CN110250495A - 一种Vc脂质体水凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种Vc脂质体水凝胶及其制备方法。本发明的Vc脂质体水凝胶包含的组分和配比如下:磷脂:5‑10mg/mL;胆固醇:1‑4mg/mL;k‑卡拉胶:4‑8mg/mL;WPI:0.6‑1.0wt%;氯化钠:0.01‑0.15M;谷氨酰胺转氨酶:8‑12U/mL;HEPES缓冲液:8‑12mM。本发明的Vc脂质体水凝胶安全无毒,且提高了脂质体的稳定性与Vc的二次缓释功能。

Description

一种Vc脂质体水凝胶及其制备方法
技术领域
本发明属于食品技术领域,特别是涉及一种Vc脂质体水凝胶及其制备方法。
背景技术
脂质体是由两亲性分子在水中通过自组装而形成的微囊泡球体,通常由磷脂组成。20世纪60年代,英国学者Bangham等将磷脂分散在水中后发现,磷脂可自发形成多层的封闭式囊泡结构,并将其命名为脂质体(liposome)。鉴于其较高的生物相容性和生物降解性、尺寸可调控性和表面可修饰等优点,在过去的几十年里,脂质体的研究已从提高靶向药物和基因治疗的效率,发展到最近在食品工业对疏水性和亲水性营养素的包埋,如功能性脂类、抗氧化剂、酶与蛋白质、维生素和矿物质等。脂质体作为一种口服运载系统,可提高其包埋物的稳定性和生物利用率,并且达到定时、定位释放的目的。然而,由于传统脂质体一般由卵磷脂和胆固醇等组成,易受环境压力影响,稳定性较差,这在很大程度上限制了它的应用;同时,脂质体进入人体消化系统后易被分解,被包埋物提前释放,生物利用性降低。
水凝胶是以水为溶剂、亲水性多糖或蛋白为分散介质所形成的胶状物,是一种高分子三维空间网络体系,其性质柔软、能在水中溶胀、吸水量大而又不溶解,并维持自身三维立体结构,同时退溶胀后具有结构记忆功能,因此被广泛应用于医药伤口敷料、药物释放载体、水土保湿、化妆品等领域。但是,传统水凝胶温度响应缓慢、力学性能差且难以降解、外观易结块。由此,本发明将脂质体和水凝胶结合制备成脂质体水凝胶,以期在提高水凝胶生物相容性的同时,增强脂质体的稳定性,达到脂质体包埋、水凝胶运载双层控释营养物的目的。
目前,李日旺等以磷脂酰胆碱和胆固醇为原料制备脂质体,再与改性的壳聚糖制备脂质体水凝胶,从而改善脂质体稳定性。在医药学领域,李伟泽等采用了薄膜分散法制备黄藤素柔性纳米脂质体,并将其制备成水凝胶贴剂,作为治疗奶牛乳房炎的一种新型高效透皮给药制剂,相比传统贴剂,具有药物透皮吸收效率高、黏附性良好、使用方便的优势。Kechai等制备透明质酸脂质体凝胶以持续将肾上腺皮质激素递送至人体内耳。另外,Burchacka等制备了含有壬二酸的脂质体水凝胶,减少治疗痤疮药物对皮肤的刺激,增强生物利用度。但在食品领域,仍鲜有关于脂质体水凝胶的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Vc脂质体水凝胶及其制备方法。本发明以k- 卡拉胶与分离乳清蛋白(WPI)为原料得到一种新型的Vc脂质体水凝胶,以解决现有脂质体普遍存在稳定性低,包埋物释放快等问题。
为了达到上述的目的,本发明采取以下技术方案:
一种Vc脂质体水凝胶,所述Vc脂质体水凝胶包括如下组分:
磷脂、胆固醇、k-卡拉胶、分离乳清蛋白(WPI)、Vc、氯化钠、谷氨酰胺转氨酶、以及HEPES缓冲液;
上述组分在Vc脂质体水凝胶中的配比如下:
磷脂:5-10mg/mL;胆固醇:1-4mg/mL;k-卡拉胶:4-8mg/mL;WPI: 0.6-1.0wt%;氯化钠:0.01-0.15M;谷氨酰胺转氨酶:8-12U/mL;HEPES缓冲液:8-12mM。
优选的,磷脂:7-9mg/mL;胆固醇:2-3mg/mL;k-卡拉胶:3-7mg/mL; WPI:0.7-0.9wt%,氯化钠:0.08-0.12M,谷氨酰胺转氨酶:9-11U/mL。
