CN110170018B - 黑蒜萃取物的制备方法、黑蒜萃取物的使用方法及治疗痛风的药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黑蒜萃取物的制备方法，包括以下步骤：步骤S10：以第一溶剂萃取黑蒜，以获得黑蒜萃取液；步骤S20：干燥黑蒜萃取液，以获得黑蒜粗萃物；步骤S30：以第二溶剂淀析黑蒜粗萃物，以获得上清液及沉淀物；步骤S40:干燥上清液，以获得黑蒜萃取物；其中，该黑蒜萃取物为无醣萃取物、多醣萃取物或其组合，本发明还公开了一种黑蒜萃取物的使用方法，本发明还公开了一种治疗痛风的药物，包含黑蒜萃取物。

Description

黑蒜萃取物的制备方法、黑蒜萃取物的使用方法及治疗痛风 的药物

技术领域

本发明涉及治疗痛风的药物技术领域，特别是指一种黑蒜萃取物的制备方法、黑蒜萃取物的使用方法及治疗痛风的药物。

背景技术

俗称为痛风性关节炎(metabolic arthritis)是指，当血液中的尿酸盐浓度超过肾脏可以代谢的阈值时，形成尿酸盐结晶，并进一步沉积在膝盖、腕关节、手指及手肘等关节处，累积过多的尿酸盐结晶所引发的疾病。

然而，随着生活水平提升、作息步调加快及不良饮食习惯所致的代谢异常，更使得痛风的发生率逐渐增加。临床上显示，糖尿病与痛风常互为并发症，因为此两种患者族群具有不良的饮食习惯、肥胖、嗜酒、少运动等共同风险因子。

目前用于治疗痛风的药物大致可以区分为四大类，包含非类固醇类消炎止痛药(NASIDs)、皮质类固醇(corticosteroids)、秋水仙素(colchicine)及降尿酸药物。但是这些药物会导致像是胃炎、急性肾衰竭、血压升高、恶心、呕吐及腹泻等非常多的副作用。此外，如果糖尿病患者使用传统的降尿酸药物，将可能导致严重的皮肤过敏反应，例如：史帝芬琼森症候群。同时，糖尿病患者又常并发肾脏病变，而对于肾脏病变的患者而言，则不宜使用秋水仙素或非类固醇类消炎止痛药，因为秋水仙素或非类固醇类消炎止痛药会加重肾功能恶化。因此，于糖尿病患者能选用的治疗痛风的药物有限的情况下，开发适用于糖尿病患者的治疗痛风药物存在极高的需求性。另外，为保护民众健康与维护大众的用药权利，对于低成本药物的需求亦相应产生。

此外，一般化学合成制得的药物存在残留副产物或溶剂的风险，因为副产物或溶剂往往为有害物质，所以一般合成药物可能具有安全疑虑，必须严加管控副产物或溶剂的含量。有些有害的副产物或溶剂可以借由代谢而排出体外，有些则不能。尤其，痛风的患者本身就患有代谢功能的问题，应当更加重视此问题。有鉴于此，寻求一种高安全性的药物来源，为当务之急。

综上所述，对于开发适用于糖尿病患者的、容易制造的以及高安全性治疗痛风的药物有迫切的需求性。

发明内容

为解决上述的问题，本发明的目的在于提供一种黑蒜萃取物的制备方法、黑蒜萃取物的使用方法及治疗痛风的药物。

为实现上述目的，本发明所采用的方案为：

一种黑蒜萃取物的制备方法，包括以下步骤：步骤S10：以第一溶剂萃取黑蒜，以获得黑蒜萃取液；步骤S20：干燥黑蒜萃取液，以获得黑蒜粗萃物；步骤S30：以第二溶剂淀析黑蒜粗萃物，以获得上清液及沉淀物；步骤S40:干燥上清液，以获得黑蒜萃取物；其中，该黑蒜萃取物为无醣萃取物、多醣萃取物或其组合。

