CN110177580A - 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法和组合物 - Google Patents

大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法和组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN110177580A
CN110177580A CN201780082671.9A CN201780082671A CN110177580A CN 110177580 A CN110177580 A CN 110177580A CN 201780082671 A CN201780082671 A CN 201780082671A CN 110177580 A CN110177580 A CN 110177580A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
days
particle
sample
method described
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780082671.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110177580B (zh
Inventor
阿莉恰·J·科皮克
罗伯特·Y·五十岚
杰里迈亚·L·奥耶
黛博拉·阿尔托马尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Central Florida Research Foundation Inc UCFRF
Original Assignee
University of Central Florida Research Foundation Inc UCFRF
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Central Florida Research Foundation Inc UCFRF filed Critical University of Central Florida Research Foundation Inc UCFRF
Priority to CN202311347286.6A priority Critical patent/CN117599088A/zh
Publication of CN110177580A publication Critical patent/CN110177580A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110177580B publication Critical patent/CN110177580B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/33—Fibroblasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/208—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2086—IL-13 to IL-16
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2312—Interleukin-12 (IL-12)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2318—Interleukin-18 (IL-18)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

公开了涉及记忆样NK细胞扩增的组合物和方法。

Description

大规模治疗性生产记忆样NK细胞的方法和组合物
背景技术
来自基因型HLA匹配的兄弟姐妹的造血干细胞移植(HSCT)改善了患有血液癌症恶性肿瘤和骨髓衰竭综合征的患者的长期存活。每年有超过10,000名美国人患上危及生命的疾病，治愈的唯一希望就是从无关的捐献者或脐带血单位进行骨髓移植。然而，超过70％的可能从同种异体干细胞移植中受益的患者没有匹配的同胞供体。这些情况延误了治疗，因此有必要采用不太理想的部分不匹配供体，这最终会导致移植物抗宿主病(GVHD)、移植失败和复发的发生率增加，所有这些都会大大减少患者生存。
移植过程的持续时间和昂贵的财务、心理和健康负担构成了额外的限制。因此，来自无关供体的HSCT的应用仅限于更年轻、更健康的患者，其具有可以承受该过程的适当的社会经济支持。由于无法根除残留的癌细胞导致的高复发率带来了进一步的挑战。虽然HSCT被认为是有疗效的，但癌症复发率却是惊人的。因此，需要新的、更有针对性的免疫疗法，其将更有效、优选地不需要匹配的供体。于20世纪90年代引入了用于治疗HSCT后急性髓性白血病(AML)复发的供体淋巴细胞输注(DLI)。该方法包括将来自原始供体的淋巴细胞给药于患有复发性疾病的AML患者。然而，临床益处是有限的，并且仅在少数具有较小肿瘤负荷的患者中观察到，并且T细胞介导的GVHD经常进一步恶化结果。
大量的供体淋巴细胞输注介导的移植物抗肿瘤(GVT)效应可能是由于自然杀伤(NK)细胞。从供体血液中分离的NK细胞的输注可产生有益的GVT效应而不引起GVHD。临床前和临床数据显示NK细胞输注的有效性导致完全缓解而没有任何GVHD。因此，与自体移植相结合或作为独立治疗的NK细胞输注，为那些没有匹配供体、经历复发或不具备移植资格的患者提供创新且可能非常有效的替代方案。然而，这些NK细胞治疗产生了对NK细胞扩增的需求，其数量足以提供治疗性治疗。因此，非常需要旨在增加类似记忆的NK细胞数量的新的和改进的方法。
所公开的方法和组合物的其他优点将部分地在下面的描述中阐述，并且部分地将从描述中理解，或者可以通过实践所公开的方法和组合物来了解。借助于所附权利要求书中特别指出的元件和组合，将实现和获得所公开的方法和组合物的优点。应当理解，前面的一般性描述和下面的详述都只是示例性和说明性的，并不是对要求保护的本发明的限制。
发明内容
本申请一般涉及包含记忆天然杀伤(NK)细胞的组合物和方法。更具体地，本申请涉及记忆天然杀伤(NK)细胞的体内、离体或体外刺激和扩增，其能够攻击和杀死癌细胞、病毒感染的细胞和某些免疫细胞。
本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；b)通过使所述细胞与包含NK细胞效应剂的囊泡接触(例如，与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触)来扩增步骤a)的预活化的NK细胞。在一些方面，是用于增加记忆样NK细胞数量的方法，其进一步包括在预活化步骤a)和/或扩增步骤b)之后洗涤和/或在扩增步骤b)后静息记忆样NK细胞。在其他方面，本文公开了其中扩增步骤和预活化步骤被逆转的方法，使得所述方法包括通过使所述细胞与包含NK细胞效应剂的囊泡接触来扩增NK细胞(例如，与PM21颗粒、EX21外泌体或者FC21饲养细胞接触)并且然后通过使所述细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化扩增的NK细胞。
在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，其中用于所公开方法的NK细胞获自未经选择的外周血单核细胞群。
还公开了任何前述方面的方法，其中所述至少一种或多种刺激性细胞因子选自IL-12、IL-15和IL-18。在一个方面，该方法能够包括使NK细胞与3种刺激性细胞因子接触。
还公开了任何前述方面的方法，其中使NK细胞与IL-12、IL-15或IL-18在体外、体内或离体接触。
还公开了任何前述方面的方法，其中使NK细胞与一种或多种刺激性细胞因子接触1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72小时。
还公开了任何前述方面的方法，其还包括使NK细胞与选自4-1BBL、IL-2、IL-21、IL-7、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、CCR7、DAP12和DAP10中的细胞因子接触。
在一个方面，本文公开了方法，其中PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞包含与膜插入肽偶联的一种或多种刺激性肽。
还公开了任何前述方面的方法，其中膜插入细胞因子包含能够膜插入的融合肽，对脂质双层具有亲和力，并且其中所述融合肽包含IG4、CD4的片段或其组合。
还公开了任何前述方面的方法，其中所述膜插入肽包含人Fc、GPI、跨膜T细胞受体或pHLIP。
还公开了任何前述方面的方法，其中所述一种或多种刺激性肽选自4-1BBL、IL-2、IL-12、IL-18、IL-21、IL-7、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10。
还公开了任何前述方面的方法，其中与膜插入肽偶联的一种或多种刺激性细胞因子是由重组DNA编码的融合蛋白。
