CN110257559B - 一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法 - Google Patents
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110257559B CN110257559B CN201910534130.6A CN201910534130A CN110257559B CN 110257559 B CN110257559 B CN 110257559B CN 201910534130 A CN201910534130 A CN 201910534130A CN 110257559 B CN110257559 B CN 110257559B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- earthworms
- swine fever
- african swine
- soil
- fever virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 title claims abstract description 80
- 241000701386 African swine fever virus Species 0.000 title claims abstract description 76
- 239000002689 soil Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 241001233061 earthworms Species 0.000 claims abstract description 106
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 42
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 241000361919 Metaphire sieboldi Species 0.000 claims description 43
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 15
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 13
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 10
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 9
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 claims description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 4
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 abstract 1
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 14
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 2
- 208000012153 swine disease Diseases 0.000 description 2
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 206010011703 Cyanosis Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N csfv Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N 0.000 description 1
- 238000009355 double cropping Methods 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000009400 out breeding Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
- A01K67/0332—Earthworms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明属于家畜病害检测技术领域,具体涉及一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法。该方法检测过程包括将蚯蚓投放在猪舍周边或生产污区或病死猪处理位置或猪场进出入口的土壤中培养,之后再检测蚯蚓体内外是否携带非洲猪瘟病毒的步骤。该方法检测效率高、准确性高,可以预判养殖场风险,降低损失;针对已感染非洲猪瘟病毒的区域内养殖场可以为猪场复产提供重要依据,降低复产后再次感染的风险;同时对猪场日常消毒管理等工作提供科学依据。
Description
技术领域
本发明属于家畜病害检测技术领域,具体涉及一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法。
背景技术
非洲猪瘟(African swine fever virus,ASFV),是一种急性,发热传染性很高的滤过性病毒所引起的猪病,其特征是发病过程短,但死亡率高达100%,临床表现为发热,皮肤发绀,淋巴结,肾、胃肠粘膜明显出血。