该黑蒜与该第一溶剂的重量比为1：10至1：30。

干燥该黑蒜萃取液及干燥该上清液的温度为-20℃至80℃。

该第一溶剂为水。

该第二溶剂为C1-C4的低级醇类。

一种黑蒜萃取物的使用方法，施予一预定剂量的黑蒜萃取物至一个体。

该预定剂量为50至500mg/kg。

当该黑蒜萃取物为无醣萃取物时，该预定剂量为50至250mg/kg。

当该黑蒜萃取物为多醣萃取物时，该预定剂量为50至250mg/kg。

当该黑蒜萃取物为无醣萃取物与多醣萃取物时，施予该无醣萃取物25至250mg/kg，且施予该多醣萃取物25至250mg/kg。

该个体为哺乳类动物。

一种治疗痛风的药物，包含上述黑蒜萃取物的制备方法所制得的黑蒜萃取物。

采用上述技术方案后，利用发明的黑蒜萃取物的制备方法制备黑蒜萃取物，可以利用本发明的黑蒜萃取物的使用方法进行使用，也可以将黑蒜萃取物制成本发明的治疗痛风的药物，其中本发明具有下述优点：

（1）本发明所采用的原料为可作为食品的黑蒜，而非人工合成的化合物，因此，本发明的制备方法的原料没有人工合成过程中残余的副产物，故较无安全顾虑，且对于像是人类的生物体，亦属容易吸收与接受的成分。此外，黑蒜是将大蒜经过长时间的发酵熟成后所制得的产品，故能够将大蒜中令人讨厌的味道消除，进而让口感变得更好，以大幅提高施用者的接受度。

（2）本发明所提供的黑蒜萃取物的制备方法主要包含萃取及移除溶剂的步骤，相较于一般的制备方法而言，本发明的制备方法所需步骤较少，操作时间明显的较短，还可以避免因为多重步骤的产量耗损。此外，本发明的制备方法所需的制程设备要求不高，例如：不需要高温高压的反应锅炉。因此，本发明的制备方法极适合工业化的大批量生产，而能达到降低药物的制造成本的目的。

（3）在本发明所提供的治疗痛风的药物中，黑蒜萃取物为无醣萃取物、多醣萃取物或其组合。经由动物实验得知，黑蒜萃取物中的无醣萃取物及多醣萃取物均具有治疗痛风性关节炎的疗效，且在相同的剂量之下，相较于一般的非类固醇类消炎止痛药药物，例如：因多美沙信(Indomethacin)，具有较佳的疗效。

（4）在本发明所提供的治疗痛风的药物中，黑蒜萃取物可为无醣萃取物、多醣萃取物或其组合，且单独施用无醣萃取物即能具有治疗痛风的效果。因此，同时患有糖尿病与痛风性关节炎的患者可单独施用不具醣类成分的无醣萃取物，来避免因为施用药物而过量摄取醣类的限制，且还能够同时避免施用传统的药物而产生的副作用。

附图说明

图1为本发明的黑蒜萃取物的制备流程图；

图2A为正常组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图2B为未给药组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图2C为因多美沙信组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图2D为低浓度黑蒜多醣萃取物组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图2E为高浓度黑蒜多醣萃取物组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图2F为低浓度黑蒜无醣萃取物组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图2G为高浓度黑蒜无醣萃取物组的大鼠踝关节肿胀程度的影像；

图3为正常组、未给药组(MSU诱导组)和5个给药组的大鼠关节肿胀的影响结果图；

图4为正常组、未给药组(MSU诱导组)和5个给药组的大鼠IL-1β的影响的直方图；

图5为正常组、未给药组(MSU诱导组)和5个给药组的大鼠IL-6的影响的直方图；

图6为正常组、未给药组(MSU诱导组)和5个给药组的大鼠TNFα的影响的直方图。

具体实施方式

为使上述目的、技术特征及实际实施后的效益更易于使本领域的技术人员理解，将于下文中以实施例搭配图式更详细地说明。

在一实施例中，在萃取黑蒜的步骤之前，可包含碎裂黑蒜的步骤，其可为研磨、搅碎等机械式方式或者为本领域的技术人员所习知的任何碎裂步骤。

请参阅图1，为本发明的黑蒜萃取物的制备流程图，一种黑蒜萃取物的制备方法，包括以下步骤：

步骤S10：以第一溶剂萃取黑蒜，以获得黑蒜萃取液；黑蒜与第一溶剂的重量比可为1：10至1：30；较佳地为1：15至1：20。第一溶剂可为水、甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，较佳地为水或乙醇。萃取的次数可为一到十次，较佳地为三到五次。于步骤S20中，还可同时加入帮助萃取的操作步骤，例如加热、超音波震荡、搅拌、或者为本领域的技术人员所习知的任何操作步骤。

