CN110218109A

CN110218109A - 一种优质蔓越莓生长调控剂及其制备方法和使用方法

Info

Publication number: CN110218109A
Application number: CN201910357226.XA
Authority: CN
Inventors: 于志民; 吕品; 郭春景; 王立民; 王化; 赵雪莹; 程正新; 魏殿文; 何丹娆; 周琳; 张继舟; 张悦; 海鹏; 李峰
Original assignee: Institute Of Nature And Ecology Heilongjiang Academy Of Sciences
Current assignee: Institute Of Nature And Ecology Heilongjiang Academy Of Sciences
Priority date: 2019-04-30
Filing date: 2019-04-30
Publication date: 2019-09-10

Abstract

本发明属于肥料生产及应用技术领域，具体涉及一种蔓越莓优质生长调控剂及其制备方法和使用方法。本发明调控剂，按质量百分比其中氮素含量30％‑45％，磷素含量15％‑30％，钾素含量35％‑50％，有机物料含量17％‑25％，第一生物提取物含量1.5％‑2.2％，第二生物提取物含量0.8％‑1.5％。本发明的调控剂能够促进蔓越莓植株快速生长，其中营养配比合理和第一生物提取物生物活性刺激蔓越莓作用明显，匍匐茎枝条比对照长约40cm，匍匐茎数量平均增加2.6枝，叶绿素含量升幅较大，增强作物光合作用，既提高蔓越莓产量品质，又有效解决大面积种植中的扦插枝条短缺问题；调控剂中第二生物提取物使蔓越莓叶霉病、烂果病降低至1％以下，虫害发病率降至5％以下。

Description

一种优质蔓越莓生长调控剂及其制备方法和使用方法

技术领域

本发明属于肥料生产及应用技术领域，具体涉及一种蔓越莓优质生长调控剂及其制备方法和使用方法。

背景技术

蔓越莓，又称蔓越橘、小红莓、酸果蔓，英文名(Cranberry)，是杜鹃花科越橘属红莓苔子亚属(Oxycoccos，又名毛蒿豆亚属)的俗称，常绿灌木，主要生长在北半球的凉爽地带酸性泥炭土壤中，分布于加拿大、美国等区域，与康科特葡萄和蓝毒并称为北美传统三大水果。蔓越莓是美国特产的水果，因其红色酸果中富含维C及其药用价值而美名远扬，蔓越莓在北美的一些地区被大量的种植，收获的果实用来鲜食或做成果汁、果干、果酱等。蔓越莓果实为2-5cm长的卵圆形浆果，成熟后表皮和果肉均呈鲜红色，食用时片酸微甜，与其他食品搭配，可增加食物清爽的口感。即使经过各种烹饪，蔓越莓特有的那种鲜红色也不会发生改变，其口味在烹饪后会有增无减。如今，蔓越莓已成为以美国为代表的西方国家家庭里不可或缺的佐餐佳品。

除了口感极佳外，蔓越莓还具有特殊的医疗价值，研究表明，蔓越莓能清除胃内幽门螺旋杆菌，有利于泌尿系统的保护，蔓越莓果实含有很高的抗氧化物质，有抗衰老、抗癌的作用。蔓越莓还是一种低热量、高纤维、富含维生素矿物质以及生物活性物质的食物，堪称健康营养素的宝库。早在1800年，就有记录表明蔓越莓可用于预防因缺乏维生素C而引起的航海员的坏血病。研究表明，蔓越莓中能提取出大量具有生物学活性的植物化学物质，主要包括原青花素、黄酮醇、花色苷及酚类物质等。这些物质大多具有抗氧化的功能，能抑制生物膜中不饱和脂肪酸的过氧化，保护膜结构和功能的完整，进而预防各种退行性病变。

目前蔓越莓制品非常多，有果汁浓缩物、酸奶、咀嚼片、胶囊、果酒、果干等，且正在大量被引进中国市场。由于在中国蔓越莓仍处于野生状态，仅在东北等地分布有一些野生品种，所以无论是种植栽培和市场开发，还是原料深加工和功能性食品研制，均处于起步阶段。然而，由于独特的口感和天然高效的抑菌及保健功效，蔓越莓及其加工制品在我国果蔬加工行业的开发前景和产品的市场前景潜力巨大。

蔓越莓植株抗寒力强，喜强酸性土壤，喜湿，在国外人工栽培历史悠久，国内人工栽培规模较小，大多以科研为主，近几年在北方进行了蔓越莓规模化种植。但与国外上百年的种植经验相比，国内人工栽培蔓越莓还存在着枝条短缺、营养调控、除草和农机等方面的诸多问题，开展优质蔓越莓栽培技术研究，既能很好的解决规模化种植中枝条短缺的问题，又能为蔓越莓优质丰产提供技术支持，对浆果产业持续发展和经济产业转型升级起到积极推动作用。

根据检索到的资料，目前与本发明相关的技术方案有：

公开号106386317A的发明“一种蔓越莓的栽培方法”中公开的本发明涉及水果种植领域，公开了一种蔓越莓的栽培方法，其中包括蔓越莓苗的选择和种植、水肥管理、修剪、病虫害防治和果实采摘。