优选的,所述磷脂与胆固醇的质量比为4-8:1;更优选的,所述磷脂与胆固醇的质量比为3-7:1。
优选的,所述HEPES缓冲液pH为6.4-8.4;更优选的,HEPES缓冲液pH 为6.8-8.0。
本发明还提供一种上述Vc脂质体水凝胶的制备方法,包括如下步骤:
(1)Vc脂质体的制备:
将磷脂、胆固醇溶于无水乙醇中,然后将混合溶液通过旋转蒸发除去溶剂,得到脂溶性薄膜,最后缓缓加入含Vc的HEPES缓冲溶液,得到Vc脂质体;
(2)Vc脂质体水凝胶的制备:
将WPI、k-卡拉胶分别用超纯水溶解后混合,再将谷氨酰胺转氨酶溶液、氯化钠溶液加入混合溶液中,然后加入步骤(1)得到的Vc脂质体并在45-55℃振荡水浴槽加热25-35min后即可制得Vc脂质体水凝胶。
优选的,所述步骤(1)需避光处理。
优选的,所述步骤(1)中含Vc的HEPES缓冲溶液在温度为50-56℃, 6-84rpm条件下充分冲洗脂溶性薄膜0.8-1.2h。
本发明采用薄膜分散法,以磷脂与胆固醇为壁材,Vc为芯材制备了Vc脂质体,然后将WPI与k-卡拉胶分别溶解后混合,陆续加入谷氨酰胺转氨酶、氯化钠与脂质体,获得的新型Vc脂质体水凝胶,大大提高脂质体稳定性,减缓了Vc的释放速度。
WPI是牛奶乳清中存在的一类蛋白质。必需氨基酸种类齐全、数量充足、比例适当,与FAO/WHO必需氨基酸需要量模式相近,是一种营养价值很高的优质蛋白质。它另含多种生物活性成分,主要有:β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、牛血清蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、乳过氧物酶、糖巨肽属活性蛋白。
水凝胶可以通过物理或化学交联方法来形成。物理交联,例如离子交联,由于带电聚合物链间的静电相互作用而形成;另一方面,水凝胶通过化学交联方式合成更加稳定,具有更高的机械强度。然而,大多数光引发剂、热引剂和化学交联剂是细胞毒性的(例如戊二醛,碳化二亚胺和二苯基磷酰基叠氮化物),使细胞存在接触残留有毒化学品的风险。因此,本发明选择了无毒的盐离子交联与酶交联。谷氨酰胺转氨酶对乳清蛋白的改性作用主要表现在提高持水性、改善凝胶特性、提高热稳定性、制备可食用膜等几个方面。
本发明具有以下技术特点:
1)本发明改进了脂质体水凝胶制备原材料,以k-卡拉胶与WPI为原料制备成胶,并将脂质体包埋于其中,是安全无毒的食品级脂质体水凝胶。
2)本发明k-卡拉胶-WPI水凝胶对脂质体包埋,即可保护脂质体免受氧化,又可缓释脂质体内部包埋物Vc,提高了脂质体的稳定性与Vc的二次缓释功能。
附图说明
图1是本发明的工艺流程图;
图2是本发明的外观形貌图(A:实施例1;B:实施例2;C:实施例3);
图3是Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶的质构分析结果图;
图4是Vc脂质体释放率结果图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整的描述。显然,所描述的实施例是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例,本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明的保护范围。
除非另作定义,本公开所使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内有一般技能的人士所理解的通常意义。
