CN110267688B - 骨再生材料 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种骨再生材料，包括：‑大孔的天然来源的羟基磷灰石的第一固相，所述第一固相具有直径大于或等于50pm的孔，优选直径在50pm至100pm之间的孔，和‑磷酸钙的固体合成第二相该第二相旨在富集所述第一相，所述第二相的Ca/P摩尔比在0.2至2之间，优选在0.3至1.8之间，优选在0.5至1.65之间，所述骨再生材料中所述天然来源的羟基磷灰石的固体第一相和所述磷酸钙的固体合成第二相之间的确定的重量比在99/1至1/99之间。

Description

骨再生材料

本发明涉及一种骨再生材料，其包含大孔的天然来源的羟基磷灰石的第一固相，所述第一固相具有直径大于或等于50μm的孔，优选直径在50μm至100μm之间的孔。

这种骨再生材料在文献WO2015/049336中已知，并且用作治疗在诸如矫正或整容手术的不同领域中的骨损伤的一部分。

羟基磷灰石是来自磷酸盐家族的矿物种类，具有式Ca₅(PO₄)₃(OH)。更具体而言，羟基磷灰石属于具有一种相同六方结构的同构化合物的磷灰石晶体学家族。该化合物多年来在不同的医学专业中被广泛用作生物材料，因为羟基磷灰石为最常见的结晶磷酸钙，并且为骨骼、牙釉质和牙本质的第一矿物成分。此外，羟基磷灰石(特别是天然来源的羟基磷灰石)具有良好的生物相容性和细胞或蛋白质的特定吸附性能。

因此认识到，天然来源的羟基磷灰石具有骨引导性质以及与人体中天然骨材料相同的晶体结构和形态，所以羟基磷灰石非常适合作为骨重建或矫正手术的一部分。在这个意义上，包含羟基磷灰石的许多材料目前被用作牙种植体以刺激具有缺陷或损伤的骨部位处的骨重建。特别地，使用来自清除了其中的有机物质(蛋白质、朊病毒、肽和脂质)的骨样品的天然羟基磷灰石使得可以获得与其人工类似物相比特别对骨再生具有特异性的基质。优选使骨再生材料预先去除任何痕量的有机物质，使得种植体被生物体正确地接受/整合，具有生物相容性并且可以通过骨传导与种植体放置其中的生物介质相互作用。

例如，羟基磷灰石可被用作替代材料来替换或再生患病或受损的组织。羟基磷灰石还经常被用作钛假体上的涂层以促进骨整合，或还可防止由于种植体和骨之间的微小运动引起的磨损。羟基磷灰石也可被用作牙骨质来替代自体骨移植物。此外，开发了越来越多的羟基磷灰石作为药物载体的应用，这是因为羟基磷灰石具有互相连接的微孔结构。

如上所述，羟基磷灰石具有非常接近骨矿物相的化学组成，并且其生物学性质以及其生物相容性使其成为优异的骨替代产品。规定骨移植(bone colonisation)取决于骨再生材料的多孔特征和其大孔之间的相互连接(数量和尺寸)。这些相互连接构成了“隧道”的类型，这使得孔之间的细胞通道和血液循环成为可能，从而促进骨形成。

羟基磷灰石通过其高生物相容性水平和其在生物体中的缓慢再吸收，可以以不同形式并且在许多组织中施用以用于各种应用。特别地，基于羟基磷灰石的可塑性牙骨质是优异的，其被制备然后施用在将被该牙骨质硬化的待处理区域上。这些牙骨质由于其良好的骨整合和其生物可吸收性而被用作骨替代物，使其可随着时间推移被新生骨替代。

还有可含有诸如羧甲基纤维素的聚合物的溶液和基于羟基磷灰石的凝胶。因此，提及了生物活性陶瓷-聚合物复合种植体，这些产品可被用于不同领域，如在牙科手术中填充牙周缺陷或在整形外科手术中进行填充。

某些基于羟基磷灰石的产品也以块状、粉末或颗粒的形式存在，用于整形外科、填充物或作为牙种植体的补充物。

在基于羟基磷灰石的产品中，许多是尚未准备好使用并且需要预先制备的产品。特别是对于基于羟基磷灰石的牙骨质而言，其需要在沉积之前在待处理区域上或其中预先混合粉末和溶液，由此在该区域进行原位硬化。其他基于羟基磷灰石的产品也需要植入之前在待处理区域上或其中成形。

