CN110218716B - 一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281极其用途。所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列如SEQ ID NO:1所示。具有高耐盐性的用途。

Description

一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其 用途

技术领域

本发明涉及基因序列领域，尤其涉及一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其用途。

背景技术

海藻在海洋植物中数量和品种最多，且多糖含量占干质量的50％以上，成为目前最具有前景的一类活性物质。海藻多糖是由多个相同或不同的单糖基通过糖苷键相连而成的高分子碳水化合物，具有很高的应用价值，如琼脂、卡拉胶、褐藻酸盐已在工业上长期使用，在食品和日用化工产业、生物材料产业和生物制药产业等多种行业也有着广泛应用。海藻寡糖是通过降解海藻胶及其衍生物生成的聚合度小于20以下的寡糖系列。这系列寡糖因具有低分子量、高稳定性以及与水可共溶等较好的性质，且这些寡糖还具有很多的生物活性如：调节免疫与抗肿瘤、抗凝血、降血糖和血脂、抗自由基氧化、抗炎症、抗病毒引起了广大食品科学家和医药生物学家的密切关注。

降解海藻多糖方法主要有化学方法、物理方法和酶法。相对于化学法和物理法降解，酶法降解反应条件温和，易于控制，可以最大程度地保护反应底物的活性基团不会在降解过程中受到破坏，产物活性较高。

自然界中广泛存在着海藻裂解酶，水体系统中的微生物、软体动物和藻类，陆地系统中的微生物以及病毒等都有海藻多糖裂解酶的存在。目前已有不少海藻胶裂解酶的基因得到克隆和测序，并构建出多种重组海藻多糖裂解酶基因工程菌，但重组海藻多糖裂解酶基因工程表达水平较低，限制了酶的应用。因此，利用基因工程手段，进一步获得具有优良特性的海藻多糖裂解酶仍是本技术领域的当务之急。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281。

为实现上述目的，本发明提供一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281，其特征在于，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列如SEQ ID NO:1所示。

进一步，所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供一种含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的重组载体，其特征在于，含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列；优选的，所述重载载体为所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281与pET-28a进行重组得到的重组载体。

本发明还提供一种所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的重组细胞，其特征在于，含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的基因序列；优选的，所述重载细胞为含有所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281与载体重组得到的重组载体再转化得到的重组细胞。

本发明还提供一种用于扩增所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL128的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如SEQ ID NO:3和4所示。

本发明还保护所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281对金属具有耐受的用途。

本发明还保护所述具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281具有高耐盐性的用途。

本发明通过设计特异性引物，海藻多糖裂解酶酶AlgL1281的DNA序列，该基因编码区长1089bp，编码362个氨基酸，其中1-27个氨基酸为信号肽，理论分子量为40kDa。大肠杆菌重组表达获得的AlgL1281具有较高酶活性和热稳定性，另外特别重要的是，该酶通过添加盐离子可以极大的增强其活性，当Na⁺浓度为0.3mol/L及以上时，促进海藻多糖裂解酶酶AlgL1281达到最大酶活力的500％以上，K⁺浓度为0.3mol/L时促进AlgL1281达到最大酶活力的300％左右，由于海水的盐离子浓度本身就比较高，这对来源海洋的海藻类多糖的降解无疑具有极大的应用价值。

附图说明

图1为本发明海藻多糖裂解酶AlgL1281的蛋白质三维结构模型图；

图2为海藻多糖裂解酶AlgL128基因重组表达纯化的SDS-PAGE图谱；

图3为本发明海藻多糖裂解酶AlgL1281具有多功能降解图示；

图4为本发明温度对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；

图5为本发明温度对海藻多糖裂解酶AlgL1281稳定性影响曲线图；

图6为本发明pH对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；

图7为本发明pH对海藻多糖裂解酶AlgL1281稳定性影响曲线图；

图8为本发明金属离子对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；

图9为本发明Na⁺对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图；

图10为本发明K⁺对海藻多糖裂解酶AlgL1281活性影响曲线图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

生物材料来源：Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5，中文名称为食鹿角菜假交替单胞菌，分离自厦门红树林土壤腐叶样品，来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)，保藏编号23819。

