CN110184337A - 探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用 - Google Patents

探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用 Download PDF

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CN110184337A CN201910407763.0A CN201910407763A CN110184337A CN 110184337 A CN110184337 A CN 110184337A CN 201910407763 A CN201910407763 A CN 201910407763A CN 110184337 A CN110184337 A CN 110184337A
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呼锦涛
徐其隆
王远
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Abstract

本发明提供了一种探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用。该探针组合物包括检测23种疾病的55个基因中的任意多个或全部基因的探针的组合。最多涵盖了23种疾病的55个基因的相关突变位点，针对如此众多的基因位点的探针组合物便于在一次同时检测多种疾病相关的基因突变相关信息，最多时可同时检测55个基因的所有突变信息。将本申请的探针组合物用于相关疾病检测时，检测效率高、成本低，适合用于对批量样本进行筛查的场景中。

Description

探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用
技术领域
本发明涉及基因检测领域，具体而言，涉及一种探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用。
背景技术
现阶段遗传代谢病的筛查还是以串联质谱为代表的传统技术，但由于串联质谱检测单一，只能在遗传代谢病方面发挥优势，其具有假阳性率和假阴性率相对较高，存在对其他类型的单基因遗传病无法进行检测的局限性；绝大部份的疾病诊断和后期优生优育指导更依赖于基因数据进行诊断，主要由于一种代谢物可对应多种疾病，很难对某些疾病亚型做出准确判断，还需要做基因诊断，所以在一些基因可以直接筛查诊断的疾病上，质谱临床路径偏长，时间成本高，临床效率偏低。此外大多数单基因遗传病的基因检测还是以低通量为主，研究某个基因的相关遗传变异。而高通量测序技术在生命科学及医学领域方面的研究和应用，可以高效的分析与挖掘测序得到的基因组大数据，提炼出与疾病相关的遗传变异信息，并为疾病的筛查、治疗和预防提供科学依据。
目标序列捕获是通过将基因组特定区域进行富集后建库测序，目前主流的方法为多重PCR法和液相杂交捕获法。由于多重PCR法由于引物设计的局限性，因此适用于捕获较小的区域，且试剂成本相对较高，不适合批量样本的筛查工作。
基于液相杂交捕获法的高通量测序，适合捕获较大的区域，适合基因的全外显子以及全长的检测。
但目前已公开的对与遗传疾病相关基因进行检测的报道中，有对单一疾病进行检测的，也有同时对单基因遗传病突变位点、染色体疾病以及连锁分析进行检测的，但后者是通过对全基因组扩增以及目的基因突变位点扩增得到的产物同时进行建库测序才能得到的，其主要应用在三代试管婴儿领域，且检测成本以及应用场景不适用于大批量样本筛查工作。此外，还有对22种常见新生儿遗传病相关的基因进行检测的报道，但该方法采用多重PCR捕获技术，成本较高，不适合在批量样本筛查工作中应用。
因此，对批量样本筛查而言，现有技术中还没有成本较低的检测方案。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用，以解决现有技术中难以低成本地对批量样本进行多种遗传病相关基因同时检测的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种探针组合物，探针组合物包括检测如下表1所示的任意多个或全部基因的探针的组合：
表1:
。
进一步地，探针组合物包括检测HBA1基因、HBA2基因和HBB基因的探针的组
合，检测HBA1基因、HBA2基因和HBB基因的探针组合物为覆盖HBA1、HBA2和
HBB基因全长的探针的组合；优选地，检测HBA1基因的探针包括SEQ ID NO:1至SEQ
ID NO:37所示探针；检测HBA2基因的探针包括SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:45所示
探针；检测HBB基因的探针包括SEQ ID NO:46至SEQ ID NO:61所示的探针。
进一步地，探针组合物中，检测编号1至38及42至55的任一基因的探针的组合为覆盖相应基因的外显子区域和剪接位点区域的探针的组合；优选地，每个探针的长度为100～150nt，更优选120nt；优选地，每个探针的Tm值为40～70℃。
根据本发明的另一方面，提供了一种同时检测多种疾病相关的基因的试剂，试剂包括探针，探针为上述任一种探针组合物。
根据本发明的另一方面，提供了一种同时检测多种疾病相关的基因的试剂盒，试剂盒包括探针，探针为上述任一种探针组合物。
根据本发明的另一方面，提供了上述任一种探针组合物在制备同时检测多种疾病相关的基因的试剂盒中的应用。
进一步地，多种疾病包括如下疾病中的多种：原发性卟啉症、高胰岛素性低血糖血症、黏多糖贮积症、高苯丙氨酸血症、生物素酶缺乏症、瓜氨酸血症I型、瓜氨酸血症II型、甲基丙二酸血症、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症、戊二酸血症、酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、长链3-羟酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、苯丙酮尿症、糖原累积病、葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症、肝豆状核变性、原发性肉碱缺乏症、非综合征耳聋、地中海贫血、先天性甲状腺功能减退症、Noonan综合征、X-连锁肾上腺脑白质营养不良、长QT综合征以及肥厚型心肌病。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种同时检测对多种疾病相关的基因的方法，该方法包括：构建待测样本的DNA文库；利用捕获探针对所构建的文库进行杂交捕获，得到杂交文库；对杂交文库进行测序分析，获得多种疾病相关的基因的信息；其中，捕获探针为上述任一种探针组合物。