公开号107926458A的发明“一种退化泥炭地种植蔓越莓的方法”中公开了本发明属于退化泥炭地恢复利用和植物种植领域，具体涉及一种退化泥炭地种植蔓越莓的方法，其中包括退化泥炭地整理、调酸，蔓越莓育苗、种植和水肥等田间管理措施。

上述现有技术，都是关于蔓越莓的育苗栽培及退化泥炭地种植蔓越莓的方法，其中也有涉及水肥等田间管理，但是在调控剂中添加某些植物提取物，对蔓越莓抗病性、功能成分积累具有积极影响等方面的研究未见报道，缺少适合规模化大面积栽培蔓越莓，适应于水收和旱收种植的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能解决规模化种植中枝条短缺的问题，同时能栽培出优质丰产蔓越莓的蔓越莓生长调控剂。

本发明的目的还在于提供一种优质蔓越莓生长调控剂制备方法。

本发明的目的还在于提供一种优质蔓越莓生长调控剂使用方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种优质蔓越莓生长调控剂，按质量百分比其中氮素含量30％-45％，磷素含量15％-30％，钾素含量35％-50％，有机物料含量17％-25％，第一生物提取物含量1.5％-2.2％，第二生物提取物含量0.8％-1.5％。

所述的氮素中，至少包括氯化铵、硫酸铵、乙酸铵和硝酸铵中的一种；所述的磷素中，至少包括过磷酸钙、磷酸氢钙中的一种；

所述的钾素中，至少包括氯化钾、硫酸钾和硝酸钾中的一种；

所述的有机物料中，至少包含褐煤、泥炭、农作物秸秆、沼渣、腐熟的动物粪便中的一种；

所述的第一生物提取物中，至少包含大黄提取物、冷杉针叶提取物、人参内生菌提取物中的一种；

所述的第二生物提取物中，至少包含紫茉莉甲醇提取物、植物内生菌提取物中的一种。

一种优质蔓越莓生长调控剂制备方法，包括如下步骤：

(1)将氮素、磷素、钾素和干燥粉碎过20目的有机物料按1.29：1：0.55：0.79的质量比例混合，破碎并搅拌均匀；

(2)将两种第一植物提取剂和第二植物提取剂按照比例进行混合，并搅拌均匀；

(3)将步骤(1)和步骤(2)中制得的物料混合并搅拌均匀即得优质蔓越莓生长调控剂；

所述的氮素中，至少包括氯化铵、硫酸铵、乙酸铵和硝酸铵中的一种；所述的磷素中，至少包括过磷酸钙、磷酸氢钙中的一种；所述的钾素中，至少包括氯化钾、硫酸钾和硝酸钾中的一种；所述的有机物料中，至少包含泥炭、农作物秸秆、沼渣、腐熟的动物粪便中的一种；所述的第一生物提取物中，至少包含大黄提取物、冷杉针叶提取物、人参内生菌提取物中的一种；所述的第二生物提取物中，至少包含紫茉莉甲醇提取物、植物内生菌提取物中的一种。

一种优质蔓越莓生长调控剂的使用方法，包括：优质蔓越莓生长调控剂按质量百分比其中氮素含量30％-45％，磷素含量15％-30％，钾素含量35％-50％，有机物料含量17％-25％，第一生物提取物含量1.5％-2.2％，第二生物提取物含量0.8％-1.5％，该优质蔓越莓生长调控剂在蔓越莓缓苗期进行机械扬施，用量为700-800公斤/公顷。

本发明的有益效果在于：本发明的调控剂能够促进蔓越莓植株快速生长，其中营养配比合理和第一生物提取物生物活性刺激蔓越莓作用明显，匍匐茎枝条比对照长约40cm，匍匐茎数量平均增加2.6枝，叶绿素含量升幅较大，增强作物光合作用，既提高蔓越莓产量品质，又有效解决大面积种植中的扦插枝条短缺问题；调控剂中第二生物提取物使蔓越莓叶霉病、烂果病降低至1％以下，虫害发病率降至5％以下。

附图说明

图1为实施例所述的蔓越莓调控剂施用一年后的生长状况图。

图2本发明调控剂施用的最佳关系图谱。

图3为本发明实施效果对比图。

具体实施方式

下面结合附图1-3对本发明做进一步描述。

蔓越莓是一种很常见食物，营养丰富。我国尚无大面积规模化种植，品种和栽培技术是限制我国蔓越莓产业发展的瓶颈。蔓越莓，又称蔓越橘、小红莓、酸果蔓，英文名(Cranberry)，其名称来源于原称“鹤莓”，因蔓越莓的花朵很象鹤的头和嘴而得名。是杜鹃花科越橘属红莓苔子亚属(学名：Oxycoccos，又名毛蒿豆亚属)的俗称，此亚属的物种均为常绿灌木，主要生长在北半球的凉爽地带酸性泥炭土壤中。花深粉红色，总状花序。红色浆果可做水果食用。蔓越莓(Cranberry)、蓝莓和康科特葡萄是美国特产的三种水果。蔓越莓在北美的一些地区被大量的种植，收获的果实用来做成果汁、果酱等。

