CN102435688B - 一种用lc-ms仪检测地沟油的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及地沟油检测技术领域，特别是涉及一种用LC-MS仪检测地沟油的方法；包括乙酸铵溶液配置、DBS标准储备溶液的配置、DBS标准系列溶液的配置、样品处理、LC-MS色谱条件的构建、样品测定和结果判断等步骤，本发明以DBS为鉴别地沟油的特异性指标，利用LC-MS仪为主要检测工具，通过反复试验构建出完整的检测条件，本发明能快速、精确地检测鉴别出样品是否是地沟油，检出限为20μg/ml，弥补了现行国家标准缺陷。
Description
技术领域
本发明涉及地沟油检测技术领域，特别是涉及一种用LC-MS仪检测地沟油的方法。
背景技术
地沟油，是不法分子将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜（通称泔水）回收，经过过滤、加热、沉淀、分离、脱色、洗油等工序加工、提炼出的油，其主要成分仍然是甘油三酯，这种被称作地沟油的三无产品，不仅质量极差、极不卫生，而且也比真正的食用油多了许多致病、致癌的毒性物质。一旦食用地沟油，它会破坏人们的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的严重后果。所以地沟油是严禁用于食用油领域的。但是，也确有一些不法商贩受利益驱动而不顾人民群众生命安全私自生产加工地沟油并作为食用油低价销售给一些小餐馆，给人们的身心都带来极大伤害。
购买普通食用油时，一般的消费者会被建议要学会感官鉴别。根据经验，食用植物油一般通过看、闻、尝、听、问五个方面来进行鉴别。但是对于对于掺杂有有害物质的劣质地沟油，仅仅靠人为的看、闻、尝、听的感官来进行鉴别是十分困难的。
目前，国内尚未制定地沟油鉴别检测的国家标准方法，虽然国内外研究人员进行了一些探索，鉴别油脂优劣的常规指标一般是水分、含量、比重、折光率、皂化值、酸价、氧化值、过氧化值、羰基值、碘值、挥发性组分、动物油脂、醛和酮类化合物（合格食用油所不含的）、电导率等指标。但是对地沟油检测的研究报道并不多见，其主要原因是高酸值的地沟油成分比较复杂，其检测的特异性理化指标还处于实验研讨阶段，要准确定性定量目前仍比较困难。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的之一在于提供了一种用LC-MS仪检测地沟油的方法；
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种用LC-MS仪检测地沟油的方法，包括如下步骤：
步骤A、标准溶液的配置：
（1）、乙酸铵溶液：称取乙酸铵加水溶解，摇匀即得质量浓度为0.6～0.8mg/ml的乙酸铵溶液；
（2）、DBS（十二烷基苯磺酸钠的简称，以下同）标准储备溶液：取DBS加乙醇稀释，摇匀即得质量浓度为0.5～2mg/ml的DBS标准储备溶液；
（3）、DBS标准系列溶液：分别取DBS标准储备液加乙醇稀释，制得质量浓度分别为4μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、500μg/ml的DBS标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取10μl注入LC-MS仪，记录色谱图，以DBS浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
步骤B、样品处理：
先取样品10.0ml，加入乙醇10～20ml，80～100℃水浴加热5～10min，涡旋混合3～5min，5000～10000r/min离心5～10min，弃去油层，旋转蒸发至干；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3～5ml复溶，5000～10000r/min离心5～10min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接着用正己烷3～5ml淋洗，弃去淋洗液，最后用体积比为98:2的甲醇-乙酸铵溶液3～5ml洗脱，洗脱液用0.45μm滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品；
步骤C、LC-MS色谱条件的构建：
（1）、色谱条件：
色谱柱：C18柱（2.0mm×50mm×2.2μm）
流动相：甲醇-乙酸铵混合溶液，所述甲醇和乙酸铵的体积比为75～85:15～25
流速：0.2ml/min
柱温：30～40℃；
（2）、质谱条件：
离子化模式：电喷雾电离源负离子模式(ESI-)
雾化气流速1.5L/min
