CN110234996A - 设备及使用其的判定系统 - Google Patents

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岩野惠
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Abstract

本发明提供一种操作性及可移动性优异的设备及使用其的判定系统。涉及一种设备，其具有：配置有化学发光指示剂及所述指示剂的发光底物的试剂部、和形成有所述试剂部的基材，以在对所述试剂部供给试样时所述化学发光指示剂和所述底物可进行反应的方式，在所述试剂部独立配置所述化学发光指示剂及所述底物。另外，涉及一种远程诊断系统，其含有：摄像终端，其检测通过对该设备供给试剂而发出的发光信号；和，信息处理单元，其对用所述摄像终端得到的发光信号数据进行处理，所述摄像终端和所述信息处理单元可以经由网络而双向通信。

Description

设备及使用其的判定系统
技术领域
本公开涉及一种设备及使用其的判定系统。
背景技术
近年来，不限于生物体物质，谋求对食品中所含的物质或化学物质等简便地进行分析的方法。作为测定这些物质的方法的一例，有比色定量法(例如非专利文献1及2等)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：吉田俊彦等、现代媒体59卷5号2013[医学检查的进展]119-124
非专利文献2：山田隆、分析No.4 296-301(1997)
发明内容
发明所要解决的技术问题
在比色定量法的情况下，有时为了进行测定而有必要用特别的测定装置进行。因此，谋求不使用特别的装置而用户自身可容易地测定的新的手段。
本公开在一方式中提供一种操作性及可移动性优异的设备及使用其的判定系统。
用于解决问题的技术方案
本公开在一个或多个实施方式中涉及一种设备，其具有：配置有化学发光指示剂及所述指示剂的发光底物的试剂部、和形成有所述试剂部的基材，所述化学发光指示剂及所述底物独立配置在所述试剂部。
本公开在一个或多个实施方式中涉及一种判定系统，其含有：摄像终端，其检测通过对本公开的设备供给试剂而发出的发光信号；和，信息处理单元，其对用所述摄像终端得到的发光信号数据进行处理，所述摄像终端和所述信息处理单元可以经由网络而双向通信。
发明效果
根据本公开，可以在一方式中提供一种操作性及可移动性优异的设备及使用其的判定系统。
附图说明
图1是表示本公开的设备中的化学发光指示剂及该指示剂的发光底物的配置(图案化)的实例的概略图。
图2表示进行了C末端/N末端缺损变异的各种各样的UnaG和NLuc的融合蛋白的化学发光光谱。UnaG(CΔ0)+NLuc(NΔ1)表示最大的FRET效率。
图3表示在接头序列中插入各种各样的变异时的化学发光光谱。与野生型化学发光胆红素指示剂的序列(GT)相比，置换为DD序列的变异体显示最大的FRET效率变化。
图4表示野生型化学发光胆红素指示剂的滴定曲线。将3次独立的测量的平均值标绘，利用希尔公式进行拟合。Kd值为3.05nM。
图5表示在室温下保存的冷冻干燥试样的、相对于胆红素的亲和性(解离常数、Kd值)的变化。
图6表示用智能手机拍摄的野生型化学发光胆红素指示剂和各种各样的浓度的胆红素溶液的96孔板上的化学发光像。
图7的A及B表示用照相机拍摄了滴加有胆红素溶液的设备的化学发光像，图7的A表示用彩色照相机拍摄的化学发光像，图7的B表示用智能手机的照相机拍摄的化学发光像。
图8表示实施例2中的利用UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白的胆红素测定的结果的一例，图8A表示化学发光光谱，图8B是表示UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白溶液(检测试剂)的稀释率和由发光强度得到的峰值的比率值(530nm/460nm)的关系的图表。
图9表示比较例1中的利用UnaG蛋白质的胆红素测定的结果的一例，图9A表示荧光光谱，图9B是表示UnaG蛋白质溶液(检测试剂)的浓度和峰值(530nm)的荧光强度的关系的图表。
具体实施方式
本公开基于如下见解：通过使用以在滴加试样的情况下、化学发光指示剂和该化学发光指示剂的发光底物进行反应的方式来配置化学发光指示剂和该化学发光指示剂的发光底物的设备，即使不使用用于测定的激发光源或特别的装置，用户自身也可以容易地进行试样中的物质的测定。
本公开基于如下见解：通过使用下述化学发光指示剂，即使在不使用用于测定的激发光源或特别的装置的情况下，用户自身也可以容易地进行物质的测定，所述化学发光指示剂是以可发生共振能量转移的方式在与物质结合而发出荧光的蛋白质上融合化学发光蛋白质而成的。
本公开基于如下见解：使用上述化学发光指示剂而得到的化学发光可以利用移动终端(智能手机或平板电脑终端等)或数码照相机等用户自身所具有的摄像手段而检测，使用通信线路而将其发送到检查机构等，或送到移动终端的应用，由此可以进行迅速的测定、判定或诊断等。
[设备]
在一个或多个实施方式中，本公开的设备具有：配置有化学发光指示剂及所述指示剂的发光底物的试剂部、和形成有所述试剂部的基材。
在试剂部至少配置有化学发光指示剂和该化学发光指示剂的发光底物。
在一个或多个实施方式中，作为化学发光指示剂，可举出通过与分析物质结合或作用而产生发光信号的指示剂。在一个或多个实施方式中，作为化学发光指示剂，可举出下述融合蛋白，所述融合蛋白是通过与分析物质结合或作用而可发光的受体蛋白质、和可以利用自身的发光能量激发受体蛋白质的发光的供体蛋白质融合成的。化学发光指示剂在一个或多个实施方式中可以根据分析物质而适当选择。化学发光指示剂的具体例如后所述。
作为发光底物，在一个或多个实施方式中，可举出成为化学发光指示剂的化学发光蛋白质的底物、且产生光的物质。在一个或多个实施方式中，发光底物为成为供体蛋白质的底物的物质。在一个或多个实施方式中，发光底物可以根据化学发光指示剂或供体蛋白质而适当确定。
在本公开的设备中，化学发光指示剂和发光底物独立配置。在一个或多个实施方式中，化学发光指示剂和发光底物按照下述方式来配置：在对配置有这些的试剂部供给试样时，化学发光指示剂和发光底物进行反应而可产生发光信号。由此，对试剂部供给试样时，化学发光指示剂和发光底物进行接触(混合)，同时试剂中的分析物质与化学发光指示剂结合或作用，由此可以产生发光信号。根据具有这样的构成的本公开的设备，在一个或多个实施方式中可优选产生下述效果：具有更高的信号/噪音比，另外，不需要激发光，因此，不需要特别的测定装置或测定设备。另外，根据本公开的设备，在一个或多个实施方式中，用户利用自身所具有的移动终端等摄像手段摄像，由此可以检测产生的发光信号，另外可以使用该通过摄像而得到的数据进行迅速的测定、判定或诊断等。
本公开中，作为“独立配置”，在一个或多个实施方式中可举出化学发光指示剂和发光底物以不接触试样等液体则不产生反应的状态配置。作为独立配置，在一个或多个实施方式中可举出邻接的化学发光指示剂和发光底物物理性地分离而配置。另外，在一个或多个实施方式中，独立配置可包含如下方式：只要是化学发光指示剂和发光底物不进行反应的状态(例如干燥状态)，则相互接触而配置。