蔓越莓的商业化生产发展得较晚，许多品种都是从野生种中获得的。目前，北美的主栽品种是1996年培育出的史蒂文斯，史蒂文斯是中熟品种，果实大，着色好，稳产性好。本里尔是另一个栽培较广的品种，早熟，果实更大，但对栽培管理措施比较敏感，稳产性不好。塞尔斯、朝圣者和麦克法林也是比较好的品种，可以在一个园中多栽培几个品种，以减少风险。因为蔓越莓寿命长，可以连续丰产几十年。所以，基地选择和品种的选择就显得很重要了。虽然蔓越莓自花授粉也能结实，但产量低，果实小。通常是多品种混栽，相互授粉，这样可以大大提高座果率，授粉树的配置方式可采用1∶1式或2∶1式。1∶1式即主栽品种与授粉品种每隔1行等量栽植；2∶1式即主栽品种每隔2行定植1行授粉树。蔓越莓在春季和秋季定植均可，其中以秋季定植的成活率更高，若春栽，则越早越好。蔓越莓是浅根性植物(根系分布在10cm厚的表土层中)，栽植床需要排水好、清洁、平整，表面需要覆盖2.5-5.0cm厚的沙子。如果沙层下的土壤是泥炭土，根系将生长得更好。在这样的土壤上栽培蔓越莓，果树的结果期可长达50年。在北美，种植蔓越莓时是把切断的蔓越莓藤茎撒在新整的苗圃沙土中，散播量大约为2t/hm²，然后用耕耙将其翻入或压入土壤，再喷灌浇水和施肥。几周后，插条就长出了新根，新芽也开始萌发生长。良好的根系一旦形成，蔓越莓植株会迅速生长，长满整个栽培床，形成一层坚实的地被。从开始栽植到形成商业产量，需要4个月的时间，若从建园开始计算，则需要7个月。因此，开展蔓越莓引种选育与栽培研究，为蔓越莓产业化提供原料基地，对填补我国蔓越莓生产技术空白，形成自有技术体系，发展蔓越莓产业具有重要战略意义。

本发明旨在通过对蔓越莓种植过程中使用的调控剂进行改良以期得到一种能够稳步提高蔓越莓生产水平的优质蔓越莓生长调控剂。

实施例1

一种优质蔓越莓生长调控剂，按质量百分比其中氮素含量30％-45％，磷素含量15％-30％，钾素含量35％-50％，有机物料含量17％-25％，第一生物提取物含量1.5％-2.2％，第二生物提取物含量0.8％-1.5％。所述的氮素中，至少包括氯化铵、硫酸铵、乙酸铵和硝酸铵中的一种；所述的磷素中，至少包括过磷酸钙、磷酸氢钙中的一种；所述的钾素中，至少包括氯化钾、硫酸钾和硝酸钾中的一种；所述的有机物料中，至少包含泥炭、农作物秸秆、沼渣、腐熟的动物粪便中的一种；所述的第一生物提取物中，至少包含大黄提取物、冷杉针叶提取物、人参内生菌提取物中的一种；所述的第二生物提取物中，至少包含紫茉莉甲醇提取物、植物内生菌提取物中的一种。

该调控剂制备方法，包括如下步骤：

(3)将步骤(1)和步骤(2)中制得的物料混合并搅拌均匀即得优质蔓越莓生长调控剂。

该调控剂的使用方法为：优质蔓越莓生长调控剂在蔓越莓缓苗期进行机械扬施，用量为700-800公斤/公顷。

实施例2

本发明调控剂的使用方法细化为：

(1)种植区规划：规模化人工栽培蔓越莓种植区应选在北纬41°-45°、小于5℃积冷量2000小时和水源便利区域，规范化标准种植区为长200m×宽50m的田块，中间土挖出运走，挖土深1m，回填沙子50cm，沙子粒径0.2-2mm，机械超平，边缘留有40cm-50cm宽排水沟，各田块间筑有宽3m×高1.5m埂道。

(2)压条移栽：剪割收集4月份的蔓越莓匍匐枝枝条，枝条为未风干的、长度10cm以上的，将剪割的枝条打捆运到种植区，人工均匀平铺，用量300kg-350kg/亩。然后，用松土机轮轧，将枝条轧入沙中，深度5cm-10cm。

(3)缓苗措施：浇透水，隔日用喷灌设备施用缓苗剂，缓苗剂为0.7kg硫酸铵、0.3kg磷酸氢二铵、1.2kg硫酸钾分别溶入2.8L质量百分比8％的黄腐酸溶液，复合而成缓苗剂，缓苗剂pH5.5-6.0，兑水800-1000倍可喷灌1亩蔓越莓田。