步骤S20：干燥黑蒜萃取液，以获得黑蒜粗萃物；

步骤S30：以第二溶剂淀析黑蒜粗萃物，以获得上清液及沉淀物；第二溶剂可为C1-C4的低级醇类（如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇），较佳地为乙醇。萃取的次数可为一到十次，较佳地为三到五次。在一实施例中，采用95%乙醇。在一实施例中，可以利用水提醇沉法分离上清液和沉淀物，其中上清液多为高极性成分，如酚类、水溶性硫化物等，沉淀物为多醣。

步骤S40:干燥上清液，以获得黑蒜萃取物。

上述干燥可以为减压浓缩、加热烘干、喷雾干燥或冻干，较佳地为减压浓缩。黑蒜萃取物可为无醣萃取物及/或多醣萃取物。在制备后且于使用之前，黑蒜萃取物可以先保存备用。保存方法可为室温、冷藏或冷冻，较佳可为冷藏。保存包装可以用冻管、安瓶或针筒。

此外，在步骤S20及步骤S40中，干燥温度可为-20℃至80℃，较佳地为40℃至60℃。当超过80℃时，可能导致黑蒜萃取物变质，当低于-20℃时，可能导致干燥速率过慢而延长操作时间。在获得黑蒜萃取液之后与干燥黑蒜萃取液之前，可还包含过滤黑蒜渣的步骤，其可为简易的抽气过滤、减压抽气过滤或重力过滤，较佳地为减压抽气过滤，其中「黑蒜渣」为黑蒜经萃取后的残渣。

本发明还公开了一种黑蒜萃取物的使用方法，施予一预定剂量的黑蒜萃取物至一个体。

在一实施例中，当施予预定剂量的黑蒜萃取物至个体时，预定剂量可为50至500mg/kg，较佳为80至200mg/kg；当预定剂量超过500mg/kg时，会产生下痢的负面效果，当预定剂量小于50mg/kg，会产生无疗效的负面效果，其中，mg/kg指的是给予实验动物的「剂量」，意指每kg实验动物给予多少mg的试验样品。

在一实施例中，当施予预定剂量的黑蒜萃取物至个体时，当黑蒜萃取物为无醣萃取物时，预定剂量为50至250mg/kg，较佳为80至200mg/kg，当预定剂量超过250mg/kg时，会产生下痢的负面效果，当预定剂量小于50mg/kg，会产生无疗效的负面效果。

在一实施例中，当施予预定剂量的黑蒜萃取物至个体时，当黑蒜萃取物为多醣萃取物时，预定剂量为50至250mg/kg，较佳为80至200mg/kg，当预定剂量超过250mg/kg时，会产生下痢的负面效果，当预定剂量小于50mg/kg，会产生无疗效的负面效果。

在一实施例中，当施予预定剂量的黑蒜萃取物至个体时，当黑蒜萃取物为无醣萃取物与多醣萃取物时，施予无醣萃取物可为25至250mg/kg，且施予多醣萃取物可为25至250mg/kg，较佳为施予无醣萃取物可为50至225mg/kg，且施予多醣萃取物可为50至225mg/kg。

在一实施例中，在施予预定剂量的黑蒜萃取物至个体的步骤中，个体可为哺乳类动物，例如：人类、牛、羊、猪、狗、猫、马、驴、兔、鼠或猴等，较佳地可为人类或鼠。施予途径可为口服、注射或涂抹，较佳地可为口服。在本发明的用黑蒜萃取物所制成的治疗痛风的药物中，药物可进一步包含医药上可接受的载体、赋形剂、助剂或其组合。其中载体可为微脂体(liposomes)、微胞(micelles)、纳米粒子(nanoparticle)或水胶(hydrogels)。赋形剂可为乳糖(Lactose)、淀粉(Starch)、淀粉糊(Starch Paste)、糊精(Dextrin)、环糊精(Cyclodextrin)、纤维素(cellulose)、树胶类(Gums)或甲基纤维素(methyl cellulose)。治疗痛风的药物可为散剂、丸剂、锭剂、针剂、药膏、贴布、药水或胶囊。