还公开了任何前述方面的方法，其中使所述NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞在体外、体内或离体接触。
还公开了任何前述方面的方法，其中使步骤a)的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60天。
在一个方面，本文公开了这样的方法，其中所述细胞是记忆样NK细胞，其静息了至少1、2、3、4或5天。
在一个方面，本文公开了用于增加记忆样NK细胞数量的试剂盒，其包含一种或多种细胞因子和包含NK细胞效应剂的一种或多种囊泡。
还公开了任何前述方面的试剂盒，其中所述一种或多种细胞因子选自IL-12、IL-15和IL-18。
还公开了任何前述方面的试剂盒，其中包含NK细胞效应剂的一种或多种囊泡是PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞。
还公开了任何前述方面的试剂盒，其中NK细胞效应剂选自4-1BBL、IL-2、IL-15、IL-21、IL-7、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10。
附图说明
包含在本说明书中并构成其一部分的附图示出了若干实施方式，并与说明书一起示出了所公开的组合物和方法。
图1显示在与PM21颗粒、K562-mb21饲养细胞(FC21细胞)接触后，用IL12、IL15和IL18预活化，然后与PM21颗粒接触后增加的记忆NK细胞扩增。
具体实施方式
在公开和描述本发明化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，应理解除非另有说明，否则它们不限于特定的合成方法或特定的重组生物技术方法，或除非另有说明，否则不限于特定的试剂，当然，这可能会有所不同。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不是限制性的。
A.定义
如说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一种(a)”、“一个(an)”和“该(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“药物载体”包括两种或更多种这样的载体的混合物等。
范围在本文中可以表示为从“约”一个特定值，和/或到“约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一个实施方案包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，将理解该特定值形成另一个实施方案。将进一步理解，每个范围的端点相对于另一个端点都是重要的，并且独立于另一个端点。还应理解，本文公开了许多值，并且除了值本身之外，每个值在本文中还被公开为“约”该特定值。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“约10”。还应理解，当公开值“小于或等于”该值时，“大于或等于该值”和值之间的可能范围也被公开，如本领域技术人员适当理解的。例如，如果公开值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应理解，在整个申请中，数据以多种不同格式提供，并且该数据表示端点和起始点，以及数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点15，则应理解，这被认为披露了大于、大于或等于、小于、小于或等于、等于10和15以及10至15之间。还应理解，还公开了两个特定单位之间的每个单位。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。
在本说明书和所附的权利要求书中，将参考许多术语，这些术语应被定义为具有以下含义：
“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的实例和不发生的实例。
提出以下实例以向本领域普通技术人员提供如何制备和评价本文要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的完整公开和描述，并且旨在纯粹地示例性的并且不旨在限制本公开。已经努力确保关于数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，温度是℃或环境温度，压力是大气压或接近大气压。
在整个申请中，引用了各种出版物。这些出版物的公开内容通过引用整体并入本申请中，以便更全面地描述其所属领域的现状。所公开的参考文献也单独地和具体地通过引用并入本文，用于其中包含的材料，其在参考文献所依据的句子中讨论。
B.扩增记忆样NK细胞的方法
人NK细胞是由CD56或CD16的表达和不存在T细胞受体(CD3)定义的外周血淋巴细胞的子集。NK细胞感知并杀死缺乏主要组织相容性复合物(MHC)-I类分子的靶细胞。NK细胞活化受体尤其包括天然细胞毒性受体(NKp30、NKp44和NKp46)和凝集素样受体NKG2D和DNAM-1。它们的配体在受胁迫、转化或感染的细胞上表达，但在正常细胞上不表达，使正常细胞对NK细胞杀伤具有抗性。NK细胞活化通过抑制性受体负调节，例如杀伤性免疫球蛋白(Ig)样受体(KIR)、NKG2A/CD94和白细胞Ig样受体-1(LIR-1)。一种抑制性受体的接合可足以阻止靶裂解。因此，NK细胞有效地靶向表达许多应激诱导的配体和很少MHC I类配体的细胞。
输注NK细胞是对NK细胞裂解敏感的癌症患者的治疗选择，包括血癌(例如急性髓性白血病或多发性骨髓瘤)和几种实体瘤(例如脑肿瘤、尤文肉瘤和横纹肌肉瘤)。增加数量的功能性NK细胞还可以显著增强用于治疗几种癌症的治疗性抗体的功效，所述癌症包括淋巴瘤、结肠直肠癌、肺癌和乳腺癌等。然而，这些类型的个性化治疗非常昂贵，典型的含有抗体的治疗方案花费数万美元。此外，由于免疫受损的癌症患者缺乏免疫细胞参与，因此通常无法实现现有方法的预期功效。
为了作为治疗方法有效，期望达到有效治疗剂量的NK细胞扩增程度。然而，先前的研究表明，NK细胞扩增仅限于几个分裂，细胞达到衰老并停止增殖，与端粒缩短的观察一致。虽然这些方法允许有效的体外NK细胞扩增，但是对活饲养细胞的需求使得该方法难以转移到不具有大GMP设施和能力的临床环境中。而且，输注到患者体内的NK细胞可能由于缺乏饲养细胞的持续刺激而可能停止分裂。此外，仍然缺乏关于体外培养的NK细胞在重新输注到患者体内时按预期发挥功能的信息。目前，IL-2给药是FDA批准的体内NK细胞扩增的唯一方法。然而，本研究中使用的淋巴细胞清除所需的强化预处理方案和高剂量的IL-2导致显著的毒性和延长的住院时间，并且在许多情况下，NK细胞的体内扩增较低。此外，IL-2的全身给药导致调节性T细胞的增殖，其抑制NK细胞的数量和功能，从而限制了它们在患者中的持久性和效率。因此，需要用于NK细胞的体内或离体扩增的替代方法。IL-15目前正在I期临床试验中作为IL-2给药的替代方法进行测试，但基于临床前研究结果，如果全身给药，仍预期其具有显著毒性。因此，两种方法都对患者具有显著的毒性，并且还诱导包括调节性T细胞在内的T细胞的增殖，导致NK细胞的持续时间短(平均少于21天)。
如上所述，NK细胞免疫疗法的功效取决于给药于患者的NK细胞的剂量或通过体内扩增输注后达到的NK细胞的剂量。目前可用的技术受限于它们不能达到在患者中实现治疗效果所需的NK细胞扩增水平。缺乏更简单的临床扩增方案是基于NK细胞的免疫疗法的进展和广泛传播的主要障碍。目前的离体扩增方案使用高剂量细胞因子与在白血病衍生的饲养细胞/刺激细胞系上表达的活化配体的组合，对于在大多数中心转移至临床环境并且不适于直接体内扩增而言具有显著缺点。本文所述的颗粒技术(包括外泌体)的使用消除了对刺激细胞的需要，因此简化了方法并允许直接和选择性的体内扩增。此外，本文公开的方法扩增了记忆样NK细胞的数量。如本文所用，“记忆样NK细胞”涉及NK细胞，其具有能够在细胞因子或肿瘤再刺激后再活化的特征。因此，在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；b)通过使所述细胞与一种或多种包含NK细胞效应剂的囊泡接触来扩增步骤a)的预活化的NK细胞。
应理解并在本文中考虑可能存在需要发生NK细胞扩增或希望所述扩增在活化之前发生的情况。因此，本文公开了其中扩增步骤和预活化步骤被逆转的方法，使得所述方法包括通过使所述细胞与包含NK细胞效应剂的囊泡接触来扩增NK细胞(例如，与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触)，然后通过使所述细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化扩增的NK细胞。简而言之，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括a)通过使所述细胞与包含NK细胞效应剂的一个或多个囊泡接触来扩增NK细胞；b)通过使所述NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化步骤a)的扩增的NK细胞。
