CN110215405A - 低氘水作为皮肤外用剂的应用及含其的皮肤外用剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了低氘水在制备皮肤外用剂中的应用，及一种含低氘水的皮肤外用剂。本发明首次发现，氘含量不高于132ppm的低氘水可以明显促进表皮角质细胞的增殖，增强细胞增殖相关蛋白Ki‑67的表达，增加真/表皮厚度，改善表皮内稳态等作用。低氘水作为皮肤外用剂中的抗衰老活性成分、保湿活性成分和修复活性成分，因而，本发明的含低氘水的皮肤外用剂具有增加皮肤弹性、抗皱、保湿、修复老化皮肤的功效。

Description

低氘水作为皮肤外用剂的应用及含其的皮肤外用剂

技术领域

本发明涉及低氘水作为皮肤外用剂的应用及含其的皮肤外用剂。

背景技术

自然界里存在的水一般由2个氢原子和1个氧原子组成，但氢原子有质量不同的3个同位素，原子量量分别为1、2、3的氢(H)、氘(D，重氢)、氚(超重氢)。自然界的水中，重氢的含量约为150ppm，由D代替H结合的水就是重水。国内外研究表明，重氢对生命体的生存发展和繁衍有害。科学界将氘元素低于150ppm的水称之为低氘水(deuterium depleted water，简称DDW)。氘含量较低的低氘水，被称之为轻氢分子水，又称超轻水、贫氘水。低氘水对人体健康有诸多好处，更有益于生命体的生存和繁衍，对于人类的健康具有重要意义。它不仅应用于科学研究，还能活化免疫细胞、改善机体基础代谢水平、抗细胞突变和延缓衰老等功能，更有益于生命体的生存发展和繁衍，对于人类的健康具有重要意义。

我们的皮肤每天都会接触到水，皮肤医学也将各种水作为辅助剂用在皮肤保湿、皮肤老化的治疗以及腐蚀性化妆步骤后的皮肤再生等方面。在过去的几十年中，多项研究证明了矿物泉水的生物功效，并认为他们的化学和热力性质对皮肤细胞生理学和内稳态具有直接的影响，但都需要到专门的水源地获取。

皮肤是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力的功能。皮肤覆盖全身，能阻挡住外来侵入，亦能起到保水、保暖、阻隔、感觉之用；它使体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭。人和高等动物的皮肤由表皮、真皮、皮下组织三层组成。

自然老化会导致表皮层和真皮层变薄，皮肤会出现松弛、干燥粗糙、弹性下降、皱纹增多等老化现象，真-表皮连接处(DEJ)表现为结构和功能面临挑战，导致两层之间营养物质的传输减少。生命过程中，真皮衰老表现为真皮对外来化学物清除力下降，真皮厚度变薄、胶原蛋白和弹性蛋白合成减少、分解增加，分解酶活性增强。人皮肤成纤维细胞是皮肤真皮网织层中最重要的细胞，是皮肤衰老和受损后的主要修复细胞之一，它不但能够促进表皮细胞的迁移、增殖和分化，还能分泌大量的胶原蛋白、弹性纤维蛋白及多种细胞修复因子，具有强大的自我更新能力，从而修复老化的皮肤。表皮层中，增殖下降以及衰老角质细胞的出现导致表皮细胞更新速度逐渐降低。表皮更新，对于年轻人来说需要28天，而对于老年人需要40-60天，从而影响了皮肤的屏障功能、保湿和修复。

综合上述的文献和专利调研，未见关于低氘水用于在具有抗衰老、保湿、弹性紧致和再生修复功效的皮肤外用剂中的专利申请和文献。

发明内容

本发明所解决的技术问题是为了开发出一种具有良好皮肤改善作用的护肤制剂，而提供了一种低氘水作为皮肤外用剂的应用及含其的皮肤外用剂。本发明的含低氘水的皮肤外用剂天然、安全可靠、机理明确，具有增加皮肤紧致弹性，抗皱抗老，修复老化皮肤，保湿锁水的功效。

本发明人通过大量研究发现：1)低氘水可以明显促进表皮角质细胞的增殖，增强细胞增殖相关蛋白Ki-67的表达，增加真/表皮厚度，改善表皮内稳态；2)在低氘水的3D全层皮肤模型培养环境下，表皮基底层结构规则细胞紧凑，真/表皮细胞功能活动旺盛；3)低氘水可以提高皮肤天然保湿因子丝聚合蛋白和透明质酸的表达；4)低氘水能显著增加真皮弹性蛋白和I型胶原蛋白的分泌；5)低氘水可以显著促进真-表皮连接处层粘连蛋白332的表达；6)低氘水具有良好的抗衰老、保湿以及修复的作用。

本发明中，所述的3D全层皮肤模型是指将表皮角质细胞和真皮成纤维细胞在模拟人体自然条件的微环境下共培养，形成组分、结构和功能都近似于真实人体皮肤的组织工程皮肤。

由此，本发明提供了一种低氘水作为皮肤外用剂的应用，所述的低氘水中氘含量不高于132ppm；所述的低氘水作为所述皮肤外用剂中的抗衰老活性成分、保湿活性成分和修复活性成分中的一种或多种。

本发明中，所述抗衰老活性成分可为本领域常规作用的抗衰老活性成分，优选为具有促进表皮角质细胞的增殖、增强Ki-67蛋白的表达、增加真/表皮厚度、增加皮肤真皮弹性蛋白的分泌和增加I型胶原蛋白的分泌中一种或多种作用的抗衰老活性成分，更优选为具有增强Ki-67蛋白的表达、增加真/表皮厚度和增加皮肤真皮弹性蛋白的分泌中一种或多种作用的抗衰老活性成分。

本领域技术人员均知，所述Ki-67蛋白表征细胞增殖、表皮更新、再生和修复的能力。

本领域技术人员均知，所述弹性蛋白是弹性纤维的主要成分，肌肤中的弹性蛋白的成分减少，会降低对维持紧致肌肤所需要的网络支持，使肌肤变得松弛。

本领域技术人员均知，所述I型胶原蛋白构成了皮肤在真皮层的基本支架，使皮肤拥有弹性。

本发明中，所述保湿活性成分可为本领域常规作用的保湿活性成分，优选为具有提高皮肤丝聚合蛋白的表达和/或透明质酸表达作用的保湿活性成分。

本领域技术人员均知，所述丝聚合蛋白是一种天然保湿因子，是一种存在于人体表皮层中的蛋白质-丝聚合蛋白于角质层的角化细胞内降解而产生的亲水性吸湿物质，能在角质层中与水结合，并通过调节、贮存水份达到保持角质细胞间含水量的作用，使皮肤自然呈现水润状态。所述丝聚合蛋白也是参与皮肤屏障的重要因子，主要功能是参与表皮细胞的分化及皮肤屏障的形成、表皮物理屏障作用、表皮保水作用、表皮酸性环境的维持和表皮防晒等作用。