实施例1：具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281基因的获得

将Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5接种至人工海水培养基中，在25℃，180r/min的条件下，震荡培养至OD₆₀₀为1-1.5，取培养菌液1mL，利用东盛生物细菌基因组快速提取试剂盒(硅胶膜离心柱法)提取Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5菌株基因组DNA。

人工海水培养基：牛肉浸膏10g、胰蛋白胨10g、蒸馏水250mL、人工海水750mL(NaCl37.51g、KCl 1.03g、CaCl₂ 1.61g、MgCl₂·6H₂O 6.4g、NaHCO₃ 0.15g、MgSO₄·7H₂O 4.67g、蒸馏水1000mL)。牛肉浸膏和胰蛋白胨在蒸馏水中溶解后用NaOH调pH至7.8，加热煮沸10min，冷却后再次加NaOH调pH至7.3，然后和人工海水混合，121℃灭菌20min。固体培养基再添加20g琼脂。

以得到的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，引物序列如下：

正向引物AlgL1281-F(SEQ ID NO：3)：

5’-CGCGGATCCAATACTAAACTTGAAAATAA-3’；下划线标注的是限制性内切酶位点BamHI；

反向引物AlgL1281-R(SEQ ID NO：4)：

5’-CCGGAATTCCGGCTTAGTTGATGGGCTTA-3’；下划线标注的是限制性内切酶EcoR I位点。

所用高保真DNA聚合酶PrimeSTAR HS购自中国大连宝生物公司，所用PCR反应试剂按照该公司提供的产品说明进行操作。

PCR反应系统为：

基因组DNA(0.679mg/ml)：0.5μL；

dNTP：4μL；

AlgL1281-F(10μmol/L)：1μL；

AlgL1281-R(10μmol/L)：1μL；

高保真DNA聚合酶PrimeSTAR HS：0.5μL；

5xBuffer:10μL；

ddH₂O：补齐50μL。

PCR条件为：95℃，5min；94℃，15s；52℃，15s，72℃，1min，30次循环，最后72℃，10min。

将PCR产物进行测序，序列如SEQ ID NO:1所示。共含有362个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。用ExPASy的protparam工具进行分析，显示蛋白质AlgL1281的理论分子量约为40kDa，理论等电点为9.06。信号肽分析结果显示，其N端有1-27个氨基酸为信号肽序列。海藻多糖裂解酶AlgL1281的蛋白质三维结构模型，如图1所示，利用SWISS-MODEL对AlgL1281进行建模，模板为来自PDB数据库编号为4be3.1.A的PL7褐藻胶裂解酶，相似度为42.55％。

SEQ ID NO:1如下所示：

ATGAAAAATCTAACATCTACTTTTAAACTCACAGCACTGGCTGCTGTTACTCCTTTATTATTTATGGGCTGCGCTAGTACAAATACTAAACTTGAAAATAATGCAGCAGTCCCTGCATCAAAATTTGATTTATCAAACTGGAAAATTAACGTACCTGTCGATTTAAACAACGACGGAAAAATTGATACAGTAGACGTTAAAGAAATTCAAACTTACGCGCACCCTGATTTTTTCTACTTGGATGATCAGGGTTATATGGTATTTGCCTCGCCAAATAAAGCACTTACCAGCGCAAACTCAACCAATACCCGTAGTGAATTACGACAAATGATCCGCGGAACAAACACTAAAATAAAAACTAAAAATTCAAAAAACAATTTTGCACTTGCTGTGCACCCGCTATCGGAGCGTTTTGGCTCAGTAGGCGGAAAAATGGAAGCCACGCTCAAAGTTGATCATGTAGCCCTGCGTGCAAACGATCCGAGTAAAAAAGCCGCTTATTCTGTGGTGGTAGGGCAAATTCACGCAGGTAAAGATCAGGCACTTATAGACACTAAGCTGGGTTTTGGCTGGGGTAACGAACCACTTAAAATTTATTACAAAAAATGGCCAGGGCATAAAACCGGATCGGTATTTTGGAACTACGAGCGTAACTTACCAAAAAAAGATCCTAACCGAACCGACATTACTTACCCTGTATGGGGCAACACCTGGGAAAACCCAGATGACCCAGCGGCTAACGGTATTGCACTAGGTGACGAGTTTAGCTACACCGTGAACGTACATAAAAATGTTATGCACCTTACATTTAGTGCTCAAGGCAAAAAAGACGTTAACTACTCTATTAACTTAGGTAATAACGTAGATGCTTATGGCAAAGTAGATGATAAAGATCATCCTAATGGCTACGCTGCCGATTGGCATTACTTTAAAGCGGGTGCGTATAACCAATGTAGTACCAAAAGCGCTAAAGGAATTTGGTACCCAGGTTGTTTAGGTACGGGTGATTGGGCTACAGACAAGCAAAATGGCGATTACGCGCAAGTAAGCTTTAAAAAATTAGTATTAAGCCCATCAACTAAGCCGTAA。