所公开的方法通过使至少NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子(例如IL-12、IL-15和/或IL-18)接触来实现NK细胞的预活化。因此，在一个方面，本文公开了通过使一种或多种NK细胞与一种或多种刺激性细胞因子接触来增加包含预活化NK细胞的记忆样NK细胞的数量的方法，所述刺激性细胞因子选自IL-12、IL-15和/或IL-18或其任何组合，包括使一种或多种NK细胞与2种或3种刺激性细胞因子接触。例如，本文具体公开了这样的方法，其中预活化步骤包括使NK细胞与IL-12；IL-15、IL-18、IL-12和IL-15；IL-12和IL-18；IL-15和IL-18；或IL-12、IL-15和IL-18接触。在一个方面，所公开的增加NK细胞数量的方法能够进一步包括使NK细胞与选自4-1BBL、IL-2、IL-21、IL-7、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、Notch配体(例如CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1和EGFL7)、CCR7、DAP12和/或DAP10的一种或多种细胞因子接触。
应理解并在本文中考虑了预活化的持续时间(即，NK细胞和刺激性细胞因子(例如，IL-12、IL-15和/或IL-18)之间的接触持续时间能够为达到所需的NK细胞预活化所需的任何长度的时间。例如，接触能够短至1分钟或多达7天(例如，在IL-12、IL-15和/或IL-18存在下培养NK细胞7天)。在一个方面，本文公开了通过使一种或多种NK细胞与IL-12、IL-15和/或IL-18接触5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36或48个小时来增加包含预活化NK细胞的记忆样NK细胞数的方法。应理解并在本文中考虑了细胞因子在培养物中的半衰期可小于所需的接触时间。因此，本文公开了其中使一个或多个NK细胞在接触期内(例如，在24小时中每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个接触期间)每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时与IL-12、IL-15和/或IL-18接触的方法。
通过使用包含一种或多种NK细胞效应剂(即，刺激性肽、细胞因子和/或粘附分子)的质膜(PM)颗粒、外泌体(EX)或饲养细胞(FC)来接触和激活和/或扩增NK细胞克服了与细胞因子毒性相关的许多障碍。NK细胞活化剂和刺激肽的实例包括但不限于41BBL、IL-2、IL-12、IL-21、IL-18、MICA、LFA-1、2B4、BCM/SLAMF2、CCR7和/或其他归巢受体。细胞因子的实例包括但不限于IL-2、IL-12、IL-21和IL-18。粘附分子的实例包括但不限于LFA-1、MICA、BCM/SLAMF2。例如，由表达膜结合的IL-21的饲养细胞制备的质膜(PM)颗粒、饲养细胞(FC)或外泌体(EX)(分别为FC21细胞、PM21颗粒和EX21外泌体)。表达膜结合的IL-21的FC21细胞、PM21颗粒和EX21外泌体能够进一步包含另外的一种或多种活化剂、刺激性肽、细胞因子和/或粘附分子，包括但不限于41BBL、IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、MICA、LFA-1、2B4、BCM/SLAMF2、CCR7(例如，表达41BBL和膜结合白细胞介素-21的PM21颗粒、EX21外泌体或FC细胞)。因此，在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；b)通过使所述细胞与至少一种包含NK细胞效应剂的囊泡接触，扩增步骤a)的预活化的NK细胞；其中包含NK细胞效应剂的囊泡是PM21颗粒、EX21颗粒和/或FC21饲养细胞中的一种或多种的任何组合。例如，本文公开了增加记忆NK细胞数的方法，其中包括通过使所述细胞与至少一种包含NK细胞效应剂的囊泡接触来扩增步骤a)的预活化的NK细胞，其中所述包含NK细胞效应剂的囊泡包含PM21颗粒；EX21外泌体；FC21饲养细胞；PM21颗粒和EX21外泌体；PM21颗粒和FC21饲养细胞；EX21外泌体和FC21饲养细胞；或PM21颗粒、EX21外泌体和FC21饲养细胞。
在一些方面，PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞的效应剂包含一种或多种与膜插入肽偶联的刺激性肽(例如，Fc、GPI、跨膜T细胞受体或pHLIP)。膜插入肽可以是促进插入膜的分子。膜插入肽可包含对脂质双层具有亲和力的CD4或IgG片段。另外，替代的膜插入肽可包含人Fc、GPI、跨膜T细胞受体或pHLIP。膜自插入肽可以是已知插入细胞膜的任何肽。取决于膜自插入肽缀合物的使用，某些膜自插入肽能够为比其他肽更好的选择。本领域技术人员将理解在不同情况下哪种膜自插入肽是理想的。例如，对于体内使用，pHLIP膜自插入肽可能是合适的。pHLIP膜自插入肽仅在低pH条件下插入膜中。因此，pHLIP缀合物在正常生理条件下不会插入细胞膜中。然而，在注射到肿瘤环境中时，pHLIP缀合物可以插入肿瘤细胞的细胞膜中，因为肿瘤环境比正常生理条件酸性更强。这种插入肿瘤环境允许激活肿瘤区域中的NK细胞。因此，使用pHLIP可防止不必要的插入随机细胞膜。
膜插入肽可以多种方式与一种或多种刺激肽偶联，并且用于偶联肽的技术是本领域公知的。与刺激肽偶联的膜插入肽也可称为膜插入肽缀合物。在一些方面，与膜插入肽偶联的一种或多种刺激肽可包含由重组DNA编码的融合蛋白，并且此类融合蛋白可在细菌细胞中产生。在某些实施方案中，融合蛋白可以由与亲脂性分子(例如疏水性肽、GPI或人Fc)缀合或偶联的一种或多种刺激性肽组成，用于锚定到脂质体或细胞膜中。可以将这些融合蛋白的cDNA载体连接到表达质粒中，该表达质粒允许在细菌(大肠杆菌)、昆虫或哺乳动物细胞中表达。在某些实施方案中，cDNA载体可以是加FLAG-或HIS-标签的。可以使用标准CaCl转染方法转染细菌细胞，例如Sambrook等,Molecular Cloning:A LaboratoryManual.第二版.Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)中所述的方法。细菌细胞也可以在LB培养基中培养，能够收获细胞并使用French Press进行裂解。通过亲和层析能够从裂解物中纯化目的蛋白质。棕榈酸酯缀合的蛋白A和纯化的Fc融合蛋白可以如文献中所述通过在4℃1:2(w/w)混合而缀合。然后可以将肿瘤中的缀合物直接注射或者可以掺入脂质体中。
偶联类型和偶联方法是本领域技术人员已知的。如本文所用，术语“偶联”是指膜自插入肽与另一分子实体(例如肽或蛋白质)缀合、连接或以其他方式连接。例如，与刺激性肽偶联的膜插入肽能够为融合蛋白，其中膜插入肽通过二硫键与另一种蛋白偶联。偶联或缀合可意味着膜自插入肽和NK细胞效应剂之间存在化学连接。
在一些方面，一种或多种刺激性肽可以与膜自插入肽或GPI锚结合，用于原位自组装。例如，41-BBL和IL-21可以与pHLIP肽偶联，所述pHLIP肽在酸性条件下将其自身插入细胞膜中，从而允许将刺激性配体锚定在肿瘤附近的细胞中。刺激性肽41BBL、IL-2、IL-12、IL-21、BCM/SLAMF2、CCR7和/或其他归巢受体可以在细菌细胞中产生或从商业来源购买，并且可以任选地将这些蛋白质的cDNA载体连接进入pTriEX表达质粒，该质粒允许在细菌(大肠杆菌)、昆虫或哺乳动物细胞中表达。cDNA载体可以编码FLAG-或HIS-标签的表达。使用标准CaCl转染方法能够转染细菌细胞，并且可以在LB培养基上培养细菌细胞。能够收获细胞并使用French press裂解，然后可以通过亲和层析从裂解物中纯化目的蛋白质。
在一些实施方案中，可以通过使用9-芴基甲氧基羰基化学的固相肽合成来制备pHLIP，并且可以通过反相色谱法在C18柱上纯化产物。然后可以通过与交联剂(例如二苯甲酮-4-碘乙酰胺)一起温育，将pHLIP与刺激性人蛋白质配体缀合。在几次洗涤后，可以将缀合的pHLIP蛋白质重悬浮于介质(例如盐水)中并进行肿瘤内或静脉内注射。基于来自先前文献的证据并在实验结果中呈现，NK细胞与刺激性配体如IL-21和41-BBL在这种经修饰的肿瘤细胞表面上的相互作用可刺激原位NK细胞扩增并引发其对肿瘤的细胞毒性反应。这种类型的刺激性方法能够用于治疗实体肿瘤，如卵巢癌，其中在酸性pH下原位插入肿瘤细胞的NK刺激性配体能够以单独低剂量IL-2或与NK细胞一起注射到患者的腹膜内空间。有强有力的证据表明，表达高水平FCγIIR(CD16)的细胞毒性淋巴细胞如NK细胞对于治疗性抗体的癌症治疗的功效至关重要。因此，该方法也能够与治疗性抗体组合使用。