本领域技术人员均知，所述透明质酸具备保持水份的能力，份量更高达其本身重量的100倍。皮肤中透明质酸具有保水、维持细胞外的空间、参与角蛋白细胞的变化过程、受体结合作用和清除自由基作用等的生理功能。

本发明中，所述修复活性成分可为本领域常规作用的修复活性成分，优选为具有促进真-表皮连接处层粘连蛋白332表达作用的修复活性成分。

本领域技术人员均知，所述层粘连蛋白332是上皮组织基底膜的主要组成蛋白之一，具促进上皮细胞粘附，迁移和细胞分化等功能。

本发明中，所述低氘水可按本领域常规分离制备方法制得，例如化学交换法、蒸馏法、电解法、热扩散法、膜扩散吸附法、离心法或激光法，优选为化学交换法或蒸馏法。

本发明中，所述的低氘水中氘含量优选为0-132ppm，但不为0，例如5、10、25、50或132ppm。

本发明中，所述的低氘水中氘含量优选为50-132ppm，例如50ppm、132ppm。

具体地，所述低氘水具有可以明显促进表皮角质细胞的增殖，增加真/表皮厚度，改善表皮内稳态；促进屏障功能修复和天然保湿因子的分泌；明显增强皮肤中透明质酸的表达；促进与细胞粘附、抗老相关的层粘连蛋白332的表达。因而低氘水具有抗衰老、保湿和修复的功效。

本发明中，优选地，所述低氘水中不含有矿物质。

本发明中，优选地，所述低氘水只含有0-132ppm的氘，但不为0；更优选地，所述低氘水只含有50-132ppm的氘。

其中，所述矿物质可为本领域常规的矿物质，例如Sr⁺、K⁺、Na⁺、Ca²⁺和Mg²⁺中的一种或多种。

本发明还提供了一种皮肤外用剂，其含有低氘水，所述的低氘水中氘含量不高于132ppm；所述低氘水相对于所述皮肤外用剂的重量百分比含量大于1％，且小于等于99％。

其中，所述低氘水的制备方法同前述定义。

本发明中，优选地，所述低氘水相对于所述皮肤外用剂的重量百分比含量为80～90％，例如84.27％、86.11％或87.16。

本发明中，所述皮肤外用剂是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆品或药品。所述化妆品中可以是基础化妆品、面部妆容化妆品、身体用化妆品和头部用护理品等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。

本发明中，所述的皮肤外用剂还可以包含其他活性成分，所述其他活性成分优选为保湿活性成分、抗氧化活性成分、控油活性成分、美白活性成分和抗衰老活性成分中的一种或多种。所述其他活性成分的含量为本领域常规的含量。

其中，所述的保湿活性成分包括天然保湿活性成分和/或合成保湿活性成分。所述天然保湿活性成分可以选自：角鲨烷、霍霍巴油、蜂蜜、灵芝提取液、芦荟提取物、透明质酸、神经酰胺、丝蛋白类保湿活性成分和胶原蛋白等天然物质中的一种或多种。所述合成保湿活性成分可以选自：多元醇类保湿成分、乳酸钠、葡萄糖衍生物、聚丙烯酸树脂、蓖麻油或其衍生物、甲壳素壳聚糖或其衍生物、和、吡咯烷酮羧酸钠等化学合成物中的一种或多种。所述多元醇类保湿成分可为甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、聚乙二醇和聚甘油中的一种或多种。

其中，所述灵芝提取液可采用本领域常规的制备方法进行制备，例如将灵芝子实体采用水或有机溶剂浸提，即可。

其中，所述芦荟提取物可采用本领域常规的McAnalley和Coats冷处理法进行制备。所述芦荟可为本领域常规的芦荟品种，例如巴巴多斯芦荟(Aloe barbadensis Mill.)、中国芦荟[Aloe vera var chinesis(haw.)Berg.]、木立芦荟(Aloe aeboresens Mill.)和青鳄芦荟(Aloe ferox Mill.)中的一种或多种。

其中，所述的抗氧化活性成分可以选自：黄酮类抗氧化活性成分、鞣质类抗氧化活性成分、醌类抗氧化活性成分、二肽类氨基酸、糖醇类抗氧化活性成分、多酚类抗氧化活性成分、生物碱类抗氧化活性成分、维生素类抗氧化活性成分和植物提取物类的抗氧化活性成分中的一种或多种。

所述黄酮类抗氧化活性成分可为水飞蓟素、黄芪苷、芦丁、槲皮素、青兰苷、双氢青兰苷和芒果苷等中的一种或多种。

所述鞣质类抗氧化活性成分可为表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯和儿茶素等中的一种或多种。

所述醌类抗氧化活性成分可为紫草素等。

所述二肽类氨基酸可为蛋氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸等中的一种或多种。

所述糖醇类抗氧化活性成分可为五碳糖、六碳糖单糖、百合多糖、果糖和糖醇等中的一种或多种。

所述多酚类抗氧化活性成分可为谷物的胚芽、葡萄酚、迷迭香酚、表迷迭香酚和异迷迭香酚等中的一种或多种。

所述生物碱类抗氧化活性成分可为川穹嗪、药根碱、木兰碱、海罂粟碱和潘荔枝碱等中的一种或多种。

所述维生素类抗氧化活性成分可为维生素E、维生素C和类胡萝卜素中的一种或多种。

所述植物提取物类的抗氧化活性成分可为凹顶藻提取物等。所述凹顶藻提取物可采用本领域常规的制备方法进行制备，例如将凹顶藻采用水或有机溶剂浸提，即可。所述凹顶藻可为本领域常规的凹顶藻品种，例如复生凹顶藻(Laurencia composita Yamada)、冈村凹顶藻(Laurencia okamurai Yamada[L.japonica])和钝形凹顶藻(Laurencia obtusa(Hads)Lamx)中的一种或多种。

其中，所述的控油活性成分可以选自：收敛剂、清凉剂、维生素类控油活性成分和角质剥离溶解剂中的一种或多种。

所述收敛剂可为氧化锌、硫酸锌、氯化铝、硫酸铝、单宁酸、柠檬酸和乳酸等中的一种或多种。

所述清凉剂可为酒精和/或薄荷。

所述维生素类控油活性成分可为维生素B6、维生素B3和维生素H中的一种或多种。

所述角质剥离溶解剂可为水杨酸和/或果酸等。

其中，所述的美白活性成分可以选自：熊果苷或其衍生物、曲酸或其衍生物、壬二酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、维生素C或其衍生物、和、果酸中的一种或多种。

其中，所述的抗衰老活性成分可以选自：维生素类抗衰老活性成分、过氧化酶和植物提取物中的一种或多种。

所述维生素类抗衰老活性成分可为维生素A和/或维生素B。

所述过氧化酶可为过氧化歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化酶GPO和过氧化氢酶等中的一种或多种。