遗憾的是，虽然这种包含大孔的天然来源的羟基磷灰石固相的骨再生材料具有对于骨内植入的特异性性质，并且由于其生物相容性和其骨引导能力而使得可以进行正确的骨再生，但在实际中观察到，这种类型的骨再生材料不总是最佳的，并且骨再生过程的时间段总是相对较长(1mm/月)的。此外，骨再生量经常不足，这导致部分纤维性组织形成而非完全骨化。

为了加速骨再生过程，文献US2002/0114755公开了包含羟基磷灰石和50质量％至90质量％磷酸三钙的材料，根据该在先文献的材料通过在升高的温度下加入Mg⁺⁺离子而在磷酸盐水溶液中转化硬藻(hard algal)组织而获得。

根据该在先文献的骨再生材料，即包含羟基磷灰石和50质量％至90质量％天然来源的磷酸三钙的的骨再生材料，具有相互连接的多孔结构，在生物体中改善和可控的再吸收，实现了骨再生的加速。

遗憾的是，虽然根据文献US2002/0114755的骨再生材料使得可以通过增加在种植部位的直接基质中的游离离子形式的钙和磷贡献来加速骨再生过程，但是观察到该材料类型不是最佳的。

实际上，获得这种骨再生材料的方法包括将羟基磷灰石转化为磷酸三钙。因此，这是第一天然相转化为第二天然相，羟基磷灰石被磷酸三钙替代。

因此，在根据文献US2002/0114755的骨再生材料的种植期间，比羟基磷灰石更易溶的磷酸三钙将快速溶解并且在种植部位的基质中释放钙和磷离子。如上所述，这种骨再生材料的磷酸三钙质量为50％至90％，并且通过转化起始材料中含有的部分羟基磷灰石(即硬藻组织)获得。因此，根据该在先文献的骨再生材料，在种植后质量的50％至90％(对应于磷酸三钙)将迅速溶解，从而产生具有宽空区的天然羟基磷灰石材料，因此确定为天然来源但不再具有最佳形貌特征(孔隙率、比表面积等)的羟基磷灰石材料使得可以实现良好的骨再生。

因此，根据文献US2002/0114755的骨再生材料一旦种植就不能长期维持天然羟基磷灰石的合适的微孔结构，因此就骨细胞的增殖和分化而言，不能确保在种植部位上最佳的骨再生过程，因为这种材料一旦种植，就不再具有表面形貌，也不具有合适的微孔性。

本发明旨在通过提供一种骨再生材料来克服现有技术的缺点，所述骨再生材料可以在刺激骨再生潜力的同时最小化骨再生时间，从而获得最佳的再生骨量。

根据本发明的骨再生材料不仅具有可以最小化骨再生时间的化学性质(以游离离子形式优化的钙和磷盐析)，而且还具有最佳的物理性质(保存的形貌和孔隙率)，能够实现良好的骨移植以获得最佳的再生骨量。

为了解决这个问题，提供了根据本发明的骨再生材料，包括大孔的天然来源的羟基磷灰石的第一固相，所述第一固相具有直径大于或等于50μm的孔，优选直径在50μm至100μm之间的孔，所述骨再生材料，即，根据本发明的骨再生材料的特征在于，其进一步包括磷酸钙的第二固体合成相，该磷酸钙的第二固体合成相旨在富集所述第一相，所述第二相的Ca/P摩尔比在0.2至2之间，优选在0.3至1.8之间，优选在0.5至1.65之间，所述骨再生材料中所述天然来源的羟基磷灰石的第一固相和所述磷酸钙的第二固体合成相之间的确定的重量比在99/1至1/99之间。

有利的是，根据本发明，所述天然来源的羟基磷灰石的第一固相与所述磷酸钙的第二固体合成相之间的确定的重量比为95/5、90/10、85/15、80/20、75/25、70/30、65/35、60/40、55/45、50/50、45/55、40/60、35/65、30/70、25/75、20/80、15/85、10/90或5/95。