应理解并在本文中考虑了预活化的NK细胞(即，与细胞因子例如IL-12、IL-15和/或IL-18接触的NK细胞)与包含NK细胞效应剂的囊泡(即，PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞)之间的接触持续时间可以为达到实现记忆样NK细胞的所需扩增所需要的任何时间长度。例如，接触能够短至1分钟或多达60天(例如，在PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞存在下培养NK细胞7天)。在一个方面，预活化的NK细胞和包含NK细胞效应剂的囊泡之间的接触可以在约6天和约60天之间，更优选地，接触可以在约6天和约40天之间。本文还公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括使预活化的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞接触5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71或72天。应理解并在本文中考虑了，在一些情况下，可能需要并且可以使预活化的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞的多次接触。例如，预活化的NK细胞能够每1,2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24个小时、2、3、4、5、6、7、8、9、0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞接触一次。因此，在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括使预活化的NK细胞与PM21颗粒，EX21外泌体和/或FC21饲养细胞接触一次以上，其中每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24个小时、2、3、4、5、6、7、8、9、0、10、11、12、13、14,15、16、17、18、19、20或21天发生一次接触。
在一个方面，能够从刺激NK细胞的饲养细胞中纯化质膜颗粒、饲养细胞或外泌体。用于本发明的用于制备质膜颗粒或外泌体的刺激NK细胞的饲养细胞，能够为自体或同种异体外周血单核细胞(PBMC)或未照射的自体或PBMC、RPMI8866、HFWT，K562、用膜结合的IL-15和41BBL转染的照射的K562细胞、用膜结合的IL-21和41BBL或EBV-LCL转染的K562细胞。在一些方面，NK细胞饲养细胞能够为用膜结合的IL-21和41BB转染的K562细胞L或用膜结合的IL-15和41BBL转染的K562细胞。
应理解并在本文中考虑了在预活化步骤中使用特定刺激细胞因子对用于扩增预活化NK细胞的包含NK细胞效应剂的囊泡没有影响。因此，细胞因子和囊泡的任何组合能够用于所公开的方法中。例如，本文具体公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；b)通过使所述细胞与一种或多种包含NK细胞效应剂的囊泡接触(例如，与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触)，使步骤a)的预活化的NK细胞扩增；其中所述一种或多种刺激性细胞因子是IL-12、IL-15和/或IL-18，并且所述一种或多种囊泡是PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞。例如，本文公开了包含以下的方法：IL-12和PM21颗粒；IL-15和PM21颗粒；IL-18和PM21颗粒；IL-12和EX21外泌体、IL-15和EX21外泌体；IL-18和EX21外泌体；IL-12和FC21饲养细胞；IL-15和FC21饲养细胞；IL-18和FC21饲养细胞；IL-12、IL15和PM21颗粒；IL-12、IL-18和PM21颗粒；IL-15、IL-18和PM21颗粒；IL-12、IL-15、IL-18和PM21颗粒；IL-12、IL15和EX21外泌体；IL-12、IL-18和EX21外泌体；IL-15、IL-18和EX21外泌体；IL-12、IL-15、IL-18和EX21外泌体；IL-12、IL15和FC21饲养细胞；IL-12、IL-18和FC21饲养细胞；IL-15、IL-18和FC21饲养细胞；IL-12、IL-15、IL-18和FC21饲养细胞；IL-12、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-15、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、FC21饲养细胞和EX21外泌体；IL-15、FC21饲养细胞和EX21外泌体；IL-18、FC21饲养细胞和EX21外泌体；IL-12、FC21饲养细胞、PM21颗粒和EX21外泌体；IL-15、FC21饲养细胞、PM21颗粒和EX21外泌体；IL-18、FC21饲养细胞、PM21颗粒和EX21外泌体；IL-12、IL15、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-15、IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、IL-15、IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、IL15、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL-15、IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL15、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-12、IL-18、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-15、IL-18、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-12、IL-15、IL-18、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-12、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL15、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；和IL-12、IL-15、IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒。
应理解并在本文中考虑了所公开的增加记忆NK细胞数的方法的每个步骤能够在体外、体内或离体发生。也就是说，用一种或多种细胞因子预活化NK细胞能够在体外、体内或离体发生。类似地，预活化的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞的接触能够在体外、体内或离体发生。此外，记忆样NK细胞的静息能够在PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞的存在下发生。另外，应理解，步骤是否在体外、离体或体内发生完全独立于特定步骤之前或之后的步骤。例如，预活化能够在体外或离体发生，而预活化的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞的接触在体内发生。或者，预活化；与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞接触；并且静息能够在体外或离体发生。另外，预活化的NK细胞能够在同种异体移植程序、半相合移植程序或体内免疫治疗程序中与PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞接触。在一些方面，在同种异体移植、半相合移植或体内免疫疗法中使用NK刺激外泌体不会引起移植物抗宿主病(GVHD)。
在一个方面，本文考虑了所公开的方法能够与从任何供体来源获得的NK细胞一起使用，所述供体来源包括从未经选择的外周血单核细胞群获得的NK细胞。在一些情况下，在所公开的试剂盒中用于增加记忆样NK细胞数量的NK细胞的供体来源也能够为NK细胞的受体。因此，NK细胞能够来自自体来源。在其他情况下，NK细胞的供体来源能够为半相合或同种异体供体来源。在一个方面，NK细胞的来源能够为可以发现NK细胞祖细胞的任何来源，包括但不限于脐带血或干细胞来源，例如诱导的多能干细胞和胚胎干细胞，或任何早期阶段NK细胞祖细胞。
应当理解，当将IFN-γ重新引入肿瘤或通过肿瘤部位的细胞因子再刺激时，通过允许IFN-γ的快速和剧烈产生，静息期能够使得到的记忆样NK细胞受益。在细胞因子再刺激后或在引入肿瘤后在肿瘤部位产生快速和剧烈的IFN-γ产生的价值是3倍：1)NK细胞不会耗尽效应分子(IFN-γ和颗粒酶；2)NK细胞的循环时间持续更长；3)IFN-γ增加的抗肿瘤作用是肿瘤靶向和较少的全身性炎症。因此，在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，其进一步包括在扩增步骤b)之后使记忆样NK细胞静息1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天。