所述植物提取物可为刺山柑芽提取物和/或飞机草提取物。

所述刺山柑芽提取物可采用本领域常规的制备方法进行制备，例如将刺山柑芽采用水或有机溶剂浸提，即可。所述刺山柑芽为刺山柑(Capparis spinosa L.)植物的芽。

所述飞机草提取物可采用本领域常规的制备方法进行制备，例如将飞机草采用水或有机溶剂浸提，即可。所述飞机草的植物学名为Chromolaene odorata L。

按照本领域常识，根据不同的剂型和目的，所述的皮肤外用剂中还可以含有本领域中常规使用的介质或基质赋形剂，只要所述赋形剂为化妆品或药学领域中可接受的赋形剂。所述赋形剂的含量为本领域常规的含量。

其中，所述赋形剂的形式可以为水相、油相、凝胶、水包蜡型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。所述水相可以为一种或多种水溶性或分散性组分的混合物，其在室温下可以为液体、半固体或固体。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的赋形剂的形式，以及其中包含的组分。

当所述赋形剂的形式为水相时，所述赋形剂优选为包括水，或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物。所述的亲水性有机溶剂可为醇，例如含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇和/或多元醇。所述“含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇”可为乙醇和/或丙醇。所述多元醇可为丙二醇、山梨醇、甘油、泛醇和聚乙二醇中的一种或多种。

当所述赋形剂的形式为乳液时，优选地，所述的皮肤外用剂还可以包括流变改进剂和/或成膜剂。

其中，所述流变改进剂可以选自：高分子增稠剂、疏水改性的丙烯酸酯共聚物、疏水改性的乙氧基化聚胺酯和疏水改性非离子多羟基化合物中的一种或多种。

所述疏水改性的丙烯酸酯共聚物可为丙烯酸酯/Steareth-20丙烯酸甲酯共聚物、和/或、丙烯酸酯/Beheneth-25丙烯酸酯共聚物。

所述疏水改性的乙氧基化聚胺酯可为PEG-150/癸醇/SMDI共聚物、和/或、PEG-150/硬脂醇/SMDI共聚物。

所述疏水改性非离子多羟基化合物可为PEG-150二硬脂酸盐。

所述高分子增稠剂可以选自：纤维素类增稠剂、聚丙烯酸类增稠剂、天然胶或其改性物、无机高分子或其改性物、聚氧乙烯类增稠剂和其它类增稠剂中的一种或多种。所述纤维素类增稠剂可以选自：纤维素、纤维素胶、羧甲基羟乙基纤维素、鲸蜡羟乙基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素和羧甲基纤维素等中的一种或多种。所述聚丙烯酸类增稠剂可以选自：丙烯酸酯/C_10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸酯/十六烷基乙氧基(20)衣康酸酯共聚物、丙烯酸酯/十六烷基乙氧基(20)甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/十四烷基乙氧基(25)丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/十八烷基乙氧基(20)衣康酸酯共聚物、丙烯酸酯/十八烷基乙氧基(20)甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/十八烷基乙氧基(50)丙烯酸酯共聚物、丙烯酸酯/VA交联聚合物、丙烯酸钠/乙烯异癸酸酯交联聚合物和聚丙烯酸或其钠盐等中的一种或多种。所述天然胶或其改性物可以选自：海藻酸或其盐(例如铵盐、钙盐和钾盐中的一种或多种)、果胶、透明质酸钠、瓜尔胶、黄原胶、阳离子瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶、黄蓍胶、鹿角菜胶或其盐(例如钙盐和/或钠盐)、汉生胶和菌核胶等中的一种或多种。所述无机高分子或其改性物可以选自：硅酸铝镁、二氧化硅、硅酸镁钠、水合二氧化硅、蒙脱土、硅酸锂镁钠、水辉石、硬脂铵蒙脱土、硬脂铵水辉石、季铵盐-90蒙脱土、季铵盐-18蒙脱土和季铵盐-18水辉石等中的一种或多种。所述聚氧乙烯类增稠剂可以选自：PEG-n(n可为5M、9M、23M、45M、90M或160M)等。所述其它类增稠剂可以选自：聚乙烯甲基醚/丙烯酸甲酯与癸二烯的交联聚合物、和/或、聚乙烯吡咯烷酮等。

其中，所述成膜剂可为本领域常规使用的成膜聚合物，只要其可溶于或分散于所述赋形剂中。所述成膜剂优选为聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯、基于烃的树脂和硅氧烷树脂中的一种或多种。

当所述赋形剂的形式为油相时，优选地，所述赋形剂包括在室温下为液体的油溶性或油分散性组分和/或在室温下为油状或蜡状的物质。

其中，所述在室温下为液体的油溶性或油分散性组分优选为包括来源于动物的基于烃的油、基于烃的甘油三酯类、矿物或合成来源的直链或支链烃类、合成酯类、合成醚类、羟基化酯类、多元醇酯类、含有C_12-26的脂肪醇类、基于部分烃的氟油和基于部分烃的氟硅油中的一种或多种。

所述来源于动物的基于烃的油可为全氢化角鲨烯。

所述基于烃的甘油三酯类可为液体的C_4-10脂肪酸的甘油三酯类和/或植物油。所述液体的C_4-10脂肪酸的甘油三酯类可为庚酸甘油三酯、辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯中的一种或多种。所述植物油可为向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄籽油、蓖麻油、鳄梨油和霍霍巴油中的一种或多种。

所述矿物或合成来源的直链或支链烃类可为液体石蜡或其衍生物、和/或、凡士林。

所述合成酯类可为脂肪醇的酯类，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯和异硬脂酸异硬脂醇酯中的一种或多种。所述羟基化酯类可为乳酸异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛基十二烷基酯、脂肪醇的庚酸酯类、辛酸酯类和癸酸脂类中的一种或多种。所述多元醇酯类可为丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二异壬酸酯和季戊四醇酯类中的一种或多种。

所述含有C_12-26的脂肪醇类可为辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一烷基十五烷醇和油醇中的一种或多种。

所述基于部分烃的氟硅油中的硅油是指在室温下为液体或半固体的挥发性或非挥发性的直链或环状聚甲基硅氧烷，例如环状聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基硅氧烷。所述硅油可包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷和/或硅氧烷。

其中，所述在室温下为油状或蜡状的物质，例如蜡和/或树胶。

所述的蜡可为包括基于烃的蜡、氟蜡和硅氧烷蜡中的一种或多种，还可为包括蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、石蜡、微晶蜡、地蜡、聚乙烯蜡和含有C_16-45的硅氧烷蜡中的一种或多种。所述基于烃的蜡、氟蜡和硅氧烷蜡的来源可为植物、矿物、动物或人工合成。

