CN110172089A - 一种kras突变多抗原组合、靶向kras突变肿瘤ctl及其应用 - Google Patents

一种kras突变多抗原组合、靶向kras突变肿瘤ctl及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用，涉及KRAS突变技术领域，本发明所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。在本发明中所述KRAS突变多抗原组合的接头不能引起特异性反应，说明所述KRAS突变多抗原组合安全可用。本发明利用所述KRAS突变多抗原组合制备得到靶向KRAS突变肿瘤CTL，对7种KRAS突变肿瘤细胞，均有一定的杀伤作用，说明CTL可以用于治疗多发的KRAS突变肿瘤疾病。

Description

一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用
技术领域
本发明属于KRAS突变技术领域，具体涉及一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用。
背景技术
ras基因家族与人类肿瘤相关的基因有三种——HRAS、KRAS和NRAS，分别定位在11、12和1号染色体上。KRAS因编码21kD的ras蛋白又名p21基因。在ras基因中，KRAS对人类癌症影响最大，它是一种分子开关：当正常时能控制调控细胞生长的路径；发生异常时，则导致细胞持续生长，并阻止细胞自我毁灭。它参与细胞内的信号传递，当KRAS基因突变时，该基因永久活化，不能产生正常的ras蛋白，使细胞内信号传导紊乱，细胞增殖失控而癌变。检测KRAS基因突变是深入了解癌基因的情况、了解各种癌症的发展预后、放化疗疗效的重要指标。
肠癌患者中，KRAS突变是对靶向药抗药的原因之一，因此，KRAS突变患者很难从靶向药中获益，生存期短，因此，迫切需要开发针对KRAS突变的免疫细胞治疗手段。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用，利用多抗原融合的KRAS突变多抗原组合制备靶向KRAS突变肿瘤CTL，可同时识别7种KRAS突变，且在识别过程中不产生其他新抗原。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种KRAS突变多抗原组合，所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列。
优选的，所述KRAS突变多抗原组合中包含6个接头序列，所述接头序列如SEQ IDNO.2～7所示。
本发明还提供了一种利用所述KRAS突变多抗原组合制备得到的靶向KRAS突变肿瘤CTL。
本发明还提供了所述靶向KRAS突变肿瘤CTL在制备治疗KRAS突变肿瘤疾病的药物中的应用。
本发明提供了一种KRAS突变多抗原组合，所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列。在本发明中所述KRAS突变多抗原组合的接头不能引起特异性反应，说明所述KRAS突变多抗原组合安全可用。本发明利用所述KRAS突变多抗原组合制备得到靶向KRAS突变肿瘤CTL(CTL，细胞毒性T淋巴细胞)，对7种KRAS突变肿瘤细胞，均有一定的杀伤作用，说明CTL可以用于治疗多发的KRAS突变肿瘤疾病。
附图说明
图1为本发明不同排列组合接头的特异性反应结果图；
图2为本发明诱导靶向多发KRAS突变的CTL细胞结果图；
图3为本发明所述靶向KRAS突变肿瘤CTL对7种KRAS突变肿瘤细胞的杀伤效果图。
具体实施方式
本发明提供了一种KRAS突变多抗原组合，所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列。
本发明所述KRAS突变多抗原组合的序列如SEQ ID NO.1所示：TEYKLVVVGAAGVGKS ALTIQTEYKLVVVGAVGVGKSALTITEYKLVVVGASGVGKSALTIEYKLVVVGAGDVGKSALTIQLTEYKLVVVGACGVGKSALTIQTEYKLVVVGADGVGKSALTICLLDILDTAGHEEYSAMRDQY，其中下划线部分为接头序列，其中接头编号与序列如表1所示：
表1接头序列对应表
在本发明中，所述KRAS突变多抗原组合的制备方法，优选的包括：以net MHC分析软件，对KARS突变序列进行预测，选出几种候选的排列组合；根据组合序列，确定接头序列，并合成相应的多肽。本发明所述KARS突变序列优选包括7种，具体如表2所示：
表2 KARS突变序列表
序列名称 SEQ ID NO 序列
KRAS-12D 8 TEYKLVVVGADGVGKSALTIQ
KRAS-12C 9 TEYKLVVVGACGVGKSALTIQ
KRAS-12V 10 TEYKLVVVGAVGVGKSALTIQ
KRAS-12A 11 TEYKLVVVGAAGVGKSALTIQ
KRAS-12S 12 TEYKLVVVGASGVGKSALTIQ
KRAS-13D 13 EYKLVVVGAGDVGKSALTIQL
KRAS-61H 14 CLLDILDTAGHEEYSAMRDQY
本发明对所述多肽的合成方法并没有特殊限定，优选由生物公司进行合成。
本发明在得到所述KRAS突变多抗原组合后，优选还包括对所述KRAS突变多抗原组合的特异性反应进行验证，所述验证优选为检测IFN-gamma的释放水平，如未发现特异性反应，即证明所述KRAS突变多抗原组合可用。本发明对所述IFN-gamma的释放水平的检测方法并没有特殊限定，利用本领域的常规方法或试剂盒即可。
本发明还提供了一种利用所述KRAS突变多抗原组合制备得到的靶向KRAS突变肿瘤CTL。