在一个方面，应当理解，在步骤之间或之后洗涤细胞能够更精确地控制对细胞因子和/或NK细胞效应剂颗粒的暴露，或者防止污染所公开的方法的后续步骤或记忆样NK细胞的使用。洗涤能够以本领域可接受的任何方式进行，包括但不限于在可接受的洗涤中离心和再悬浮的循环，然后在培养基中最终重新悬浮，简单地倒出培养基，然后用可接受的培养基进行一次或多次漂洗；所述洗涤在培养温度、室温或冷洗(例如，在冰上或在冷冻离心机中)进行。洗涤能够用磷酸盐缓冲盐水(PBS)或任何适当的含有或不含有血清(例如，胎牛血清)的培养NK细胞的培养基(例如，GMP培养基，Roswell Park MemorialInstitute(RPMI)institute,Minimal Essential Media(MEM),Eagle’s MEM(EMEM),X-VIVO 20TM等)。因此，在一个方面，本文公开了增加NK细胞数量的方法，其包括a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；b)通过使所述细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触，扩增步骤a)的预活化的NK细胞；进一步包括在用IL-12、IL-15和IL-18预活化后洗涤NK细胞和/或在用一种或多种包含NK细胞效应剂的囊泡(即PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞)扩增后洗涤NK细胞。
所公开的方法使记忆样NK细胞的数量惊人地增加，显著超过通过替代方法实现的数量。如图1所示，用刺激性细胞因子预处理，然后通过与PM21颗粒接触扩增预活化细胞，在15天内扩增NK细胞数超过10,000倍。这比使用K562-mb21饲养细胞或和单独使用PM21颗粒的扩增相比增加了100倍。因此，在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，其中所述方法导致在至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18天内NK细胞增加5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000或15000倍。在一个方面，能够相对于饲养细胞扩增或单独的PM21颗粒增加。因此，应理解并在本文中考虑了，相对于单独的K562饲养细胞刺激的扩增，所公开的方法能够导致至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15倍的增加或者相对于单独的PM21颗粒刺激的扩增，至少50、60、70、75、80、90、100、110、120、125、130、140、150、175或200倍的增加。
C.组合物
公开了用于制备公开的组合物的组分以及在本文公开的方法中使用的组合物本身。本文公开了这些和其他材料，并且应当理解，当公开这些材料的组合、子集、相互作用、组等时，尽管可能未明确公开这些化合物的各种个体和集体组合的特定参考和排列，每个都在本文中特别考虑和描述。例如，如果公开和讨论了特定的细胞因子(例如IL-12、IL-15或IL-18)、PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞，并且讨论了能够对许多分子进行许多修饰，所述分子包括细胞因子(例如IL-12、IL-15或IL-18)、PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞，特别考虑了细胞因子的每一种组合和排列(例如IL-12、IL-15或IL-18)、PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞以及可能的修饰，除非另有明确说明。因此，如果公开了一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F以及组合分子的实例，公开了AD，那么即使每个都没有单独列举，每个都是单独和共同考虑的含义组合，AE、AF、BD、BE、BF、CD、CE和CF被认为是公开的。同样，还公开了这些的任何子集或组合。因此，例如，将考虑公开A-E、B-F和C-E的子组。该概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用所公开的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以执行的各种附加步骤，则应理解，能够利用所公开方法的任何特定实施方案或实施方案的组合来执行这些附加步骤中的每一个。
增加记忆样NK细胞数量的公开方法利用一种或多种细胞因子(例如，IL-12、IL-15和/或IL-18)与包含NK细胞效应剂的囊泡组合，例如，PM21颗粒、FC21饲养细胞和/或EX21外泌体。应理解并在本文中考虑了将所公开方法中使用的组分提供在容易允许人执行所公开方法的包装中将是有利的。
因此，在一个方面，本文公开了用于增加记忆样NK细胞数量的试剂盒，其包含一种或多种细胞因子(例如，IL-12、IL-15和/或IL-18)的和包含一种或多种NK细胞效应剂的一种或多种囊泡。在一个方面，囊泡能够为PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞。例如，所公开的试剂盒能够包含IL-12和PM21颗粒；IL-15和PM21颗粒；IL-18和PM21颗粒；IL-12和EX21外泌体，IL-15和EX21外泌体；IL-18和EX21外泌体；IL-12和FC21饲养细胞；IL-15和FC21饲养细胞；IL-18和FC21饲养细胞；IL-12、IL15和PM21颗粒；IL-12、IL-18和PM21颗粒；IL-15、IL-18和PM21颗粒；IL-12、IL-15、IL-18和PM21颗粒；IL-12、IL15和EX21外泌体；IL-12、IL-18和EX21外泌体；IL-15、IL-18和EX21外泌体；IL-12、IL-15、IL-18和EX21外泌体；IL-12、IL15和FC21饲养细胞；IL-12、IL-18和FC21饲养细胞；IL-15、IL-18和FC21饲养细胞；IL-12、IL-15、IL-18和FC21饲养细胞；IL-12、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-15、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、FC21饲养细胞和EX21外泌体；IL-15、FC21饲养细胞和EX21外泌体；IL-18、FC21饲养细胞和EX21外泌体；IL-12、FC21饲养细胞、PM21颗粒和EX21外泌体；IL-15、FC21饲养细胞、PM21颗粒和EX21外泌体；IL-18、FC21饲养细胞、PM21颗粒和EX21外泌体；IL-12、IL15、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-15、IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、IL-15、IL-18、EX21外泌体和PM21颗粒；IL-12、IL15、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL-15、IL-18、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL15、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-12、IL-18、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-15、IL-18、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-12、IL-15、IL-18、EX21外泌体和FC21饲养细胞；IL-12、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL15、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-12、IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；IL-15、IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒；或IL-12、IL-15、IL-18、EX21外泌体、FC21饲养细胞和PM21颗粒。
应理解并在本文中考虑了包含在囊泡中的NK细胞效应剂(例如，PM21颗粒、EX21外泌体和/或FC21饲养细胞)能够选自4-1BBL、IL-2、IL-21、IL-7、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10。
应理解并在本文中考虑所公开的试剂盒还能够包含除IL-12、IL-15和/或IL-18外的细胞因子。因此，一方面是用于增加NK细胞数量的试剂盒，其进一步包含4-1BBL、IL-2、IL-12、IL-18、IL-21、IL-7、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10。
在一个方面，本文考虑了所公开的试剂盒能够与从供体来源获得的NK细胞一起使用，所述供体来源包括从未经选择的外周血单核细胞群获得的NK细胞。在一些情况下，在所公开的试剂盒中用于增加记忆样NK细胞数量的NK细胞的供体来源也能够为NK细胞的受体。因此，NK细胞能够来自自体来源。在其他情况下，NK细胞的供体来源能够为半相合或同种异体供体来源。
本文进一步考虑了存在这样的情况：在试剂盒中提供NK细胞是有益的。因此，在一个方面，本文公开了用于增加进一步包含NK细胞或NK细胞系的记忆样NK细胞数量的试剂盒。