(4)施剂：在开花前期施入调控剂促进植株生长，调控剂中所含氮素(至少包括脲、氯化铵、硫酸铵、乙酸铵、硝酸铵中的一种)，磷素(至少包括过磷酸钙、磷酸氢钙中的一种)，钾素(至少包括氯化钾、硫酸钾、硝酸钾中的一种)和有机物质(至少包含泥炭、农作物秸秆、沼渣、腐熟的牛羊粪便中的一种，将有机物料晾干粉碎，粉碎至20目)。将氮、磷、钾和有机物料按1.29：1：0.55：0.79的比例混合，将两种第一植物提取剂和第二植物提取剂按照2：1的比例进行混合，搅拌均匀，然后送入造粒机造粒，造粒后送入烘干机，烘干后冷却即得蔓越莓生长调控剂，用量47.5kg/亩。

(5)水分管理：灌溉用水要求不能为碱性，碳酸盐含量小于200mg/L；灌溉量为每次浇水使栽培沙田持水量达到70％；灌溉时间为日平均气温大于23℃时每日9时和15时浇水一次，日平均气温15℃-22℃时每日9时或15时浇水一次，日平均气温低于15℃时根据实际沙田持水量而定。

实施例3

根据实施例1所述的一种优质蔓越莓生长调控剂，其所述的有机物质后还添加有腐殖化褐煤，腐殖化褐煤的加工步骤包括：

(1)粗加工褐煤：取褐煤静止放置在背光通风处晾干，粉碎研磨过60目筛，在温度变化范围为115-117℃的干燥箱中烘干，将烘干后的褐煤放置于玻璃材质的储物容器中；

(2)硝化粗加工褐煤：取步骤(1)的经过粗加工的褐煤，加入质量份数为21％-24％的硝酸浸泡7-9小时后，将褐煤淋洗至中性，在90℃的干燥箱中烘干；

(3)去矿化褐煤：将步骤(3)的褐煤与6mol/L的盐酸溶液按质量比35:6混合，用玻璃器皿搅拌均匀，在震荡机上震荡1天后进行过滤，使用蒸馏水对褐煤洗涤至中性；将褐煤放置在真空干燥箱中70℃条件下进行干燥，向盐酸处理过的褐煤中加入10倍55％的氢氟酸溶液，使用震荡机进行震荡一天，再次进行过滤，再次将盐酸处理过的褐煤用蒸馏水洗涤至中性，并在90℃干燥箱中烘干；

(4)活性化褐煤：取去矿化的褐煤与含8％硫酸的50％的磷酸溶液按质量比6:1混合，用玻璃器皿搅拌均匀后，在90℃条件下浸渍15小时后进行过滤，将过滤后的原料放入恒温炉中，通入氮气，以20℃/min速度升温使褐煤达到390℃后，烘干1小时，烘干过程中每5分钟通一次氮气，在自然条件下使褐煤的温度降至室温，然后使用85-90℃的蒸馏水洗至中性，并在90℃干燥箱中烘干；

(5)褐煤腐殖化：取步骤(4)烘干的褐煤与质量份数30％的氢氧化钠溶液按质量比6:1混合，用玻璃器皿搅拌均匀，室温静止放置两天，直到混合液分层，取下层沉淀，加蒸馏水，搅拌均匀，室温静止放置两天，取下层沉淀，再加蒸馏水反复冲洗，直到静止放置的混合液不分层后，在90℃干燥箱中烘干得到成品褐煤。

本发明提供的腐殖化褐煤的作用在于吸附土壤重金属离子，重金属离子被吸附的过程可分为四个步骤：重金属离子在溶液中向褐煤迁移扩散；重金属离子与褐煤外表面活性位点的吸附作用；重金属离子在褐煤内部孔道内迁移扩散；以及重金属离子与褐煤内表面活性位点吸附作用。

所述腐殖化褐煤的量与优质蔓越莓生长调控剂的量的关系为：

R_f为吸附平衡时的吸附量，R_m为吸附平衡时的最大吸附容量，C_f为调控剂中腐殖化褐煤的浓度；K_L是与吸附活化能有关的常数；K_f是表征吸附能力的参数，n是吸附剂异质性因子，R是气体常数，T是绝对温度，K_T是最大吸附量时的平衡常数。

通过上述关系可以在栽培蔓越莓之前通过合理测量种植土地的重金属含量合理设置调控剂中的褐煤浓度，达到节约成本同时有效吸附重金属。由于腐殖化褐煤量过大，会影响土壤中正离子含量，导致土壤酸碱度失衡，同时也会影响土壤透水能力，因此本发明还可以避免由于腐殖化褐煤量过多导致土地二次污染的问题。

实施例4

本发明所述的大黄提取物的制备方法为：将大黄粉碎，加入质量浓度为12wt％-14wt％的盐酸溶液，大黄粉碎物与所述盐酸溶液的重量体积比为2:7-9g/mL，在50-60℃水解2小时，过滤，滤渣水洗至中性，烘干，用体积分数为85％-95％的乙醇溶液回流提取，所述乙醇溶液与大黄粗粉的体积重量比为10-15:1mL/g，每次提取2-3h，重复提取3-4次，过滤或离心后，液体部分浓缩回收乙醇至含固量为10wt％-15wt％的浓缩液，将浓缩液在160-180℃下喷雾干燥，即成大黄提取物。