在本发明的范围内，已经强调了根据本发明的这种骨再生材料具有：

-天然来源的羟基磷灰石的第一固相，其具有直径大于或等于50μm的孔，优选直径在50μm至100μm之间的孔；

-旨在富集所述第一相的磷酸钙的第二固体合成相；

-磷酸钙的第二固体合成相的Ca/P摩尔比在0.2至2之间，优选在0.3至1.8之间，优选在0.5至1.65之间；以及

-所述天然来源的羟基磷灰石的第一固相和所述磷酸钙的第二合成固相之间确定的重量比在99/1至1/99之间，

使得可以确保在骨再生部位的基质中适当地盐析钙(例如，以细胞外游离Ca²⁺离子的形式)和磷(例如，以细胞外游离PO₄ ^3-离子的形式)，以至于通过显著地促进骨细胞的增殖和分化以及矿化，这些可以起到周围生物组织再生的促进剂的作用。

此外，令人惊讶地观察到，根据本发明的骨再生材料，即其羟基磷灰石的固相是通过磷酸钙的第二相富集的羟基磷灰石的天然相的骨再生材料具有的最佳形貌特征(孔隙率、比表面积等)可通过进行良好的骨移植来优化骨再生，并且甚至是在骨再生材料的种植之后也是如此。

良好的骨移植取决于成骨材料的多孔特征和其大孔之间的相互连接(数量和尺寸)，这些相互连接构成了“隧道”的类型，这可使孔之间的细胞通道和血液循环成为可能，促进了骨形成。因此，天然羟基磷灰石的形貌特征的保留对于获得适当的骨再生是至关重要的，根据文献US2002/0114755的再生材料不是这种情况，其中羟基磷灰石的天然相的一部分(质量为50％至90％)转化为了磷酸三钙的天然相。

因此，根据本发明的骨再生材料同时具有最佳的化学和物理性质(游离离子形式的优化的钙和磷盐析/形貌、孔隙率)，相对于诸如在文献WO2015/049336和US2002/0114755中的骨再生材料，这确保了骨再生和骨的形成获得显著减少的时间优化。

特别地，在本发明的范围内已经强调，当所述天然来源的羟基磷灰石的第一固相与所述磷酸钙的第二合成固相之间的确定的重量比在99/1至1/99之间，并且优选为95/5、90/10、85/15、80/20、75/25、70/30、65/35、60/40、55/45、50/50、45/55、40/60、35/65、30/70、25/75、20/80、15/85、10/90或5/95时，骨再生时间显著缩短。这是由于在这样的重量比的情况下，游离离子形式的钙和/或磷盐析中的至少一种使得钙和/或磷因此以一定量位于周围骨再生基质中，使得相对于自然遇到的浓度，可以显著增加此处的浓度，而且仅羟基磷灰石倾向于捕获游离离子形式的钙和磷，并且从骨再生部位耗尽周围的基质。

必须注意的是，在现有技术中描述了两相骨再生材料，特别是由合成羟基磷灰石和合成磷酸三钙结合物组成的材料：因此这些是100％合成的材料，至于诸如在开始指出的再生材料，需要相对长的骨再生持续时间。而且，与根据本发明的材料相反的是，这种完全合成的两相骨再生材料在骨细胞的增殖和分化方面不能确保在种植部位上最佳的骨再生，因为其没有合适的表面形貌也没有合适的微孔。

优选地，根据本发明，所述磷酸钙的第二合成固相的Ks溶度积大于所述天然来源的羟基磷灰石的第一相的Ks溶度积。这是特别有利的，因为钙和磷必须在种植部位的直接基质中以游离离子的形式提供，同时保留天然来源的羟基磷灰石固相的结构性质(孔径、比表面积等)和组成。由于第二相的溶解度较大，因此主要是该相特别将为以游离离子形式的钙和磷(例如，Ca²⁺和PO₄ ^3-)释放的源而不是天然来源的羟基磷灰石，后者明显地较少溶解，且相反的是，该相还倾向于在种植基质的开始处固定这些离子。

有利的是，根据本发明，所述天然来源的羟基磷灰石的第一固相的比表面积大于4m²/g。

优选地，根据本发明，所述磷酸钙的第二合成固相选自由磷酸一钙(MCP)、磷酸二钙(DCP)、磷酸八钙(OCP)、钙缺乏磷灰石(CDA)、无定形磷酸钙(ACP)、磷酸三钙(TCP)、磷酸四钙(TTCP)以及它们的混合物组成的组。