一种Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶,所述Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶主要由磷脂、胆固醇、k-卡拉胶、WPI、Vc、氯化钠与谷氨酰胺转氨酶组成,以HEPES为缓冲溶液;所述各组分含量:磷脂5-10mg/mL,胆固醇:1-4mg/mL, k-卡拉胶为4-10mg/mL,WPI为0.6-1.0%,氯化钠为0.01-0.15M,谷氨酰胺转氨酶为8-12U/mL,HEPES缓冲溶液为8-12mM。所述HEPES缓冲液pH为 6.4-8.4。
上述Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶的制备方法,如图1所示,包括如下步骤:
Vc脂质体制备:
(1)原料溶解:将磷脂、胆固醇,加入到溶剂无水乙醇,于磁力搅拌器搅拌直至使固体物质完全溶解;
(2)制膜:将步骤(1)处理后的溶液加入旋转蒸发仪中,抽真空去溶剂,容器内壁附着一层脂溶性混合物;
(3)洗膜:将步骤(2)制得的脂质薄膜中沿圆底烧瓶壁缓缓加入含Vc 的HEPES缓冲溶液,获得Vc(研究脂质体水凝胶储存稳定性时脂质体里不加 Vc)脂质体;
(4)将步骤(3)得到的Vc脂质体进行检验。
Vc脂质体水凝胶制备:
(5)原料溶解混合:分别将WPI和k-卡拉胶用超纯水溶解,然后混合并搅拌。再陆续将谷氨酰胺转氨酶溶液、氯化钠溶液加入上述混合物中,继续搅拌。随后,加入Vc脂质体,并将混合物搅拌至均匀;
(6)制备Vc脂质体水凝胶:将步骤(5)处理后的混合物置于45-55℃振荡水浴槽加热,25-35min后即可制得Vc脂质体水凝胶;
(7)将步骤(6)得到的Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶进行储存、检验;
下面结合实施例,进一步阐述本发明。
实施例1:
Vc脂质体制备:
(1)原料溶解:将磷脂、胆固醇以6:1质量比混合,加入到溶剂无水乙醇,于磁力搅拌器搅拌直至使固体物质完全溶解;
(2)制膜:将步骤(1)处理后的溶液加入旋转蒸发仪中,抽真空去溶剂,容器内壁附着一层脂溶性混合物;
(3)洗膜:将步骤(2)制得的脂质薄膜中沿圆底烧瓶壁缓缓加入含Vc 的HEPES缓冲溶液(pH=7.4,10mM),50℃,80rpm条件下充分洗膜约1h,获得Vc(研究脂质体水凝胶储存稳定性时脂质体里不加Vc)脂质体,其中磷脂浓度为8mg/mL;
(4)将步骤(3)得到的Vc脂质体进行检验。
Vc脂质体水凝胶制备:
(5)原料溶解混合:分别将WPI和k-卡拉胶用超纯水溶解,得到2mg/mL 的κ-卡拉胶、0.6%分离乳清蛋白(WPI)溶液,各取2mL混合搅拌。再将0.5 mL的0.1M氯化钠、0.5mL的10U/mL谷氨酰胺转氨酶加入上述混合物中,继续搅拌。随后,加入1mL Vc脂质体,并将混合物搅拌至均匀;
(6)制备Vc脂质体水凝胶:将步骤(5)处理后的混合物置于50℃振荡水浴槽加热,30min后即可制得Vc脂质体水凝胶;
(7)将步骤(6)得到的Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶进行储存、检验;其外观形貌如图2,质构如图3,脂质体释放率如图4。
实施例2:
Vc脂质体制备:
(1)原料溶解:将磷脂、胆固醇以6:1质量比混合,加入到溶剂无水乙醇,于磁力搅拌器搅拌直至使固体物质完全溶解;
(2)制膜:将步骤(1)处理后的溶液加入旋转蒸发仪中,抽真空去溶剂,容器内壁附着一层脂溶性混合物;
(3)洗膜:将步骤(2)制得的脂质薄膜中沿圆底烧瓶壁缓缓加入含Vc 的HEPES缓冲溶液(pH=7.0,10mM),50℃,80rpm条件下充分洗膜约1h,获得Vc(研究脂质体水凝胶储存稳定性时脂质体里不加Vc)脂质体,其中磷脂浓度为8mg/mL;
(4)将步骤(3)得到的Vc脂质体进行检验。