Claims (21)

1.一种增加记忆样NK细胞数量的方法，包括：a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；和b)通过使所述细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触，扩增步骤a)的预活化的NK细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述NK细胞获自未经选择的外周血单核细胞群。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种或多种刺激性细胞因子选自由IL-12、IL-15和IL-18组成的组。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法包括使所述NK细胞与3种刺激性细胞因子接触。
5.根据权利要求3所述的方法，其还包括使所述NK细胞与选自由以下组成的组中的细胞因子接触：4-1BBL、IL-2、IL-21、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10。
6.根据权利要求1所述的方法，其中使所述NK细胞与IL-12、IL-15或IL-18在体外、体内或离体接触。
7.根据权利要求1所述的方法，其中使所述NK细胞与所述一种或多种刺激性细胞因子接触约6至约24小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞包含与膜插入肽偶联的一种或多种刺激性细胞因子。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述膜插入细胞因子包含能够膜插入的融合肽，对脂质双层具有亲和力，并且其中所述融合肽包含IG4、CD4的片段或其组合。
10.根据权利要求8所述的方法，其中与膜插入肽偶联的所述一种或多种刺激细胞因子是由重组DNA编码的融合蛋白。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述膜插入肽包含人Fc、GPI、跨膜T细胞受体或pHLIP。
12.根据权利要求8所述的方法，其中所述一种或多种刺激性肽选自由4-1BBL、IL-2、IL-12、IL-18、IL-21、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10组成的组。
13.根据权利要求1所述的方法，其中使所述NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞在体外、体内或离体接触。
14.根据权利要求1所述的方法，其中使步骤a的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、45天或60天。
15.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤b)之后静息扩增的记忆样NK细胞。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞是静息了至少(在其之间或不超过)1天、2天、3天、4天或5天的记忆样NK细胞。
17.根据权利要求1所述的方法，其中NK细胞的来源是NK细胞前体来源，其中NK细胞前体来源选自由脐带血、诱导多能干细胞和胚胎干细胞组成的组。
18.用于增加记忆样NK细胞数量的试剂盒，其包含一种或多种细胞因子和包含NK细胞效应剂的一种或多种囊泡。
19.根据权利要求18所述的试剂盒，其中所述一种或多种细胞因子选自由IL-12、IL-15和IL-18组成的组。
20.根据权利要求18所述的试剂盒，其中包含NK细胞效应剂的所述一种或多种囊泡是PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞。
21.根据权利要求20所述的试剂盒，其中所述NK细胞效应剂选自由-1BBL、IL-2、IL-15、IL-21、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10组成的组。
CN201780082671.9A 2016-11-08 2017-11-08 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法和组合物 Active CN110177580B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311347286.6A CN117599088A (zh) 2016-11-08 2017-11-08 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15/345,965 2016-11-08
US15/345,965 US10300089B2 (en) 2016-11-08 2016-11-08 Methods for high scale therapeutic production of memory NK cells
PCT/US2017/060614 WO2018089476A1 (en) 2016-11-08 2017-11-08 Methods and compositions high scale therapeutic production of memory-like nk cells