检测器电压：1.68kv
CDL温度：200℃
加热模块温度：200℃
选择监测离子：m/z=297.15、311.17、325.18、339.20；
步骤D、样品测定和结果判断:
在构建的条件下，精密量取待测样品10μl，注入LC-MS仪，如检出的色谱峰保留时间与高纯度DBS一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，有所选择检测的离子出现，且相对丰度比也与高纯度DBS一致，则可判断样品中存在DBS，进而判断样品为地沟油。
根据检测数据进行定量计算：
式中：ω(十二烷基苯磺酸钠)-样品中十二烷基苯磺酸钠质量分数，μg/ml，
ρ-从校准曲线上查得的待测溶液中十二烷基苯磺酸钠的质量浓度，μg/ml，
V-样品定容体积，ml，
m-样品取样量，ml。
较佳地、所述乙醇为体积浓度为40～60%的乙醇溶液。
较佳地、步骤B样品处理中，所述涡旋混合3～5min后，重复80～100℃水浴加热5～10min两次。
较佳地、步骤B样品处理中，所述已活化的固相萃取柱为依次用甲醇3ml和水3ml活化的固相萃取柱。
其筛查原理为：地沟油，是不法分子将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜（通称泔水）回收，经过过滤、加热、沉淀、分离、脱色、洗油等工序加工、提炼出的油。DBS（十二烷基苯磺酸钠的简称）为常用洗涤剂，被大量使用于餐饮业的清洗消毒环节中，具有中等毒性，动物实验表明有明显促致癌作用。该物质在天然食用油中不可能存在，但用于精制地沟油的原材料-含有洗碗水中的洗涤剂，且加工、精制过程难以去除该洗涤剂化学成分，导致性质稳定的DBS残留在地沟油中，因此，选择DBS作为鉴别地沟油的特异指标，专属性强。
本发明包括乙酸铵溶液配置、DBS标准储备溶液的配置、DBS标准系列溶液的配置、样品处理、LC-MS色谱条件的构建、样品测定和结果判断等步骤，以DBS为鉴别地沟油的特异性指标，利用LC-MS仪为主要检测工具，通过反复试验构建出完整的检测条件，本发明能快速、精确地检测鉴别出样品是否是地沟油，检出限为20μg/ml，弥补了现行国家标准缺陷。
附图说明
图1为选择离子监测图；
其中：A：十一烷基苯磺酸钠m/z=297.15
B：十二烷基苯磺酸钠m/z=311.17
C：十三烷基苯磺酸钠m/z=325.18
D：十四烷基苯磺酸钠m/z=339.20
图2为十一烷基苯磺酸钠(A)质谱图；
图3为十二烷基苯磺酸钠(B)质谱图；
图4为十三烷基苯磺酸钠(C)质谱图；
图5为十四烷基苯磺酸钠(D)质谱图；
图6为地沟油样品选择离子监测图。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好的理解本发明，以下通过几个具体实施例来进行详尽说明。
实施例1
一种用LC-MS仪检测地沟油的方法，包括如下步骤：
步骤A、标准溶液的配置：
（1）、乙酸铵溶液：称取乙酸铵0.3855g，加水500ml溶解，摇匀，即得；
（2）、DBS标准储备溶液：取DBS约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀、即得；
（3）、DBS标准系列溶液：分别取DBS标准储备液适量，加50%乙醇稀释，制得含DBS分别为4μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、500μg/ml的标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取10μl注入LC-MS仪，记录色谱图，以DBS浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
步骤B、样品处理：
取样品10.0ml，加入50%乙醇20ml，80℃水浴加热20min，涡旋混合5min，自“80℃水浴加热20min”重复二次，10000r/min离心10min，弃去油层，旋转蒸发至干，加加甲醇-2%乙酸的水溶液3ml复溶，10000r/min离心10min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇3ml和水3ml活化)，用正己烷3ml淋洗，弃去淋洗液，用体积比为98:2的甲醇-乙酸铵溶液3ml洗脱，洗脱液用0.45μm滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品。
步骤C、LC-MS色谱条件的构建：
（1）、色谱条件：
色谱柱：C18柱（2.0mm×50mm×2.2μm）
流动相：甲醇-乙酸铵混合溶液，所述甲醇和乙酸铵的体积比为80:20
