CN110283256A - 一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法 - Google Patents

一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法 Download PDF

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肖强
王辛
周秀梅
郑祝
夏雪
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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

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Abstract

本发明申请属于多糖提取技术领域，具体公开了一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，(1)原料准备；(2)粉碎；(3)脱脂；(4)脱单糖；(5)提取复合溶液；(6)离心；(7)除蛋白；(8)醇析过夜；(9)沉淀处理。本发明主要用于提取润楠多糖，解决了现有技术中提取多糖方法复杂导致应用范围较小的问题。

Description

一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体公开了一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法。
背景技术
润楠是樟科，润楠属乔木。根据医术记载其茎、叶、皮药用，治霍乱、吐泻不止，抽筋及足肿。其中宜昌润楠在我国传统和民间医药典籍中有应用记载，在三峡区域民间主要应用 其治疗各种皮肤炎症、关节肿痛和风湿性疾病，疗效显著，且无明显的毒副作用。研究人员 对已分离鉴定的化学成分和主要提取部位进行了初步的活性评价和筛选，主要研究结果有： 通过溶剂提取法和多种色谱方法对宜昌润楠干燥茎枝的95％乙醇提取物进行分离纯化，利用 现代波谱技术和理化性质进行结构鉴定：一共分离鉴定了52个化合物，分别是润楠香豆素 (1)、润楠丁内脂A(2)、润楠丁内酯B(3)、润楠丁内酯C(4)、润楠丁内酯D(5)、润楠丁内 酯E(6)、润楠丁内酯F(7)等
多糖又称多聚糖，是由单糖缩合成的多聚物，广泛分布于自然界中，是一类由醛糖或酮 糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，包括同多糖和杂多糖，多由10个以上单糖构 成的糖单位重复组成，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物 质之一。近年来随着中药材多糖研究的深入，其多种药物功效被证实，如保肝、抗肿瘤、抗 氧化、抗炎、抗凝血、降血糖、免疫调节、保湿等。
当前对其他植物多糖提取方法主要有：采用水提醇沉法、酶解—水提醇沉法、超声波— 水提醇沉法、微波—水提醇沉法。这些方法成本高，能耗高、过程相对复杂，导致提取方法 应用范围较小。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，以解决现有技术中提取多 糖方法复杂导致应用范围较小的问题。
为了达到上述目的，本发明的技术方案为：一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，包括 以下步骤：
(1)原料准备：树龄5年以上的新鲜成熟润楠叶片，叶片大小均匀，无病虫害，洗净后60℃干燥至恒重；
(2)粉碎：将步骤(1)中干燥至恒重的润楠叶片放入粉碎机中粉碎，粉碎后过60目筛；
(3)脱脂：将步骤(2)中粉碎后的润楠粉末加入适量石油醚，80℃下索氏提取法回流 1.5h，过滤得药渣，将药渣自然风干；
(4)脱单糖：将步骤(3)中脱脂后的润楠药渣加入适量质量分数为95％乙醇，85℃下 回流1.5h，过滤得药渣，将药渣自然风干备用；
(5)经(1)～(4)处理过的润楠粉末控制料液比为1:200，加入适量复合酶，调节pH值为4，提取2h得到复合溶液；
(6)离心：将步骤(5)中的复合溶液离心，滤液在70℃下旋转蒸发浓缩；
(7)除蛋白：将步骤(6)中蒸发浓缩的滤液用TCA法去蛋白，100％TCA按照1:10的比例加入到上述滤液中，4℃沉淀1h，离心去除沉淀，保留上清液；
(8)醇析过夜：将步骤(7)中离心后收集上清液加入95％乙醇，上清液与乙醇的体积 比为1:3，静置于4℃环境中醇沉过夜；
(9)沉淀处理：离心，沉淀用80％乙醇洗涤三次。真空干燥得润楠多糖。
进一步，步骤(5)中使用的符合酶为果胶酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶酶，浓度分别为50U/g、50U/g、100U/g。使用上述种类的酶能加快酶解速度，提高了提取润楠多糖的提取效率。
进一步，步骤(5)中在50℃酶解提取得到复合溶液。30℃纤维素酶提取得率很低，而 70℃高温会导致酶失活，采用上述温度适合酶促反应。
进一步，步骤(9)中的冷冻温度为-50℃，真空度<15Pa，干燥时间为24h。在上述温度 和真空度条件下能加快润楠多糖的干燥速度。
进一步，步骤(6)和(9)中的离心转速均为10000r/min，离心时间为15min。
进一步，步骤(4)中利用索氏提取法进行回流。由于索氏萃取是直接对萃取剂进行加 热，且选用的萃取剂一般沸点都较低，从根本上保证了能量的快速传导和充分利用。而且萃 取剂是在索氏萃取器中循环利用的，这既减少了溶剂用量，又缩短了操作时间，大大降低了 能耗。另一方面，索氏萃取的设备简单、操作简便，且其造价低，体积小，适于实验室应用。
本技术方案的工作原理及有益效果在于：
(1)本发明采用复合酶法提取润楠叶中多糖，相比之下有更高的得率，对能源的消耗 更低，且工艺更加简单易行。本发明公开了一种高效、绿色、节能的从润楠叶中提取多糖的 工艺；
(2)此发明润楠多糖的提取率为18.13％，比不同水提法要高，而且提取过程中的药剂 以及复合酶均能重复使用，对环境也无污染，成本也比较低廉。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：树龄5年以上的新鲜成熟润楠叶片，叶片大小均匀，无病虫害，洗净后60℃干燥至恒重；
(2)粉碎：将步骤(1)中干燥至恒重的润楠叶片放入粉碎机中粉碎，粉碎后过60目筛；
(3)脱脂：将步骤(2)中粉碎后的润楠粉末加入适量石油醚(60～90℃沸程)，80℃下索氏提取法回流1.5h，过滤得药渣，将药渣自然风干；
(4)脱单糖：将步骤(3)中脱脂后的润楠药渣加入适量质量分数为95％乙醇，85℃下 索氏提取法回流1.5h，过滤得药渣，将药渣自然风干备用；
(5)经(1)～(4)处理过的润楠粉末控制料液比为1:200，加入适量复合酶(果胶酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶酶浓度分别为50U/g、50U/g、100U/g)，调节pH值为4，50℃酶解 提取2h；
(6)离心：将浸提后的复合溶液离心(10000r/min，15min)，滤液在70℃下旋转蒸发浓缩；
(7)除蛋白：将步骤(6)中蒸发浓缩的滤液用TCA法去蛋白，100％TCA按照1:10的比例加入到上述滤液中，4℃沉淀1h，离心去除沉淀，保留上清液；
(8)醇析过夜：将步骤(7)中离心后收集上清液加入95％乙醇，上清液与乙醇的体积 比为1:3，静置于4℃环境中醇沉过夜；
(9)沉淀处理：离心(10000r/min，15min)，沉淀用80％乙醇洗涤三次。真空冷冻冻干(-50℃，真空度<15Pa，干燥24h)得润楠多糖。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描 述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若 干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专 利的实用性。