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311347286.6A Division CN117599088A (zh) 2016-11-08 2017-11-08 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110177580A true CN110177580A (zh) 2019-08-27
CN110177580B CN110177580B (zh) 2023-11-03

Family

ID=62065337

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311347286.6A Pending CN117599088A (zh) 2016-11-08 2017-11-08 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法
CN201780082671.9A Active CN110177580B (zh) 2016-11-08 2017-11-08 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法和组合物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311347286.6A Pending CN117599088A (zh) 2016-11-08 2017-11-08 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法

Country Status (8)

Country Link
US (2) US10300089B2 (zh)
EP (1) EP3538160A4 (zh)
JP (2) JP7385263B2 (zh)
KR (2) KR20230153527A (zh)
CN (2) CN117599088A (zh)
AU (1) AU2017356928A1 (zh)
CA (1) CA3043172A1 (zh)
WO (1) WO2018089476A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110904052A (zh) * 2019-12-30 2020-03-24 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种snk细胞的培养方法
CN115521914A (zh) * 2022-10-12 2022-12-27 西北工业大学 一种人原代自然杀伤细胞体外扩增体系及方法

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2019215034C1 (en) 2018-02-01 2022-01-06 Nkmax Co., Ltd. Method of producing natural killer cells and composition for treating cancer
CA3127459A1 (en) * 2019-01-24 2020-07-30 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Compositions and methods for stimulating natural killer cells
CN109810197B (zh) * 2019-02-25 2020-05-12 上海尚泰生物技术有限公司 用于高效扩增nk的人工抗原递呈细胞及其构建方法
CN113195706A (zh) * 2019-07-08 2021-07-30 南克维斯特公司 Ciml nk细胞及其方法
JP2022542399A (ja) * 2019-07-31 2022-10-03 ンカルタ・インコーポレイテッド ナチュラルキラー細胞の増殖を亢進する、および細胞障害性を増強するための方法および組成物
CN110684730B (zh) * 2019-10-11 2021-03-19 山东德升生物工程有限公司 一种利用滋养细胞高效扩增nk细胞的制备方法
US20210277358A1 (en) * 2020-03-05 2021-09-09 Korea Research Institute Of Bioscience METHOD FOR PRODUCING MEMORY-LIKE NK CELLS WITH ABILITY TO EXPRESS HIGHER LEVELS OF NCRS, CYTOTOXICITY, AND IFN-y THAN NK CELLS IN HUMAN PERIPHERAL BLOOD
KR20230150113A (ko) * 2022-04-21 2023-10-30 (주) 엘피스셀테라퓨틱스 유사 기억 자연 살해 세포 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 유사 기억 자연 살해 세포의 항암 용도