以下，以本发明的一实施例来做更进一步的详细说明。

本发明的黑蒜萃取物的实施例的制备步骤包含：秤取100 g黑蒜，打碎黑蒜，并以500 mL水连续萃取三到五次，以获得黑蒜萃取液。其中，黑蒜与水的重量比为1：5。萃取的过程中加热并搅拌以帮助萃取。以滤纸趁热过滤黑蒜萃取液并收集滤液。过滤的方式使用抽气过滤。然后，使用减压浓缩并烘干黑蒜萃取液的滤液，以获得黑蒜粗萃物。加入95%乙醇至黑蒜粗萃物中，黑蒜粗萃物与乙醇的重量比为1：20，使用磁石搅拌器充分搅拌。在室温下，淀析24小时，产生上清液及沉淀物，使用抽气过滤过滤上清液，并烘干上清液及沉淀物，烘干温度为60℃，以获得黑蒜萃取物。沉淀物烘干后即为多醣萃取物，上清液烘干后即为无醣萃取物。多醣萃取物与无醣萃取物可保存于冰箱中以备用。其结果请参照表1，其本发明的黑蒜萃取物的实施例的制备结果。

表1

萃取物	萃取物重量（g）	萃取率（%）
			总萃取物	64.40	64.40
多醣萃取物	9.15	9.15
			无醣萃取物	48.37	48.37

如表1所示，总萃取物包括黑蒜萃取物和其他萃取物，总萃取物的萃取率的计算方式为获得的总萃取物的重量除以黑蒜的重量。多醣萃取物或无醣萃取物的萃取率的计算方式为获得的多醣萃取物或获得的无醣萃取物的重量除以黑蒜的重量。经水萃取后的总萃取物的萃取率可达64.40%，而其中多醣萃取物的萃取率可占9.15%，无醣萃取物的萃取率可占48.37%。其中，如表1所示，多醣萃取物与无醣萃取物的重量总和小于总萃取物的重量，此现象主要是由于过滤上的实验常规损失所导致。

接续上述，进行大鼠的动物实验。将SD大鼠70只随机分为正常组及尿酸钠诱导组(MSU诱导组)；其中，尿酸钠诱导组形成痛风性关节炎，尿酸钠诱导组再分成1个未给药组及5个给药组，每一组包含10只SD大鼠。5个给药组分别灌胃给予80mg/kg多醣萃取物、160mg/kg多醣萃取物、80mg/kg无醣萃取物、160mg/kg无醣萃取物与3 mg/kg因多美沙信，且依序分别以低浓度黑蒜多醣萃取物组、高浓度黑蒜多醣萃取物组、低浓度黑蒜无醣萃取物组、高浓度黑蒜无醣萃取物组及因多美沙信组表示。正常组和未给药组给予等体积的生理盐水。给药频率及次数为每天1次，连续14天。

使用灭菌蒸馏水配成浓度为100mg/mL的尿酸钠(sodium urate，MSU)混悬液，取0.2mL的尿酸钠混悬液一次性踝关节腔注射。在第11天执行灌胃，在灌胃后1小时，将MSU诱导组和5个给药组的大鼠仰位固定，将其后肢踝关节周围剃毛，然后用75％的医用酒精清洗消毒，膝关节轻度弯曲，注射MSU混悬液到踝关节腔，以踝关节囊对侧鼓起为注入指标，造成实验性急性痛风关节炎模型。正常组按照上述方法注射等体积的生理盐水。其实验结果显示在图2A-2G及图3。