2018年8月3日—15日,中国在辽宁沈阳、河南郑州、江苏连云港3个相隔很远的地区,接连发现3起非洲猪瘟疫情。8月19日,江苏省连云港市海州区某养殖场确诊发生非洲猪瘟疫情,发病615头,死亡88头。8月24日,浙江省温州市乐清市畜牧兽医局报告,某养殖小区3个养殖户的生猪发病430头,死亡340头。9月2日,安徽省宣城市宣州区发生生猪非洲猪瘟疫情。古泉镇某养殖场存栏生猪285头,死亡40头。五星乡某养殖场存栏生猪440头,死亡94头。9月17日,内蒙古第二个旗县发生非洲猪瘟疫情,同时发布了封锁非洲猪瘟疫区的命令。1月23日9时,北京市房山区青龙湖镇、琉璃河镇各一个养殖场排查出非洲猪瘟疫情。2019年1月1日,黑龙江省绥化市明水县发生非洲猪瘟疫情。2019年3月7日,广西贵港一养殖场发生非洲猪瘟疫情。由于现在尚未有有效的非洲猪瘟疫苗和药物,一旦发生疫情只能采取封闭、扑杀、无害化处理、消毒等处置措施,给广大养殖户带来巨大的经济损失。
非洲猪瘟病毒(ASFV)属于非洲猪瘟病毒科,非洲猪瘟病毒属,双链DNA病毒。它是目前唯一的DNA虫媒病毒。ASFV对乙醚及氯仿等脂溶剂敏感,对热、腐败、干燥等的抵抗力较强。病毒可在56℃的环境下存活2小时、4℃下存活6个月、在干燥的室温环境下可存活2年,而在-20℃下几乎可无限期的存活。在PH值范围为3至10的环境下,病毒十分稳定。由于非洲猪瘟病毒的这一稳定特性,给猪场复产带来严重挑战,一旦消毒不彻底,猪场环境或土壤中存在存活病毒,复产后再次感染概率为100%。
通常对待疫情区的处理均会采用反复清理、清洗、消毒、空置,这一系列措施能够有效杀灭饲养场所表面的非洲猪瘟病毒,但土壤中的病毒无法得到有效处理,已经有资料表明,非洲猪瘟病毒可随着水流、尿液、粪便等渗透到土壤中导致疫情传播。因此在猪场复产前一旦土壤中存在未杀死的非洲猪瘟病毒,将对复产后的猪场带来严重威胁,甚至再次感染造成损失。
因此如何准确确定饲养环境中是否含有非洲猪瘟病毒,何时解除疫区封锁,合理把握复产时间对生猪养殖业具有重要意义,而目前尚没有较好的方法可以直接检测猪场环境尤其是土壤中的非洲猪瘟病毒,更没有准确的方法可以合理把控发病后猪场的复产时间,疫区猪场复产全靠经验与运气。
发明内容
针对上述技术问题,本发明旨在提供一种可以直接检测猪场土壤中非洲猪瘟病毒的方法,以确定发病、清空并经清理、消毒后的猪场是否适合复产。该方法还可以有效排查猪场复产的风险性及风险来源,有针对性的对猪舍周边、生产污区、病死猪处理位置等高风险区域进行排查,并采取有针对性的处理方案。
为实现上述目的,本发明通过以下技术方案实现:
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,包括将蚯蚓投放在猪舍周边、生产污区、病死猪处理位置、猪场进出入口的土壤中培养,之后再检测蚯蚓体内是否携带非洲猪瘟病毒的步骤。
具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓投放场地选择与处理:选择猪舍周边、生产污区、病死猪处理位置、猪场进出入口做为待检测场所,用消毒处理后的纯净水浇透;
(2)蚯蚓投放:将蚯蚓投放至待检测场所,之后用低功率紫外灯照射地面;
(3)蚯蚓回收:投放后培养3-5天,根据蚯蚓粪便位置,挖出蚯蚓,不同区域蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓回收数量大于投放总数量的70%;
(4)检测:将回收的蚯蚓粉碎后取样,采用荧光PCR方法检测是否携带非洲猪瘟病毒,若非洲猪瘟病毒检测呈阳性,表明消毒不彻底,对阳性区域继续清理、消毒;若检测非洲猪瘟病毒呈阴性,重复步骤(1)至步骤(4)2-4次,直至所有检测呈阴性。
做为具体技术方案,步骤(1)中蚯蚓的投放数量为10-15条/m2。
做为优选技术方案,所述蚯蚓在投入待检场所前需在非洲猪瘟病毒呈阴性的培养基中培养2-7天,投入前随机抽检蚯蚓中非洲猪瘟病毒2-3次,每次检测结果呈阴性后方可投放。
做为优选技术方案,所述步骤(1)中低功率紫外灯照射时间为3-5min,紫外功率为10-20W。
做为具体技术方案,所述步骤(3)中蚯蚓投放后培养期间定期向投放区域中喷洒纯净水,保持土壤湿润。
做为具体技术方案,在步骤(1)中蚯蚓投放之前将投放区域进行松土处理,以便于蚯蚓钻入土壤内部。
做为具体技术方案,所述步骤(1)中的待检测场所按3-10m2/块分别编号。
做为具体技术方案,所述步骤(4)中蚯蚓的粉碎过程采用低温研磨粉碎。
做为具体技术方案,所用蚯蚓为孵化10天之后尚未性成熟的蚯蚓。
该检测方法可用于检测猪场土壤中的病毒,包括猪瘟病毒、蓝耳病毒、伪狂犬病毒、流行性腹泻病毒、轮状病毒等。
本发明可用于检测非洲猪瘟疫情前后猪场周边环境土壤中的非洲猪瘟病毒,提前防范风险或延迟猪场复产,能有效检测出猪场及周边土壤中的病毒,检测方法简单、高效,本发明具有以下优势:
检测效率高,准确性高
由于直接检测土壤中是否存在非洲猪瘟病毒难度较大,需要大量且频繁的采样,且无法准确测定土壤中是否存在非洲猪瘟病毒,目前仍未有行之有效的方法来准确检测土壤中的非洲猪瘟病毒。本发明采用蚯蚓作为病毒富集对象,由于蚯蚓主要以泥土中的物质为食物,将蚯蚓投放在可能含有非洲猪瘟病毒的土壤中,随着蚯蚓的进食、代谢、钻洞,将土壤中的非洲猪瘟富集到身体内外,大大提高土壤中非洲猪瘟病毒的检测效率和准确性。
对养殖场风险预判,降低养殖户损失
该方法可在非洲猪瘟发生后的猪场或周边猪场进行养殖风险预判。当养殖场周边存在非洲猪瘟疫情后,疫区周边养殖场除增加养殖区的消毒外,可以采用该方法进行预判,判定养殖场周边的土壤中是否存在非洲猪瘟病毒,及时处理,提前防范,有效应对,能够大大降低发病风险,减少经济损失。针对疫区养殖户,在清理、消毒、静置后,检测疫区地下土壤中是否仍有非洲猪瘟病毒存活,能够及时把握复产时间,减少经济损失。