有利的是，根据本发明，所述天然来源的羟基磷灰石的第一相为从天然来源的骨材料中，特别是从动物来源的骨材料中获得的羟基磷灰石。例如，天然来源的羟基磷灰石可为从来自于哺乳动物(牛、马、猪或羊)、珊瑚或墨鱼的骨材料中获得的羟基磷灰石。

优选地，根据本发明，所述第一相的大孔的所述天然来源的羟基磷灰石为至少部分烧结的大孔的天然来源的羟基磷灰石。受控烧结(加热粉末而不使其熔化)有利地使得可以获得天然来源的羟基磷灰石，其具有增加的机械抗性并且保留了合适的微孔性和合适的表面形貌，这使得可以促进种植并且提高种植后的长期稳定性。

有利的是，根据本发明的骨再生材料进一步包括至少一种选自由以下组成的组的治疗剂：抗生素、抗病毒药、抗炎药、诸如类固醇之类的激素、诸如BMP(骨形态发生蛋白)之类的生长因子、抗排斥剂、干细胞以及它们的混合物。

优选地，根据本发明的骨再生材料旨在用作用于哺乳动物(优选为人类)的骨形成、骨再生或骨矫正的种植体或假体。

在所附权利要求中指出了根据本发明的骨再生材料的其他实施方案。

本发明还旨在提供一种含有根据本发明的骨再生材料的医疗装置。

在所附权利要求中指出了根据本发明的医疗装置的其他实施方案。

本发明还旨在提供一种包含根据本发明的骨再生材料的骨再生组合物。

在所附权利要求中指出了根据本发明的组合物的其他实施方案。

本发明还基于一种用于富集根据本发明的骨再生材料的方法，所述方法包括：

-供应骨再生材料的步骤，以及

-在钙和磷中，富集所述骨再生材料的步骤，

所述方法其特征在于，通过以任何顺序彼此相继进行的至少一次第一单独浸泡和至少一次第二单独浸泡，从而进行所述钙和磷的富集步骤，所述至少一次第一浸泡在包含钙的第一溶液中进行并且所述至少一次第二浸泡在包含磷的第二溶液中进行。

优选地，根据本发明的方法，所述第一浸泡在Ca(NO₃)₂.4H₂O、CaCl₂.2H₂O、Ca(OH)₂、CaSO₄.2H₂O或CaCO₃的第一溶液中进行。

有利地，根据本发明的方法，所述第二浸泡在Na₃PO₄、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄.H₂O、K₃PO₄、K₂HPO₄、KH₂PO₄、K₂HPO₄、(NH₄)₃PO₄、(NH₄)₂HPO₄或NH₄H₂PO₄的第二溶液中进行。

在所附权利要求中指出了根据本发明的方法的其他实施方案。

实施例

用于不同的骨再生材料-溶解度测试的游离离子形式的钙和磷的盐析随时间变化的比较

为了确定不同骨再生材料在开始时随时间盐析(溶解度测试)的钙和磷的量(浓度)，进行了比较试验，这在复制体内种植条件的培养基中进行。

1.方法

为此，在模拟体内种植条件(人类血浆)的培养基中，即，在pH为7并且成分如下表1中概述的HBSS培养基(Hank的平衡盐培养基)中测定钙和磷的比例和盐析量(浓度)：

表1

	浓度(mM)
		Na<sup>+</sup>	142.8
K<sup>+</sup>	5.8
		Mg<sup>2+</sup>	0.9
Ca<sup>2+</sup>	1.3
		Cl-	146.8
HCO<sup>3-</sup>	4.2
		HPO<sub>4</sub><sup>2-</sup>	0.3
H<sub>2</sub>PO<sup>4-</sup>	0.4
		SO<sub>4</sub><sup>2-</sup>	0.4
葡萄糖	5.6

测试了以下骨再生材料：

材料1：0.5g天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相，未富集的，具有尺寸为50μm至100μm之间的孔；

材料2：0.5g天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相，具有尺寸为50μm至100μm之间的孔，并且根据羟基磷灰石的固相/磷酸钙的合成固相的重量比为90/10，由磷酸钙的合成固相富集，磷酸钙相的Ca/P摩尔比为小于1.67；以及