请参照图2A-2G及图3，图2D-2G为本发明的黑蒜多醣萃取物及无醣萃取物用于制备治疗痛风的药物的一实施例的大鼠踝关节肿胀程度的照片。图3为本发明的黑蒜多醣萃取物及无糖萃取物的一实施例对尿酸钠晶体痛风性关节炎大鼠关节肿胀的影响结果图。实验结果的数据，以单因子变异数分析(One-way ANOVA)分析变异数，再以雪费多重比较法(Scheffe’s multiple range test)检定其间差异的显著性，凡p值小于0.05时，则认为有统计意义。其中，n=10，统计以平均值±标准偏差(mean±S.D)做计算，当给药组与未给药组比较时，以**表示p<0.01，以***表示p<0.001；未给药组与正常组比较时，以###表示p<0.001。

如图2A-2G及图3所示，用无弹性软尺测量大鼠踝关节周径，观察诱导前后受试大鼠踝关节周径的变化，每隔24小时记录一次，踝关节肿胀率的计算方式为测量时间点的踝关节周径与初始时间点的踝关节周径的差值除以初始时间点的踝关节周径，其是以「百分比」来表示。未给药组的踝关节肿胀率明显高于正常组，但给予多醣萃取物及无醣萃取物的结果显示两种给药量的多醣萃取物及无醣萃取物均有效地降低痛风性关节炎的肿胀，其中无醣萃取物效果最好。此结果显示多醣萃取物及无醣萃取物皆具有抗炎作用，可以缓解痛风性关节炎。

以下对大鼠脚踝组织的介白素-1β（interleukin-1beta，IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）及介白素-6（interleukin-6，IL-6）进行检测，以说明本发明的黑蒜萃取物中多醣萃取物及无糖萃取物对大鼠尿酸钠晶体痛风性关节炎关节发炎细胞激素的影响。

大鼠牺牲后，取出脚踝组织，制作成样品。配置1mg/mL IL-1β、1mg/mL TNF-α和1mg/mL IL-6的标准品溶液以及样品的稀释溶液。将三个标准品溶液以及样品的稀释溶液分别取100μL加入到96孔盘中，放到分子杂交箱里，在37°C下反应90分钟。反应结束后取出，将96孔盘排空，每孔加入100μL生物素侦测抗体试剂(Biotinylated Detection Abreagent)，于分子杂交箱里以37°C反应60分钟。取出孔盘，倒空孔内液体，以生理食盐水清洗3次，每孔再加入100μL卵白素结合辣根过氧化物酶(Avidin-HRP conjugate)，放入分子杂交箱里，在37°C下反应30分钟。反应结束后取出96孔盘，排空液体，以生理盐水进行5次清洗。每孔加入90μL受质(Substrate)试剂在分子杂交箱里，37°C下反应15分钟。反应结束后，每孔加入50μL中止液(Stop Solution)，在波长450nm进行读值，结果数据以吸光值(optical density，O.D.)表示。其结果显示在图4至图6。

图4至图6的实验结果的数据，以单因子变异数分析(One-way ANOVA)分析变异数，再以雪费多重比较法(Scheffe’s multiple range test)检定其间差异的显著性，凡p值小于0.05时，则认为有统计意义。其中，n=10，统计以平均值±标准偏差(mean±S.D)做计算，当其他组与未给药组比较时，以*表示p<0.05，以**表示p<0.01，以***表示p<0.001。

如图4所示，未给药组IL-1β显著高于正常组，而低浓度及高浓度黑蒜多醣萃取物及高浓度黑蒜无醣萃取物可有效改善降低IL-1β活性。图5所示未给药组IL-6显著高于正常组，而高浓度的黑蒜多醣萃取物及高浓度的黑蒜无醣萃取物可有效改善降低IL-6活性。图6所示未给药组TNF-α显著高于正常组，而高浓度的黑蒜多醣萃取物及高浓度的黑蒜无醣萃取物可有效改善降低TNF-α活性。经由动物实验得知，本发明所提供的黑蒜萃取物中无醣萃取物及多醣萃取物均具有治疗痛风性关节炎的疗效。

综上所述，本发明针对黑蒜内含有的多醣萃取物及无醣萃取物进行萃取，以用于制备治疗痛风的药物的用途，多醣萃取物及无醣萃取物均具有治疗或改善痛风性关节炎的功效，而其中无醣萃取物进一步能够在避免使用传统药物所造成的副作用之下提供给无法摄取含糖成分的族群使用，从而本发明还揭示了一种治疗痛风的药物，包含本发的黑蒜萃取物的制备方法制得的黑蒜萃取物。

因此，利用发明的黑蒜萃取物的制备方法制备黑蒜萃取物，可以利用本发明的黑蒜萃取物的使用方法进行使用，也可以将黑蒜萃取物制成本发明的治疗痛风的药物，其中本发明具有下述优点：

（1）本发明所采用的原料为可作为食品的黑蒜，而非人工合成的化合物，因此，本发明的制备方法的原料没有人工合成过程中残余的副产物，故较无安全顾虑，且对于像是人类的生物体，亦属容易吸收与接受的成分。此外，黑蒜是将大蒜经过长时间的发酵熟成后所制得的产品，故能够将大蒜中令人讨厌的味道消除，进而让口感变得更好，以大幅提高施用者的接受度。

（2）本发明所提供的黑蒜萃取物的制备方法主要包含萃取及移除溶剂的步骤，相较于一般的制备方法而言，本发明的制备方法所需步骤较少，操作时间明显的较短，还可以避免因为多重步骤的产量耗损。此外，本发明的制备方法所需的制程设备要求不高，例如：不需要高温高压的反应锅炉。因此，本发明的制备方法极适合工业化的大批量生产，而能达到降低药物的制造成本的目的。

（3）在本发明所提供的治疗痛风的药物中，黑蒜萃取物为无醣萃取物、多醣萃取物或其组合。经由动物实验得知，黑蒜萃取物中的无醣萃取物及多醣萃取物均具有治疗痛风性关节炎的疗效，且在相同的剂量之下，相较于一般的非类固醇类消炎止痛药药物，例如：因多美沙信(Indomethacin)，具有较佳的疗效。

（4）在本发明所提供的治疗痛风的药物中，黑蒜萃取物可为无醣萃取物、多醣萃取物或其组合，且单独施用无醣萃取物即能具有治疗痛风的效果。因此，同时患有糖尿病与痛风性关节炎的患者可单独施用不具醣类成分的无醣萃取物，来避免因为施用药物而过量摄取醣类的限制，且还能够同时避免施用传统的药物而产生的副作用。

虽然本发明已以上述实施例具体描述本发明的用黑蒜萃取物所制成的治疗痛风的药物，然而本发明所属技术领域的技术人员应理解，可在不违背本发明的技术原理及精神下，对实施例作修改与变化。因此本发明的权利保护范围应如申请专利范围所述。

Claims (6)

1.一种黑蒜萃取物在制备治疗痛风药物中的用途，其特征在于，所述黑蒜萃取物经由以下步骤制得，

步骤S1：以水萃取黑蒜，以获得黑蒜萃取液；

步骤S2：干燥黑蒜萃取液，以获得黑蒜粗萃物；

步骤S3：以95%乙醇淀析黑蒜粗萃物，以获得上清液及沉淀物；

步骤S4:干燥上清液及沉淀物，以获得黑蒜萃取物；

其中，该黑蒜萃取物为沉淀物干燥后所得多醣萃取物及上清液干燥后所得无醣萃取物。

2.如权利要求1所述黑蒜萃取物在制备治疗痛风药物中的用途，其特征在于：该黑蒜与水的重量比为1：10至1：30。

3.如权利要求1所述黑蒜萃取物在制备治疗痛风药物中的用途，其特征在于：干燥该黑蒜萃取液及干燥该上清液、沉淀物的温度为-20℃至80℃。

4.如权利要求1所述黑蒜萃取物在制备治疗痛风药物中的用途，其特征在于：步骤S1中以水萃取黑蒜之前，先将黑蒜打碎。

5.如权利要求1所述黑蒜萃取物在制备治疗痛风药物中的用途，其特征在于：步骤S1的萃取过程中加热并搅拌。

6.如权利要求1至5任一项黑蒜萃取物在制备治疗痛风药物中的用途，其特征在于：步骤S2中干燥黑蒜萃取液之前，先将黑蒜萃取液进行过滤，然后使用减压浓缩。

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