进一步地，构建待测样本的DNA文库的步骤包括：提取待测样本的DNA，待测样本为滤纸片干血斑样本；利用40～60ngDNA构建DNA文库；优选地，提取滤纸片干血斑样本的DNA的步骤包括：将滤纸片干血斑样本置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取；更优选地，将滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解；将孔板置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取。
进一步地，将滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解之前，该方法还包括：利用打孔器对滤纸片干血斑样本进行打孔，获取打孔样本；将打孔样本置于孔板中；向孔板中添加裂解液进行裂解；优选地，打孔器的直径为6～12mm；优选孔板为96孔板；优选裂解是在50～60℃孵育15～45min。
应用本发明的技术方案，本申请的上述探针组合物最多涵盖了23种疾病的55个基因的相关突变位点，针对如此众多的基因位点的探针组合物便于在一次同时检测多种疾病相关的基因突变相关信息，最多时可同时检测55个基因的所有突变信息。将本申请的探针组合物用于相关疾病检测时，检测效率高、成本低，适合用于对批量样本进行筛查的场景中。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
如背景技术所提到的，针对批量样本进行多疾病相关基因进行筛查时，现有技术还没有很简便的、低成本的检测方案。为改善这一现状，在本申请一种典型的实施方式中，提供了一种探针组合物，该探针组合物包括检测如下表1所示的任意多个或全部基因的探针的组合：
表1：
。
本申请的上述探针组合物，最多涵盖了23种疾病的55个基因的相关突变位点，针对如此众多的基因位点的探针组合物便于在一次同时检测多种疾病相关的基因突变相关信息，最多时可同时检测55个基因的所有突变信息。将本申请的探针组合物用于相关疾病检测时，检测效率高、成本低，适合用于对批量样本进行筛查的场景中。
在一种优选的实施例中，上述探针组合物包括检测HBA1基因、HBA2基因和HBB基因的探针的组合，检测HBA1基因、HBA2基因和HBB基因的探针组合物为覆盖HBA1、HBA2和HBB基因全长的探针的组合；优选地，检测HBA1基因的探针包括表2所示的探针：
表2：
；
检测HBA2基因的探针包括表3所示探针：
表3：
；
检测HBB基因的探针包括表4所示探针：
表4：
。
地中海贫血是一组由于珠蛋白基因缺陷致使血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺陷或不足所导致的贫血或病理状态。缘于基因缺陷的复杂性与多样性，缺乏的珠蛋白链类型、数量及临床症状变异性较大。地中海贫血以α地中海贫血和β地中海贫血较为常见。由于α地中海贫血相关的HBA1和HBA2基因外显子同源性非常高(高达96.68％)，β地中海贫血相关基因HBB其致病位点多在内含子区域，因此，在设计探针时，将HBA1、HBA2和HBB基因进行全长设计，可同时对拷贝数变异和点突变进行检测。
对于地中海贫血检测，拷贝数变异目前常规的检测方法为MLPA，点突变采用PCR-反向斑点杂交。由于HBA1和HBA2基因存在高度的同源性，在采用上述方法进行检测时存在不能同时检测拷贝数变异和点变异的缺陷。而在本申请中，通过对相关基因的目标区域进行分区，每个分区进行120bp长度的探针设计，至少1次被探针覆盖，能够实现对拷贝数变异及点突变进行同时检测，对样本进行一次采集就可完成相关的全部检测，避免了使用多种方法、多个步骤检测基因的位点变异以及片段的缺失，降低了检测成本。
在一种优选的实施例中，探针组合物中，检测表1中编号除39～41的任一基因的探针的组合为覆盖相应基因的外显子区域和剪接位点区域的探针的组合；优选地，每个探针的长度为100～150nt，更优选120nt；优选地，每个探针的Tm值为40～70℃。
编号除39～41的任一基因之间同源性较低，针对各自基因的探针之间的相互影响较小，因而设计时仅选择覆盖外显子区域和剪接位点区域即可。具体各基因的探针的设计方法采用常规的设计方法即可。各探针的具体长度可以根据实际情况合理设置，但优选探针的长度在上述范围内，是因为现有检测探针的长度大多为40-80nt，特异性较差，不能对基因重复区进行有效捕获，而本申请选择的100～150nt的探针长度约是常规探针长度的2～4倍，其特异性强，非特异性低，能够对基因重复区域进行高效捕获。
在本申请第二种典型的实施方式中，提供了一种检测多种疾病相关的基因的试剂，该试剂包括探针，探针为上述任一种探针组合物。通过利用上述探针组合物，能够进一步通过高通量测序一步完成多系统疾病致病基因检测，避免了使用多种方法、多个步骤检测基因的位点变异以及片段的缺失的繁琐程序，且成本低，效率高，适合用于批量筛查的试剂中。
在本申请第三种典型的实施方式中，提供了一种检测多种疾病相关的基因的试剂盒，试剂盒包括探针，探针为上述任一种探针组合物。通过利用上述探针组合物，能够进一步通过高通量测序一步完成多系统疾病致病基因检测，避免了使用多种方法、多个步骤检测基因的位点变异以及片段的缺失的繁琐程序，且成本低，效率高，适合用于批量筛查的试剂盒中。
在本申请第四种典型的实施方式中，提供了上述任一种探针组合物在制备检测多种疾病相关的基因的试剂盒中的应用。
在一种优选的实施例中，多种疾病包括如下疾病中的多种：原发性卟啉症、高胰岛素性低血糖血症、黏多糖贮积症、高苯丙氨酸血症、生物素酶缺乏症、瓜氨酸血症I型、瓜氨酸血症II型、甲基丙二酸血症、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症、戊二酸血症、酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、长链3-羟酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、苯丙酮尿症、糖原累积病、葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD缺乏症)、肝豆状核变性、原发性肉碱缺乏症、非综合征耳聋、地中海贫血、先天性甲状腺功能减退症、Noonan综合征、X-连锁肾上腺脑白质营养不良、长QT综合征以及肥厚型心肌病
上述疾病涉及了遗传代谢类、血液系统、内分泌系统、眼耳鼻喉系统、泌尿系统以及心血管系统等几大系统方面的疾病，通过利用上述探针组合物，能够进一步通过高通量测序一步完成多系统疾病致病基因检测，避免了使用多种方法、多个步骤检测基因的位点变异以及片段的缺失的繁琐程序，且成本低，效率高，适合用于批量筛查的试剂盒的制备中。
在本申请第五种典型的实施方式中，提供了一种检测多种疾病相关的基因的方法，该方法包括：构建待测样本的DNA文库；利用捕获探针对所构建的文库进行杂交捕获，得到杂交文库；对杂交文库进行测序分析，获得多种疾病相关的基因的信息；其中，捕获探针为上述任一种探针组合物。
该方法通过一次检测即可对多种疾病的相关致病基因进行检测，避免了使用多种方法、多个步骤检测基因的位点变异以及片段的缺失的繁琐程序，且成本低，效率高，适合用于批量筛查。
