventis Pasteur Limited High molecular weight major outer membrane protein of moraxella
US5843464A (en) 1995-06-02 1998-12-01 The Ohio State University Synthetic chimeric fimbrin peptides
GB9513074D0 (en) 1995-06-27 1995-08-30 Cortecs Ltd Novel anigen
US6290970B1 (en) 1995-10-11 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor protein of Moraxella
US6090576A (en) 1996-03-08 2000-07-18 Connaught Laboratories Limited DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella
KR20000010667A (ko) * 1996-04-23 2000-02-25 팜 윌리암 엔. 병원성 에스케리히아 콜리 관련 단백질
US7341727B1 (en) 1996-05-03 2008-03-11 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same
FR2748748B1 (fr) 1996-05-17 1998-11-06 Pasteur Institut Identification et clonage d'un antigene mycobacterien correspondant a une hemagglutine de liaison a l'heparine
GB9616351D0 (en) 1996-08-02 1996-09-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
US6764840B2 (en) 1997-05-08 2004-07-20 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6303347B1 (en) 1997-05-08 2001-10-16 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
JP2001502925A (ja) 1997-06-03 2001-03-06 コノート ラボラトリーズ リミテッド モラクセラのラクトフェリン受容体遺伝子
GB9812613D0 (en) 1998-06-11 1998-08-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
FR2832410B1 (fr) 2001-11-19 2004-04-02 Pasteur Institut Antigene mycobacterien recombinant de type hemagglutinine de liaison a l'heparine methylee, procedes de preparation et compositions immunogenes comprenant un tel antigene
PT2192127E (pt) 2003-12-23 2012-08-06 Nationwide Children S Hospital Inc Pili de tipo iv de haemophilus influenzae
US6997910B2 (en) * 2004-05-03 2006-02-14 Infusive Technologies, Llc Multi-chamber, sequential dose dispensing syringe
GB0504436D0 (en) 2005-03-03 2005-04-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
UA92782C2 (ru) 2006-01-17 2010-12-10 Арне Форсгрен Новый поверхностный белок haemophilus influenzae (белок е; ре)
US20090181078A1 (en) 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
DK2068918T4 (da) 2006-09-26 2024-09-02 Access To Advanced Health Inst Vaccinesammensætning omfattende syntetisk adjuvant
EA021391B1 (ru) 2007-03-02 2015-06-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Способ индукции иммунного ответа, вакцинная композиция, ее применение и набор
ES2597439T3 (es) 2007-12-24 2017-01-18 Id Biomedical Corporation Of Quebec Antígenos recombinantes del VSR
AU2009273130B2 (en) 2008-07-25 2014-10-16 Glaxo Group Limited Novel compositions and methods
ES2647321T3 (es) 2008-07-25 2017-12-20 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Composiciones y procedimientos novedosos
KR20110049834A (ko) 2008-07-25 2011-05-12 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 투베르쿨로시스 ｒｖ2386ｃ 단백질, 이를 함유하는 조성물 및 이의 용도
WO2010129537A1 (en) * 2009-05-05 2010-11-11 The Johns Hopkins University Phosphopeptides as melanoma vaccines
WO2010149657A1 (en) 2009-06-22 2010-12-29 Px Therapeutics Method for the purification of hbha
MA33449B1 (fr) 2009-06-24 2012-07-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Antigènes recombinants du vrs
ES2918381T3 (es) 2009-07-15 2022-07-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones de proteína F de VRS y métodos para producir las mismas
EP2528621B1 (en) 2010-01-27 2016-09-21 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Modified tuberculosis antigens
SI2651436T1 (sl) 2010-12-14 2016-07-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Mikrobakterijski antigenski sestavek
TW201302779A (zh) 2011-04-13 2013-01-16 Glaxosmithkline Biolog Sa 融合蛋白質及組合疫苗
JP2014519819A (ja) 2011-05-13 2014-08-21 ノバルティス アーゲー 融合前ｒｓｖｆ抗原
US20140141037A1 (en) 2012-11-20 2014-05-22 Novartis Ag Rsv f prefusion trimers
US10017543B2 (en) 2013-03-13 2018-07-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Prefusion RSV F proteins and their use
GB201316463D0 (en) 2013-09-16 2013-10-30 Giles Clark & Cook Ltd Novel compositions
TW201620927A (zh) 2014-02-24 2016-06-16 葛蘭素史密斯克藍生物品公司 Ｕｓｐａ２蛋白質構築體及其用途
WO2016172396A2 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Saab Ihab Multi-chamber sequential delivery syringe

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0761231A1 (en) * 1992-06-25 1997-03-12 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccine composition containing adjuvants
CN1956729A (zh) * 2004-05-21 2007-05-02 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
WO2015150568A1 (en) * 2014-04-02 2015-10-08 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Novel methods for inducing an immune response

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘轶博等: "免疫佐剂作用机制研究新进展", 《中国新药杂志》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023179588A1 (zh) * 2022-03-21 2023-09-28 厦门大学 截短的水痘-带状疱疹病毒囊膜糖蛋白gE

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