或者称取大黄50g，每次加入12倍量蒸馏水，煎煮提取3次，煎煮提取时间为1h/次，3次煎煮的大黄提取物溶液分别过滤后合并滤液；在80℃、0.07-0.09Mpa的条件下减压浓缩至100mL；在-40℃到-44℃，真空度在0.2-0.4mbar下冷冻干燥后得到大黄提取物。

其中大黄为大黄属植物的根、茎、叶中的至少一种。

大黄提取物为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎提取物。掌叶大黄和唐古特大黄药材称北大黄，主产于青海、甘肃、四川等地。药用大黄药材称南大黄，主产于四川、湖北等地。大黄味苦寒，归胃、肝大肠经，有效成分为蒽醌类化合物，包括大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等，有清除氧自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒等功效。

本发明的大黄提取物中，总蒽醌类化合物含量为40-50wt％。提取物制成的干粉中，结合型蒽醌与游离型蒽醌的质量比为1:7-10。

所述大黄提取物在调控剂的浓度为：

Q_t＝K_tt^0.5+C；

K_t为粒子内扩散速率常数，C是与土壤层厚度有关的常数，t为调控剂有效时间。

实施例5

冷杉属于高纬度、高海拔的松树科植物，在几百年前，当地人就认识到了冷杉的药用和保健价值。冷杉精华是基于100％冷杉新鲜针叶细胞液的提取物，采用液化二氧化碳萃取及先进的微囊包裹技术制作而成。经过检测，在西伯利亚冷杉精华中发现了一种极为珍稀的成分——聚戊烯醇。除聚戊烯醇，冷杉精华还含有铁–麦芽酚、氨基醋酸、磷脂酰丝氨酸、酚酸、维生素E乙酸盐等成分。铁–麦芽酚是极其珍稀的元素，因含铁–麦芽酚，使冷杉精华呈深红色。麦芽酚是一种天然的天然抗氧化剂，一方面，它阻断自由基，防止其破坏细胞和机体纤维组织的完整性。而另一方面，能够促进植物对铁元素更好的吸收和消化。

本发明的冷杉针叶提取物的制备方法为：

取冷杉针叶清洗并放置在阴凉处干燥后，用粉碎机粉碎成末；将冷杉针叶粉末过0.3目筛后装入塑封袋，在4℃条件下保存；

取冷杉针叶粉末，每5g用50mL蒸馏水80℃条件下进行热回流提取2小时以上；过滤提取液，收集滤液并用纯净水定容至50mL，减压抽滤得到冷杉针叶提取物；或者取冷杉针叶粉末每5g用50mL质量分数为50％的乙醇溶液通过80℃热回流提取2小时以上，过滤提取液，收集滤液并用质量分数为50％的乙醇溶液定容至50mL，减压抽滤得到冷杉针叶提取物；或者取冷杉针叶粉末，每5g用50mL蒸馏水进行超声波提取30分钟以上，过滤提取液，收集滤液并用纯净水定容至50mL，减压抽滤得到冷杉针叶提取物。

本发明以冷杉针叶为原料，提取分离冷杉针叶中的三萜酸和聚戊烯醇等提取物，开发这些生物活性物质的药用价值，使针叶脂溶性物质得到更为合理利用。采用溶剂萃取法和层析法，提取的选择性和提取率大大提高，所得产品纯度也较高，而且溶剂可回收重复利用，环境较为友好。本发明充分利用针叶脂溶性物质中的三萜酸和聚戊烯醇等，提高了产品的总得率，降低了生产成本，是一种具有推广应用前景的提取分离方法。从冷杉提取分离的针叶三萜酸，使用非常小的剂量，即可影响蔓越莓生长和发育的生理过程，主要表现在提高蔓越莓的产量，具有明显的促进增产作用，与现有其他农药联合使用时，增产效果非常明显。

实施例6

人参内生菌提取物的制备方法为：

用氯化汞、次氯酸钠和无水乙醇对人参根系表面进行消毒，采用组织印迹法检查人参表面消毒是否彻底；用组织分离法对人参内生菌进行分离，用高氏1号培养基对内生放线菌进行分离、用PDA培养基对内生真菌进行分离、用NA培养基对内生细菌进行分离；

配置发酵液培养基，本培养基包括酵母浸膏质量为3.5g、Na₂HPO₄质量为17g、MgSO₄质量为0.2g、可溶性淀粉质量为3.5g、Na₂SO₄质量为1.5g、蛋白胨质量为17g、H₂O容量为1000mL，按顺序的放入高压灭菌锅内，并在100℃，30分钟条件下开始灭菌。待灭菌完毕后，在无菌超净工作台中取直径为7-9mm大小的内生放线菌、内生真菌或内生细菌的菌落2-3块接入发酵液培养基中，密封培养基后放置于温度为30℃的摇床上培养36小时，在转速为125转/分条件下，震荡培养6天，得到发酵液。然后用抽滤机对发酵液进行过滤，并将过滤后得到的发酵液和菌丝体分别用容器收集起来。