在一种优选的实施例中，构建待测样本的DNA文库的步骤包括：提取待测样本的DNA，待测样本为滤纸片干血斑样本；利用40～60ngDNA构建DNA文库；优选地，提取滤纸片干血斑样本的DNA的步骤包括：将滤纸片干血斑样本置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取。
滤纸片是血液标本采集和运输的极好载体。全血滴在滤纸片上制成滤纸片干血斑(Dried blood spots，DBS)，有很好的生物稳定性和安全性，便于储存和运输，特别适用于发展中国家边远地区的样本采集、储存和运输。目前的滤纸片干血斑通常用来对艾滋病病毒I型DNA进行检测，以解决HIV-1感染者全血样本采集、运输和储存过程中存在的实际困难。其仅涉及一般DNA的检测，对DNA的浓度和纯度要求均较低，只要能够进行一般的PCR即可。而针对滤纸片干血斑这一类特殊样本，现有技术中还没有相应的DNA提取及文库构建方案。
而本申请通过利用全自动液体处理工作站对滤纸片干血斑样本进行DNA提取，不仅能够实现高质量(纯度高)的DNA提取，而且能够实现针对滤纸片干血斑样本成功构建测序文库。解决了滤纸片干血斑样本低起始量(低于100ng)建库的困难，使得此类微量样本能够利用高通量进行测序，进而实现一次同时检测多种疾病的相关基因突变情况，成本低且效率高，非常适合应用于如新生儿等稀缺样本的多疾病批量筛查场合。
具体将滤纸片干血斑样本置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取的步骤按照仪器的操作说明进行操作即可。在一种优选的实施例中，将滤纸片干血斑样本置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取的步骤包括：将滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解；将孔板置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取。
在一种优选的实施例中，将滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解之前，该方法还包括：利用打孔器对滤纸片干血斑样本进行打孔，获取打孔样本；将打孔样本置于孔板中；向孔板中添加裂解液进行裂解。
将滤纸片干血斑样本置于孔板中的方式可以有多种，可以直接将干血斑剪成小碎块儿置于孔板中，也可以采用其他能够使孔板容纳干血斑的方式。在一种优选的实施例中，将滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解之前，该构建方法还包括：利用打孔器对滤纸片干血斑样本进行打孔，获取打孔样本；将打孔样本置于孔板中；向孔板中添加裂解液进行裂解。打孔器进行取样可以使得取样面积大小均匀，如果干血斑的载样量相同的话，取样面积携带的样本量也相对均匀。
上述打孔器取样时，具体选取的打孔器的直径大小可根据需要进行选择。在一种优选的实施例中，打孔器的直径为6～12mm，优选孔板为96孔板；优选裂解是在50～60℃孵育15～45min。裂解温度和时间可根据样本具体情况不同而进行适当调整。
在一种优选的实施例中，将孔板置于全自动液体处理工作站的核酸提取室，并选取干血斑提取模式进行DNA提取。
在利用全自动液体处理工作站将滤纸片干血斑提取出高质量高纯度的DNA后，具体的建库步骤可采用常规的文库构建方法，此处不再赘述。
下面将结合具体实施例进行详细解释本申请的有益效果。需要说明的是，以下实施例如无特殊说明，试剂或耗材都来购于天根生化科技公司。
实验一 探针的设计
1、致病基因信息获取：通过OMIM数据库获得23种遗传病相关的表1所示的55个基因信息，包括疾病、基因、位置(如：苯丙酮尿症、PAH、12q23.2)；
2、探针设计：
该55个基因在ucsc覆盖的CDS区域长度为：101001bp，目标区域覆盖度为101184bp，共1282条探针，全部覆盖了捕获区域。
捕获探针的设计原则如下：
1)根据目标位点在参考基因组上的位置范围确定基因组待测区域，转录本为hg19；
2)根据基因组待测区域序列进行分区，设计捕获探针，每个分区长度为120bp，进行Blast比对，校对探针的特异性，保证检测范围内区域全覆盖；
3)探针Tm值40℃～70℃，探针无发卡等特殊结构。
按照上述要求，委托按照上述要求，委托IDT公司进行了探针设计，共计1282条探针。
实验二 以全外周血滤纸片干血斑(DBS)为实验材料进行测序文库构建，具体步骤如下：
1、DNA提取
1)用打孔器将6mm直径大小的DBS打入1.5ml的离心管中，用烧灼和酒精擦拭的方法消毒打孔器头部，避免交叉污染。
2)向装有血片的离心管中加入500ul裂解液，56℃孵育0.5小时；
3)将经过孵育处理的液体加入96孔板中，所有标本加入完成后，放入核酸提取室，选取干血斑提取模式，仪器自动完成提取。
2、40ng起始量建库
1)取人的标准品，稀释100倍，振荡混匀，用Qbuit精确测定浓度。
2)按测定的浓度计算40ng所需要添加的体积。
3)使用Bioruptor仪器超声打断样本。
4)DNA打断后进行检测，将样本和配制好的marker进行点胶、电泳检测，电泳条带在处于200bp-300bp位置时，进行纯化；
5)末端修复和加A，反应体系如下表5。
表5:
试剂 体积
DNA样本 42μl
缓冲液1 6.8μl
酶1 1.2ul
总体系 50ul
修复加A的反应程序如下：
37℃ 30min，
72℃ 30min，
4℃ Hold。
6)接头连接：反应结束后将样本放置于冰上，反应体系如下表6所示：
表6：
反应程序如下：
20℃ 30min。
7)将连接后的产物进行M270链霉亲和素磁珠纯化，纯化后的样本进行PCR扩增，反应程序如下：
8)将扩增后的产物使用M270链霉亲和素磁珠纯化；
9)文库定量:检测所建文库的浓度为5ng/μL(文库浓度应≥5ng/μL，否则文库视为构建失败)。
10)文库杂交：取出杂交试剂和封闭试剂，配制成杂交反应体系，浓缩DNA文库，加入杂交缓冲溶液，变性后加入探针(此处的探针为检测前述表1所示的55个基因的1282条探针的组合物)，过夜杂交。
11)捕获和洗脱杂交的文库：用M270链霉亲和素磁珠捕获杂交文库，并进行PCR扩增，使其不断富集。
12)扩增后的DNA文库用M270链霉亲和素磁珠纯化：
13)用Qubit准确定量文库浓度，稀释文库，送库检。
将扩增后的产物使用1倍M270链霉亲和素磁珠纯化，将得到的纯化产物使用0.7～0.85倍M270链霉亲和素磁珠进行片段分选，即在0.7倍磁珠纯化时留上清，补加至0.85倍M270链霉亲和素磁珠，纯化得到文库大小在300-600bp。
实验三 真实案例
首先根据“致病基因明确的疾病，主要以隐性或不完全外显的形式进行遗传，发病率在＞1/50000之间，严重致残致畸致愚，有一定治疗手段”等原则筛选出来涉及人体多个系统多种疾病相关的基因，并收集全国12000多例新生儿足跟血滤纸片干血斑样本，使用本申请的探针组合物及方法对这些样本进行目标基因筛查。其中广西柳州总体筛查结果如表7所示。
表7：
。