SEQ ID NO:2如下所示：

MKNLTSTFKLTALAAVTPLLFMGCASTNTKLENNAAVPASKFDLSNWKINVPVDLNNDGKIDTVDVKEIQTYAHPDFFYLDDQGYMVFASPNKALTSANSTNTRSELRQMIRGTNTKIKTKNSKNNFALAVHPLSERFGSVGGKMEATLKVDHVALRANDPSKKAAYSVVVGQIHAGKDQALIDTKLGFGWGNEPLKIYYKKWPGHKTGSVFWNYERNLPKKDPNRTDITYPVWGNTWENPDDPAANGIALGDEFSYTVNVHKNVMHLTFSAQGKKDVNYSINLGNNVDAYGKVDDKDHPNGYAADWHYFKAGAYNQCSTKSAKGIWYPGCLGTGDWATDKQNGDYAQVSFKKLVLSPSTKP。

实施例2：AlgL1281基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中的中的重组表达和纯化

将实施例1所得的PCR产物及pET-28a质粒用限制性内切酶EcoR I和BamHI双酶切，回收酶切后的产物片段。限制性内切酶EcoR I和BamHI购自中国大连宝生物公司，酶切用到的酶与底物反应的体系、温度和时间，均按照该公司提供的产品说明操作。

将经过EcoR I和BamHI双酶切的PCR产物，与同样经过双酶切的pET-28a质粒载体，在T4DNA连接酶的催化下进行连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株，涂布于含有0.1mg/mL卡那霉素的LB固体培养基上，37℃倒置培养16h后，挑取阳性转化子，将阳性转化子接入含有0.1mg/mL卡那霉素的液体LB培养基中，37℃，180r/min，培养12h，用正向引物AlgL1281-F和反向引物AlgL1281-R进行菌液PCR验证。

将PCR验证正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，涂布于含有0.1mg/mL卡那霉素的LB固体培养基上，37℃倒置培养16h后，挑取阳性转化子，将阳性转化子接入含有0.1mg/mL卡那霉素的液体LB培养基中，37℃，180r/min,培养12h，用正向引物AlgL1281-F和反向引物AlgL1281-R进行菌液PCR验证，结果得到大小约为1100bp的扩增产物，初步证明构建的重组质粒正确。将重组质粒送至厦门铂瑞生物科技有限公司进行测序，结果表明，在pET-28a的EcoR I和BamHI酶切位点插入SEQ ID NO.1所示的基因AlgL1281，且插入方向正确，所以进一步证明构建的重组质粒正确，将该重组质粒命名为pET-28a-AlgL1281。