将菌丝体和发酵液用乙酸乙酯溶剂分别反复萃取后将滤液与菌丝体混合在一起。该混合物用旋转蒸发仪进行旋蒸浓缩到原体积的50％，收集到浓缩液，将浓缩液引流流入已装好硅胶的硅胶柱，然后用质量配比为1:50乙酸乙酯和石油醚溶剂进行梯度洗脱，采用薄层层析法进行比对，合并其中相同的组分，得到3个组分，将第一组分经过质量配比为15：13：2的乙酸乙酯、乙醇和水进行梯度洗脱、重结晶，得出第一化合物。第二组分经过质量配比为25：1的三氯甲烷和甲醇进行梯度洗脱、重结晶，得出第二化合物。第三组分使用无水乙醇进行洗脱、重结晶，得出第三化合物。

或者将发酵液和菌丝体用正丁醇溶剂分别反复萃取，将滤液与菌丝体合并起来。合并后的混合物用旋转蒸发仪进行旋蒸浓缩收集到浓缩液20g，浓缩液用玻璃棒引流流入已装好硅胶的硅胶柱，然后用质量配比为1:75的乙酸乙酯和石油醚溶剂进行梯度洗脱，采用TLC进行比对，合并其中相同的组分，从中获得4个组分，第四组分有沉淀析出，用乙酸乙酯溶解第四组分，制备薄层，将质量配比为7:1的氯仿和甲醇溶液展开，出现两个色带，刮取两个色带，分别得到第八组分和第九组分，用质量配比为17:5:2的氯仿、甲醇和水继续梯度洗脱第八和第九组分，多次重结晶后分别得出第四化合物和第五化合物；将第五组分用TLC进行比对，合并其中相同的组分，再用质量配比为30:1的氯仿和甲醇溶液继续进行梯度洗脱，洗脱后进行结晶和重结晶，得出第六化合物；第六组分用TLC进行比对，合并其中相同的组分，再用质量配比为50:1的氯仿和甲醇溶液继续进行梯度洗脱，洗脱后进行结晶和重结晶，得出第七化合物；第七组分先用乙酸乙酯溶剂洗脱得出第十组分，再用甲醇、乙酸乙酯和三氯甲烷的混合物进行梯度洗脱，洗脱后对其结晶和重结晶，得出第八化合物。

将上述八种化合物按照比例混合研磨成粉末获得人参内生菌提取物。

人参根中分离的内生菌中可得到苍耳素、异丹参酮II、人参炔醇、2,4,5-三甲基-1,3-苯二酚、2,4-二羟基-3,5,6-三甲基苯甲酸甲酯、甘露醇、青霉酸、麦角甾醇、过氧麦角甾醇、对羟乙基苯酚等化合物，该内生菌提取物可通过不同方式刺激植物生长，可以自身合成或促进宿主植物合成植物必需的生长激素并促进宿主根系以及各器官的生长，协助宿主植物在土壤中吸收有营养的矿质元素，也可通过增强寄主植物对恶劣生长环境和有害病原体的防御能力等方面来使植物稳定生长，而且具有的生物活性也多种多样，如抗病毒活性、酶抑制活性、免疫抑制活性、杀虫活性、抗微生物活性、抗氧化活性、抗原生动物活性。

实施例7

紫茉莉(Mirabilis jalapa L.)，又叫草茉莉、胭脂花或粉豆花，属于紫茉莉科，紫茉莉属，是一种多年生观赏花卉，常作一年生栽培，高度可达1m。原产于南美，具有生态适应广、耐贫瘠、生长速度快、繁殖力强等生物特性，在我国很多地区均有栽培。根部含有氨基酸、有机酸和大量淀粉，花含多种甜菜黄素等黄色素，根和叶可以入药，具有清热解毒、活血调经和滋补的功效。近年来，紫茉莉的研究得到重视，其在医药、植物保护、环境保护方面也显示出了研究价值。发明人研究发现，紫茉莉具有制备植物源农药的潜力。

本发明所述的紫茉莉甲醇提取物的提取方法包括：

取紫茉莉粉碎物，用10倍质量的甲醇对紫茉莉粉碎物提取48小时以上，对上述溶液进行抽滤，过滤得到的残渣继续使用同样的方法通过甲醇对紫茉莉粉碎物提取48小时，并将两次抽滤得到的提取液合并浓缩到原体积的1/2,回收有机溶剂，获得紫茉莉甲醇提取物。