针对性强,对猪场及周边的消毒工作做到有的放矢
由于病毒看不见摸不着,因此在对猪场的日常消毒过程中具有一定的盲目性,可能大力度消毒的区域并没有病毒,而被忽略的死角或场所却携带有病毒,这在一定程度上增加了猪场的运营成本。采用本发明的方法可以有针对性的对猪场的各个区域进行消毒,划出消毒重点区域和安全区域,消毒工作有的放矢,节约运营成本。
附图说明
图1实施例3中荧光定量检测的扩增曲线图;
图2实施例4中荧光定量检测的扩增曲线图;
图3实施例5中荧光定量检测的扩增曲线图;
图4实施例6中荧光定量检测的扩增曲线图。
具体实施例
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明,需要指出的是,以下实施方式仅是以例举的方式对本发明所做的解释性说明,所有本领域的技术人员以本发明的精神对本发明所做的等效的替换均落入本发明的保护范围。
实施例1
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,包括将蚯蚓投放在猪舍周边或生产污区或病死猪处理位置或猪场进出入口的土壤中培养,之后再检测蚯蚓体内外是否携带非洲猪瘟病毒的步骤。
该方法先将蚯蚓投放到猪舍周边或生产猪舍周边或生产污区或病死猪处理位置或猪场进出入口的土壤,培养后将蚯蚓回收,检测蚯蚓体内外是否含有非洲猪瘟病毒。该方法简单易行,检测成本低,效率高,可有效预防养殖场感染非洲猪瘟病毒。
实施例2
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓投放场地选择与处理:选择猪舍周边或生产污区或病死猪处理位置活猪场进出入口做为待检测场所,用消毒处理后的纯净水浇透;
(2)蚯蚓投放:将蚯蚓投放至待检测场所,之后用低功率紫外灯照射地面;
(3)蚯蚓回收:投放后培养3-5天,根据蚯蚓粪便位置,挖出或引诱出蚯蚓,不同区域蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓回收数量大于投放总数量的70%;
(4)检测:将回收的蚯蚓粉碎后,采用荧光PCR方法检测是否携带非洲猪瘟病毒,若非洲猪瘟病毒检测呈阳性,表明消毒不彻底,对阳性区域继续清理、消毒;若检测非洲猪瘟病毒呈阴性,重复步骤(1)—步骤(4)2-4次,直至所有检测呈阴性。
实施例3
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓投放场地选择与处理:选择农业农村部公布的某发病猪舍周边、生产污区、病死猪处理位置做为待检测场所,用消毒处理后的纯净水浇透土壤表层;检测时间为该养殖场非洲猪瘟疫情爆发处理后一周,测定日平均气温15-20℃,适合蚯蚓生长;对被检测区域按3-5m2的大小进行标记,共标记检测区域10块,编号从1-10顺序编号,检测面积、检测位置、蚯蚓投入量如下表1所示;
(2)蚯蚓投放:按照每平方10-15条的数量投放蚯蚓,共投放蚯蚓560条,蚯蚓投放前先对蚯蚓进行净化培养后抽样检测蚯蚓中非洲猪瘟病毒呈阴性;之后将蚯蚓投放至待检测区域,投放后用低功率紫外灯照射地面,紫外灯功率为16w,照射时间为5min;所有蚯蚓均钻入土壤,投放有效;
(3)蚯蚓回收:每天浇水,保持测量位置土壤湿润,投放后培养3天,根据蚯蚓粪便位置,挖出蚯蚓,不同区域蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓回收数量如表1所示,每个测量点回收比例大于70%,有效;
(4)检测:将每个区域回收的蚯蚓全部粉碎后取样,采用荧光PCR方法进行检测,检测是否含有非洲猪瘟病毒。
检测结果如表1、图1所示。
表1本例中各检测点蚯蚓投放量及检测结果表
由图1与表1可知,该被检测猪舍粪便堆积区域检测出非洲猪瘟病毒,该区域消毒不彻底,需进一步加大消毒力度,猪场入口、围墙外侧未检测出非洲猪瘟病毒,病死猪处理区,猪场草坪存在可疑情况,其他检测区域非洲猪瘟病毒呈阴性,综合分析,在后续的消毒处理过程中应加大对粪便堆积区,病死猪处理区,猪场草坪位置的消毒处理频率与力度。该猪场尚不能进行复产,不能解除封锁。
实施例4
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓选种与净化:蚯蚓产地:湖南邵阳,将蚯蚓放置已经净化消毒后的培养基中,培养7天,抽样检测蚯蚓中非洲猪瘟病毒均呈阴性;
(2)蚯蚓投放场地选择与处理:选择农业农村部公布的某发病猪场周边、生产污区、病死猪处理位置做为待检测场所,对被检测区域按3-5m2的大小进行标记,共标记检测区域11块,编号从1-11顺序编号,检测面积、检测位置、蚯蚓投入量如下表1所示;将土壤表层松动,松动深度为3-5cm表层,用消毒处理后的纯净水浇透;检测时间为该养殖场非洲猪瘟疫情爆发处理后第9天,检测时白天平均气温11-17℃,晚平均气温10-14℃,适合蚯蚓生长;
(3)蚯蚓投放:按照每平方15条的数量投放蚯蚓,共投放蚯蚓690条,投放后用低功率紫外灯照射地面,紫外照射功率为20W,照射时间为3min;所有蚯蚓均钻入土壤,投放有效;
(4)蚯蚓回收:每天浇水,浇水需控制水温20-35℃,所用水需进行消毒处理;土壤湿度以轻抓土壤可有少量水挤出为宜,投放后培养3天,根据蚯蚓粪便位置,挖出蚯蚓,11个不同区域的蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓总回收数量576条回收率83%,大于70%,回收有效,如表1所示;