流速：0.2ml/min
柱温：40℃；
（2）、质谱条件：
离子化模式：电喷雾电离源负离子模式(ESI-)
雾化气流速1.5L/min
检测器电压：1.68kv
CDL温度：200℃
加热模块温度：200℃
选择监测离子：m/z=297.15、311.17、325.18、339.20；
步骤D、样品测定和结果判断:
在构建的色谱条件下，精密量取待测样品10μl，注入LC-MS仪，记录色谱图，计算峰面积，用所述DBS标准系列溶液所得标准曲线计算待测溶液中十二烷基苯磺酸钠含量；
如待测样品色谱图中能检出与DBS标准物质色谱图中任一主峰保留时间一致的色谱峰，则表明待测样品中存在十二烷基苯磺酸钠，判断待测样品为地沟油。
实施例2
一种用LC-MS仪检测地沟油的方法，包括如下步骤：
步骤A、标准溶液的配置：
（1）、乙酸铵溶液：称取乙酸铵0.3g，加水500ml溶解，摇匀，即得；
（2）、DBS标准储备溶液：取DBS约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加40%乙醇稀释至刻度，摇匀、即得；
（3）、DBS标准系列溶液：分别取DBS标准储备液适量，加40%乙醇稀释，制得含DBS分别为4μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、500μg/ml的标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取10μl注入LC-MS仪，记录色谱图，以DBS浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
步骤B、样品处理：
取样品10.0ml，加入40%乙醇10ml，90℃水浴加热8min，涡旋混合3min，自“90℃水浴加热20min”重复二次，5000r/min离心8min，弃去油层，旋转蒸发至干，加加甲醇-2%乙酸的水溶液4ml复溶，5000r/min离心8min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇4ml和水4ml活化)，用正己烷4ml淋洗，弃去淋洗液，用体积比为98:2的甲醇-乙酸铵溶液4ml洗脱，洗脱液用0.45μm滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品。
步骤C、LC-MS色谱条件的构建：
（1）、色谱条件：
色谱柱：C18柱（2.0mm×50mm×2.2μm）
流动相：甲醇-乙酸铵混合溶液，所述甲醇和乙酸铵的体积比为75:25
流速：0.2ml/min
柱温：30℃；
（2）、质谱条件：
离子化模式：电喷雾电离源负离子模式(ESI-)
雾化气流速1.5L/min
检测器电压：1.68kv
CDL温度：200℃
加热模块温度：200℃
选择监测离子：m/z=297.15、311.17、325.18、339.20；
步骤D、样品测定和结果判断:
在构建的色谱条件下，精密量取待测样品10μl，注入LC-MS仪，记录色谱图，计算峰面积，用所述DBS标准系列溶液所得标准曲线计算待测溶液中十二烷基苯磺酸钠含量；
如待测样品色谱图中能检出与DBS标准物质色谱图中任一主峰保留时间一致的色谱峰，则表明待测样品中存在十二烷基苯磺酸钠，判断待测样品为地沟油。
实施例3
一种用LC-MS仪检测地沟油的方法，包括如下步骤：
步骤A、标准溶液的配置：
（1）、乙酸铵溶液：称取乙酸铵0.4g，加水500ml溶解，摇匀，即得；
（2）、DBS标准储备溶液：取DBS约100mg，精密称定，置50ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀、即得；
（3）、DBS标准系列溶液：分别取DBS标准储备液适量，加60%乙醇稀释，制得含DBS分别为4μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、500μg/ml的标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取10μl注入LC-MS仪，记录色谱图，以DBS浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
步骤B、样品处理：
取样品10.0ml，加入60%乙醇15ml，100℃水浴加热5min，涡旋混合4min，自“100℃水浴加热20min”重复二次，8000r/min离心5min，弃去油层，旋转蒸发至干，加加甲醇-2%乙酸的水溶液5ml复溶，8000r/min离心5min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇5ml和水5ml活化)，用正己烷5ml淋洗，弃去淋洗液，用体积比为98:2的甲醇-乙酸铵溶液5ml洗脱，洗脱液用0.45μm滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品。
步骤C、LC-MS色谱条件的构建：
（1）、色谱条件：
色谱柱：C18柱（2.0mm×50mm×2.2μm）
流动相：甲醇-乙酸铵混合溶液，所述甲醇和乙酸铵的体积比为85:15
流速：0.2ml/min
柱温：35℃；
（2）、质谱条件：
离子化模式：电喷雾电离源负离子模式(ESI-)
雾化气流速1.5L/min
检测器电压：1.68kv
CDL温度：200℃
加热模块温度：200℃
选择监测离子：m/z=297.15、311.17、325.18、339.20；
步骤D、样品测定和结果判断:
在构建的色谱条件下，精密量取待测样品10μl，注入LC-MS仪，记录色谱图，计算峰面积，用所述DBS标准系列溶液所得标准曲线计算待测溶液中十二烷基苯磺酸钠含量；
如待测样品色谱图中能检出与DBS标准物质色谱图中任一主峰保留时间一致的色谱峰，则表明待测样品中存在十二烷基苯磺酸钠，判断待测样品为地沟油。
以上所述仅为了是本领域技术人员理解本发明所列举的几个具体实施例，并非用来限制本发明所要求保护的范围。故凡以本发明权利要求所述的特征、结构及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。
Claims (3)
1.一种用LC-MS仪检测地沟油的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A、标准溶液的配置：
（1）、乙酸铵溶液：称取乙酸铵加水溶解，摇匀配制成质量浓度为0.6～0.8mg/ml的乙酸铵溶液；
（2）、DBS标准储备溶液：取DBS加乙醇稀释，摇匀配制成质量浓度为0.5～2mg/ml的DBS标准储备溶液；
（3）、DBS标准系列溶液：分别取DBS标准储备液加乙醇稀释，制得质量浓度分别为4μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、500μg/ml的DBS标准系列溶液；在所构建的色谱条件下，分别精密量取10μl注入LC-MS仪，记录色谱图，以DBS浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；
步骤B、样品处理：
先取样品10.0ml，加入乙醇10～20ml，80～100℃水浴加热5～10min，涡旋混合3～5min，5000～10000r/min离心5～10min，弃去油层，旋转蒸发至干；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3～5ml复溶，5000～10000r/min离心5～10min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接着用正己烷3～5ml淋洗，弃去淋洗液，最后用体积比为98:2的甲醇-乙酸铵溶液3～5ml洗脱，洗脱液用0.45μm滤膜滤过，收集滤液，得到待测样品；
步骤C、LC-MS色谱条件的构建：
（1）、色谱条件：
色谱柱：C18柱（2.0mm×50mm×2.2μm）
流动相：甲醇-乙酸铵混合溶液，所述甲醇和乙酸铵的体积比为75～85:15～25
流速：0.2ml/min
柱温：30～40℃；
（2）、质谱条件：
离子化模式：电喷雾电离源负离子模式(ESI-)
雾化气流速1.5L/min
检测器电压：1.68kv
CDL温度：200℃
加热模块温度：200℃
选择监测离子：m/z=297.15、311.17、325.18、339.20；
步骤D、样品测定和结果判断:
在构建的条件下，精密量取待测样品10μl，注入LC-MS仪，如检出的色谱峰保留时间与高纯度DBS一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，有所选择检测的离子出现，且相对丰度比也与高纯度DBS一致，则可判断样品中存在DBS，进而判断样品为地沟油；
其中，DBS为十二烷基苯磺酸钠的简称；步骤B样品处理中，所述已活化的固相萃取柱为依次用甲醇3～5ml和水3～5ml活化的固相萃取柱。
2.根据权利要求1中所述检测地沟油的方法，其特征在于，所述乙醇为体积浓度为40～60%的乙醇溶液。
3.根据权利要求1中所述检测地沟油的方法，其特征在于，步骤B样品处理中，所述涡旋混合3～5min后，重复80～100℃水浴加热5～10min两次。
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