在一个或多个实施方式中，化学发光指示剂及发光底物可以图案化而配置。作为图案化的形状，在一个或多个实施方式中，可举出点状、线状、或圆圈状等。从提高化学发光指示剂和发光底物的接触率、产生更高的发光信号方面考虑，在一个或多个实施方式中，优选化学发光指示剂和发光底物交替地且以马赛克状图案化。从可以提高再现性方面考虑，图案化优选为微细。
在本公开的设备中，试剂部在基材上形成。在一个或多个实施方式中，试剂部既可以在1张基材的同一平面形成，也可以以由2张基材夹持的方式形成。
图1中例示非限定性的图案化的形状。图1A中，通过在1张基材11上将点状的化学发光试剂13及发光底物14交替地以马赛克状图案化而形成试剂部12。图1B中，通过在2张基材11的一面将化学发光试剂13和发光底物14分别以点状图案化，且将化学发光试剂13和发光底物14以图案化的面相对的方式配置2张基材11，形成试剂部12。图1C及D中，通过分别在1张基材11上将化学发光试剂13和发光底物14以线状或圆圈状图案化而形成试剂部12。
就化学发光指示剂及发光底物而言，从降低在试样供给前化学发光指示剂和发光底物进行反应方面考虑，在一个或多个实施方式中，优选为干燥状态。
基材的材质没有特别限定，在一个或多个实施方式中，可举出石蜡、特氟龙(注册商标)等氟系材料、玻璃、聚丙烯、织物、无纺布、及纸等。就基材的材质而言，从可以检测高的发光信号方面考虑，在一个或多个实施方式中，优选为疏水性。
[化学发光指示剂]
本公开中“化学发光指示剂”是指：在该化学发光指示剂产生发光信号的过程中至少部分地含有化学发光或化学发光能量的产生的物质。
作为化学发光指示剂，在一个或多个实施方式中，可举出含有化学发光蛋白质部分的融合蛋白。作为化学发光指示剂，在一个或多个实施方式中，既可以为公知的化学发光指示剂，也可以为目前开发中或今后可被开发的化学发光指示剂。
作为化学发光指示剂，在一个或多个实施方式中，可举出利用了通过与分析物质结合或作用而产生的FRET(荧光共振能量转移)的化学发光指示剂等。作为利用了FRET的化学发光指示剂，在一个或多个实施方式中，可举出：化学发光性钙离子指示剂(K Saito et al.,PLoS ONE,5：e9935,2010、K Saito et al.,Nature,Communications,3,1262,2012、KSuzuki et al,Nature,Communications,7,13718,2016、Yang J et al.,NatureCommunications,7,13268,2016)、以及化学发光性ATP指示剂及化学发光性cAMP指示剂(KSaito et al.,Nature,Communications,3,1262,2012)等。
作为其它的化学发光指示剂，作为一个或多个实施方式，可举出使可结合试样中的生物体物质等分析物质的蛋白质(A)与化学发光蛋白质(B)融合成的融合蛋白(C)等。就该化学发光指示剂而言，基于本发明人等的如下见解：通过使化学发光蛋白质以可产生共振能量转移的方式融合于当结合生物体物质则发出荧光的蛋白质，不使用用于观测的激发光源，另外，可以使用2波长的测定光，可以将该分析物质的定量容易化。作为“可结合分析物质的蛋白质(A)”，在一个或多个实施方式中，可举出：在结合有分析物质的状态下可发出荧光的蛋白质(A1)、及可结合作为自体荧光分子的分析物质的蛋白质(A2)。
作为用于本公开的设备的化学发光指示剂的一例，以在融合蛋白(C)中、蛋白质(A)可结合的分析物质是生物体物质的情况为例，具体地进行说明。
[可结合生物体物质的蛋白质(A)]
作为该方式中的融合蛋白(C)中的“可结合生物体物质的蛋白质(A)”，在一个或多个实施方式中，可举出：在结合有生物体物质的状态下可发出荧光的蛋白质(A1)、及可结合作为自体荧光分子的生物体物质的蛋白质(A2)。
作为在结合有生物体物质的状态下可发出荧光的蛋白质(A1)，在一个或多个实施方式中，可举出在脱辅基蛋白时为无荧光性、结合作为配体的生物体物质而成为全蛋白时有荧光性的蛋白质。作为所述蛋白质(A1)的一个或多个实施方式，可举出UnaG蛋白。另外，作为所述蛋白质(A1)的其它的一个或多个实施方式，可举出smURFP、IFP、及iRFP。
UnaG蛋白具有与间接胆红素特异性地结合、利用青色的激发光而发光成绿色的性质(Kumagai et al.,Cell 2013,153,1602-1611)。UnaG与间接胆红素具有极高的结合能力(解离常数＝98pM)。UnaG的序列信息可以参照UniProtKB/Swiss-Prot：P0DM59.1、或GenBank：AB763906.1(2016年8月时刻)。如果使用UnaG蛋白作为所述蛋白质(A1)，则可以进行例如间接胆红素的检测。
smURFP为small ultra red fluorescent protein(小超红蛋白)的简称，为与作为血红蛋白的代谢物的胆绿素结合而显示红色的荧光性的蛋白质(Rodriguez et al.,Nature Methods,2016,13,763-769)。
IFP为infrared-fluorescent protein(红外荧光蛋白)的简称，为与胆绿素结合而显示红色的荧光性的蛋白质(Shu X,et al.,Science 2009,324(5928),804-8-7)。
iRFP为near-infrared fluorescent protein(近红外荧光蛋白)的简称，为与胆绿素结合而显示红色的荧光性的蛋白质(Filonov GS,et al.,Nat Biotech 2011,29(8),757-761)。
如果使用这些smURFP、IFP、或iRFP作为所述蛋白质(A1)，则可以进行例如胆绿素的检测。
作为所述蛋白质(A1)，可以为UnaG蛋白或smURFP、IFP、或iRFP的变异体。作为UnaG蛋白或smURFP、IFP、或iRFP的变异体，可以在能够维持当结合作为配体的胆红素或胆绿素而成为全蛋白则有荧光性的特性的范围内发生缺失、附加、置换等变异。作为变异的氨基酸的数量，没有特别限制，在一个或多个实施方式中，可举出1～4、1～3、1～2、或1个，或者可举出显示至少90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、或99.5％以上的同源性的氨基酸序列的范围。作为变异的非限定性的实例，可举出融合蛋白(C)中的与蛋白质(B)的融合部分(C末端或N末端)的缺失。
可结合作为自体荧光分子的生物体物质的蛋白质(A2)是指通过结合该自体荧光分子而有荧光性的蛋白质。作为所述自体荧光分子，可举出黄素单核苷酸(FMN)。作为可结合自体荧光分子(FMN)的蛋白质(A2)，在一个或多个实施方式中，可举出FbFP、iLOV蛋白、及mini-SOG蛋白。
FbFP为Flavin mononucleotide(FMN)-based fluorescent protein(黄素单核苷酸基荧光蛋白)的简称，为源自细菌的青色受体的荧光蛋白(Drepper T.,et al.,NatBiotech.2007,25(4)443-445)。
iLOV蛋白为改变源自植物青色受体向光素的light,oxygen or voltage-sensing(LOV，光-氧-电感受)结构域的荧光蛋白而荧光特性得以改善的蛋白质(Chapman S.,etal.,PNAS 2008,105(50)20038-43)。
mini-SOG蛋白为mini Singlet Oxygen Generator(迷你单线态氧发生器)的简称，为源自拟南芥(Arabidopsis)的向光素2的荧光蛋白(Shu X.,et al.,PLoS Biol.2011,9(4))。
所述蛋白质(A2)可以是在可结合所述自体荧光分子的范围内发生了缺失、附加、或置换等变异的变异体。作为变异的氨基酸的数量，可举出上述的范围。
[化学发光蛋白质(B)]
化学发光蛋白质(B)可以利用其发光能量激发蛋白质(A)的荧光或自体荧光。使用融合这种化学发光蛋白质(B)而成的融合蛋白(C)作为检测试剂，因此，根据本公开的检测方法，可以不使用用于观察的激发光源而进行生物体物质的定量测定。作为化学发光蛋白质(B)，可举出可成为可以利用共振能量转移激发所述蛋白质(A)的荧光的共振能量转移的供体的发光蛋白质(荧光素酶)。从可以根据发光色判定检测方面考虑，优选所述蛋白质(A)的发光色与所述蛋白质(B)的发光色不同。
已知所述共振能量转移为荧光共振能量转移(FRET)或生物发光共振能量转移(BRET)。该蛋白质(B)可以根据所述蛋白质(A1)的吸收波长、或结合于所述蛋白质(A2)的自体荧光分子的吸收波长而选择。作为该蛋白质(B)，可举出公知的发光蛋白质、例如萤火虫荧光素酶、水母发光蛋白、细菌荧光素酶、及它们的变异体。
所述蛋白质(A)为UnaG的情况下，作为所述蛋白质(B)，在一个或多个实施方式中，可举出以腔肠素化合物为发光底物的荧光素酶。作为该荧光素酶的一个或多个实施方式，可举出NLuc。
所述蛋白质(B)可以为公知的荧光素酶的变异体。作为荧光素酶的变异体，可以在能够维持通过结合荧光素而发光的特性的范围内发生缺失、附加、置换等变异。作为变异的氨基酸的数量，没有特别限制，在一个或多个实施方式中，可举出1～4、1～3、1～2、或1个，或者可举出显示至少90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、或99.5％以上的同源性的氨基酸序列的范围。作为变异的非限定性的实例，可举出蛋白质(C)中的与蛋白质(A)的融合部分(C末端或N末端)的缺失。
[接头]
在所述融合蛋白(C)中，所述蛋白质(A)与所述蛋白质(B)可以通过接头结合。该接头可以以从所述蛋白质(B)向所述蛋白质(A)的共振能量转移的效率升高的方式选择。作为该接头的长度，在一个或多个实施方式中，可举出1～10、1～5、2～4或2～3氨基酸残基。
所述蛋白质(A)为UnaG的情况下，作为接头，在一个或多个实施方式中，可举出GT、DD、GTG、或GTGG等，这些接头中，从发光效率方面考虑，优选DD、GTG、或GTGG，更优选GTG。
所述融合蛋白(C)中的所述蛋白质(A)与所述蛋白质(B)的融合的顺序没有特别限定，N末侧可以为所述蛋白质(A)，也可以为所述蛋白质(B)。所述融合蛋白(C)在一个或多个实施方式中可以在N末端或C末端融合标签蛋白。
由于所述融合蛋白(C)具备上述的构成，因此，在作为所述蛋白质(A)的底物的生物体物质和作为所述蛋白质(B)的底物的荧光素同时存在的情况下，显示所述蛋白质(A)的发光色的倾向，作为所述蛋白质(A)的底物的生物体物质的量越少，所述蛋白质(B)的发光色的倾向越强。因此，如果使用所述融合蛋白(C)，则可以进行生物体物质的检测/测定。
在一个或多个实施方式中，本公开的设备可以也称为用于分析特定的检测对象的分析用设备或芯片。在一个或多个实施方式中，在分析物质为生物体物质的情况下，本公开的设备可以也称为生物设备或生物芯片。
作为本公开的设备的分析物质，没有特别限定，在一个或多个实施方式中，可举出：生物体试样中的生物体物质、食品中的过敏原或有害物质、河川水或海水等自然环境中的污染物质或有害物质、或病原菌等。作为试样，在一个或多个实施方式中，可举出生物体试样、食品等。
作为生物体试样，为含有源自生物的该生物体物质的试样，优选为液体状。作为这种生物体试样，没有特别限制，可举出例如：全血、血清、血浆、及尿等体液试样。另外，本公开中的生物体试样可以根据需要进行稀释和/或前处理等。本公开的检测方法当然可以将上述“生物体试样”以外的试样设为测定对象。可举出例如作为分析物质的生物体物质的标准试样、即用于测定的对照试样。
作为生物体物质，在一个或多个实施方式中，可举出：生物体内的低分子化合物、分解代谢物、核酸、糖、肽、蛋白质、细胞、或微生物等。
[设备的制造方法]
在一个或多个实施方式中，本公开的制造方法为本公开的设备的制造方法。本公开的制造方法包含下述步骤：以独立配置化学发光指示剂和该化学发光指示剂的发光底物的方式在基材上图案化。
作为化学发光指示剂和发光底物的图案化，在一个或多个实施方式中可以如下进行：以当对配置有化学发光指示剂和发光底物的位置供给试样时、化学发光指示剂和发光底物可接触(混合)而产生发光信号的方式，将这些物质独立配置。
作为图案化的方法，在一个或多个实施方式中，可以通过将化学发光指示剂或发光底物的溶液以给定的图案形状配置并使其干燥而进行。在一个或多个实施方式中，图案化可以使用喷墨打印机等公知的技术而进行。
作为化学发光指示剂、发光底物、基材及图案化的形状等，与本公开的设备同样。
[检测方法]
在一个或多个实施方式中，本公开的检测方法为使用本公开的设备检测试样中的分析物质的方法。
在一个或多个实施方式中，本公开的检测方法包含下述步骤：对本公开的设备的试剂部供给试样、及检测通过供给试样而产生的发光信号。根据本公开的设备，不需要激发光，因此，在一个或多个实施方式中，发光信号的检测可以通过移动终端(智能手机等)及数码照相机等摄像手段而进行。
在一个或多个实施方式中，本公开的检测方法可以在室温或环境温度下进行。作为供给试样后至观察的时间，在一个或多个实施方式中，可举出数秒～数分钟左右、或数秒～1分钟左右。
作为本公开的检测方法的非限定性的一个或多个实施方式，以使用使可结合生物体物质的蛋白质(A)与化学发光蛋白质(B)融合成的融合蛋白(C)的方式为例进行说明。
在对配置有融合蛋白(C)和蛋白质(B)的底物的试剂部添加试样时，产生发光。以其发光信号为指标，可以判别结合于蛋白质(A)的生物体物质的有无。基本上，如果该生物体物质存在，则发光色成为蛋白质(A)的发光色，如果其不存在，则成为蛋白质(B)的发光色。
另外，在一个或多个实施方式中，本方式的检测方法中的、试样的发光色依赖于该生物体物质的浓度而变化。该生物体物质的浓度越提高，试样的发光色越从蛋白质(B)的发光色变化为蛋白质(A)的发光色。即，可以将发光信号中的蛋白质(A)和蛋白质(B)的发光强度比与生物体物质的浓度附加关联。
因此，根据本方式的检测方法，不管试样量如何，都可以由发光信号进行该生物体物质的定量性浓度测定。从可以进行定量测定方面考虑，与试样接触(混合)的融合蛋白(C)的摩尔浓度优选在Kd程度的浓度域。
在一个或多个实施方式中，本公开的检测方法可以包含由试样的发光信号定量地算出生物体物质的浓度的工序。
[判别方法]
在另一方式中，本公开涉及一种试样中的分析物质的浓度判别方法，其包含下述步骤：基于用本公开的检测方法得到的发光信号数据，判别试样中的分析物质的浓度。
如上所述，用本公开的检测方法得到的发光信号中的、蛋白质(A)和(B)的发光强度比可以依赖于试样中的生物体物质的浓度。因此，可以由检测中使用的融合蛋白(C)的信息和发光信号判别生物体物质的浓度。
所述发光信号数据可以用移动终端(智能手机等)的彩色照相机等彩色检测器简便地获取、接收发送，因此，可以简便地把握生物体物质的浓度。
[判定系统]
在另一方式中，本公开涉及一种使用有本公开的设备的判定系统(本公开的判定系统)。本公开的判定系统包含：摄像终端，检测通过对本公开的设备供给试样而发出的发光信号；和，信息处理单元，对摄像终端中得到的发光信号数据进行处理。在本公开的判定系统中，摄像终端和信息处理单元可以经由网络而双向通信。另外，本公开的判定系统可以进一步含有通信终端，其可经由网络与信息处理单元双向通信。
在一个或多个实施方式中，根据本公开的判定系统，可以不在特别的检查机构等中进行、另外不管位置如何、即使为远程也可以迅速且容易地得到专家的分析、判定或诊断结果。在一个或多个实施方式中，本公开的判定系统可以作为远程分析系统、远程判定系统或远程诊断系统利用。
在一个或多个实施方式中，作为摄像终端，可举出通用的图像读取装置等。作为图像读取装置，没有特别限定，在一个或多个实施方式中，可举出：智能手机或平板电脑终端等移动终端、数码照相机、及CCD照相机等。作为摄像终端，可以进行迅速的测定及判定结果的接收等，因此，在一个或多个实施方式中，可举出智能手机或平板电脑终端等移动终端。
在一个或多个实施方式中，发光信号的检测可以通过如下方法来进行：利用摄像终端摄像通过对本公开的设备供给试样而发出的发光信号。从提高测定精度方面考虑，在一个或多个实施方式中，发光信号的检测可以通过在摄像终端的照相机部分安装连接构件、在其上配置供给了试样的本公开的设备而进行。
在一个或多个实施方式中，所检测的发光信号可以利用检测发光信号的摄像终端发送到信息处理单元。在一个或多个实施方式中，向信息处理单元的发送可以通过摄像终端的应用而进行。另外，所检测的发光信号可以由与摄像终端不同的通信终端发送到信息处理单元。在一个或多个实施方式中，作为通信终端，可举出具有通信功能的个人计算机等。
在一个或多个实施方式中，信息处理单元蓄积有：对用于分析物质的化学发光指示剂的发光信号数据、与成为基准的发光信号数据建立关联的信息，可以基于这些和由摄像终端所检测的发光信号数据进行判定。在一个或多个实施方式中，信息处理单元包含下述步骤：将所发送的发光信号数据和成为基准的发光信号数据进行比较，将得到的诊断结果发送到摄像终端。
本公开进一步涉及以下的非限定性的一个或多个实施方式。
[1]一种设备，其具有：配置有化学发光指示剂及所述指示剂的发光底物的试剂部、和
形成有所述试剂部的基材，
所述化学发光指示剂及所述底物独立配置在所述试剂部。
[2]根据[1]所述的设备，其中，以在对所述试剂部供给试样时所述化学发光指示剂和所述底物可进行反应的方式，配置所述化学发光指示剂及所述底物。
[3]根据[2]所述的设备，其中，所述化学发光指示剂为融合蛋白(C)，所述融合蛋白(C)是使可结合所述试样中的分析物质的蛋白质(A)与化学发光蛋白质(B)融合成的，
所述蛋白质(A)与所述蛋白质(B)以可进行共振能量转移的方式连接。
[4]根据[3]所述的设备，其中，所述底物为化学发光蛋白质(B)的底物。
[5]根据[3]或[4]所述的设备，其中，所述蛋白质(A)为在结合有所述分析物质的状态下可发出荧光的蛋白质(A1)、或可结合作为自体荧光分子的分析物质的蛋白质(A2)，
所述蛋白质(B)可以利用其发光能量激发所述蛋白质(A)的荧光或自体荧光。
[6]一种判定系统，其含有：摄像终端，其检测通过对[1]～[5]中任一项所述的设备供给试样而发出的发光信号；和
信息处理单元，其对用所述摄像终端得到的发光信号数据进行处理，
所述摄像终端和所述信息处理单元可以经由网络而双向通信。
[7]一种设备的制造方法，其包含下述步骤：以独立配置化学发光指示剂和所述指示剂的发光底物的方式，将这些物质在基材上图案化。
以下，通过实施例进一步详细地说明本公开，但这些实施例为例示的，本公开并不限于这些实施例。
实施例
[实验例]
1.融合蛋白(化学发光指示剂)的基因构建
使用在N末端附加有BamHI限制酶部位、在C末端附加有KpnI限制酶部位的以下的引物将野生型UnaG的C末缺损变异体进行扩增。
Forward primer:CGCGGATCCGGGTGGTTCTGGTATGG序列号1
Reverse primer0:(CΔ0)GCTGGTACCTTCCGTCGCCCTCCG序列号2
Reverse primer1:(CΔ1)GCTGGTACCCGTCGCCCTCCGGTA序列号3
Reverse primer2:(CΔ2)GCTGGTACCCGCCCTCCGGTAGCT序列号4
Reverse primer3:(CΔ3)GCTGGTACCCCTCCGGTAGCTGCG序列号5
Reverse primer4:(CΔ4)GCTGGTACCCCGGTAGCTGCGCAC序列号6
使用在N末端附加有KpnI限制酶部位、在C末端附加有EcoRI限制酶部位的以下的引物将野生型NLuc的N末端缺损变异体进行扩增。
Forward primer 1:(NΔ1)GCCGGTACCGTCTTCACACTCGAAGATTTCG序列号7
Forward primer 2:(NΔ4)GCCGGTACCCTCGAAGATTTCGTTGGGGAC序列号8
Forward primer 3:(NΔ5)GCCGGTACCGAAGATTTCGTTGGGGACTGGC序列号9
Reverse primer:ATGAATTCTTACGCCAGAATGCGTTCGCACAG序列号10
将聚合酶链反应(PCR)中扩增的DNA片段利用苯酚·氯仿法提取。UnaG的DNA片段利用BamHI及KpnI进行限制酶处理。NLuc的DNA片段用KpnI及EcoRI进行限制酶处理。琼脂糖凝胶电泳后，从凝胶将带切出之后进行纯化(QIAEX2,QIAGEN)。将纯化的各片段和利用BamHI、EcoRI进行了限制酶处理的pRSETB载体连接，转化JM109(DE3)株之后，在于10cm培养皿制作的LB琼脂培养基上在37℃下培养一夜。
2.筛选
将菌落生长的琼脂培养基置于室温，加入冷却至室温附近的在1％低熔点琼脂糖凝胶中加入有最终浓度10μM的胆红素的溶液4mL，注入于琼脂培养基上，在室温下固化。接着，从凝胶上加入10μM腔肠素-h溶液，立即利用设置于暗箱的一眼反射式相机(Sonyα7)拍摄，取得菌落的彩色图像。由RGB图像的绿通道(UnaG的发光)和蓝通道(NLuc的发光)图像制作比率图像，拾起比率值高的菌落。接着，将拾起的菌落在96孔板上、在LB培养基+10μM胆红素+100μg/mL氨苄青霉素中在23℃下培养60小时。在培养液中加入10μM腔肠素，利用荧光分光光度计(FV7000)或酶标仪测量化学发光光谱。以波长450nm标准化，以波长525nm的相对值(比率值)为基础进行筛选。
筛选使C末端缺损变异体UnaG和N末端缺损变异体NLuc在KpnI位点融合的蛋白质。结果，UnaG(CΔ0)和NLuc(NΔ1)的组合(以下，称为"UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白"。)显示最大的荧光共振能量转移(FRET)效率(图2)。该UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白的碱基序列为序列号11，氨基酸序列为序列号12。
3.融合蛋白的接头序列的最佳化
将作为UnaG和NLuc的接头的序列的2残基(GT)利用反向PCR法置换为随机的序列。使用以下的引物。
Forward primer:NNKNNKGTCTTCACACTCGAAGATTTC序列号13
Reverse primer:TTCCGTCGCCCTCCGGTAGCTG序列号14
将含有载体序列的全长扩增后，通过用限制酶DpnI进行处理而将模板质粒进行处理，连接后，转化JM109(DE3)株，在于10cm培养皿制作的LB琼脂培养基上在37℃下培养一夜。用上述2中记述的方法筛选表达的菌落。
4.向融合蛋白的接头序列的插入
在UnaG和NLuc的接头的序列(GT)后，利用反向PCR法插入接头序列。使用以下的引物。
Forward primer(G):GGCGTCTTCACACTCGAAGATTTC序列号15
Forward primer(GG):GGCGGCGTCTTCACACTCGAAGATTTC序列号16
Forward primer(GGS):GGCGGCAGCGTCTTCACACTCGAAGATTTC序列号17
Reverse primer:GGTACCTTCCGTCGCCCTC序列号18
将含有载体序列的全长通过PCR扩增后，通过用限制酶DpnI进行处理而将模板质粒进行处理，连接后，转化JM109(DE3)株，在于10cm培养皿制作的LB琼脂培养基上在37℃下培养一夜。用上述2中记述的方法筛选表达的菌落。
通过利用随机变异插入进行的接头序列最佳化，与野生型的接头序列(GT)相比，(DD)序列显示大的FRET效率的变化(图3)。进而，研究追加有挠性接头的化学发光胆红素指示剂的FRET效率，结果，(GTG)序列显示最大的FRET效率。
5.蛋白质的纯化
将转化到J JM109(DE3)株中的UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白在200mL的LB培养基+100μg/mL羧苄青霉素(原文：Carvenisillin)溶液中、在23℃下培养60小时。集菌后，利用弗氏压碎法将大肠杆菌破碎，利用使用有Ni-NTA柱(QIAGEN)的亲和性色谱法进行纯化。进而，为了除去过量的咪唑，使用凝胶过滤柱(PD-10,GE HealthCare)。利用Bradford法测量蛋白质浓度。
6.冷冻干燥试样的制作
将纯化的UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白500μL放入于15mL falcon管，利用液氮使其冻结。其后，利用冷冻干燥装置，得到蛋白质溶液的粉末。粉末在室温下保存。
7.滴定曲线的测量
相对于最终浓度5nM的UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白混合0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、2.5nM、5nM或10nM的胆红素溶液及最终浓度5μM腔肠素-h，利用多通道分光器(PMA-12,浜松光电制)或酶标仪测量发光光谱。将其结果的一例示于图4。标绘3次独立的测量的平均值，利用希尔公式进行拟合。Kd值为3.05nM。
另外，冷冻干燥试样制作后，为了研究保持怎样的程度的期间活性，在室温下保存每隔数日将冷冻干燥试样溶解于水而形成的溶液，利用上述7中记述的方法测量胆红素的亲和性。其结果得知：虽然亲和性稍有偏差，但是，保持活性(图5)。
8.利用智能手机的测定
在96孔多孔板上将最终浓度10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、100nM或250nM的胆红素溶液及最终浓度5μM腔肠素-h与最终浓度50nM的融合蛋白进行混合，使用搭载于iPhone(注册商标)6的应用(Manual -Custom exposure camera)，利用ISO1500、曝光时间0.5秒进行测量。
对在多孔板上制作的融合蛋白及各种各样的浓度的胆红素溶液进行彩色拍摄的结果，成功地测量到溶液由于胆红素浓度依赖而从蓝色变化为绿色的情形(图6)。如图6所示，胆红素为0nM时为化学发光蛋白质的发光色(青色)。随着胆红素浓度增加，变化为UnaG的发光色(绿色)。使用RGB说明颜色的变化的情形的一例时，发光色变化为0nM(56,133,204)、10nM(79,157,215)、20nM(96,169,209)、30nM(101,164,194)、40nM(119,179,189)、50nM(123,169.156)、100nM(154,187,111)、250nM(158,191,107)。
如果存在图6那样的相关，则可以由发光数据(发光色)算出胆红素浓度。
[实施例1]
使用上述的UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白制作设备，使用其进行试样中的胆红素的测定。
＜设备的制造方法＞
使用下述的化学发光指示剂及发光底物制造设备。
化学发光指示剂：67.6μM UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白
发光底物：150nM腔肠素-h
使用Certus liquid dispenser(Gyger社制)的1,536多孔图案功能，对化学发光指示剂及发光底物，分别将30nL的小滴在盖玻片或保鲜膜上以成为如图1A那样的格子状的方式图案化。液滴(径1～2mm)的间隔(邻接的液滴的中心与中心的距离)设为2mm。
＜胆红素的测定＞
在暗室中，将100nM的胆红素溶液5μL或磷酸缓冲液(PBS)(无胆红素)5μL滴加在设备上，将化学发光信号用彩色照相机(α7,Sony制)、以ISO25600、0.5秒曝光时间进行摄像。进而，在智能手机(iPhone(注册商标)6，Apple制)的照相机中，也通过ISO1500、0.5秒曝光而摄像。将其结果示于图7的A及B。
图7的A是用彩色照相机拍摄的化学发光像，图7的B是用智能手机的照相机拍摄的化学发光像。如图7的A及B所示，在滴加有胆红素溶液的部分和滴加有磷酸缓冲液(无胆红素)的部分发光色不同。另外，其发光数据(发光色)的倾向也与图6同样。
由此判断：基于图6那样的相关数据，可以由使用本公开的设备得到的发光数据(发光色)算出溶液的胆红素浓度。
[实施例2]