所述的树胶可为聚二甲基硅氧烷、羧甲基纤维素钠和多糖类中的一种或多种。所述树胶为半固体物质时，其一般为基于烃的化合物，例如羊毛脂或其衍生物。

本发明的皮肤外用剂还可以进一步包含常规的用于化妆品领域中的任何其他组分，例如防腐剂、芳香剂、亲水性活性剂和亲脂性活性剂中的一种或多种。上述其他组分的含量可为本领域常规的含量。

本发明中，所述皮肤外用剂还可以包含颗粒相，所述的颗粒相可以为化妆品组合物中使用的颜料、珠光剂和填充剂中的一种或多种。所述颗粒相的含量可为本领域常规的含量。所述颜料优选为无机颜料和/或有机颜料。所述无机颜料优选为包括氧化钛、氧化锆、氧化铈、氧化锌、氧化铁和铁蓝中的一种或多种。所述有机颜料优选为包括钡色淀、锶色淀、钙色淀、铝色淀和碳黑中的一种或多种。所述珠光剂优选为涂覆了氧化钛、氧化铁或天然颜料的云母。所述填充剂优选为包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸锌、云母、高岭土、尼龙粉末、聚乙烯粉末、特氟龙、淀粉、一氮化硼和共聚物微球中的一种或多种。所述的共聚物微球优选为硅氧烷树脂微珠。

本发明的皮肤外用剂还可以进一步包括抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂和维生素中的一种或多种。上述成分的含量可为本领域常规的含量。

本发明中，所述的皮肤外用剂的形式可以为任何合适的产品形式，所述的产品形式包括、但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾中的一种或多种。众所周知地，本发明的皮肤外用剂可为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品，其制备方法可为本领域常规的制备方法。

在本发明的优选实施方式一中，所述的皮肤外用剂为化妆水，所述的皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，多元醇类A3-6％，甜菜碱1％，泛醇0.5％，甘草酸二钾0.05-0.1％，其他活性成分A0.11-2.0％，聚乙二醇-32 0.5％，表面活性剂A0.15-0.2％，防腐剂A 0.4-0.45％，黄原胶0-0.15％，木瓜提取物0-2.0％，香料0.03％和所述低氘水84.27-87.16％；其中，所述的多元醇类A为丁二醇、1,2-戊二醇和双丙甘醇中的一种或多种；所述其他活性成分A为尿囊素、烟酰胺和透明质酸钠中的一种或多种；所述表面活性剂A为羟乙基纤维素、聚山梨醇酯-20和PEG-40氢化蓖麻油中的一种或多种；所述防腐剂A为防腐剂IS-45、羟苯甲酯和苯氧乙醇中的一种或多种。

按照本领域常识，所述防腐剂IS-45为美国Germall公司生产的防腐剂，其中含有丙二醇、双咪唑烷基脲、羟苯甲酯和碘代丙炔基丁基甲胺酸。

按照本领域常识，所述木瓜提取物可为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa(Sweet)Nakai的果实的提取物。所述木瓜提取物可采用本领域常规的制备方法进行制备，例如将果实采用水或有机溶剂浸提，即可。

其中，所述多元醇A可为3-5％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述多元醇A可为双丙甘醇、丁二醇和1,2-戊二醇、或、丁二醇和双丙甘醇。

其中，所述多元醇A可为3％双丙甘醇、3％丁二醇和3％1,2-戊二醇、或、3％丁二醇和2％双丙甘醇，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述其他活性成分A可为烟酰胺、或、“尿囊素和透明质酸钠”。

其中，所述其他活性成分A可为2％烟酰胺、或、0.1％尿囊素和0.1％透明质酸钠，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述表面活性剂A可为聚山梨醇酯-20、PEG-40氢化蓖麻油、或、羟乙基纤维素和PEG-40氢化蓖麻油。

其中，所述表面活性剂A可为0.2％聚山梨醇酯-20、0.15％PEG-40氢化蓖麻油、或、0.05％羟乙基纤维素和0.15％PEG-40氢化蓖麻油，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述防腐剂A可为防腐剂IS-45、或、羟苯甲酯和苯氧乙醇。

其中，所述防腐剂A可为0.4％防腐剂IS-45、或、0.15％羟苯甲酯和0.3％苯氧乙醇，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述木瓜提取物可为1％或2％，所述百分比是指重量百分比。

在本发明的优选实施方式二中，所述的皮肤外用剂为精华液，所述皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，多元醇类B 3-6％，泛醇1％，甘草酸二钾0.1％，尿囊素0.1％，其他活性成分B 2.1-4.3％，表面活性剂B0.05-3.6％，防腐剂B 0.25-0.45％，黄原胶0.2-0.4％，木瓜提取物0-2.0％，丙烯酸树脂Pemulen TR-2 0.3％和香料0.05％；所述皮肤外用剂中还包含氨甲基丙醇，所述氨甲基丙醇的含量以调节至所述皮肤外用剂的pH值为5.5-7为准；所述的皮肤外用剂中，所述的低氘水补足余量至100％；其中，所述的多元醇类B为丁二醇和/或1,3-丙二醇；所述其他活性成分B为烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠、生育酚乙酸酯和透明质酸钠中的一种或多种；所述表面活性剂B为羟乙基纤维素、异硬脂酸异丙酯、聚甘油-2油酸酯和聚甘油-10油酸酯中的一种或多种；所述防腐剂B为羟苯丙酯、羟苯甲酯和苯氧乙醇中的一种或多种。

按照本领域常识，所述丙烯酸树脂Pemulen TR-2为一种丙烯酸(酯)类/C_10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物，由美国诺誉化工公司生产。

按照本领域常识，所述黄原胶为糖类经黄单胞杆菌发酵，产生的一种胞外微生物多糖。

其中，所述木瓜提取物的定义如前所述。

其中，所述多元醇类B可为3-5％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述多元醇类B可为3％丁二醇、3％丁二醇和3％1,3-丙二醇、或、3％丁二醇和2％1,3-丙二醇，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述其他活性成分B可为3-4.3％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述其他活性成分B可为抗坏血酸磷酸酯钠、烟酰胺和透明质酸钠、或者、“生育酚乙酸酯、烟酰胺和透明质酸钠”。

其中，所述其他活性成分B可为3％抗坏血酸磷酸酯钠、2％烟酰胺和透0.1％明质酸钠、或者、“0.2％生育酚乙酸酯、4％烟酰胺和0.1％透明质酸钠”。

其中，所述表面活性剂B可为0.15-3.6％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述表面活性剂B可为羟乙基纤维素、或、“异硬脂酸异丙酯、聚甘油-2油酸酯和聚甘油-10油酸酯”。

其中，所述表面活性剂B可为0.05％羟乙基纤维素、0.15％羟乙基纤维素、或、“3％异硬脂酸异丙酯、0.1％聚甘油-2油酸酯和0.5％聚甘油-10油酸酯”，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述防腐剂B可为羟苯甲酯和苯氧乙醇、或、羟苯丙酯和羟丙甲酯。