使用异丙基硫代半乳糖甘(IPTG)进行重组海藻多糖裂解酶的诱导表达。加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)至终浓度0.05mmol/L，16℃诱导20h后将菌液收集至200mL的离心管中，6000rpm离心沉淀细菌细胞。将细菌细胞重新悬浮在20mL的溶解缓冲液(溶解缓冲液配方为：0.3mol/LNaCl，15mmol/L咪唑，50mmol/LNaH₂PO₄，pH8.0)中，超声波破碎处理至菌液成半透明(参数设置为300w，超声时间5s，间歇时间5s，总工作时间15min)，11000rpm离心20min，上清与预先用溶解缓冲液平衡的Ni-NTA Agarose混匀，4℃结合1小时，纯化过程按照纯化试剂盒(购自Qiagen公司)说明进行。纯化后的蛋白经的SDS-PAGE电泳分析，其分子量约为40kDa，使用Bradford法测定蛋白浓度，得到浓度约为1.0mg/ml的重组海藻多糖裂解酶AlgL1281(结果参见图2)。其中泳道M为蛋白Marker，泳道1为空载体pET-28a在E.coliBL21中的表达，泳道2为重组载体pET-28a-AlgL128在E.coli BL21中的诱导表达，泳道3为重组载体pET-28a-AlgL128在E.coli BL21中的未诱导表达，泳道4为经Ni-NTA纯化所得的目的蛋白AlgL128(40kDa)。可以看出来，目的蛋白AlgL128得到了诱导表达，同时得到了纯化，有效去除了杂质。

实施例3：重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的酶学性质分析

1、重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的海藻多糖降解能力

重组海藻多糖裂解酶AlgL1281分别与0.5％的底物(κ-卡拉胶、琼脂、海藻酸钠)反应后，根据重组海藻多糖裂解酶AlgL1281对不同种类底物的降解能力大小，测定酶活性，结果见图3。纵坐标为相对酶活％。相对酶活的测定方法如下。从图3的结果显示，重组AlgL1281海藻多糖裂解酶对κ-卡拉胶、琼脂、海藻酸钠都具有降解活性，其中对海藻酸钠的降解能力最强，以最高酶活为100％。

2.重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的酶活力(相对酶活)的测定：

将50μL纯化后的重组海藻多糖裂解酶AlgL1281与950μL海藻酸钠(0.5％，pH 8.0)混合，在50℃反应80min后于沸水浴中终止反应，然后加入1mL DNS溶液(DNS溶液配方为：称取3，5-二硝基水杨酸10g，置于600ml水中，逐渐加入氢氧化钠10，在50℃水浴中搅拌溶解，再依次加入酒石酸钾钠200g，苯酚2g和无水亚硫酸钠5g，全部溶解澄清后冷却至室温，用水定容至1000ml，过滤，贮存于棕色试剂瓶中，避光放置7天后使用。)并于沸水浴中反应10min，在540nm下测定吸光值。酶活力定义为：在上述条件下，每分钟催化生成1μg还原糖(比如褐藻胶寡糖)所需的酶量为一个酶活力单位(U)。

3.温度对酶活性及稳定性的影响

酶的最适反应温度的确定，在反应温度为35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、65℃条件下测定重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的酶活，以最高酶活为100％，结果如图4所示(国际酶活的测定标准进行，酶活定义的最适条件80min)。测定重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的温度稳定性时，酶液在30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃下分别处理30min和120min，在最适反应温度下测定剩余酶活，以未处理时的酶活为100％。结果图5所示(温度稳定性是指酶在相应温度下处理后再进行酶活的测定，即温育30min或2h后再与底物反应80min)。从图4可以看出重组海藻多糖裂解酶AlgL1281在50℃时达到最大活力，表明重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的最适反应温度为50℃。从图5可以看出，该酶在30℃到50℃下较稳定，在温浴2h时依旧有80％的酶活力保留，在60℃温浴2h，酶活力依旧有最初的60％。结果表明重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的温度稳定性较好。

4、pH值对酶活性及稳定性的影响

用不同pH的缓冲体系配制底物，在最适反应温度下测定酶活，最高酶活记为100％。缓冲液体系分别为50mmol/L的乙酸-乙酸钠(pH 4-6)、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠(pH6-8)、Tris-Hcl(pH8-9)、甘氨酸-NaOH(pH9-10)。pH稳定性的研究是通过将纯化后的重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的酶液与不同pH的缓冲液等比例混合后，并在4℃放置1h，然后测定剩余酶活力(处理条件是50℃反应80min)，以未处理时酶活力记为100％。结果见图6和图7(图6是最适反应pH，图7是在相应pH下先把酶处理后，再与底物反应)。从图6可以看出，在pH8.0时重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的活力最高，表明AlgL1281的最适pH为8.0。从图7可以看出，重组海藻多糖裂解酶AlgL1281在酸性至偏碱性(6-9.5)范围内相对稳定，4℃处理1h后仍能保持60％以上的酶活力。