(5)检测:将每个区域回收的蚯蚓全部粉碎后取样,采用荧光PCR方法进行检测,以确定是否含有非洲猪瘟病毒。
荧光PCR检测的扩增曲线图如图2所示,结果如表2所示。
表2本例中各检测点蚯蚓投放量及检测结果表
由图2、表2可知,该被检测猪场病死猪处理区域,非洲猪瘟病毒检测呈阳性,粪便堆积区域存在可疑情况,猪场入口、围墙外侧检测结果呈阴性,属于相对安全区域。对于该猪场今后的消毒工作中,需加大对粪便堆积区域、病死猪处理区域的消毒强度和频率。该猪场目前尚不能复产,不能解除封锁,需进一步消毒、净化处理,尤其是对病死猪处理区与粪便堆积区做进一步的消毒。同时,在病死猪处理区与粪便堆积区的蚯蚓通过紫外线、高盐进行捕杀,防止由于蚯蚓的活动导致进一步的交叉污染。
实施例5
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,该方法可用于对未感染非洲猪瘟病毒的猪场做风险评估,具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓投放场地选择与处理:选择猪舍周边、生产污区、猪场进出口位置做为待检测场所,用消毒处理后的纯净水浇透;
(2)蚯蚓投放:将蚯蚓投放至待检测场所,投放数量及投放位置如表3所示,投放后用低功率紫外灯照射投放区域地面;紫外灯照射功率为10w,照射时间5min;
(3)蚯蚓回收:投放后培养5天,根据蚯蚓粪便位置,挖出蚯蚓,不同区域蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓回收数量大于投放总数量的70%;
(4)检测:将每个区域回收的蚯蚓全部粉碎后取样,采用荧光PCR方法进行检测,以确定是否含有非洲猪瘟病毒。
检测结果如表3所示,荧光定量检测的扩增曲线图如图3所示。
表3本例中各检测点蚯蚓投放量及检测结果表
表3、图3可知,所检测猪场的所有被检测区域非洲猪瘟病毒检测均呈阴性,表明该猪场相对安全,土壤中未检测出非洲猪瘟病毒,无需恐慌,只需做好日常消毒工作即可。
为进一步验证试验效果,采用本实施例的方法重复检测相同区域位置2次,检测结果显示非洲猪瘟病毒呈阴性。该猪场相对安全,感染非洲猪瘟病毒的风险较低。
实施例6
一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,该方法可用于对非洲猪瘟疫区的猪场标记风险位置,为疫情猪场后续有针对性的消毒工作做指导,该方法具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓选择:分别选择孵化10天至性成熟前(未成熟)的蚯蚓与成熟蚯蚓做为投放蚯蚓,随机抽样检测蚯蚓非洲猪瘟病毒呈阴性;
(1)蚯蚓投放场地选择与处理:选择农业农村部公布的某发病猪场周边、生产污区、猪场进出口位置做为待检测场所,用消毒处理后的纯净水浇透;
(2)蚯蚓投放:将两种不同生长阶段的蚯蚓投放至待检测场所,投放数量及投放位置如表4所示,投放后用低功率紫外灯照射投放区域地面,紫外灯功率16w,处理时间4min;
(3)蚯蚓回收:投放后培养3天,根据蚯蚓粪便位置,挖出或用诱导剂引诱出蚯蚓,不同区域蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓回收数量大于投放总数量的70%;
(4)检测:将每个区域回收的蚯蚓全部粉碎后取样,采用荧光PCR方法进行检测,以确定是否含有非洲猪瘟病毒。
表4本例中各检测点蚯蚓投放种类数量及检测结果表
表4为本实施例中非洲猪瘟病毒检测结果,荧光定量检测的扩增曲线如图4所示。
由表4可知,在粪便堆积区检测出非洲猪瘟病毒呈阳性,该区域风险较高,应着重对该区域进行消毒处理。编号为4的区域检测出非洲猪瘟病毒,并且所采用的的蚯蚓为已经性成熟的蚯蚓,为预防该区域蚯蚓已经繁殖,并防止蚯蚓卵中含有非洲猪瘟病毒,另需对该区域进行蚯蚓卵、幼虫的捕杀,防止携带有非洲猪瘟病毒的蚯蚓卵孵化后对其他区域造成感染。对该区域需延长处理时间和处理周期,直至无蚯蚓幼虫孵化为宜。
为避免性成熟之后的蚯蚓繁殖带来的较繁琐的处理措施,在本实验过程中应优先选用尚未进入性成熟阶段的蚯蚓做为实验载体。
Claims (4)
1.一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,包括将蚯蚓投放在猪舍周边或生产污区或病死猪处理位置或猪场进出入口的土壤中培养,之后再检测蚯蚓体内外是否携带非洲猪瘟病毒的步骤;具体包括以下步骤:
(1)蚯蚓投放场地选择与处理:选择猪舍周边或生产污区或病死猪处理位置或猪场进出入口作为待检测场所,用消毒处理后的纯净水浇透;蚯蚓投放前用已消毒的工具对投放区域做松土处理;待检测场所按3-10m2/块分别编号;
(2)蚯蚓投放:蚯蚓在投入待检场所前需在非洲猪瘟病毒呈阴性的培养基中培养2-7天,投入前随机抽检蚯蚓中非洲猪瘟病毒2-3次,每次检测结果呈阴性后方可投放;将蚯蚓投放至待检测场所,蚯蚓的投放数量为10-15条/m2,之后用低功率紫外灯照射地面;
(3)蚯蚓回收:投放后培养3-5天,培养期间定期向投放区域中喷洒纯净水,保持土壤湿润;根据蚯蚓粪便位置,挖出或引诱出蚯蚓,不同区域蚯蚓分开放置,并做好标记,蚯蚓回收数量需大于投放总数量的70%;
(4)检测:将回收的蚯蚓粉碎后取样,采用荧光PCR方法检测是否携带非洲猪瘟病毒,若非洲猪瘟病毒检测呈阳性,表明消毒不彻底,对阳性区域继续清理、消毒;若检测非洲猪瘟病毒呈阴性,重复步骤(1)至步骤(4)2-4次,直至所有区域检测呈阴性。
2.如权利要求1所述的一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,所述步骤(2)中低功率紫外灯照射时间为3-5min,紫外功率为10-20W。