本发明的发现紫茉莉甲醇提取物有抗植物病毒作用，提取物对小菜蛾、菜粉蝶、斜纹夜蛾等均有杀灭作用。

实施例8

植物内生菌是指那些其全部或部分生活史在健康植物的各种组织或细胞内部度过的真菌或细菌(包括放线菌)，其存在不引起明显的宿主感染症状，但可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内部植物扩增出微生物DNA的方法来证明其内生性。其广泛分布在植物的根、茎、叶、花、果实中，对宿主植物无害，宿主植物为其提供生长所需的营养物质，其促进宿主植物合成活性成分，并且帮助宿主植物代谢毒素，抵抗外界的攻击和侵食。两者互利共生，拮抗平衡。植物内生菌的种类和数量受宿主植物种类和外在环境影响很大。不同植物菌种不同，同种植物不同地点、不同温度、不同环境菌种不同，即使同一植物不同时间菌种也会不同。作为一种微生物新资源，其生长周期短、代谢易于控制、菌种易于选育及可通过大规模发酵实现工业化生产等的优点使人们对其日益关注。

本发明的植物内生菌提取物的制作方法为：

取植物的叶子，用纯净水冲洗干净叶片上的杂质，在阴凉处晾干叶片表面水分；进行页面消毒处理：用浓度70％酒精漂洗植物叶子5min以上，用纯净水漂洗植物叶子3次以上；然后用浓度3％的次氯酸钠溶液漂洗5min以上，再用纯净水漂洗植物叶子3次以上，在阴凉处晾干叶片表面水分，将上述表面消毒后的叶片切割成小块置于PDA培养基上，在30℃的恒温环境下培养8天。

待叶片小块边缘长出菌丝后用消毒的镊子将菌丝转入另一PDA培养基内，采用平板划线方法纯化菌落，待纯化完全后，取纯化后的菌株，对菌株进行液体发酵，过滤发酵液，取滤液加乙酸乙酯进行萃取，萃取2次。合并萃取液在40℃条件下减压蒸干，得到粗浸膏即次级代谢产物。

或者取菌丝转入装有100ml的PDB培养液的250ml容量的锥形瓶中，进行30℃、160rpm的恒温振荡培养，培养时间60小时。将锥形瓶中的菌液接种于装有500ml的PDB培养液的1000ml容量的锥形瓶中，进行30℃、160rpm的恒温振荡培养，培养时间240小时。分别对上述两种菌液和菌丝用乙酸乙酯进行萃取，萃取5次。将萃取液在40℃条件下进行减压蒸干，得到发酵粗提物。甲醇溶解菌液和菌丝，加等量硅胶搅拌，用石油醚湿法装柱，采用石油醚:丙酮为5:0.7-1:9和二氯甲烷:甲醇12:1-0:1的溶液进行不同浓度梯度洗脱得到提取物组分，采用TLC进行比对，合并其中相同的组分，得到一个粗组分提取物，用氯仿和甲醇溶解后静置，溶液中析出透明结晶，清洗结晶表面杂质后得到植物内生菌提取物。

所述的植物内生菌提取物包括青霉酸、麦角甾醇、二氢青霉酸、胸腺嘧啶、吲哚-3-甲酸。

所述的植物包括短叶紫衫树皮、黄杨叶子、披碱草叶子、九里香叶子、番茄叶子、韭菜叶子、山药叶子、石榴叶子和石榴皮。

对本发明的研究表明：植物内生菌提取物的浓度与受测试种子出芽率呈现负相关。当植物内生菌提取物溶液浓度为2mg/ml时，稗草、田旋花和龙葵种子的出芽率为0。当植物内生菌提取物溶液浓度为2.25mg/ml时,反枝苋、狗尾草和牛筋草种子的出芽率为0。因此，本发明对于蔓越莓的除草效果更加明显。

实施例9

本发明在有机物料中增加了纤维素降解菌，具体的培养方法为：

在已灭菌的110ml的富集培养基中加入10g纤维素降解菌，在220r/min，35℃下恒温振荡240天。然后取100ml的菌液在3000r/min的条件下离心20min，用纯净书将5ml上清液进行梯度稀释，分别吸取0.1ml的稀释液在CMC平板上进行涂布操作，每个梯度重复3次。在35℃恒温下培养120小时后，挑取单菌落在CMC培养基上进一步分离、纯化培养，纯化的菌落分别点种在CMC平板上，重复3次，35℃下培养144小时，用2g/L的刚果红染液，染色1小时，滤掉染液，再加入1mol/L的NaCl溶液，洗涤1小时。

检测菌落处有无明显的透明圈并测量统计透明圈直径和菌落直径。将透明圈直径和菌落直径的比值最大的菌株制备菌悬液，分别移取3ml接种到滤纸条培养基中，在35℃恒温培养箱中培养240小时，观察滤纸条的变化，选择滤纸条被降解程度最高的细菌菌株接种到LB培养基，于240r/min、35℃条件下恒温振荡培养25小时后，进行DNA提取和PCR扩增，然后用质量分数1％的琼脂糖凝胶电泳进行检测PCR产物。菌株经6SrDNA测序，利用BLAST功能组件将测得的基因序列进行同源性比较，选取相似性更高的菌株作为纤维素降解菌。