以G6PD缺乏症为例：G6PD缺乏症在我国分布呈“南高北低”趋势，人群中基因携带率为4％～20％，从广西柳州地区的2093例样本筛查结果中，117例样本的G6PD基因的携带相关变异，对其进行回溯，其中87例样本取得联系(其余样本失联)，71个样本被确诊为G6PD缺乏症，1例样本家属告知生化结果异常但还未确诊，其余15例样本家长表示孩子没有临床症状，且未做相关的临床诊断。其中1例样本在筛查过程中，不但筛查到G6PD基因的致病变异，而且筛查出地中海贫血—SEA型基因缺失(东南亚型)杂合变异，并且在回访时G6PD缺乏症和地中海贫血均确诊。
同时，对柳州地区的2093例样本进行了地中海贫血拷贝数变异进行分析，其中134例为-SEA型杂合缺失，45例-4.2型杂合缺失，76例-3.7型杂合缺失，1例-3.7型纯合缺失，其余均为阴性。对以上255例筛查出拷贝数变异样本以及随机抽取的30例阴性样本采用“金标准”(具体采用α-地中海贫血基因检测试剂盒(gap-PCR法)(亚能生物技术(深圳)有限公司))进行验证，结果完全相同，表明本申请的探针组合物来进行检测，不仅能低成本批量筛选，而且检测准确性高。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：
1)基于液相捕获的二代测序技术，本申请的实施例提高了探针覆盖度以及捕获效率，同时降低了检测成本。具体包括致病基因信息获取、探针设计、样本的提取、建库等主要步骤。针对55个基因共设计了1282条探针，完全覆盖了目标捕获区域，通过对探针制备进行了优化，能够做到高效率捕获靶位点(捕获探针在250×的平均测序深度下，达到＞99.9％的覆盖度)。
2)通过利用高通量测序一步完成多系统疾病致病基因检测，避免了使用多种方法、多个步骤检测基因的位点变异以及片段的缺失。
3)本申请将建库起始量降低到100ng以下，同时应用大型自动液体工作站自动完成样本核酸提取工作的，与传统手工操作相比具有优势：1)无交叉污染；2)自动化系统在每次工作中，操作者只需要做好安装工作、不知孔板，提取整个过程不需要人为参与，省时省力；3)提取样本通量大，为384份/天，且提取的核酸质量纯度较好。本申请通过优化建库流程和方法，解决了低起始量建库的困难，使得微量样本能够利用高通量进行测序。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 南京诺禾致源生物科技有限公司
<120> 探针组合物、包含其的试剂、试剂盒、检测方法及应用
<130> PN95967TJNH
<160> 61
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
cgctcgcggg ccggcactct tctggtcccc acagactcag agagaaccca ccatggtgct 60
gtctcctgcc gacaagacca acgtcaaggc cgcctggggt aaggtcggcg cgcacgctgg 120
<210> 2
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
cgagtatggt gcggaggccc tggagaggtg aggctccctc ccctgctccg acccgggctc 60
ctcgcccgcc cggacccaca ggccaccctc aaccgtcctg gccccggacc caaaccccac 120
<210> 3
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
ccctcactct gcttctcccc gcaggatgtt cctgtccttc cccaccacca agacctactt 60
cccgcacttc gacctgagcc acggctctgc ccaggttaag ggccacggca agaaggtggc 120
<210> 4
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
cgacgcgctg accaacgccg tggcgcacgt ggacgacatg cccaacgcgc tgtccgccct 60
gagcgacctg cacgcgcaca agcttcgggt ggacccggtc aacttcaagg tgagcggcgg 120
<210> 5
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
gccgggagcg atctgggtcg aggggcgaga tggcgccttc ctctcagggc agaggatcac 60
gcgggttgcg ggaggtgtag cgcaggcggc ggctgcgggc ctgggccgca ctgaccctct 120
<210> 6
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
tctctgcaca gctcctaagc cactgcctgc tggtgaccct ggccgcccac ctccccgccg 60
agttcacccc tgcggtgcac gcctccctgg acaagttcct ggcttctgtg agcaccgtgc 120
<210> 7
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
tgacctccaa ataccgttaa gctggagcct cggtagccgt tcctcctgcc cgctgggcct 60
cccaacgggc cctcctcccc tccttgcacc ggcccttcct ggtctttgaa taaagtctga 120
<210> 8
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
gtgggcagca gcctgtgtgt gcctgggttc tctctatccc ggaatgtgcc aacaatggag 60
gtgtttacct gtctcagacc aaggacctct ctgcagctgc atggggctgg ggagggagaa 120
<210> 9
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
ctgcagggag tatgggaggg gaagctgagg tgggcctgct caagagaagg tgctgaacca 60
tcccctgtcc tgagaggtgc caggcctgca ggcagtggct cagaagctgg ggaggagaga 120
<210> 10
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
ggcatccagg gttctactca gggagtccca gcatcgccac cctcctttga aatctccctg 60