材料3：0.5g天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相，具有尺寸为50μm至100μm之间的孔，并且根据羟基磷灰石的固相/磷酸钙的合成固相的重量比为80/20，由磷酸钙的合成固相富集，磷酸钙相的Ca/P摩尔比为小于1.67。

根据文献WO2015/049336中描述的方法获得天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相，并且更具体而言是由尺寸为0.25mm至1mm的羟基磷灰石颗粒组成。

通过在Ca(NO₃)₂.4H₂O(1M、pH＝10)和NaH₂PO₄.H₂O(0.5M、pH＝10)分离的浴中对天然来源的羟基磷灰石(羟基磷灰石颗粒)的第一固相进行时长为5分钟的连续和交替浸泡获得含有天然来源的羟基磷灰石的第一固相和磷酸钙的第二合成固相的材料。第一浴可以富集天然来源的羟基磷灰石钙(Ca²⁺)颗粒，即第二磷(PO₄ ^3-)浴。

在连续4次浸泡(在每个浴中浸泡2次)后，获得羟基磷灰石的固相/磷酸钙的合成固相的重量比为90/10，或在连续6次浸泡(在每个浴中浸泡3次)后，获得羟基磷灰石的固相/磷酸钙的合成固相的重量比为80/20，冲洗在钙和磷中富集的天然来源的羟基磷灰石颗粒以去除过量的钙和磷，然后以100℃的温度干燥6小时。

通过在37℃的温度浸入10ml的HBSS培养基中，同时测试总共36个样品(0.5g)。每种材料的两个样品经过8小时、24小时、48小时、1周、2周和3周后，以持续时间进行游离离子形式的的钙和磷盐析测定，冲洗这些样品并且在这些各自的持续时间之后以100℃的温度干燥。

根据ICP-AES(电感耦合等离子体-原子发射光谱)技术测定在HBSS培养基中每个样品开始时盐析的钙和磷的量(浓度)，这在通过离心去除在HBSS培养基中可能的悬浮材料之后进行。通过在浸入HBSS培养基之前和之后称重(重量分析法)来定义材料的重量，这对于以上提及的每段持续时间都如此。

2.结果

对于每种材料(样品)，起始钙和磷的浓度分别为1.26mmol/l和0.78mmol/l，这对应于初始HBSS培养基中这些离子的浓度。

测定结果说明，当材料1(天然牛科动物来源的、未富集的羟基磷灰石固相)浸入在HBSS培养基中时，游离离子形式的钙和磷浓度在稳定前降低。同时，观察到材料1的重量增加。例如，在3周后，培养基中的钙浓度为0.06mmol/l，而培养基中的磷浓度为0.03mmol/l，每个样品的平均重量增加为5mg。

对于材料2(通过合成固体钙相(比例为90/10)富集的天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相)，钙和磷浓度开始随着钙浓度(0.6mmol/l)的快速稳定而降低，而在浸泡3周后，磷浓度逐渐增加至达到1.34mmol/l的最终值，该浓度大于在HBSS培养基中的初始磷浓度。材料2的样品的重量首先几乎没有增加，然后降低至重量损失为3.5mg。

对于材料3(通过磷酸钙的合成固相(比例为80/20)富集的天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相)，钙和磷浓度随时间的推移增加而样品的重量减少。在浸入HBSS培养基中3周后，最终的钙和磷浓度分别为3.69mmol/l和2.78mmol/l，重量损失为12.5mg，这些浓度大于在HBSS培养基中初始测定的浓度。

3.结论

材料1(天然牛科动物来源的、未富集的羟基磷灰石固相)获得的结果强调了羟基磷灰石固定在HBSS培养基中游离离子形式的钙和磷，从而在其表面形成磷灰石层的能力。在浸入8小时后，在样品表面吸附了大部分的钙和磷的游离离子。这些结果对应于重量分析法的记录，表明在浸入3周后的样品较重。因此，这些结果表明材料1(未富集的羟基磷灰石)固定游离离子形式的钙和磷，并且羟基磷灰石在HBSS培养基中的溶解是微不足道的。