本发明对所述靶向KRAS突变肿瘤CTL的制备方法并没有特殊限定，优选包括：将所述KRAS突变多抗原组合构建到表达载体上；制备慢病毒，感染抗原提呈细胞(DC、PBMC、人工DC等)，制备CTL。
本发明还提供了所述靶向KRAS突变肿瘤CTL在制备治疗KRAS突变肿瘤疾病的药物中的应用。本发明对所述药物的剂型并没有特殊限定。
下面结合实施例对本发明提供的一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
以net MHC分析软件，对KARS突变序列进行预测，选出下述七种排列组合：
KRAS-12D：TEYKLVVVGADGVGKSALTIQ；
KRAS-12C：TEYKLVVVGACGVGKSALTIQ；
KRAS-12V：TEYKLVVVGAVGVGKSALTIQ；
KRAS-12A：TEYKLVVVGAAGVGKSALTIQ；
KRAS-12S：TEYKLVVVGASGVGKSALTIQ；
KRAS-13D：EYKLVVVGAGDVGKSALTIQL；
KRAS-61H：CLLDILDTAGHEEYSAMRDQY；
根据组合序列，确定接头序列，并合成相应的多肽：
组合一(SEQ ID NO.15)：
CLLDILDTAGHEEYSAMRDQYTEYKLVVVGADGVGKSALTITEYKLVVVGACGVGKSALTIQTEYKLVVVGAVGVGKSALTIQTEYKLVVVGAAGVGKSALTITEYKLVVVGASGVGKSALTIQEYKLVVVGAGDVGKSALTIQL组合二(SEQ ID NO.16)：
CLLDILDTAGHEEYSAMRDQYTEYKLVVVGADGVGKSALTTEYKLVVVGAVGVGKSALTITEYKLVVVGAAGVGKSALTIQTEYKLVVVGASGVGKSALTIQEYKLVVVGAGDVGKSALTIQL TEYKLVVVGACGVGKSALTIQ组合三(SEQ ID NO.17)：
TEYKLVVVGADGVGKSALTICLLDILDTAGHEEYSAMRDQYTEYKLVVVGAVGVGKSALTIQTEYKLVVVGAAGVGKSALTIQTEYKLVVVGASGVGKSALTIQEYKLVVVGAGDVGKSALTIQLTEYKLVVVGACGVGKSALTIQ
组合四(KRAS突变多抗原组合，SEQ ID NO.1)：
TEYKLVVVGAAGVGKSALTIQTEYKLVVVGAVGVGKSALTITEYKLVVVGASGVGKSALTIEYKLVVVGAGDVGKSALTIQLTEYKLVVVGACGVGKSALTIQTEYKLVVVGADGVGKSALTI CLLDILDTAGHEEYSAMRDQY
实施例2
检测实施例1制备得到的4种组合的IFN-gamma释放水平，其中组合4为本发明提供的KRAS突变多抗原组合：
1)以HLA-A0201、HLA-A0206、HLA-A2601、HLA-A2402等几种人类淋巴细胞抗原(HLA)的外周血单个核细胞(PBMC)作为检测细胞；
2)1500rpm离心5min，收集PBMC，加入10mL PBS重悬细胞并计数，1500rpm离心5min，收集PBMC以1640培养基+10％FBS+200U/mL IL2重悬，计数调整至1×106cells/mL；
3)以排枪将PBMC分至96孔平底板中，200μL/孔，细胞数为2×105cells；再分别加入10μL 1mg/mL的突变多肽，终浓度为50μg/mL，每条多肽设置3复孔；
4)设置阳性对照和阴性对照；
5)37℃、5％CO2刺激24h后，1500rpm离心10min，转移140μL上清至新的96孔板中；
6)再将96孔板进行离心，1500rpm 10min，取样品进行ELISA检测；检测结果如图1所示：4种组合中，仅有第4种的接头不能引起特异性反应，证明本发明提供的所述KRAS突变多抗原组合安全可用，且在检测过程中不产生新的抗原。
实施例3
1、构建多抗原融合片段表达载体
将本发明提供所述KRAS突变多抗原组合合成基因，以NheI和BamH I进行酶切，并连接的方法构建到表达载体上，转化感受态细胞Stbl3，挑取单克隆进行鉴定，选取测序正确的克隆，提取质粒备用；
2、慢病毒包装：
1)转染前一天，将4×106的293T(加拿大)细胞接种10cm2平皿上(10mL DMEM+10％FBS)；
2)取15mL离心管标记为A，加入以下试剂并混匀：
慢病毒质粒 12μg
慢病毒包装质粒 6μg+6μg
1640 500μL
3)取15mL离心管标记为B，分别加入500μL 1640(无FBS)培养基及72μLlipofectamine 2000，混匀，室温静置5min；
4)将A管液体转入B管内，混匀，室温静置25min，
5)将接种后的293T细胞从培养箱中取出，弃培养液，再加入10mL 1640(无FBS)培养液；
6)将1mL混合物逐滴均匀加入到293T细胞培养液中，轻微混匀，置于37℃，5％CO2培养箱中培养6h；
7)换正常培养液DEME+10％FBS培养；
8)48h后，收病毒液，将培养液转移至50mL离心管中4000g，离心5min，4℃收集上清病毒液，过0.45μm滤膜，然后4℃保存。
3、慢病毒浓缩
1)按5：1的比例加浓缩液(合生基因)，混匀后，4℃过夜。
2)4℃、4000g，离心30min浓缩慢病毒；
3)弃上清，用移液器吸走全部液体；
4)每管用150μLPBS重悬，混匀后，分装，留10μL进行滴度测定。
4、分离DC和T+B细胞：
1)单采血，分离PBMC；
2)将PBMC以培养基1640+10％FBS调整至1×106细胞/mL，至于培养皿中，于37℃5％CO2培养箱，静止过夜；收集悬浮细胞，标记为T+B，备用；
3)以培养基1640+10％FBS对贴在培养皿底部的细胞进行吹打，收集贴壁的单核细胞，备用；
5、慢病毒感染抗原提呈细胞
APC来源：上述方法进行贴盘分离单核细胞，也可以PBMC作为抗原提呈细胞、或者人工改造的抗原提呈细胞，都可以作为备选细胞，进行慢病毒感染；
1)抗原提呈细胞计数，以MOI＝5:1，进行慢病毒的感染；
2)12孔板，总体积1mL，每孔Polybrene 1μL。
6、分离目的细胞：
1)离心收集T+B细胞或者PBMC，以PBS重选，细胞过30μm细胞筛，计数；
2)离心，300g 10min，完全去除上清；
3)以分离缓冲液(PBS,pH 7.2,0.5％BSA 2mM EDTA)重悬细胞，每107cells以80μL分离缓冲液重悬；
4)每107cells，加入20μL CD8或CD3或CD56beads；
5)混匀后，孵育15min(2-8℃)
6)每107cells，加入1-2mL分离buffer重悬细胞，300g 10min，完全去除上清；
7)将108以内的细胞以500μL分离buffer重悬；
8)以分离buffer润洗分离柱；MS：500μL，LS：3mL；
9)将细胞转移至分离柱
10)收集未结合的细胞，并以分离buffer冲洗3次，液体完全流出时，再加入分离buffer；MS：3×500μL；
11)从分离器上卸下柱子，放到适合的分离管上；
12)加入适量的分离缓冲液，立即将细胞推出，收集细胞备用；
7、诱导靶向多发KRAS突变的CTL细胞
1)分离KRAS突变患者的PBMC，以PBMC为起始，或者以分离的CD8+细胞，分离CD3+细胞，或者分离CD56-细胞，作为起始细胞；
2)将CD3+T细胞或CD8+T细胞以X-VIVO培养基调整至1×106/mL，2mL接种于6孔板中，将APC按1：200比例加入孔中，标记为Day 0；
3)共培养48h，Day 3按培养基体积，每天加入IL-2，终浓度为50IU/mL；
4)Day 5后，培养基变黄时进行半量换液(X-VIVO+50IU/mL IL 2)。
根据细胞生长情况补充培养基，细胞密度维持在0.5～1×106/mL；
5)Day 21收获细胞，即为靶向KRAS突变肿瘤CTL；
8、CTL细胞的流式分型鉴定
1)收集CTL细胞，1000rpm离心5min；
2)1×106cells/管，加入CD3、CD4、CD8和CD56的抗体，室温避光30min；
3)PBS洗两次，1000rpm离心5min
PBS重悬，上机检测。
检测结果如图2所示：NK细胞比例为8.32％，NKT细胞为14.1％，T细胞为77.3％，其中，CD8+T细胞为78.9％，CD4+T细胞为4.4％。
实施例4
对实施例3得到的所述靶向KRAS突变肿瘤CTL利用LDH法进行杀伤实验：
1)收集靶细胞，1000rpm离心5min；
2)以PBS洗一遍，1000rpm离心5min；
3)以1640+2％FBS重悬后，计数调整至8×104cells/mL，分至96孔板中(U型底)，50μL/孔，备用；
4)收集效应细胞，1000rpm离心5min；
5)以PBS洗一遍，1000rpm离心5min；
6)以1640+2％FBS重悬细胞计数后，分至96孔板中(U型底)，50μL/孔，设置效靶比为10：1、5：1、2.5：1和1.25：1；
7)37℃5％CO2共孵育3.5h后，进行LDH检测。
检测结果如图3所示：所述靶向KRAS突变肿瘤CTL对7种KRAS突变肿瘤细胞，均有一定的杀伤作用，说明所述靶向KRAS突变肿瘤CTL可以用于治疗多发的KRAS突变肿瘤疾病。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京鼎成肽源生物技术有限公司
<120> 一种KRAS突变多抗原组合、靶向KRAS突变肿瘤CTL及其应用
<160> 17
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 144
<212> PRT
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Ala Leu Thr Ile Gln Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val
20 25 30
Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val
35 40 45
Val Gly Ala Ser Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Glu Tyr Lys
50 55 60
Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Gln Leu Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly
85 90 95
Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly
100 105 110
Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Cys Leu Leu Asp Ile
115 120 125
Leu Asp Thr Ala Gly His Glu Glu Tyr Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr
130 135 140
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<211> 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Val Val Gly Ala
20
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<211> 19
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Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val
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Val Gly Ala
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20
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<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly His Glu Glu Tyr Ser Ala
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Met Arg Asp Gln Tyr Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp
20 25 30
Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val
35 40 45
Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Thr Glu
50 55 60
Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
65 70 75 80
Thr Ile Gln Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val
85 90 95
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly
100 105 110
Ala Ser Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Glu Tyr Lys Leu
115 120 125
Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln
130 135 140
Leu
145
<210> 16
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly His Glu Glu Tyr Ser Ala
1 5 10 15
Met Arg Asp Gln Tyr Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp
20 25 30
Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val
35 40 45
Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Thr Glu Tyr Lys
50 55 60
Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Gln Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ser Gly Val Gly Lys
85 90 95
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly
100 105 110
Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Thr Glu Tyr Lys Leu
115 120 125
Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln
130 135 140
<210> 17
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 15
Leu Thr Ile Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly His Glu Glu
20 25 30
Tyr Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val
35 40 45
Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Thr Glu Tyr
50 55 60
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ala Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
65 70 75 80
Ile Gln Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Ser Gly Val Gly
85 90 95
Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala
100 105 110
Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Thr Glu Tyr Lys
115 120 125
Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile
130 135 140
Gln
145

Claims (4)

1.一种KRAS突变多抗原组合，其特征在于，所述KRAS突变多抗原组合具有如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述KRAS突变多抗原组合，其特征在于，所述KRAS突变多抗原组合中包含6个接头序列，所述接头序列如SEQ ID NO.2～7所示。
3.一种利用权利要求1或2所述KRAS突变多抗原组合制备得到的靶向KRAS突变肿瘤CTL。
4.权利要求3所述靶向KRAS突变肿瘤CTL在制备治疗KRAS突变肿瘤疾病的药物中的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113388024A (zh) * 2020-03-18 2021-09-14 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种输卵管癌靶标抗原、输卵管癌靶标抗原刺激培养的ctl细胞及其应用
WO2024081674A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Aadi Bioscience, Inc. Combination therapies for the treatment of cancer
WO2024112821A1 (en) * 2022-11-22 2024-05-30 Elixirgen Therapeutics, Inc. Antigens for cancer immunotherapy

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108137685A (zh) * 2015-03-23 2018-06-08 约翰·霍普金斯大学 由体细胞突变基因编码的hla限制性表位
CN108350059A (zh) * 2015-09-15 2018-07-31 美国卫生和人力服务部 识别hla-cw8限制性突变kras的t细胞受体
WO2018144082A1 (en) * 2017-02-01 2018-08-09 Modernatx, Inc. Rna cancer vaccines
CN108395479A (zh) * 2017-02-06 2018-08-14 高军 一种有关kras基因突变的t细胞受体
CN109790211A (zh) * 2016-08-02 2019-05-21 美国卫生和人力服务部 抗kras-g12d t细胞受体

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108137685A (zh) * 2015-03-23 2018-06-08 约翰·霍普金斯大学 由体细胞突变基因编码的hla限制性表位
CN108350059A (zh) * 2015-09-15 2018-07-31 美国卫生和人力服务部 识别hla-cw8限制性突变kras的t细胞受体
CN109790211A (zh) * 2016-08-02 2019-05-21 美国卫生和人力服务部 抗kras-g12d t细胞受体
WO2018144082A1 (en) * 2017-02-01 2018-08-09 Modernatx, Inc. Rna cancer vaccines
CN108395479A (zh) * 2017-02-06 2018-08-14 高军 一种有关kras基因突变的t细胞受体

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROCKACY MJ等: "Association between KRAS mutation, detected in pancreatic cyst fluid, and long-term outcomes of patients", 《CLIN GASTROENTEROL HEPATOL.》 *
刘亮等: "结肠癌18F-FDG摄取与KRAS突变及患者临床特征的相关性研究", 《临床放射学杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113388024A (zh) * 2020-03-18 2021-09-14 北京鼎成肽源生物技术有限公司 一种输卵管癌靶标抗原、输卵管癌靶标抗原刺激培养的ctl细胞及其应用
WO2024081674A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Aadi Bioscience, Inc. Combination therapies for the treatment of cancer
WO2024112821A1 (en) * 2022-11-22 2024-05-30 Elixirgen Therapeutics, Inc. Antigens for cancer immunotherapy

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