gttgaaccca gttaacatac gctctccatc aaaacaaaac gaaacaaaac aaactagcaa 120
<210> 11
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
aataggctgt ccccagtgca agtgcaggtg ccagaacatt tctctcattc ccaccccttc 60
ctgccagagg gtaggtggct ggagtgaggg tgctggccct actcacactt cctgtgtcac 120
<210> 12
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
ggtgaccctc tgagagcagc ccagtcagtg gggaaggagg aaggggctgg gatgctcaca 60
gccggcagcc cacacctggg gagactcttc agcagagcac cttgcggcct tactcctgca 120
<210> 13
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
cgtctcctgc agtttgtaag gtgcattcag aactcactgt gtgcccagcc ctgagctccc 60
agctaattgc cccacccagg gcctctggga cctcctggtc ttctgcttcc tgtgctgcca 120
<210> 14
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
gcaacttctg gaaacgtccc tgtccccggt gctgaagtcc tggaatccat gctgggaagt 60
tgcacagccc atctggctct cagccagcct aggaacatga gcagcacttc caacccagtc 120
<210> 15
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 15
cctgccccac agcaagcctc cccctccaca ctcacagtac tggattgagc tttggggagg 60
gtggagagga ccctgtcact gctttccttc tggacatgga cctctctgaa ttgttgggga 120
<210> 16
<211> 119
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 16
gttccctccc ctctccacca cccgctcttc ctgcgcctca cagcccagag cattgttatt 60
tcagcagaaa cactttaaaa aataaactaa aatccgacag gcacggtggc tcacgcctg 119
<210> 17
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
tccgcctcaa aaaaaaaaaa gcccccacat cttatctttt ttttttcctt caggctgtgg 60
gcagagtcag aagagggtgg cagacaggga ggggaaatga gaagatccaa cgggggaagc 120
<210> 18
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
attgctaagc tggtcggagc tacttccttc tctgcccaag gcagcttacc ctggcttgct 60
cctggacacc cagggcaggg cctgagtaag ggcctgggga gacagggcag ggagcaggct 120
<210> 19
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
gaagggtgct gacctgatgc actcctcaaa gcaagatctt ctgccagacc cccaggaaat 60
gacttatcag tgatttctca ggctgttttc tcctcagtac catcccccca aaaaacatca 120
<210> 20
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
cttttcatgc acagggatgc acccactggc actcctgcac ctcccaccct tccccagaag 60
tccacccctt ccttcctcac cctgcaggag ctggccagcc tcatcacccc aacatctccc 120
<210> 21
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
cacctccatt ctccaaccac agggcccttg tctcctctgt cctttcccct ccccgagcca 60
agcctcctcc ctcctccacc tcctccacct aatacatatc cttaagtctc acctcctcca 120
<210> 22
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
ggaagccctc agactaaccc tggtcacctt gaatgcctcg tccacacctc cagacttcct 60
cagggcctgt gatgaggtct gcacctctgt gtgtacttgt gtgatggtta gaggactgcc 120
<210> 23
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
tacctcccag aggaggttga atgctccagc cggttccagc tattgctttg tttacctgtt 60
taaccagtat ttacctagca agtcttccat cagatagcat ttggagagct gggggtgtca 120
<210> 24
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
cagtgaacca cgacctctag gccagtggga gagtcagtca cacaaactgt gagtccatga 60
cttggggctt agccagcacc caccacccca cgcgccaccc cacaaccccg ggtagaggag 120
<210> 25
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
tctgaatctg gagccgcccc cagcccagcc ccgtgctttt tgcgtcctgg tgtttattcc 60
ttcccggtgc ctgtcactca agcacactag tgactatcgc cagagggaaa gggagctgca 120