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000050639A2 (en) * 1999-02-22 2000-08-31 Variagenics, Inc. Gene sequence variations with utility in determining the treatment of disease
US20150258143A1 (en) * 2012-10-02 2015-09-17 Bloodcenter Research Foundation Method of providing cellular therapy using modified natural killer cells or t lymphocytes
WO2016069607A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for natural killer cells
CN106029694A (zh) * 2013-12-06 2016-10-12 达纳-法伯癌症研究院公司 治疗性肽

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101133185B1 (ko) * 2008-07-29 2012-04-06 서울대학교병원 자연살해세포의 증식방법
EP2539442A1 (en) 2010-02-24 2013-01-02 Ingo Schmidt-Wolf Method for the generation of a cik cell and nk cell population
KR101644984B1 (ko) 2011-12-22 2016-08-12 재단법인 목암생명과학연구소 자연살해세포의 제조방법, 이러한 방법에 의해 제조된 자연살해세포 및 이를 포함하는 종양 및 감염성 질환 치료용 조성물
AU2013282353B2 (en) * 2012-06-28 2018-10-25 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for natural killer cells
CN109952369B (zh) * 2016-10-05 2024-03-22 弗罗里达中央大学研究基金会 涉及nk细胞和抗pdl1癌症治疗的方法和组合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000050639A2 (en) * 1999-02-22 2000-08-31 Variagenics, Inc. Gene sequence variations with utility in determining the treatment of disease
US20150258143A1 (en) * 2012-10-02 2015-09-17 Bloodcenter Research Foundation Method of providing cellular therapy using modified natural killer cells or t lymphocytes
CN106029694A (zh) * 2013-12-06 2016-10-12 达纳-法伯癌症研究院公司 治疗性肽
WO2016069607A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for natural killer cells

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110904052A (zh) * 2019-12-30 2020-03-24 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种snk细胞的培养方法
CN115521914A (zh) * 2022-10-12 2022-12-27 西北工业大学 一种人原代自然杀伤细胞体外扩增体系及方法
CN115521914B (zh) * 2022-10-12 2024-04-19 西北工业大学 一种人原代自然杀伤细胞体外扩增体系及方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20190314412A1 (en) 2019-10-17
KR20230153527A (ko) 2023-11-06
WO2018089476A1 (en) 2018-05-17
JP7385263B2 (ja) 2023-11-22
US20180125888A1 (en) 2018-05-10
KR102596903B1 (ko) 2023-11-01
KR20190074303A (ko) 2019-06-27
AU2017356928A1 (en) 2019-05-30
CA3043172A1 (en) 2018-05-17
CN117599088A (zh) 2024-02-27
JP2023025033A (ja) 2023-02-21
US10300089B2 (en) 2019-05-28
EP3538160A4 (en) 2020-05-27
JP2019533469A (ja) 2019-11-21
EP3538160A1 (en) 2019-09-18
CN110177580B (zh) 2023-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110177580A (zh) 大规模治疗性生产记忆样nk细胞的方法和组合物
Brown et al. Optimization of IL13Rα2-targeted chimeric antigen receptor T cells for improved anti-tumor efficacy against glioblastoma
Cummins et al. Chimeric antigen receptor T-cell therapy for acute myeloid leukemia: how close to reality?
Tonn et al. Treatment of patients with advanced cancer with the natural killer cell line NK-92
CN107530376A (zh) 用于癌症治疗的联合免疫疗法和细胞因子控制疗法
Corrigan-Curay et al. T-Cell Immunotherapy: Looking Forward: T Cell Immunotherapy: Optimizing Trial Design Bethesda, Maryland 10-11 September 2013
Przespolewski et al. Advances in immunotherapy for acute myeloid leukemia
Kabir et al. Immunotherapy for medulloblastoma: current perspectives
CN109069539A (zh) 用于癌症治疗的联合免疫疗法和细胞因子控制疗法
JP2017536812A (ja) バイパータイト型およびトリパータイト型のシグナル伝達免疫細胞
CN108779160A (zh) 施用工程化t细胞以治疗中枢神经系统中的癌症
JP2022058482A (ja) 生体内での存続性及び治療活性及びその増殖のためのｎｋｔ細胞サブセット
Baas et al. Combining autologous dendritic cell therapy with CD3 antibodies promotes regulatory T cells and permanent islet allograft acceptance
Alaniz et al. Low molecular weight hyaluronan preconditioning of tumor-pulsed dendritic cells increases their migratory ability and induces immunity against murine colorectal carcinoma
Su et al. Coculturing dendritic cells with zoledronate acid efficiently enhance the anti-tumor effects of cytokine-induced killer cells
Ishikawa et al. Adoptive cell transfer therapy for malignant gliomas
JP3904374B2 (ja) キラー活性を増強したリンパ球
Morecki et al. Induction of long-lasting antitumor immunity by concomitant cell therapy with allogeneic lymphocytes and trifunctional bispecific antibody
Kiaei et al. Advances in natural killer cell therapies for breast cancer
Li et al. Co-infusion of CAR T cells with aAPCs expressing chemokines and costimulatory ligands enhances the anti-tumor efficacy in mice
Lo Presti et al. Use of cord blood derived T-cells in cancer immunotherapy: milestones achieved and future perspectives
TW201938196A (zh) 融合蛋白擴展
Sanchez et al. T9 glioma cells expressing membrane-macrophage colony stimulating factor produce CD4+ T cell-associated protective immunity against T9 intracranial gliomas and systemic immunity against different syngeneic gliomas
Steinfatt Modulation of regulatory T cells for the immunotherapy of inflammatory diseases and cancer
Nambam et al. Immune Intervention in Type 1 Diabetes

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant