CN110220932B - 一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在uva辐照过程中品质变化的方法 - Google Patents
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在uva辐照过程中品质变化的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法。包括步骤：S1、取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂a‑(4‑吡啶基‑1‑氧)‑N‑叔丁基硝基酮，终浓度为20～50mM；S2、将步骤S1所得混合样品进行UVA照射；S3、将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测。本发明应用ESR技术检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中氧化物质的生成，为肌原纤维蛋白加工过程中的品质检测提供更快速、准确的方法及明确的规范。
Description
技术领域
本发明属于食品质量检测技术领域，尤其涉及一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法。
背景技术
褐藻多酚(Phlorotannin)是从褐藻中提取出的一类酚类化合物，是间苯三酚衍生物，其具有抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、免疫、清除自由基等生物活性。但是，目前工业上对褐藻的利用主要是从中提取褐藻胶、碘、甘露醇及氯化钾，很少涉及到褐藻多酚的提取及利用。
辐照技术已被越来越多的国家应用于食品保鲜、质量和安全控制及品质提高等领域。UVA波段是紫外线波长划分的一部分，波长320～420nm。通过紫外 (UVA)照射促进自由基的形成，可导致褐藻多酚产生的自由基大量积累，造成多酚氧化和抗氧化的失衡，使之更倾向于氧化。
常用化学方法来进行蛋白、脂质的氧化程度的检测，如采用硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化的终产物之一丙二醛的含量来评价脂质的过氧化程度。但现有的技术存在灵敏度和精确度不高的问题，同时脂质过氧化其终产物比较复杂，除了丙二醛以外还有其他的醛类产物，会干扰测定结果的准确度和精度。
电子自旋共振波谱(electron spin resonance,ESR)法是一种根据电子自旋共振波谱吸收程度，检测组织、细胞、溶液中自由基的有效方法。对于自由基的检测可采用自旋捕获的方法，较为准确地检测不同种类自由基。捕获剂POBN 与经过UVA诱导后的褐藻多酚所产生的自由基反应，形成的产物具有相对较长的寿命而且有特征的ESR波谱，可以方便地通过ESR波谱仪进行检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，用于较为准确、快速地检测不同种类自由基。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮(POBN)，得混合样品；所述POBN的终浓度为 20～50mM；
S2、将步骤S1所述混合样品进行UVA照射；
S3、将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3450～3490G；扫描宽度：55～105G；频率：9.00～10.00GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：8.00～10.00mW；接收增益： 1.00×105～1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4000.00～6000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec。
优选方式下，步骤S1所述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法为：取肌原纤维蛋白溶于pH6、25mM磷酸盐缓冲液中，配置成浓度为 35～70mg/mL的肌原纤维蛋白溶液，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入褐藻多酚，得含有多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；所述褐藻多酚的添加量为：以肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的含量为基准，每克肌原纤维蛋白添加20～700μmol 褐藻多酚；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。
优选方式下，步骤S2所述UVA照射的条件为：4℃、照射强度5-10W/m2、照射时间1～4h、接受照射混合样品溶液高度为1mm～10mm。
上述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法，优选方式下，所述肌原纤维蛋白为鱼肌原纤维蛋白。
上述鱼肌原纤维蛋白，优选方式下，所述鱼肌原纤维蛋白为马鲛鱼肌原纤维蛋白、罗非鱼肌原纤维蛋白或草鱼肌原纤维蛋白。
上述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法，优选方式下，所述褐藻多酚为海带多酚或裙带菜孢子叶多酚。
最优方式下，所述快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液，制备成浓度为50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加625μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的浓度为40mM，得混合样品；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl；
S2、将步骤S1所得混合样品4℃条件下进行UVA照射；其中，所述UVA 照射处理时间为1h，照射强度选择10W/m2，液面高度5mm；
S3、用毛细管吸取步骤S2接受UVA照射后的混合样品溶液，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：9.66mW；接收增益：1.00×105；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：360.00msec。
本发明的有益效果是：
本发明是应用ESR技术，通过监测自由基信号的产生以确定含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中氧化物质的生成，从而反映肌原纤维蛋白在加工过程中的品质变化。本发明为肌原纤维蛋白加工过程中的品质检测提供更快速、准确的方法及明确的规范。
附图说明
图1为本发明实施例1的ESR谱图。
图2为本发明实施例2的ESR谱图。
图3为本发明实施例3的ESR谱图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式进行更加详细的说明，以便能够更好地理解本发明的方案以及其各个方面的优点。然而，以下描述的具体实施方式和实施例仅是说明的目的，而不是对本发明的限制。