Vc脂质体水凝胶制备:
(5)原料溶解混合:分别将WPI和k-卡拉胶用超纯水溶解,得到4mg/mL 的κ-卡拉胶、0.7%分离乳清蛋白(WPI)溶液,各取2mL混合搅拌。再将0.5 mL的0.1M氯化钠、0.5mL的10U/mL谷氨酰胺转氨酶加入上述混合物中,继续搅拌。随后,加入1mL Vc脂质体,并将混合物搅拌至均匀;
(6)制备Vc脂质体水凝胶:将步骤(5)处理后的混合物置于50℃振荡水浴槽加热,30min后即可制得Vc脂质体水凝胶;
(7)将步骤(6)得到的Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶进行储存、检验;其外观形貌如图2,质构如图3,脂质体释放率如图4。
实施例3:
Vc脂质体制备:
(1)原料溶解:将磷脂、胆固醇以6:1质量比混合,加入到溶剂无水乙醇,于磁力搅拌器搅拌直至使固体物质完全溶解;
(2)制膜:将步骤(1)处理后的溶液加入旋转蒸发仪中,抽真空去溶剂,容器内壁附着一层脂溶性混合物;
(3)洗膜:将步骤(2)制得的脂质薄膜中沿圆底烧瓶壁缓缓加入含Vc 的HEPES缓冲溶液(pH=7.0,10mM),50℃,80rpm条件下充分洗膜约1h,获得Vc(研究脂质体水凝胶储存稳定性时脂质体里不加Vc)脂质体,其中磷脂浓度为8mg/mL;
(4)将步骤(3)得到的Vc脂质体进行检验。
Vc脂质体水凝胶制备:
(5)原料溶解混合:分别将WPI和k-卡拉胶用超纯水溶解,得到6mg/mL 的κ-卡拉胶、0.8%分离乳清蛋白(WPI)溶液,各取2mL混合搅拌。再将0.5 mL的0.1M氯化钠、0.5mL的10U/mL谷氨酰胺转氨酶加入上述混合物中,继续搅拌。随后,加入1mL Vc脂质体,并将混合物搅拌至均匀;
(6)制备Vc脂质体水凝胶:将步骤(5)处理后的混合物置于50℃振荡水浴槽加热,30min后即可制得Vc脂质体水凝胶;
(7)将步骤(6)得到的Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶进行储存、检验;其外观形貌如图2,质构如图3,脂质体释放率如图4。
实施例4:
Vc脂质体制备:
(1)原料溶解:将磷脂、胆固醇以6:1质量比混合,加入到溶剂无水乙醇,于磁力搅拌器搅拌直至使固体物质完全溶解;
(2)制膜:将步骤(1)处理后的溶液加入旋转蒸发仪中,抽真空去溶剂,容器内壁附着一层脂溶性混合物;
(3)洗膜:将步骤(2)制得的脂质薄膜中沿圆底烧瓶壁缓缓加入含Vc 的HEPES缓冲溶液(pH=7.0,10mM),50℃,80rpm条件下充分洗膜约1h,获得Vc(研究脂质体水凝胶储存稳定性时脂质体里不加Vc)脂质体,其中磷脂浓度为8mg/mL;
(4)将步骤(3)得到的Vc脂质体进行检验。
Vc脂质体水凝胶制备:
(5)原料溶解混合:分别将WPI和k-卡拉胶用超纯水溶解,得到8mg/mL 的κ-卡拉胶、0.9%分离乳清蛋白(WPI)溶液,各取2mL混合搅拌。再将0.5 mL的0.1M氯化钠、0.5mL的10U/mL谷氨酰胺转氨酶加入上述混合物中,继续搅拌。随后,加入1mL Vc脂质体,并将混合物搅拌至均匀;
(6)制备Vc脂质体水凝胶:将步骤(5)处理后的混合物置于50℃振荡水浴槽加热,30min后即可制得Vc脂质体水凝胶;
(7)将步骤(6)得到的Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶进行储存、检验;其质构如图3,脂质体释放率如图4。
实施例5:
Vc脂质体制备:
(1)原料溶解:将磷脂、胆固醇以6:1质量比混合,加入到溶剂无水乙醇,于磁力搅拌器搅拌直至使固体物质完全溶解;
(2)制膜:将步骤(1)处理后的溶液加入旋转蒸发仪中,抽真空去溶剂,容器内壁附着一层脂溶性混合物;