<210> 26
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
ggaagcgagg ctggagagca ggaggggctc tgcgcagaaa ttcttttgag ttcctatggg 60
ccagggcgtc cgggtgcgcg cattcctctc cgccccagga ttgggcgaag cctcccggct 120
<210> 27
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
cgcactcgct cgcccgtgtg ttccccgatc ccgctggagt cgatgcgcgt ccagcgcgtg 60
ccaggccggg gcgggggtgc gggctgactt tctccctcgc tagggacgct ccggcgcccg 120
<210> 28
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
aaaggaaagg gtggcgctgc gctccggggt gcacgagccg acagcgcccg accccaacgg 60
gccggccccg ccagcgccgc taccgccctg cccccgggcg agcgggatgg gcgggagtgg 120
<210> 29
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
agtggcgggt ggagggtgga gacgtcctgg cccccgcccc gcgtgcaccc ccaggggagg 60
ccgagcccgc cgcccggccc cgcgcaggcc ccgcccggga ctcccctgcg gtccaggccg 120
<210> 30
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
cgccccgggc tccgcgccag ccaatgagcg ccgcccggcc gggcgtgccc ccgcgcccca 60
agcataaacc ctggcgcgct cgcggcccgg cactcttctg gtccccacag actcagagag 120
<210> 32
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
aacccaccat ggtgctgtct cctgccgaca agaccaacgt caaggccgcc tggggtaagg 60
tcggcgcgca cgctggcgag tatggtgcgg aggccctgga gaggtgaggc tccctcccct 120
<210> 32
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
gctccgaccc gggctcctcg cccgcccgga cccacaggcc accctcaacc gtcctggccc 60
cggacccaaa ccccacccct cactctgctt ctccccgcag gatgttcctg tccttcccca 120
<210> 33
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
ccaccaagac ctacttcccg cacttcgacc tgagccacgg ctctgcccag gttaagggcc 60
acggcaagaa ggtggccgac gcgctgacca acgccgtggc gcacgtggac gacatgccca 120
<210> 34
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
acgcgctgtc cgccctgagc gacctgcacg cgcacaagct tcgggtggac ccggtcaact 60
tcaaggtgag cggcgggccg ggagcgatct gggtcgaggg gcgagatggc gccttcctcg 120
<210> 35
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
cagggcagag gatcacgcgg gttgcgggag gtgtagcgca ggcggcggct gcgggcctgg 60
gccctcggcc ccactgaccc tcttctctgc acagctccta agccactgcc tgctggtgac 120
<210> 36
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
cctggccgcc cacctccccg ccgagttcac ccctgcggtg cacgcctccc tggacaagtt 60
cctggcttct gtgagcaccg tgctgacctc caaataccgt taagctggag cctcggtggc 120
<210> 37
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
catgcttctt gccccttggg cctcccccca gcccctcctc cccttcctgc acccgtaccc 60
ccgtggtctt tgaataaagt ctgagtgggc ggcagcctgt gtgtgcctga gttttttccc 120
<210> 38
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
cgccagccaa tgagcgccgc ccggccgggc gtgcccccgc gccccaagca taaaccctgg 60
cgcgctcgcg ggccggcact cttctggtcc ccacagactc agagagaacc caccatggtg 120
<210> 39
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
ctgtctcctg ccgacaagac caacgtcaag gccgcctggg gtaaggtcgg cgcgcacgct 60
ggcgagtatg gtgcggaggc cctggagagg tgaggctccc tcccctgctc cgacccgggc 120
<210> 40
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
tcctcgcccg cccggaccca caggccaccc tcaaccgtcc tggccccgga cccaaacccc 60
acccctcact ctgcttctcc ccgcaggatg ttcctgtcct tccccaccac caagacctac 120
<210> 41