3.如权利要求1所述的一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,所述步骤(4)中蚯蚓的粉碎过程采用低温研磨粉碎。
4.如权利要求1-3任一所述的一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,所用蚯蚓为孵化10天之后尚未性成熟的蚯蚓。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910534130.6A CN110257559B (zh) | 2019-06-19 | 2019-06-19 | 一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910534130.6A CN110257559B (zh) | 2019-06-19 | 2019-06-19 | 一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110257559A CN110257559A (zh) | 2019-09-20 |
CN110257559B true CN110257559B (zh) | 2021-05-21 |
Family
ID=67919520
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910534130.6A Active CN110257559B (zh) | 2019-06-19 | 2019-06-19 | 一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110257559B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110724770A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-01-24 | 广东省农业科学院动物卫生研究所 | 检测非洲猪瘟病毒的防污染荧光定量pcr引物组、试剂盒及检测方法 |
CN112359144A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-02-12 | 广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场 | 一种规模猪场非洲猪瘟病毒监测与清除方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1834646A (zh) * | 2006-04-20 | 2006-09-20 | 上海交通大学 | 利用蚯蚓监测环境砷污染的方法 |
CN101907619A (zh) * | 2010-07-27 | 2010-12-08 | 上海交通大学 | 低剂量污染土壤生态毒性效应定量的检测方法 |
CN102128915B (zh) * | 2010-12-02 | 2013-11-06 | 南京大学 | 利用蚯蚓生物标志物诊断土壤污染状况的方法 |
CN105312312A (zh) * | 2014-10-21 | 2016-02-10 | 苗庆龄 | 重金属污染土壤的综合修复方法 |
CN105296626A (zh) * | 2015-11-03 | 2016-02-03 | 西南大学 | 一种快速检测土壤中病残体携带tmv方法 |
CN108300808B (zh) * | 2018-02-23 | 2020-05-29 | 湖南国测生物科技有限公司 | 一种非洲猪瘟病毒荧光pcr检测试剂盒、制备方法及使用方法 |
-
2019
- 2019-06-19 CN CN201910534130.6A patent/CN110257559B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110257559A (zh) | 2019-09-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Solomon et al. | Transmission of Escherichia coli O157: H7 from contaminated manure and irrigation water to lettuce plant tissue and its subsequent internalization | |
Bøtner et al. | Virus survival in slurry: analysis of the stability of foot-and-mouth disease, classical swine fever, bovine viral diarrhoea and swine influenza viruses | |
Fidjeland et al. | The potential for self-sanitisation of faecal sludge by intrinsic ammonia | |
Ziemer et al. | Fate and transport of zoonotic, bacterial, viral, and parasitic pathogens during swine manure treatment, storage, and land application | |