在堆肥过程中，离不开各种微生物的主导作用。虽然秸秆堆肥本身含有一些微生物，但由于秸秆成分中木质纤维素的复杂结构限制分解速度，只有少数微生物起到分解的作用，因此研究学者为了提高堆肥效率，在堆肥过程中加入促腐菌剂，来补充堆肥中的微生物种类，增加微生物数量，微生物产生的酶类更丰富，各菌种各司其职又协调配合，在堆肥中使有机物快速腐解，堆肥腐熟更快。

实施例10

所述的施剂3天后向土壤中撒入大蒜根系腐解液，腐解液的制作方法为：

称取20g剪碎成0.5cm长度的大蒜根系放置于3L玻璃器皿中，加入2L土壤稀释溶液，放入30℃恒温培养箱中避光培养。25天后提取腐解液：过滤2次后进行真空抽滤，用乙酸乙酯充分萃取分液之后40℃旋转蒸发浓缩至15mL得到大蒜根系腐解液，置于5℃冰箱保存。

土壤酶是土壤组分中的活跃成分，其参与土壤中众多代谢活动，与土壤肥力密切相关。大蒜能够提高土壤中磷酸酶活性，促进磷素周转、循环，原因是它能够促进根际微生物多样性增加。大蒜秸秆腐解物能显著提高土壤pH和土壤电导率值，且秸秆腐解物能够在一定程度上增加土壤中全氮和有机碳含量，提高土壤中蔗糖酶、脲酶及碱性磷酸酶活性。

实施例11

需要指出的是，本发明第一第二生物提取物的比例含量随比例变化呈现互相促进和制约的情况。举例说明，植物内生菌有除草的效果，然而紫茉莉甲醇提取物和人参内生菌提取物对其均有抑制作用，由于涉及实验数据量过大，这里不一一阐述相互促进和抑制的实验数据，

本发明在施用过程中，将调控集中各组分含量进行调整后，实测蔓越莓苗生长规律，经过数据拟合，我们得到了蔓越莓长苗高度(cm)与本发明调控剂施用的最佳关系图谱：

其中t为第一生物提取物的含量，1.5％≤t≤2.2％，T为第二生物提取物的含量，0.8％≤T≤1.5％，G为调控剂每公斤每公顷施用量，700≤G≤770，将上式中括号内包含第一第二生物提取物的参数统一代表为A，如图2所示，其中曲线为拟合曲线，点为实际采样点。

综上所述，本发明具体涉及一种优质蔓越莓生长调控剂及其制备方法和使用方法。通过控制植物提取剂用量和配比，结合营养元素复合而成调控剂，既适合蔓越莓生长规律和生理特性，满足蔓越莓快速生长的营养需求，尤其是蔓越莓直立茎、匍匐茎数量增多，枝条显著增长，又具有杀虫、抑菌和抗病毒活性等作用，对植株的开花数、座果数均有所提高，这不仅解决蔓越莓大规模种植中存在的枝条短缺问题，也为蔓越莓丰产提质打下坚实基础，经济效益明显。这里必须指出的是，本发明给出的其他未说明的技术因为都是本领域的公知技术，根据本发明所述的名称或功能，本领域技术人员就能够找到相关记载的文献，因此未做进一步说明。本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述实施方式所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。

Claims

1.一种优质蔓越莓生长调控剂，其特征在于：按质量百分比其中氮素含量30％-45％，磷素含量15％-30％，钾素含量35％-50％，有机物料含量17％-25％，第一生物提取物含量1.5％-2.2％，第二生物提取物含量0.8％-1.5％。

2.根据权利要求1所述的一种优质蔓越莓生长调控剂，其特征在于：所述的氮素中，至少包括氯化铵、硫酸铵、乙酸铵和硝酸铵中的一种；所述的磷素中，至少包括过磷酸钙、磷酸氢钙中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种优质蔓越莓生长调控剂，其特征在于：所述的钾素中，至少包括氯化钾、硫酸钾和硝酸钾中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种优质蔓越莓生长调控剂，其特征在于：所述的有机物料中，至少包含褐煤、泥炭、农作物秸秆、沼渣、腐熟的动物粪便中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种优质蔓越莓生长调控剂，其特征在于：所述的第一生物提取物中，至少包含大黄提取物、冷杉针叶提取物、人参内生菌提取物中的一种。

6.根据权利要求1所述的一种优质蔓越莓生长调控剂，其特征在于：所述的第二生物提取物中，至少包含紫茉莉甲醇提取物、植物内生菌提取物中的一种。

7.一种优质蔓越莓生长调控剂制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

8.一种优质蔓越莓生长调控剂的使用方法，其特征在于，包括：优质蔓越莓生长调控剂按质量百分比其中氮素含量30％-45％，磷素含量15％-30％，钾素含量35％-50％，有机物料含量17％-25％，第一生物提取物含量1.5％-2.2％，第二生物提取物含量0.8％-1.5％，该优质蔓越莓生长调控剂在蔓越莓缓苗期进行机械扬施，用量为700-800公斤/公顷。