相对于一定浓度的胆红素·发光底物(腔肠素-h)溶液，将原液、2倍稀释、4倍稀释或8倍稀释的UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白溶液进行混合，利用多通道分光器(PMA-12，浜松光电制)测量发光光谱，由得到的发光强度算出UnaG的发光波长(530nm)的发光强度和NLuc的发光波长(460nm)的发光强度的比率值(530nm/460nm)。将其结果的一例示于图8。图8中，图8的A表示化学发光光谱，图8的B是表示UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白溶液(检测试剂)的稀释率和比率值(530nm/460nm)的关系的坐标图。
[比较例1]
在96孔板(黑色)上加入UnaG蛋白溶液(8.25nM，16.5nM，31.5nM，62.5nM，125nM或250nM)各50μL，接着加入400nM胆红素溶液各50μL。使用酶标仪(SH-9000，corona社制)照射450nm的波长的激发光之后，取得荧光光谱。将其结果的一例示于图9。图9中，图9的A是表示荧光光谱的坐标图，图9的B是表示UnaG蛋白溶液(检测试剂)的浓度和UnaG的发光波长(530nm)的荧光强度的关系的坐标图。
比较例1中，如图9的A及B所示，虽然作为检测对象的胆红素的浓度相同，但是，荧光强度因检测试剂的浓度而变化。即，可以说比较例1(使用有UnaG蛋白的方法)不能进行定量的测量。
与此相对，使用UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白进行测量的实施例2中，虽然发光强度因检测试剂的浓度而不同，但是，光谱的波形一定(如图8的A)，如图8的B所示，不管检测试剂的浓度，相对于相同的胆红素浓度的峰值比率值(530nm/460nm)大致相同。因此，可以说，通过使用UnaG(CΔ0)-NLuc(NΔ1)融合蛋白，可以进行与检测试剂的浓度无关的测定、即定量的测量。
序列表自由文本
序列号1：正向引物
序列号2：反向引物
序列号3：反向引物
序列号4：反向引物
序列号5：反向引物
序列号6：反向引物
序列号7：正向引物
序列号8：正向引物
序列号9：正向引物
序列号10：反向引物
序列号11：UnaG(C 0)-NLuc(N 1)融合蛋白的碱基序列
序列号12：UnaG(C 0)-NLuc(N 1)融合蛋白的氨基酸序列
序列号13：正向引物
序列号14：反向引物
序列号15：正向引物
序列号16：正向引物
序列号17：正向引物
序列号18：反向引物
序列表
<110> 国立大学法人大阪大学（Osaka University）
<120> 设备
<130> H4538
<150> 2017-18773
<151> 2017-02-03
<160> 18
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物
<400> 1
cgcggatccg ggtggttctg gtatgg 26
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物0
<400> 2
gctggtacct tccgtcgccc tccg 24
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物1
<400> 3
gctggtaccc gtcgccctcc ggta 24
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物2
<400> 4
gctggtaccc gccctccggt agct 24
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物3
<400> 5
gctggtaccc ctccggtagc tgcg 24
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物4
<400> 6
gctggtaccc cggtagctgc gcac 24
<210> 7
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物 1
<400> 7
gccggtaccg tcttcacact cgaagatttc g 31
<210> 8
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物 2
<400> 8
gccggtaccc tcgaagattt cgttggggac 30
<210> 9
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物 3
<400> 9
gccggtaccg aagatttcgt tggggactgg c 31
<210> 10
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物
<400> 10
atgaattctt acgccagaat gcgttcgcac ag 32
<210> 11
<211> 948
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> UnaG(C 0)-NLuc(N 1)
<400> 11
ggtggttctg gtatggtcga gaaatttgtt ggcacctgga agatcgcaga cagccataat 60
tttggtgaat acctgaaagc tatcggagcc ccaaaggaat taagcgatgg tggggatgcc 120
acgacgccga cattgtacat ctcccagaag gacggagaca aaatgacagt gaaaatagag 180
aatggacctc ctacgttcct tgacactcaa gtaaagttca aattagggga ggagttcgac 240
gaatttcctt ctgatcgaag aaaaggcgta aaatctgtcg tgaacttggt gggagagaag 300
ctggtgtacg tacaaaagtg ggacggcaag gagacgacgt atgtccgaga gataaaggac 360
ggtaaactgg tcgtgacact tacgatggga gacgtcgtgg ctgtgcgcag ctaccggagg 420
gcgacggaag gtaccgtctt cacactcgaa gatttcgttg gggactggcg acagacagcc 480
ggctacaacc tggaccaagt ccttgaacag ggaggtgtgt ccagtttgtt tcagaatctc 540
ggggtgtccg taactccgat ccaaaggatt gtcctgagcg gtgaaaatgg gctgaagatc 600
gacatccatg tcatcatccc gtatgaaggt ctgagcggcg accaaatggg ccagatcgaa 660
aaaattttta aggtggtgta ccctgtggat gatcatcact ttaaggtgat cctgcactat 720