其中，所述防腐剂B可为0.15％羟苯甲酯和0.3％苯氧乙醇、或、0.1％羟苯丙酯和0.15％羟丙甲酯。

其中，所述黄原胶可为0.3-0.4％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述木瓜提取物可为1.0-2.0％，所述百分比是指重量百分比。

在本发明的优选实施方式三中，所述的皮肤外用剂为乳液，所述皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，1,3-丙二醇5％，泛醇1％，生育酚乙酸酯0.5％，其他活性成分C 2-7.1％，聚二甲基硅氧烷2％，乳化剂A1652％，异硬脂酸异丙酯3％，油类C 2-3％，鲸蜡硬脂醇0.5％，防腐剂C 0.3％，黄胶原0.5％和EDTA二钠0.1％；所述皮肤外用剂中还包含三乙醇胺，所述三乙醇胺的含量以调节所述皮肤外用剂的pH值至5.5-7为准；所述皮肤外用剂中，所述低氘水补足余量至100％；其中，所述其他活性成分C为甘草酸二钾、烟酰胺和氢化聚异丁烯中的一种或多种；所述油类C为矿油和/或异十六烷；所述防腐剂C为羟苯甲酯和/或羟苯丙酯。

其中，所述其他活性成分C可为3-7.1％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述其他活性成分C可为烟酰胺、氢化聚异丁烯、或、“甘草酸二钾、烟酰胺和氢化聚异丁烯”。

其中，所述其他活性成分C可为2％烟酰胺、3％氢化聚异丁烯、或、“0.1％甘草酸二钾、4％烟酰胺和3％氢化聚异丁烯”，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述油类C可为2％矿油或3％异十六烷，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述防腐剂C可为0.2％羟苯甲酯和0.1％羟苯丙酯，所述百分比是指重量百分比。

在本发明的优选实施方式四中，所述的皮肤外用剂为乳霜，所述皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，1,3-丙二醇5％，泛醇1％，生育酚乙酸酯0.5％，其他活性成分D 2-7.1％，聚二甲基硅氧烷2％，乳化剂A1652％，异硬脂酸异丙酯3％，油类D 2-8％，鲸蜡硬脂醇2-3％，防腐剂D 0.3％，丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物2％和EDTA二钠0.1％；所述皮肤外用剂中还包含三乙醇胺，所述三乙醇胺的含量以调节所述皮肤外用剂的pH值至5.5-7为准；所述皮肤外用剂中，所述低氘水补足余量至100％；其中，所述其他活性成分D为甘草酸二钾、烟酰胺和氢化聚异丁烯中的一种或多种；所述油类D为矿油和/或异十六烷；所述防腐剂D为羟苯甲酯和/或羟苯丙酯。

按照本领域常识，所述乳化剂A165为市售商品，其含有甘油硬脂酸酯和PEG-100硬脂酸酯。所述丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物为赛比克公司生产的牌号为Sepinov EMT 10的增稠剂。

其中，所述其他活性成分D可为3-7.1％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述其他活性成分D可为烟酰胺、氢化聚异丁烯、或、“甘草酸二钾、烟酰胺和氢化聚异丁烯”。

其中，所述其他活性成分D可为2％烟酰胺、3％氢化聚异丁烯、或、“0.1％甘草酸二钾、4％烟酰胺和3％氢化聚异丁烯”，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述油类D可为3-8％，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述油类D可为2％矿油、3％异十六烷、或、5％矿油和3％异十六烷，所述百分比是指重量百分比。

其中，所述防腐剂D可为0.2％羟苯甲酯和0.1％羟苯丙酯，所述百分比是指重量百分比。

在本发明的皮肤外用剂中，优选地，水的来源仅为所述的低氘水，即是说，所述的皮肤外用剂中不含有其他类型的水，例如超纯水或自来水。

在本发明中，所述的室温为本领域常规意义上的室温，一般指20-30℃。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各优选实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

本发明首次发现低氘水可以明显促进表皮角质细胞的增殖，增加真/表皮厚度，改善表皮内稳态；促进屏障功能修复和天然保湿因子的分泌；明显增强皮肤中透明质酸的表达；促进与细胞粘附、抗老相关的层粘连蛋白332的表达；促进弹性蛋白、I型胶原的表达。本申请中的低氘水具有增加皮肤紧致弹性，抗老，保湿，修复老化皮肤的功效。

附图说明

图1为效果实施例1中低氘水处理后的3D皮肤模型与正常人体皮肤形态学对比；图1A为50ppm低氘水处理组的3D皮肤模型，图1B为正常人体皮肤组织结构；使用石蜡切片进行苏木精伊红染色，图1A为目镜×物镜：10×10，图1B为目镜×物镜：10×25。

图2为效果实施例1中马森三色染色法染色的3D全层皮肤模型表皮及真皮形态，图2A为空白对照组，图2B为50ppm低氘水组，图2C为132ppm低氘水组，目镜×物镜：10×10。

图3为效果实施例1中马森三色染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组的表皮厚度图像量化数据分析的柱形图，与空白对照组相比，***P<0.001。

图4为效果实施例1中3D全层皮肤模型Ki-67免疫染色图，图4A为空白对照组，图4B为50ppm低氘水组，图4C为132ppm低氘水组，目镜×物镜：10×10，图4A、图4B和图4C中箭头表示的是Ki-67免疫染色阳性区域。

图5为效果实施例1中Ki-67免疫染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组中Ki-67染色表征的表皮细胞增殖指数量化数据分析的柱形图，与空白对照组相比，***P<0.001。

图6为效果实施例1中3D全层皮肤模型丝聚合蛋白免疫染色图，图6A为空白对照组，图6B为50ppm低氘水组，图6C为132ppm低氘水组，目镜×物镜：10×10，图6A、图6B和图6C中箭头表示的是丝聚合蛋白免疫染色阳性区域。

图7为效果实施例1中丝聚合蛋白免疫染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组中丝聚合蛋白阳性染色区域经真表皮连接处的长度标准化后量化数据分析的柱形图，与空白对照组相比，*P<0.05、**P<0.01。

图8为效果实施例1中3D全层皮肤模型的透明质酸染色图，图8A为空白对照组，图8B为50ppm低氘水组、图8C为132ppm低氘水组，目镜×物镜：10×10，图8A、图8B和图8C中箭头表示的是透明质酸染色阳性区域。

图9为效果实施例1中透明质酸染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组中透明质酸阳性染色区域相对于真皮总面积百分比的量化数据分析柱形图，与空白对照组相比，**P<0.01、***P<0.001。

图10为效果实施例1中透明质酸染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组中透明质酸阳性染色区域相对于皮肤总面积百分比的量化数据分析柱形图，与空白对照组相比，**P<0.01。