本发明提供了一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法。其中，包括取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂POBN，得混合样品；所述POBN的添加量终浓度为20～50mM；所述POBN为a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮；将步骤S1所述混合样品进行 UVA照射；将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3450～3490G；扫描宽度：55～105G；频率：9.00～10.00GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：8.00～10.00mW；接收增益：1.00×105～1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4000.00～6000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec。
在一种实施方案中，所述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法为：取肌原纤维蛋白溶于25mM磷酸盐缓冲液中，配置成浓度为35～70mg/mL 的肌原纤维蛋白，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入褐藻多酚，得含有多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；所述褐藻多酚的添加量为：以肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的含量为基准，每克肌原纤维蛋白添加20～700μmol褐藻多酚；所述 25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。
在一种实施方案中，所述UVA照射的条件为：4℃、照射强度5-10W/m2、照射时间1～4h、接受照射的混合样品高度为1mm～10mm。
在一种实施方案中，肌原纤维蛋白为鱼肌原纤维蛋白。
在一种实施方案中，所述鱼肌原纤维蛋白为马鲛鱼肌原纤维蛋白、罗非鱼肌原纤维蛋白或草鱼肌原纤维蛋白。
在一种实施方案中，所述褐藻多酚为海带多酚或裙带菜孢子叶多酚。
一种快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂POBN，得混合样品；所述POBN的添加量终浓度为20～50mM；所述POBN为a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮；
S2、将步骤S1所述混合样品进行UVA照射；
S3、将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3450～3490G；扫描宽度：55～105G；频率：9.00～10.00GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：8.00～10.00mW；接收增益： 1.00×105～1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4000.00～6000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec。
优选方式下，步骤S1所述所述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法为：取肌原纤维蛋白溶于25mM磷酸盐缓冲液中，配置成浓度为 35～70mg/mL的肌原纤维蛋白，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入褐藻多酚，得含有多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；所述褐藻多酚的添加量为：以肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的含量为基准，每克肌原纤维蛋白添加20～700μmol褐藻多酚；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl。
优选方式下，步骤S2所述UVA照射的条件为：4℃、照射强度5-10W/m2、照射时间1～4h、接受照射的混合样品高度为1mm～10mm。
优选方式下，所述肌原纤维蛋白为鱼肌原纤维蛋白。
优选方式下，所述鱼肌原纤维蛋白为马鲛鱼肌原纤维蛋白、罗非鱼肌原纤维蛋白或草鱼肌原纤维蛋白。
优选方式下，所述褐藻多酚为海带多酚或裙带菜孢子叶多酚。
最优方式下，一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，溶于25mM磷酸盐缓冲液，制备成浓度为50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加625μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的浓度为40mM，得混合样品；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6M NaCl；
S2、将步骤S1所得混合样品4℃条件下进行UVA照射；其中，所述UVA 照射处理时间为1h，照射强度选择10W/m2，液面高度5mm；
S3、将步骤S2所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：9.66mW；接收增益：1.00×105；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：360.00msec。
其中，步骤S1所述提取肌原纤维蛋白，包括步骤：
S11：按照料液比1:3(重量:体积，g/mL)的比例在鱼肉加入50mM、 pH6.0的磷酸盐缓冲液，8000rpm匀浆2min，8000g条件下离心15min，取沉淀；
S12：将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积，g/mL)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液，8000rpm匀浆2min，8000g条件下离心15min，取沉淀；
S13：将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积，g/mL)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液，8000rpm匀浆2min，8000g条件下离心15min，取沉淀；
S14：将步骤S13所得沉淀加入按照料液比1:3(重量:体积，g/mL)的比例加入0.1MNaCl，8000rpm条件下匀浆1min，8000g条件下离心15min，取沉淀；
S15：将步骤S13所得沉淀料液比1:3(重量:体积，g/mL)加入0.1M NaCl， 8000rpm条件下匀浆1min，8000g条件下离心15min，取沉淀；
S16：将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积，g/mL)的比例加入0.1MNaCl，过80目两层纱布后离心，所得沉淀即为肌原纤维蛋白，用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6MNaCl)将肌原纤维蛋白稀释至35-70mg/mL。
下述实施例中使用的ESR检测仪型号为A200，厂商：布鲁克拜厄斯宾有限公司。
实施例1：