ggcacactgg taatcgacgg ggttacgccg aacatgatcg actatttcgg acggccgtat 780
gaaggcatcg ccgtgttcga cggcaaaaag atcactgtaa cagggaccct gtggaacggc 840
aacaaaatta tcgacgagcg cctgatcaac cccgacggct ccctgctgtt ccgagtaacc 900
atcaacggag tgaccggctg gcggctgtgc gaacgcattc tggcgtaa 948
<210> 12
<211> 313
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> UnaG(C 0)-NLuc(N 1)
<400> 12
Gly Gly Ser Gly Met Val Glu Lys Phe Val Gly Thr Trp Lys Ile Ala
1 5 10 15
Asp Ser His Asn Phe Gly Glu Tyr Leu Lys Ala Ile Gly Ala Pro Lys
20 25 30
Glu Leu Ser Asp Gly Gly Asp Ala Thr Thr Pro Thr Leu Tyr Ile Ser
35 40 45
Gln Lys Asp Gly Asp Lys Met Thr Val Lys Ile Glu Asn Gly Pro Pro
50 55 60
Thr Phe Leu Asp Thr Gln Val Lys Phe Lys Leu Gly Glu Glu Phe Asp
65 70 75 80
Glu Phe Pro Ser Asp Arg Arg Lys Gly Val Lys Ser Val Val Asn Leu
85 90 95
Val Gly Glu Lys Tyr Val Gln Lys Trp Asp Gly Lys Glu Thr Thr Tyr
100 105 110
Val Arg Glu Ile Lys Asp Gly Lys Leu Val Val Thr Leu Thr Met Gly
115 120 125
Asp Val Val Ala Val Arg Ser Tyr Arg Arg Ala Thr Glu Gly Thr Val
130 135 140
Phe Thr Leu Glu Asp Phe Val Gly Asp Trp Arg Gln Thr Ala Gly Tyr
145 150 155 160
Asn Leu Asp Gln Val Leu Glu Gln Gly Gly Val Ser Ser Leu Phe Gln
165 170 175
Asn Leu Gly Val Ser Val Thr Pro Ile Gln Arg Ile Val Leu Ser Gly
180 185 190
Glu Asn Gly Leu Lys Ile Asp Ile His Val Ile Ile Pro Tyr Glu Gly
195 200 205
Leu Ser Gly Asp Gln Met Gly Gln Ile Glu Lys Ile Phe Lys Val Val
210 215 220
Tyr Pro Val Asp Asp His His Phe Lys Val Ile Leu His Tyr Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Ile Asp Gly Val Thr Pro Asn Met Ile Asp Tyr Phe Gly Arg
245 250 255
Pro Tyr Glu Gly Ile Ala Val Phe Asp Gly Lys Lys Ile Thr Val Thr
260 265 270
Gly Thr Leu Trp Asn Gly Asn Lys Ile Ile Asp Glu Arg Leu Ile Asn
275 280 285
Pro Asp Gly Ser Leu Leu Phe Arg Val Thr Ile Asn Gly Val Thr Gly
290 295 300
Trp Arg Leu Cys Glu Arg Ile Leu Ala
305 310
<210> 13
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> n 为a, c, g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> k 为 g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(5)
<223> n为a, c, g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> k为 g或t
<400> 13
nnknnkgtct tcacactcga agatttc 27
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物
<400> 14
ttccgtcgcc ctccggtagc tg 22
<210> 15
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物
<400> 15
ggcgtcttca cactcgaaga tttc 24
<210> 16
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物
<400> 16
ggcggcgtct tcacactcga agatttc 27
<210> 17
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物
<400> 17
ggcggcagcg tcttcacact cgaagatttc 30
<210> 18
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物
<400> 18
ggtaccttcc gtcgccctc 19

Claims (7)

1.一种设备，其具有：
配置有化学发光指示剂及所述指示剂的发光底物的试剂部、和
形成有所述试剂部的基材，
所述化学发光指示剂及所述底物独立配置在所述试剂部。
2.根据权利要求1所述的设备，其中，
以在对所述试剂部供给试样时所述化学发光指示剂和所述底物可进行反应的方式，配置所述化学发光指示剂及所述底物。
3.根据权利要求2所述的设备，其中，
所述化学发光指示剂为融合蛋白(C)，所述融合蛋白(C)是使可结合所述试样中的分析物质的蛋白质(A)与化学发光蛋白质(B)融合成的，
所述蛋白质(A)和所述蛋白质(B)以可进行共振能量转移的方式连接。
4.根据权利要求3所述的设备，其中，
所述底物为所述蛋白质(B)的底物。
5.根据权利要求3或4所述的设备，其中，
所述蛋白质(A)为在结合有所述分析物质的状态下可发出荧光的蛋白质(A1)、或可结合作为自体荧光分子的分析物质的蛋白质(A2)，