图11为效果实施例1中3D全层皮肤模型的弹性蛋白染色图，图11A为空白对照组，图11B为50ppm低氘水组、图11C为132ppm低氘水组，目镜×物镜：10×25，图11A、图11B和图11C中箭头表示的是弹性蛋白染色阳性区域。

图12为效果实施例1中弹性蛋白染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组中弹性蛋白阳性染色区域相对于真皮层总面积百分比量化数据分析的柱形图，与空白对照组相比，^nsP>0.05、*P<0.05。

图13为效果实施例1中3D全层皮肤模型的I型胶原蛋白染色图，图13A为空白对照组，图13B为50ppm低氘水组、图13C为132ppm低氘水组，，目镜×物镜：10×10，图13A、图13B和图13C中箭头表示的是I型胶原蛋白染色阳性区域。

图14为效果实施例1中I型胶原蛋白染色后，空白对照组、50ppm低氘水组、132ppm低氘水组中I型胶原蛋白阳性染色区域相对于真皮层总面积百分比量化数据分析的柱形图，与空白对照组相比，^nsP>0.05、*P<0.05。

图15为效果实施例1中3D全层皮肤模型的层粘连蛋白332染色图，图15A为空白对照组，图15B为50ppm低氘水组、图15C为132ppm低氘水组，目镜×物镜：10×10，图15A、图15B和图15C中箭头表示的是层粘连蛋白332染色阳性区域。

图16为效果实施例1中层粘连蛋白332染色后，层粘连蛋白332阳性染色区域经真表皮连接处的长度标准化后量化数据分析的柱形图，与空白对照组相比，^nsP>0.05、*P<0.05。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

下述实施例中，应用3D全层皮肤模型验证低氘水的功效，证明其在皮肤细胞增殖分化方面的生物效应。

下述实施例中，低氘水为采用蒸馏法制备，具体地，由上海交通大学生命科学技术学院提供。

下述实施例中，木瓜提取物的制备方法为：取蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa(Sweet)Nakai的新鲜果实木瓜切片，置于真空干燥箱24h，粉碎，过40目筛，70％乙醇浸提，木瓜与乙醇的质量体积比为1:4(kg/L)，过滤，旋转浓缩得膏状物即可。

下述实施例中，3D全层皮肤模型的建立参考文献Celine AUXENFANS,JulieFRADETTE,Charlotte LEQUEUX,Lucie GERMAIN,Beste KINIKOGLU,Nicolas BECHETOILLE,Fabienne BRAYE,AUGER,Odile DAMOUR.Evolution of three dimensionalskin equivalent models reconstructed in vitro by tissue engineering.Eur JDermatol 2009；19(2):107-13。

实施例1 3D全层皮肤模型的建立

1.1皮肤细胞来源

角质细胞(NHEK)和成纤维细胞(NHDF)的原始培养来自于两位健康人进行常规外科手术遗弃的皮肤，遵守赫尔辛基宣言(上海细胞和组织库-SOBC，上海)。NHDF混合了一位47岁女性的脸部皮肤细胞、45岁女性的胸部皮肤细胞和35岁女性的腿部皮肤细胞。3D实验的NHEK来自于16岁男性捐献者的包皮，2D的NHEK培养捐献者为43岁。

1.2体外人皮肤替代物培养

真皮替代物(DE)的准备，来自成年捐献者(42岁)的NHDF以2.5×10⁵cells/cm²的浓度接种在由壳聚糖-胶原-糖胺聚糖骨架材料上。该真皮替代物(DE)在37℃、5％CO₂的环境下生长21天。皮肤替代物(SE)的准备，来自于捐献者(16岁)的NHEK以2.5×10⁵cells/cm²的密度接种在21天的DE上。7天的浸没培养后，SE提到气-液表面，培养33天后收取样品，并用于组织学和免疫组织学的研究。

实施例2

2.1预处理

将3D全层皮肤模型构建过程分为空白对照组和低氘水组，空白对照组每次换液的培养基由纯水和DMEM粉末(购自Gibco)配制而成，通过0.22μm的过滤器过滤并被储存在4℃，从NHDF接种后第一次培养基换液开始(第一天)直到结束(第33天)；低氘水组将纯水换成氘含量为50ppm低氘水，其余操作同空白组。

2.2组织学和免疫组织学分析

培养33天后分别收取各组别样品，迅速移至含4％福尔马林的中性缓冲液中固定24h并埋入石蜡或于OCT中-20℃冷冻。石蜡包埋福尔马林固定的样品之后被切成5μm的切片。

(1)马森三色染色法

将组织切片脱蜡和再水化后，组织切片先由魏格特氏铁苏木精染色液染色，纯水润洗后滴加布里希猩红-酸性品红溶液，纯水润洗后滴加磷钨酸溶液，之后滴加亮绿溶液，分别按顺序在纯水、无水乙醇及甲基环己烷中润洗，封片，并进行常规组织学分析。

(2)免疫组织化学

将组织切片进行热导的抗原修复处理之后，在5％H₂O₂/3％牛血清白蛋白BSA(Sigma)中孵育来灭活内源性过氧化物酶。非特异性结合在包含5％BSA的磷酸盐缓冲液PBS中受阻。之后切片分别与不同种类的一抗(见表1)在PBS/BSA 5％中室温状态下孵育过夜。在与过氧化物酶结合的二抗(EnVision，Dakocytomation)孵育一小时后，抗原由二氨基联苯胺盐酸盐作为底物进行检测。组织切片随后由Harris苏木精(25％，Sigma Aldrich)复染。上述百分比均指质量百分比。

(3)透明质酸(HA)检测

将组织切片与3mg/mL的生物酰化HA结合蛋白(HABP)(Merck)孵育过夜。PBS冲洗后，根据厂家方案，结合上的HABP通过应用抗生素蛋白-生物素复合技术可视化。

表1

2.3图像采集和分析

DAB标记的免疫染色和样本由马森三色染色法染色，通过Axio Scope A1显微镜观察(Zeiss)，由AxioCam HRc照相机和Zen软件(Zeiss)采集图片。16位图片以标记图片文件格式(tiff)被保存。获得同样方法不同条件下12张有代表性的图片。图像处理和分析由可用于显微镜的MBF_ImageJ软件进行。采集马森三色染色的表皮增厚数据、Ki67细胞核阳性细胞区域总表面积、丝聚合蛋白阳性区域总面积和透明质酸免疫染色阳性区域总面积。

2.4数据描述和统计分析

所有的数据都表示为“平均值±标准差”的形式。所有的数据统计学显著性利用T检验运行来评估。统计上的显著差异通过*号标注：^nsP>0.05、*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。