(3)洗膜:将步骤(2)制得的脂质薄膜中沿圆底烧瓶壁缓缓加入含Vc 的HEPES缓冲溶液(pH=7.0,10mM),50℃,80rpm条件下充分洗膜约1h,获得Vc(研究脂质体水凝胶储存稳定性时脂质体里不加Vc)脂质体,其中磷脂浓度为8mg/mL;
(4)将步骤(3)得到的Vc脂质体进行检验。
Vc脂质体水凝胶制备:
(5)原料溶解混合:分别将WPI和k-卡拉胶用超纯水溶解,得到10mg/mL 的κ-卡拉胶、1.0%分离乳清蛋白(WPI)溶液,各取2mL混合搅拌。再将0.5 mL的0.1M氯化钠、0.5mL的10U/mL谷氨酰胺转氨酶加入上述混合物中,继续搅拌。随后,加入1mL Vc脂质体,并将混合物搅拌至均匀;
(6)制备Vc脂质体水凝胶:将步骤(5)处理后的混合物置于50℃振荡水浴槽加热,30min后即可制得Vc脂质体水凝胶;
(7)将步骤(6)得到的Vc脂质体k-卡拉胶-WPI水凝胶进行储存、检验;其质构如图3,脂质体释放率如图4。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明方法及其核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求保护范围内。

Claims (9)

1.一种Vc脂质体水凝胶,其特征在于,所述Vc脂质体水凝胶包括如下组分:
磷脂、胆固醇、k-卡拉胶、分离乳清蛋白(WPI)、Vc、氯化钠、谷氨酰胺转氨酶、以及HEPES缓冲液;
上述组分在Vc脂质体水凝胶中的配比如下:
磷脂:5-10mg/mL;胆固醇:1-4mg/mL;k-卡拉胶:4-8mg/mL;WPI:0.6-1.0wt%;氯化钠:0.01-0.15M;谷氨酰胺转氨酶:8-12U/mL;HEPES缓冲液:8-12mM。
2.根据权利要求1所述的一种Vc脂质体水凝胶,其特征在于,组分在Vc脂质体水凝胶中的配比为磷脂:5-10mg/mL;胆固醇:1-4mg/mL;k-卡拉胶:3-7mg/mL;WPI:0.7-0.9wt%,氯化钠:0.08-0.12M,谷氨酰胺转氨酶:9-11U/mL。
3.根据权利要求1所述的一种Vc脂质体水凝胶,其特征在于,所述磷脂与胆固醇的质量比为4-8:1。
4.根据权利要求1所述的一种Vc脂质体水凝胶,其特征在于,所述磷脂与胆固醇的质量比为3-7:1。
5.根据权利要求1所述的一种Vc脂质体水凝胶,其特征在于,所述HEPES缓冲液pH为6.4-8.4。
6.根据权利要求1所述的一种Vc脂质体水凝胶,其特征在于,所述HEPES缓冲液pH为6.8-8.0。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的Vc脂质体水凝胶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)Vc脂质体的制备:
将磷脂、胆固醇溶于无水乙醇中,然后将混合溶液通过旋转蒸发除去溶剂,得到脂溶性薄膜,最后缓缓加入含Vc的HEPES缓冲溶液,得到Vc脂质体;
(2)Vc脂质体水凝胶的制备:
将WPI、k-卡拉胶分别用超纯水溶解后混合,再将谷氨酰胺转氨酶溶液、氯化钠溶液加入混合溶液中,然后加入步骤(1)得到的Vc脂质体并在45-55℃振荡水浴槽加热25-35min后即可制得Vc脂质体水凝胶。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)需避光处理。
9.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中含Vc的HEPES缓冲溶液在温度为50-56℃,6-84rpm条件下充分冲洗脂溶性薄膜0.8-1.2h。
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