这些结果说明，对于材料2(通过磷酸钙合成固相(比例为90/10)富集的天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相)，两种现象同时发生，因为钙和磷的浓度都首先降低，这又与羟基磷灰石必须固定这些离子的能力有关。然而，随后在培养基中的磷浓度增加并且甚至超过了在初始HBSS培养基中该化合物的浓度，而钙浓度保持低于在HBSS培养基中初始测定的浓度，然而大于当材料1浸入相同培养基时测定的浓度。同时，在3周后，重量分析法的结果显示样品减重。材料2的所有这些结果表明该材料溶解在HBSS培养基中，这只能归因于富集相(磷酸钙的合成固相)，因为用材料1获得的结果说明在相同条件下羟基磷灰石的溶解是微不足道的。

用材料3(通过磷酸钙的合成固相(比例为80/20)富集的天然牛科动物来源的羟基磷灰石的固相)获得的结果表明钙和磷浓度没有发生下降，相反，钙和磷浓度随着时间的推移增加，同时样品的重量减少。从这些观察结果可得出结论，钙和磷浓度的这些增加是由于在HBSS培养基中材料3的第二相的溶解，因为用材料1获得的结果说明在相同条件下羟基磷灰石的溶解是完全微不足道的。此外，可以观察到，材料3不会或仅略微固定盐析的游离离子形式钙和磷，这确保了后者保持在溶液中。

所有这些结果还说明，富集的(磷酸钙的合成固相)比羟基磷灰石更易溶，并且它能够在周围培养基(HBSS模拟血浆)中，盐析游离离子形式的钙和磷(Ca²⁺和PO₄ ^3-)。

众所周知，本发明决不限于上述实施方案，并且在不脱离所附的权利要求的范围的情况下可对本发明进行修改。

Claims (13)

1.一种骨再生材料，包括大孔的天然动物来源的羟基磷灰石的第一固相，第一固相具有直径大于或等于50μm的孔，所述骨再生材料的特征在于，羟基磷灰石的第一固相经磷酸钙的第二相富集，第二相是合成固相并具有在0.2至2之间的Ca/P摩尔比，并且所述第二相的Ks溶度积大于天然动物来源的羟基磷灰石的第一固相的Ks溶度积，所述骨再生材料中天然动物来源的羟基磷灰石的第一固相和磷酸钙的第二合成固相之间的确定的重量比在99/1至1/99之间，其中，通过以任何顺序彼此相继进行的至少一次第一单独浸泡和至少一次第二单独浸泡进行钙和磷的富集，至少一次第一浸泡在包含钙的第一溶液中进行并且至少一次第二浸泡在包含磷的第二溶液中进行。

2.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，第一固相具有直径在50μm至100μm之间的孔。

3.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，所述第二相具有在0.3至1.8之间的Ca/P摩尔比。

4.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，所述第二相是合成固相并具有在0.5至1.65之间的Ca/P摩尔比。

5.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，天然动物来源的羟基磷灰石的第一固相的比表面积大于4m²/g。

6.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，磷酸钙的第二合成固相选自由磷酸一钙(MCP)、磷酸二钙(DCP)、磷酸八钙(OCP)、钙缺乏磷灰石(CDA)、无定形磷酸钙(ACP)、磷酸三钙(TCP)、磷酸四钙(TTCP)以及它们的混合物组成的组。

7.根据权利要求1所述的骨再生材料，其中第一固相的大孔的天然动物来源的羟基磷灰石为至少部分烧结的大孔的天然动物来源的羟基磷灰石。

8.根据权利要求1所述的骨再生材料，进一步包括至少一种选自由以下组成的组的治疗剂：抗生素、抗病毒药、抗炎药、激素、生长因子、抗排斥剂、干细胞以及它们的混合物。

9.根据权利要求1所述的骨再生材料，旨在被用作用于哺乳动物的骨形成、骨再生或骨矫正的种植体或假体。

10.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，第一浸泡在Ca(NO₃)₂.4H₂O、CaCl₂.2H₂O、Ca(OH)₂、CaSO₄.2H₂O或CaCO₃的第一溶液中进行。

11.根据权利要求1所述的骨再生材料，其特征在于，第二浸泡在Na₃PO₄、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄.H₂O、K₃PO₄、K₂HPO₄、KH₂PO₄、K₂HPO₄、(NH₄)₃PO₄、(NH₄)₂HPO₄或NH₄H₂PO₄的第二溶液中进行。

12.一种医疗设备，其含有根据权利要求1至11中任一项所述的骨再生材料。

13.一种骨再生组合物，其包括根据权利要求1至11中任一项所述的骨再生材料。