实施例3

将实施例2中配制培养基的50ppm低氘水改为132ppm低氘水，其余操作同实施例2。

效果实施例1

(1)组织形态分析

由图1可以观察到使用50ppm低氘水处理(图1A)的3D皮肤模型与正常人体皮肤细胞(图1B)在结构上相似，且具有较好的层状结构。皮肤层状结构包括真皮层、真表皮连接处、基底层、棘状层、颗粒层和角质层，其中表皮层包括基底层、棘状层、颗粒层和角质层，真皮层分泌有丰富的细胞外基质。

(2)马森三色染色

马森三色染色后，3D全层皮肤模型形态分析显示，低氘水处理的3D全层皮肤模型中表皮、真-表皮连接处(DEJ)和真皮层外观与空白对照组相似，外观正常，未出现细胞毒性(如图2A、2B、2C所示)；低氘水处理后表皮层分化的更厚(如图2B、2C所示)，同样的培养时间内，空白对照组的3D全层皮肤模型表皮细胞只有两到三层，表皮层薄并且排列松散(如图2A所示)；图像处理和分析显示低氘水处理组与空白对照组表皮厚度相比，50ppm低氘水组显著增加234.2％，132ppm低氘水组显著增加79.8％(如图3所示)。

由此可知，低氘水能够刺激表皮形态发生并且促进基于老化皮肤细胞设计的3D全层皮肤模型的表皮再生，能显著改善表皮厚度，且呈现剂量依赖性。

(3)Ki-67免疫染色

经Ki-67抗体孵育染色后，免疫组织分析显示，空白对照组与低氘水组Ki-67均在基底层特异性表达，与空白对照组比较，由低氘水处理过后，Ki-67阳性细胞数量显著增加(如图4A、图4B、图4C所示，箭头表示的是Ki-67免疫染色阳性区域)。通过自动图像分析得到表皮快速增殖细胞比例相比较空白对照组，50ppm低氘水组显著增加73.4％，132ppm低氘水组显著增加49.5％(如图5所示)。

由此可知，低氘水能有效促进表皮细胞增殖，且呈现剂量依赖性。

(4)丝聚蛋白免疫染色

经丝聚蛋白抗体孵育染色后，免疫组织分析显示，空白对照组与低氘水组丝聚蛋白均在角质层特异性表达，由图6A、图6B、图6C可知(图6A、图6B和图6C中箭头表示的是丝聚合蛋白免疫染色阳性区域)，低氘水处理的3D全层皮肤模型中显示丝聚合蛋白强烈的阳性染色，而对于空白对照只检测到零星的蛋白簇，说明低氘水可显著激发丝聚合蛋白的表达，能增强表皮后期分化。图像量化分析，以染色阳性面积经真表皮连接处的长度标准化后来计算(如图7所示)，显示低氘水处理组丝聚合蛋白表达相比较空白对照组，50ppm低氘水组显著增加455.8％，132ppm低氘水组显著增加138.8％。

由此可知，低氘水处理能快速再生表皮细胞，有助于产生较厚的表皮层，且有利于形成角质层。表明低氘水处理后改善了皮肤屏障功能，且呈现剂量依赖性。

(5)透明质酸染色

透明质酸染色后，3D全层皮肤模型形态分析显示，相比较空白对照组，透明质酸在低氘水处理组的分泌明显加强(如图8A、图8B、图8C所示，箭头表示的是透明质酸染色阳性区域)。图像量化分析显示低氘水处理组透明质酸的分泌相比较空白对照组：以阳性面积/真皮总面积来计算，50ppm低氘水组显著增加100.6％，132ppm低氘水组显著增加63.8％(如图9所示)；以阳性面积/皮肤总面积来计算，50ppm低氘水组显著增加73.8％，132ppm低氘水组显著增加54.4％(如图10所示)。

由此可知，低氘水能显著增加皮肤细胞抗老、保湿及弹性相关表皮标志物的表达，且呈现剂量依赖性。

(6)弹性蛋白免疫染色

经弹性蛋白抗体孵育染色后，免疫组织分析显示，相比较空白对照组，低氘水能显著增加弹性蛋白的表达(如图11A、图11B、图11C所示，箭头表示的是弹性蛋白染色阳性区域)。通过自动图像分析，以染色阳性面积/真皮层总面积来计算，得到弹性蛋白的比例相比较空白对照组，50ppm低氘水组显著增加219.8％，132ppm低氘水组无显著差异(如图12所示)。

由此可知，低氘水组可以激发3D皮肤模型中弹性蛋白的表达，能改善皮肤弹性，起到紧致抗老的作用，且呈现剂量依赖性。

(7)I型胶原蛋白免疫染色

经I型胶原蛋白抗体孵育染色后，免疫组织分析显示，相比较空白对照组，低氘水能显著增加I型胶原蛋白的表达(如图13A、图13B、图13C所示，箭头表示的是I型胶原蛋白染色阳性区域)。通过自动图像分析，以染色阳性面积/真皮层总面积来计算，得到I型胶原蛋白的比例相比较空白对照组，50ppm低氘水组显著增加20.3％，132ppm低氘水组无显著差异(如图14所示)。

由此可知，低氘水组可以激发3D皮肤模型中I型胶原蛋白的表达，且呈现剂量依赖性。

(8)层粘连蛋白332免疫染色

经层粘连蛋白332抗体孵育染色后，免疫组织分析显示，相比较空白对照组，低氘水能显著增加层粘连蛋白332的表达(如图15A、图15B、图15C所示，箭头表示的是层粘连蛋白332染色阳性区域)。通过自动图像分析，以染色阳性面积经真表皮连接处的长度标准化后来计算，得到层粘连蛋白332的比例相比较空白对照组，50ppm低氘水组显著增加167.1％，132ppm低氘水组无显著差异(如图16所示)。

由此可知，低氘水组可以激发3D重建皮肤模型中层粘连蛋白332的表达，且呈现剂量依赖性。

上述具体效果数据可见下述表2。

表2

综上，组织学和免疫组织学结果显示表皮厚度增加是角质细胞增殖增强的结果，同时伴随增强的细胞粘附和完整的终端分化，说明培养基中低氘水的添加可以改善表皮内稳态。说明低氘水显著激发表皮细胞的增殖和分化、表皮更快的再生和修复能力，促进屏障功能修复。

对于角质层，低氘水能明显增强透明质酸的表达，透明质酸深度参与皮肤保湿并且随皮肤衰老急剧减少，突出了低氘水对皮肤抗衰老、保湿和屏障修复方面的特性。

对于真-表皮连接处，低氘水明显促进了层粘连蛋白332的表达，该标志物通常随衰老急剧下调。

对于真皮层，低氘水能显著提升真皮乳突层的厚度，促进真皮成熟，增加I型胶原蛋白及弹性蛋白的分泌。低氘水能诱导和皮肤老化、保湿以及弹性紧致相关的主要标志物，突出了低氘水对皮肤抗衰老、紧致和保湿的特性。