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6MNaCl)，制备成浓度为50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；向所述肌原纤维蛋白溶液中加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加625μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为40mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品4℃条件下进行UVA照射；其中，所述UVA 照射处理时间为1h，照射强度选择10W/m2，液面高度5mm；
S3、用毛细管吸取步骤S2接受UVA照射后的混合样品溶液，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：9.66mW；接收增益：1.00×105；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：360.00msec。
本实施例测得的ESR图谱如图1中的U1所示，与对比例1、对比例2 相比较，加入625μmol裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白经UVA照射后，其ESR信号强度显著增强，肌原纤维蛋白发生氧化。
实施例2
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从草鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6M NaCl)，制备成浓度为70mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；向所述肌原纤维蛋白溶液中加入海带多酚，得含有海带多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加25μmol 海带多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有海带多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为30mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品4℃条件下进行UVA照射；其中，所述UVA 照射处理时间为2h，照射强度选择8W/m2，液面高度3mm；
S3、用毛细管吸取步骤S2接受UVA照射后的混合样品溶液，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3460G；扫描宽度：65G；频率：9.85GHz；衰减器：10.00dB；功率：9.82mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4800.00msec；转换时间：340.00msec。
本实施例测得的ESR图谱如图2中的U2所示，与对比例3、对比例4 相比较，加入25μmol海带多酚的肌原纤维蛋白经UVA照射后，其ESR信号强度显著增强，肌原纤维蛋白发生氧化。
实施例3
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6MNaCl)，制备成浓度为35mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；向所述肌原纤维蛋白溶液中加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加125μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为20mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品4℃条件下进行UVA照射；其中，所述UVA 照射处理时间为3h，照射强度选择6W/m2，液面高度10mm；
S3、用毛细管吸取步骤S2接受UVA照射后的混合样品溶液，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3480G；扫描宽度：70G；频率：9.52GHz；衰减器：15.00dB；功率：8.97mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5000.00msec；转换时间：400.00msec。
本实施例测得的ESR图谱如图3中的U3所示，与对比例5、对比例6 相比较，加入125μmol裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白经UVA照射后，其ESR信号强度显著增强，肌原纤维蛋白发生氧化。
对比例1
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6MNaCl)，制备成浓度为50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；将自由基捕获剂POBN加入所述肌原纤维蛋白溶液中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为 40mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：9.66mW；接收增益：1.00×105；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：360.00msec。
本对比例测得的ESR图谱如图1中的A1所示。
对比例2
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6MNaCl)，制备成浓度为50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；向所述肌原纤维蛋白溶液中加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加625μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为40mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：9.66mW；接收增益：1.00×105；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：360.00msec。
本对比例测得的ESR图谱如图1中的N1所示。
对比例3
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从草鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6M NaCl)，制备成浓度为70mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；将自由基捕获剂 POBN加入所述肌原纤维蛋白溶液中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为 30mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3460G；扫描宽度：65G；频率：9.85GHz；衰减器：10.00dB；功率：9.82mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4800.00msec；转换时间：340.00msec。
本对比例测得的ESR图谱如图2中的A2所示。
对比例4