5、金属离子对酶活性的影响

在纯化后的重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的酶液中分别添加终浓度为1mmol/L或10mmol/L的不同金属离子(Mg²⁺、Sr²⁺、Mn²⁺、Al³⁺、Ba²⁺、Cd²⁺、Fe³⁺、Ca²⁺、Cu²⁺)，37℃放置1h后，测定酶的剩余活力，以未添加金属离子的酶活力为100％，研究金属离子对酶活性的影响，如图8所示。从图8可以看出，金属离子Ca²⁺在浓度为1mmol/L时对重组海藻多糖裂解酶AlgL1281基本没有影响，Mg²⁺、Sr²⁺、Ba²⁺在浓度为1mmol/L时对重组海藻多糖裂解酶AlgL1281有轻微的抑制作用。当浓度为10mmol/L时，Ca²⁺、Sr²⁺、Ba²⁺对酶活力有明显的抑制。10mM的Mn²⁺、Al³⁺几乎能完全抑制酶活。Na⁺、K⁺对酶活的影响单独列出，结果如图9和图10。从图9和图10可以看出，同浓度的Na⁺和K⁺对重组AlgL1281海藻多糖裂解酶的影响。当Na⁺浓度为0.3mol/L时，促进重组海藻多糖裂解酶AlgL1281达到最大酶活力的500％左右，K⁺浓度为0.3mol/L时促进重组海藻多糖裂解酶AlgL1281达到最大酶活力的300％左右，继续增加K⁺浓度，促进作用有降低趋势。重组海藻多糖裂解酶AlgL1281对Na⁺有较强的耐受性，Na⁺增加到0.7mol/L对酶活仍有促进作用。

6、抑制剂和去垢剂对酶活性的影响

在纯化后的重组海藻多糖裂解酶AlgL1281的酶液中分别添加终浓度为1mmol/L或10mmol/L抑制剂(EDTA、DTT、巯基乙醇、CTAB、Urea)和1％或10％去垢剂(SDS、Tween 20、Tween 80、TritonX 100)，37℃放置1h后，测定酶的剩余活力，以未添加抑制剂或去垢剂的酶活力记为100％，研究抑制剂和去垢剂对酶活性的影响。结果如表1所示，重组海藻多糖裂解酶AlgL1281对DTT和吐温80具有很好的抗性，SDS对重组海藻多糖裂解酶AlgL1281有较强的抑制作用。在浓度为1％时，重组海藻多糖裂解酶AlgL1281基本失活。EDTA和CTAB在10mM时对也重组海藻多糖裂解酶AlgL1281有明显的抑制作用，极大的抑制了酶的活性。低浓度的β-ME、尿素以及吐温20对酶活有轻微的抑制。