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
ttcccgcact tcgacctgag ccacggctct gcccaggtta agggccacgg caagaaggtg 60
gccgacgcgc tgaccaacgc cgtggcgcac gtggacgaca tgcccaacgc gctgtccgcc 120
<210> 42
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
ctgagcgacc tgcacgcgca caagcttcgg gtggacccgg tcaacttcaa ggtgagcggc 60
gggccgggag cgatctgggt cgaggggcga gatggcgcct tcctctcagg gcagaggatc 120
<210> 43
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
acgcgggttg cgggaggtgt agcgcaggcg gcggctgcgg gcctgggccg cactgaccct 60
cttctctgca cagctcctaa gccactgcct gctggtgacc ctggccgccc acctccccgc 120
<210> 44
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
cgagttcacc cctgcggtgc acgcctccct ggacaagttc ctggcttctg tgagcaccgt 60
gctgacctcc aaataccgtt aagctggagc ctcggtagcc gttcctcctg cccgctgggc 120
<210> 45
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
ctcccaacgg gccctcctcc cctccttgca ccggcccttc ctggtctttg aataaagtct 60
gagtgggcag cagcctgtgt gtgcctgggt tctctctatc ccggaatgtg ccaacaatgg 120
<210> 46
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
tgagcatctg gattctgcct aataaaaaac atttattttc attgcaatga tgtatttaaa 60
ttatttctga atattttact aaaaagggaa tgtgggaggt cagtgcattt aaaacataaa 120
<210> 47
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 47
gtggctaatg ccctggccca caagtatcac taagctcgct ttcttgctgt ccaatttcta 60
ttaaaggttc ctttgttccc taagtccaac tactaaactg ggggatatta tgaagggcct 120
<210> 48
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 48
atacctctta tcttcctccc acagctcctg ggcaacgtgc tggtctgtgt gctggcccat 60
cactttggca aagaattcac cccaccagtg caggctgcct atcagaaagt ggtggctggt 120
<210> 49
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 49
taagaggttt catattgcta atagcagcta caatccagct accattctgc ttttatttta 60
tggttgggat aaggctggat tattctgagt ccaagctagg cccttttgct aatcatgttc 120
<210> 50
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
atgatacaat gtatcatgcc tctttgcacc attctaaaga ataacagtga taatttctgg 60
gttaaggcaa tagcaatatc tctgcatata aatatttctg catataaatt gtaactgatg 120
<210> 51
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 51
attgaccaaa tcagggtaat tttgcatttg taattttaaa aaatgctttc ttcttttaat 60
atactttttt gtttatctta tttctaatac tttccctaat ctctttcttt cagggcaata 120
<210> 52
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
tactttattt tcttttattt ttaattgata cataatcatt atacatattt atgggttaaa 60
gtgtaatgtt ttaatatgtg tacacatatt gaccaaatca gggtaatttt gcatttgtaa 120
<210> 53
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
gtaacttaaa aaaaaacttt acacagtctg cctagtacat tactatttgg aatatatgtg 60
tgcttatttg catattcata atctccctac tttattttct tttattttta attgatacat 120
<210> 54
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 54
gctttctttt tttttcttct ccgcaatttt tactattata cttaatgcct taacattgtg 60
tataacaaaa ggaaatatct ctgagataca ttaagtaact taaaaaaaaa ctttacacag 120
<210> 55
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
cagtgtggaa gtctcaggat cgttttagtt tcttttattt gctgttcata acaattgttt 60
tcttttgttt aattcttgct ttcttttttt ttcttctccg caatttttac tattatactt 120
<210> 56
<211> 119