Claims (6)

1.一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料准备：树龄5年以上的新鲜成熟润楠叶片，叶片大小均匀，无病虫害，洗净后60℃干燥至恒重；
(2)粉碎：将步骤(1)中干燥至恒重的润楠叶片放入粉碎机中粉碎，粉碎后过60目筛；
(3)脱脂：将步骤(2)中粉碎后的润楠粉末加入适量石油醚，80℃下索氏提取法回流1.5h，过滤得药渣，将药渣自然风干；
(4)脱单糖：将步骤(3)中脱脂后的润楠药渣加入适量质量分数为95％乙醇，85℃下回流1.5h，过滤得药渣，将药渣自然风干备用；
(5)经(1)～(4)处理过的润楠粉末控制料液比为1:200，加入适量复合酶，调节pH值为4，提取2h得到复合溶液；
(6)离心：将步骤(5)中的复合溶液离心，滤液在70℃下旋转蒸发浓缩；
(7)除蛋白：将步骤(6)中蒸发浓缩的滤液用TCA法去蛋白，100％TCA按照1:10的比例加入到上述滤液中，4℃沉淀1h，离心去除沉淀，保留上清液；
(8)醇析过夜：将步骤(7)中离心后收集上清液加入95％乙醇，上清液与乙醇的体积比为1:3，静置于4℃环境中醇沉过夜；
(9)沉淀处理：离心，沉淀用80％乙醇洗涤三次。真空干燥得润楠多糖。
2.根据权利要求1所述的一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，其特征在于，步骤(5)中使用的复合酶为果胶酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶酶，浓度分别为50U/g、50U/g、100U/g。
3.根据权利要求2所述的一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，其特征在于，步骤(5)中在50℃酶解提取得到复合溶液。
4.根据权利要求1所述的一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，其特征在于，步骤(9)中的冷冻温度为-50℃，真空度<15Pa，干燥时间为24h。
5.根据权利要求1所述的一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，其特征在于，步骤(6)和(9)中的离心转速均为10000r/min，离心时间为15min。
6.根据权利要求1所述的一种从润楠叶中提取润楠多糖的方法，其特征在于，步骤(4)中利用索氏提取法进行回流。
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