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从草鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6M NaCl)，制备成浓度为70mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；向所述肌原纤维蛋白溶液中加入海带多酚，得含有海带多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加25μmol 海带多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有海带多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为30mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3460G；扫描宽度：65G；频率：9.85GHz；衰减器：10.00dB；功率：9.82mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4800.00msec；转换时间：340.00msec。
本对比例测得的ESR图谱如图2中的N2所示。
对比例5
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6MNaCl)，制备成浓度为35mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；将自由基捕获剂 POBN加入所述肌原纤维蛋白溶液中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为 20mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3480G；扫描宽度：70G；频率：9.52GHz；衰减器：15.00dB；功率：8.97mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5000.00msec；转换时间：400.00msec。
本对比例测得的ESR图谱如图3中的A3所示。
对比例6
一种快速检测含褐藻多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，使用pH6、25mM磷酸盐缓冲液(含 0.6MNaCl)，制备成浓度为35mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；向所述肌原纤维蛋白溶液中加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加125μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的终浓度为20mM，得混合样品；
S2、将步骤S1所得混合样品溶液用毛细管吸取进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3480G；扫描宽度：70G；频率：9.52GHz；衰减器：15.00dB；功率：8.97mW；接收增益：1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5000.00msec；转换时间：400.00msec。
本对比例测得的ESR图谱如图3中的N3所示。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，其特征在于，包括步骤：
S1、取含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样，加入自由基捕获剂POBN，得混合样品；所述POBN的终浓度为20～50mM；所述POBN为a-(4-吡啶基-1-氧)-N-叔丁基硝基酮；
S2、将步骤S1所述混合样品进行UVA照射；
S3、将UVA照射后的样品用毛细管吸取，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3450～3490G；扫描宽度：55～105G；频率：9.00～10.00GHz；衰减器：10.00～30.00dB；功率：8.00～10.00mW；接收增益：1.00×105～1.00×106；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：4000.00～6000.00msec；转换时间：300.00～400.00msec；
步骤S1所述含有褐藻多酚的肌原纤维蛋白溶液试样的制备方法为：取肌原纤维蛋白溶于pH6、25mM磷酸盐缓冲液中，配置成浓度为35～70mg/mL的肌原纤维蛋白溶液，向所述肌原纤维蛋白溶液中加入褐藻多酚，得含有多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；所述褐藻多酚的添加量为：以所述肌原纤维蛋白溶液中肌原纤维蛋白的含量为基准，每克肌原纤维蛋白添加20～700μmol褐藻多酚；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6MNaCl。
2.根据权利要求1所述快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，其特征在于，步骤S2所述UVA照射的条件为：4℃、照射强度5～10W/m2、照射时间1～4h、接受照射的混合样品高度为1mm～10mm。
3.根据权利要求1所述快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，其特征在于，所述肌原纤维蛋白为鱼肌原纤维蛋白。
4.根据权利要求3所述快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，其特征在于，所述鱼肌原纤维蛋白为马鲛鱼肌原纤维蛋白、罗非鱼肌原纤维蛋白或草鱼肌原纤维蛋白。
5.根据权利要求1所述快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，其特征在于，所述褐藻多酚为海带多酚或裙带菜孢子叶多酚。
6.根据权利要求1所述快速检测含多酚的肌原纤维蛋白在UVA辐照过程中品质变化的方法，其特征在于，包括步骤：
S1、从马鲛鱼肉中提取肌原纤维蛋白，溶于pH6、25mM磷酸盐缓冲液，制备成浓度为50mg/mL的肌原纤维蛋白溶液；加入裙带菜孢子叶多酚，得含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样；以所述肌原纤维蛋白溶液中的肌原纤维蛋白总量计，每克肌原纤维蛋白添加625μmol裙带菜孢子叶多酚；将自由基捕获剂POBN加入所述含有裙带菜孢子叶多酚的肌原纤维蛋白溶液试样中，使自由基捕获剂POBN的浓度为40mM，得混合样品；所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6MNaCl；
S2、将步骤S1所得混合样品4℃条件下进行UVA照射；其中，所述UVA照射处理时间为1h，照射强度10W/m2，接受照射的混合样品的液面高度为5mm；
S3、用毛细管吸取步骤S2接受UVA照射后的混合样品溶液，进行电子自旋共振检测：电子自旋共振检测的扫描条件为：中心磁场：3470G；扫描宽度：80G；频率：9.75GHz；衰减器：20.00dB；功率：9.66mW；接收增益：1.00×105；调制频率：100kHz；调制幅度：1.00G；相位调变：0.00deg；偏移量：0.00％；时间常数：5242.88msec；转换时间：360.00msec。
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