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 56
tggttaagtt catgtcatag gaaggggata agtaacaggg tacagtttag aatgggaaac 60
agacgaatga ttgcatcagt gtggaagtct caggatcgtt ttagtttctt ttatttgct 119
<210> 57
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
aacctcaagg gcacctttgc cacactgagt gagctgcact gtgacaagct gcacgtggat 60
cctgagaact tcagggtgag tctatgggac gcttgatgtt ttctttcccc ttcttttcta 120
<210> 58
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
aggttctttg agtcctttgg ggatctgtcc actcctgatg ctgttatggg caaccctaag 60
gtgaaggctc atggcaagaa agtgctcggt gcctttagtg atggcctggc tcacctggac 120
<210> 59
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
atagaaactg ggcatgtgga gacagagaag actcttgggt ttctgatagg cactgactct 60
ctctgcctat tggtctattt tcccaccctt aggctgctgg tggtctaccc ttggacccag 120
<210> 60
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
tgactcctga ggagaagtct gccgttactg ccctgtgggg caaggtgaac gtggatgaag 60
ttggtggtga ggccctgggc aggttggtat caaggttaca agacaggttt aaggagacca 120
<210> 61
<211> 120
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
agcagggagg gcaggagcca gggctgggca taaaagtcag ggcagagcca tctattgctt 60
acatttgctt ctgacacaac tgtgttcact agcaacctca aacagacacc atggtgcatc 120

Claims (10)

1.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包括检测如下表1所示的任意多个或全部基因的探针的组合：
表1:
。
2.根据权利要求1所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包括检测所述HBA1基因、HBA2基因和HBB基因的探针的组合，检测所述HBA1基因、HBA2基因和HBB基因的探针组合物为覆盖所述HBA1、HBA2和HBB基因全长的探针的组合；
优选地，检测所述HBA1基因的探针包括SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:37所示探针；
检测所述HBA2基因的探针包括SEQ ID NO:38至SEQ ID NO:45所示探针；
检测所述HBB基因的探针包括SEQ ID NO:46至SEQ ID NO:61所示的探针。
3.根据权利要求1或2所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物中，检测编号为1至38及42至55的任一基因的探针的组合为覆盖相应基因的外显子区域和剪接位点区域的探针的组合；
优选地，每个所述探针的长度为100～150nt，更优选120nt；
优选地，每个所述探针的Tm值为40～70℃。
4.一种同时检测多种疾病相关的基因的试剂，所述试剂包括探针，其特征在于，所述探针为权利要求1至3中任一项所述的探针组合物。
5.一种同时检测多种疾病相关的基因的试剂盒，所述试剂盒包括探针，其特征在于，所述探针为权利要求1至3中任一项所述的探针组合物。
6.权利要求1至3中任一项所述的探针组合物在制备同时检测多种疾病相关的基因的试剂盒中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述多种疾病包括如下疾病中的多种：原发性卟啉症、高胰岛素性低血糖血症、黏多糖贮积症、高苯丙氨酸血症、生物素酶缺乏症、瓜氨酸血症I型、瓜氨酸血症II型、甲基丙二酸血症、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症、戊二酸血症、酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、长链3-羟酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、苯丙酮尿症、糖原累积病、葡萄糖6-磷酸脱氢酶缺乏症、肝豆状核变性、原发性肉碱缺乏症、非综合征耳聋、地中海贫血、先天性甲状腺功能减退症、Noonan综合征、X-连锁肾上腺脑白质营养不良、长QT综合征以及肥厚型心肌病。
8.一种同时检测对多种疾病相关的基因的方法，其特征在于，所述方法包括：
构建待测样本的DNA文库；
利用捕获探针对所构建的文库进行杂交捕获，得到杂交文库；
对所述杂交文库进行测序分析，获得所述多种疾病相关的基因的信息；
其中，所述捕获探针为权利要求1至3中任一项所述的探针组合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述构建待测样本的DNA文库的步骤包括：
提取所述待测样本的DNA，所述待测样本为滤纸片干血斑样本；
利用40～60ng所述DNA构建所述DNA文库；
优选地，提取所述滤纸片干血斑样本的DNA的步骤包括：
将所述滤纸片干血斑样本置于全自动液体处理工作站中进行DNA提取；
更优选地，将所述滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解；
将所述孔板置于所述全自动液体处理工作站中进行DNA提取。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，将所述滤纸片干血斑样本置于孔板中进行裂解之前，所述方法还包括：
利用打孔器对所述滤纸片干血斑样本进行打孔，获取打孔样本；
将所述打孔样本置于所述孔板中；
向所述孔板中添加裂解液进行所述裂解；
优选地，所述打孔器的直径为6～12mm；优选所述孔板为96孔板；优选所述裂解是在50～60℃孵育15～45min。
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