Jensen et al. | Survival of Ascaris eggs and hygienic quality of human excreta in Vietnamese composting latrines | |
CN110257559B (zh) | 一种检测猪场土壤中是否携带非洲猪瘟病毒的方法 | |
Malik et al. | Emergence and re-emergence of glanders in India: a description of outbreaks from 2006 to 2011 | |
Nielsen et al. | Persistence of low-pathogenic avian influenza H5N7 and H7N1 subtypes in house flies (Diptera: Muscidae) | |
Kumar et al. | Viability of white spot syndrome virus (WSSV) in sediment during sun-drying (drainable pond) and under non-drainable pond conditions indicated by infectivity to shrimp | |
CN112741025B (zh) | 一种石斑鱼种苗的培育方法 | |
Jiang et al. | Thermal inactivation of Escherichia coli O157: H7 in cow manure compost | |
CN105602945B (zh) | 一种同时检测海水鱼类三种致病菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法 | |
Ko et al. | Investigation of bioaerosols released from swine farms using conventional and alternative waste treatment and management technologies | |
Duc et al. | The use of composting for the disposal of African swine fever virus‐infected swine carcasses | |
CN100435786C (zh) | 金丝桃素在制备抗rna病毒药物中的应用 | |
CN110241258B (zh) | 检测猪场鸟类或其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法 | |
Glenn et al. | Genetic evidence of vertical transmission and cycling of Yersinia ruckeri in hatchery-origin fall chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha | |
CN104429976B (zh) | 一种甜樱桃砧木高效脱毒方法 | |
CN110195130B (zh) | 检测猪场苍蝇及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法 | |
CN104721837A (zh) | 猪伪狂犬病的防控方法 | |
CN103191904A (zh) | 一种养猪场粪便处理方法 | |
Fletcher et al. | The depuration of pacific oysters (Crassostrea gigas) | |
CN111296355A (zh) | 一种用于规模化养猪的闭合链式生物安全体系 | |
Gao et al. | Evaluation of the matrix effect of thermophilic anaerobic digestion on inactivation of infectious laryngotracheitis virus using real-time PCR and viral cell culture | |
Kakooza et al. | Occurrence of Selected Bacterial Antibiotic Resistance Genes in Soils of Animal Farms in Uganda |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: No. 708, Changsha Avenue, Yuhua District, Changsha City, Hunan Province 410000 Patentee after: Hunan Animal Epidemic Prevention and Control Center Patentee after: Hunan Zhongjing Biotechnology Co., Ltd Address before: No. 708, Changsha Avenue, Yuhua District, Changsha City, Hunan Province 410000 Patentee before: Hunan Animal Epidemic Prevention and Control Center Patentee before: Hunan xinnanfang Breeding Service Co., Ltd |