表1抑制剂及去污剂对酶活性的影响表

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

SEQUENCE LISTING

<110> 集美大学

<120> 一种具有高耐盐性的多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281及其用途

<130> JMDX-19025-CNI

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1089

<212> DNA

<213> Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5

<400> 1

atgaaaaatc taacatctac ttttaaactc acagcactgg ctgctgttac tcctttatta 60

tttatgggct gcgctagtac aaatactaaa cttgaaaata atgcagcagt ccctgcatca 120

aaatttgatt tatcaaactg gaaaattaac gtacctgtcg atttaaacaa cgacggaaaa 180

attgatacag tagacgttaa agaaattcaa acttacgcgc accctgattt tttctacttg 240

gatgatcagg gttatatggt atttgcctcg ccaaataaag cacttaccag cgcaaactca 300

accaataccc gtagtgaatt acgacaaatg atccgcggaa caaacactaa aataaaaact 360

aaaaattcaa aaaacaattt tgcacttgct gtgcacccgc tatcggagcg ttttggctca 420

gtaggcggaa aaatggaagc cacgctcaaa gttgatcatg tagccctgcg tgcaaacgat 480

ccgagtaaaa aagccgctta ttctgtggtg gtagggcaaa ttcacgcagg taaagatcag 540

gcacttatag acactaagct gggttttggc tggggtaacg aaccacttaa aatttattac 600

aaaaaatggc cagggcataa aaccggatcg gtattttgga actacgagcg taacttacca 660

aaaaaagatc ctaaccgaac cgacattact taccctgtat ggggcaacac ctgggaaaac 720

ccagatgacc cagcggctaa cggtattgca ctaggtgacg agtttagcta caccgtgaac 780

gtacataaaa atgttatgca ccttacattt agtgctcaag gcaaaaaaga cgttaactac 840

tctattaact taggtaataa cgtagatgct tatggcaaag tagatgataa agatcatcct 900

aatggctacg ctgccgattg gcattacttt aaagcgggtg cgtataacca atgtagtacc 960

aaaagcgcta aaggaatttg gtacccaggt tgtttaggta cgggtgattg ggctacagac 1020

aagcaaaatg gcgattacgc gcaagtaagc tttaaaaaat tagtattaag cccatcaact 1080

aagccgtaa 1089

<210> 2

<211> 362

<212> PRT

<213> Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5

<400> 2

Met Lys Asn Leu Thr Ser Thr Phe Lys Leu Thr Ala Leu Ala Ala Val

Thr Pro Leu Leu Phe Met Gly Cys Ala Ser Thr Asn Thr Lys Leu Glu

Asn Asn Ala Ala Val Pro Ala Ser Lys Phe Asp Leu Ser Asn Trp Lys

Ile Asn Val Pro Val Asp Leu Asn Asn Asp Gly Lys Ile Asp Thr Val

Asp Val Lys Glu Ile Gln Thr Tyr Ala His Pro Asp Phe Phe Tyr Leu

Asp Asp Gln Gly Tyr Met Val Phe Ala Ser Pro Asn Lys Ala Leu Thr

Ser Ala Asn Ser Thr Asn Thr Arg Ser Glu Leu Arg Gln Met Ile Arg

Gly Thr Asn Thr Lys Ile Lys Thr Lys Asn Ser Lys Asn Asn Phe Ala

Leu Ala Val His Pro Leu Ser Glu Arg Phe Gly Ser Val Gly Gly Lys

Met Glu Ala Thr Leu Lys Val Asp His Val Ala Leu Arg Ala Asn Asp

Pro Ser Lys Lys Ala Ala Tyr Ser Val Val Val Gly Gln Ile His Ala

Gly Lys Asp Gln Ala Leu Ile Asp Thr Lys Leu Gly Phe Gly Trp Gly

Asn Glu Pro Leu Lys Ile Tyr Tyr Lys Lys Trp Pro Gly His Lys Thr

Gly Ser Val Phe Trp Asn Tyr Glu Arg Asn Leu Pro Lys Lys Asp Pro

Asn Arg Thr Asp Ile Thr Tyr Pro Val Trp Gly Asn Thr Trp Glu Asn

Pro Asp Asp Pro Ala Ala Asn Gly Ile Ala Leu Gly Asp Glu Phe Ser

Tyr Thr Val Asn Val His Lys Asn Val Met His Leu Thr Phe Ser Ala

Gln Gly Lys Lys Asp Val Asn Tyr Ser Ile Asn Leu Gly Asn Asn Val

Asp Ala Tyr Gly Lys Val Asp Asp Lys Asp His Pro Asn Gly Tyr Ala

Ala Asp Trp His Tyr Phe Lys Ala Gly Ala Tyr Asn Gln Cys Ser Thr

Lys Ser Ala Lys Gly Ile Trp Tyr Pro Gly Cys Leu Gly Thr Gly Asp

Trp Ala Thr Asp Lys Gln Asn Gly Asp Tyr Ala Gln Val Ser Phe Lys

Lys Leu Val Leu Ser Pro Ser Thr Lys Pro

<210> 3

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 3

cgcggatcca atactaaact tgaaaataa 29

<210> 4

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

ccggaattcc ggcttagttg atgggctta 29

Claims (1)

1.多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281具有高耐盐性的用途,所述多功能海藻多糖裂解酶AlgL1281的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

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