实施例4-6皮肤外用剂

实施例4-6的皮肤外用剂为化妆水，以重量百分比计，其具体组成见下表3。

表3

按照本领域常规的化妆水的制备方法，制得实施例4-6的皮肤外用剂。

实施例7-9皮肤外用剂

实施例7-9的皮肤外用剂为精华液，以重量百分比计，其具体组成见下表4。

表4

按照本领域常规的精华液的制备方法，制得实施例7-9的皮肤外用剂。

实施例10-15皮肤外用剂

实施例10-12的皮肤外用剂为乳液，实施例13-15的皮肤外用剂为乳霜，以重量百分比计，其具体组成分别见下表5。

表5

按照本领域常规的乳液的制备方法，制得实施例10-12的皮肤外用剂；按照本领域常规的乳霜的制备方法，制得实施例13-15的皮肤外用剂。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种低氘水作为皮肤外用剂的应用，所述的低氘水中氘含量不高于132ppm；所述的低氘水作为所述皮肤外用剂中的抗衰老活性成分、保湿活性成分和修复活性成分中的一种或多种。

2.如权利要求1所述的作为皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述抗衰老活性成分为具有促进表皮角质细胞的增殖、增强Ki-67蛋白的表达、增加真/表皮厚度、增加皮肤真皮弹性蛋白的分泌和增加I型胶原蛋白的分泌中一种或多种作用的抗衰老活性成分。

3.如权利要求2所述的作为皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述抗衰老活性成分为增强Ki-67蛋白的表达、增加真/表皮厚度和增加皮肤真皮弹性蛋白的分泌中一种或多种作用的抗衰老活性成分。

4.如权利要求1所述的作为皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述保湿活性成分为具有提高皮肤丝聚合蛋白的表达和/或透明质酸表达作用的保湿活性成分。

5.如权利要求1所述的作为皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述修复活性成分为具有促进真-表皮连接处层粘连蛋白332表达作用的修复活性成分。

6.如权利要求1～5任一项所述的作为皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述低氘水中氘含量为50-132ppm；

和/或，所述低氘水中不含有矿物质。

7.一种皮肤外用剂，其特征在于，其含有低氘水，所述的低氘水中氘含量不高于132ppm；所述低氘水相对于所述皮肤外用剂的重量百分比含量大于1％，且小于等于99％。

8.如权利要求7所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述的皮肤外用剂还包含保湿活性成分、抗氧化活性成分、控油活性成分、美白活性成分和抗衰老活性成分中的一种或多种；

和/或，所述的皮肤外用剂包含赋形剂，所述赋形剂的形式为水相、油相、凝胶、水包蜡型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液；

和/或，所述的皮肤外用剂包含防腐剂、芳香剂以及亲水性和亲脂性活性剂中的一种或多种；

和/或，所述皮肤外用剂包含颗粒相；

和/或，所述的皮肤外用剂包含抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂和维生素中的一种或多种。

9.如权利要求7或8所述的皮肤外用剂，其特征在于，当所述的皮肤外用剂为化妆水时，所述的皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，多元醇类A 3-6％，甜菜碱1％，泛醇0.5％，甘草酸二钾0.05-0.1％，其他活性成分A0.11-2.0％，聚乙二醇-32 0.5％，表面活性剂A 0.15-0.2％，防腐剂A0.4-0.45％，黄原胶0-0.15％，木瓜提取物0-2.0％，香料0.03％和所述低氘水84.27-87.16％；其中，所述的多元醇类A为丁二醇、1,2-戊二醇和双丙甘醇中的一种或多种；所述其他活性成分A为尿囊素、烟酰胺和透明质酸钠中的一种或多种；所述表面活性剂A为羟乙基纤维素、聚山梨醇酯-20和PEG-40氢化蓖麻油中的一种或多种；所述防腐剂A为防腐剂IS-45、羟苯甲酯和苯氧乙醇中的一种或多种；

当所述的皮肤外用剂为精华液时，所述皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，多元醇类B 3-6％，泛醇1％，甘草酸二钾0.1％，尿囊素0.1％，其他活性成分B 2.1-4.3％，表面活性剂B 0.05-3.6％，防腐剂B 0.25-0.45％，黄原胶0.2-0.4％，木瓜提取物0-2.0％，丙烯酸树脂Pemulen TR-2 0.3％和香料0.05％；所述皮肤外用剂中还包含氨甲基丙醇，所述氨甲基丙醇的含量以调节至所述皮肤外用剂的pH值为5.5-7为准；所述的皮肤外用剂中，所述的低氘水补足余量至100％；其中，所述的多元醇类B为丁二醇和/或1,3-丙二醇；所述其他活性成分B为烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠、生育酚乙酸酯和透明质酸钠中的一种或多种；所述表面活性剂B为羟乙基纤维素、异硬脂酸异丙酯、聚甘油-2油酸酯和聚甘油-10油酸酯中的一种或多种；所述防腐剂B为羟苯丙酯、羟苯甲酯和苯氧乙醇中的一种或多种；

当所述的皮肤外用剂为乳液时，所述皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，1,3-丙二醇5％，泛醇1％，生育酚乙酸酯0.5％，其他活性成分C 2-7.1％，聚二甲基硅氧烷2％，乳化剂A165 2％，异硬脂酸异丙酯3％，油类C 2-3％，鲸蜡硬脂醇0.5％，防腐剂C0.3％，黄胶原0.5％和EDTA二钠0.1％；所述皮肤外用剂中还包含三乙醇胺，所述三乙醇胺的含量以调节所述皮肤外用剂的pH值至5.5-7为准；所述皮肤外用剂中，所述低氘水补足余量至100％；其中，所述其他活性成分C为甘草酸二钾、烟酰胺和氢化聚异丁烯中的一种或多种；所述油类C为矿油和/或异十六烷；所述防腐剂C为羟苯甲酯和/或羟苯丙酯；

当所述的皮肤外用剂为乳霜时，所述皮肤外用剂包含下述重量百分比的组分：甘油5％，1,3-丙二醇5％，泛醇1％，生育酚乙酸酯0.5％，其他活性成分D 2-7.1％，聚二甲基硅氧烷2％，乳化剂A165 2％，异硬脂酸异丙酯3％，油类D 2-8％，鲸蜡硬脂醇2-3％，防腐剂D0.3％，丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物2％和EDTA二钠0.1％；所述皮肤外用剂中还包含三乙醇胺，所述三乙醇胺的含量以调节所述皮肤外用剂的pH值至5.5-7为准；所述皮肤外用剂中，所述低氘水补足余量至100％；其中，所述其他活性成分D为甘草酸二钾、烟酰胺和氢化聚异丁烯中的一种或多种；所述油类D为矿油和/或异十六烷；所述防腐剂D为羟苯甲酯和/或羟苯丙酯。

10.如权利要求7～9中任一项所述的皮肤外用剂，其特征在于，在所述的皮肤外用剂中，水的来源仅为所述的低氘水。