所述蛋白质(B)可以利用其发光能量激发所述蛋白质(A)的荧光或自体荧光。
6.一种判定系统，其含有：摄像终端，其检测通过对权利要求1～5中任一项所述的设备供给试样而发出的发光信号；和
信息处理单元，其对用所述摄像终端得到的发光信号数据进行处理，
所述摄像终端和所述信息处理单元可以经由网络而双向通信。
7.一种设备的制造方法，其包含下述步骤：
以独立配置化学发光指示剂和所述指示剂的发光底物的方式，将这些物质在基材上图案化。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113219033A (zh) * 2021-04-30 2021-08-06 福州大学 一种电化学适配体传感器的免校正定量测量方法

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3845902B1 (en) * 2017-06-23 2022-09-14 NanoTemper Technologies GmbH Methods for measuring inter- and/or intra-molecular interactions

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62103542A (ja) * 1985-07-22 1987-05-14 Fuji Photo Film Co Ltd 一体型多層分析要素
JPH0698030B2 (ja) 1987-01-08 1994-12-07 東洋紡績株式会社 Ｎａｄｐｈの化学発光法による定量法
JPH03282257A (ja) 1990-03-30 1991-12-12 Konica Corp 化学発光試薬及びそれを使用する分析素子
CA2130947C (en) * 1993-11-12 2001-02-06 Robert E. Emmons Dry elements, test devices, test kits and methods for chemiluminescent detection of analytes using peroxidase-labeled reagents
EP0675362B1 (en) 1994-03-30 2000-09-27 Johnson &amp; Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Minimizing interferences in chemiluminescent thin-film immunoassays
AU7736796A (en) 1995-11-17 1997-06-11 Universal Health-Watch, Inc. Chemiluminescent assay methods and devices for detecting target analytes
JP2000074837A (ja) 1998-08-31 2000-03-14 Fuji Photo Film Co Ltd 撮影装置
JP3871846B2 (ja) 2000-03-10 2007-01-24 日立ソフトウエアエンジニアリング株式会社 ハイブリダイゼーション反応検出方法及び検出装置
CA2634522C (en) 2005-12-21 2015-09-29 Meso Scale Technologies, Llc Assay modules having assay reagents and methods of making and using same
JP5845156B2 (ja) 2005-12-21 2016-01-20 メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法
JP4618325B2 (ja) * 2008-04-28 2011-01-26 ソニー株式会社 情報処理装置及び情報処理方法並びにプログラム
JP5518450B2 (ja) 2008-12-04 2014-06-11 富士フイルム株式会社 断片化抗体固定化担体及びその製造方法
JP2013120120A (ja) 2011-12-07 2013-06-17 Konica Minolta Medical & Graphic Inc ラテラルフロー型クロマト法用テストストリップ、およびそれを用いたアナライトの検出または定量方法
US10067149B2 (en) * 2012-12-12 2018-09-04 Promega Corporation Recognition of cellular target binding by a bioactive agent using intracellular bioluminescence resonance energy transfer
JP6751294B2 (ja) 2012-12-12 2020-09-02 プロメガ コーポレイションＰｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 細胞内生体発光共鳴エネルギ移動を用いた生物活性剤による細胞ターゲット結合の認知
US10040992B2 (en) 2013-05-10 2018-08-07 Luminescent MD, LLC Guanine chemiluminescence compound and applications
CA2918426C (en) * 2013-07-18 2021-10-19 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Means and methods for bioluminescence resonance energy transfer (bret) analysis in a biological sample
EP3191600A1 (en) * 2014-09-11 2017-07-19 Promega Corporation Luciferase sequences utilizing infrared-emitting substrates to produce enhanced luminescence
EP3575779A4 (en) 2017-01-27 2019-12-04 Osaka University METHOD FOR DETECTION OF BIOLOGICAL MATERIAL, AND CHEMILUMINESCENT INDICATOR USED IN THE METHOD

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113219033A (zh) * 2021-04-30 2021-08-06 福州大学 一种电化学适配体传感器的免校正定量测量方法

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