CN110169926A - 高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，通过模拟皮肤角质层中双分子膜的三个主要成分脂肪酸、胆甾醇、神经酰胺的摩尔比例1:1:1，来重塑环境造成的皮肤屏障损伤，并搭配燕麦β‑葡聚糖、四氢甲基嘧啶羧酸等成分高效修复肌肤、增强肌肤抵抗力。同时，选取黄芩、甘草、苦参等多种抗菌、抗病毒、抗炎的天然中药成分，分别在湿疹的起始阶段、传递阶段和湿疹效应阶段发挥其功效，有效抑制炎症因子的释放、传递，有效治疗湿疹，协同增效，安全无刺激，预防湿疹反复发生。

Description

高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其 膏霜的制备工艺

技术领域

本发明属于护肤品领域，涉及预防、治疗湿疹技术，尤其是高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺。

背景技术

婴儿湿疹，俗称“奶癣”，是一种具有明显渗出倾向的皮炎，多发于出生2个月至2岁的婴幼儿，主要分布在两颊部、前额、下颏部及耳后。皮疹呈多样性，反复发作，影响宝宝的休息、睡眠和生长发育。婴儿湿疹是由多种内外因素引起的瘙痒剧烈的一种儿童过敏性皮肤问题，与儿童皮肤未发育完善，容易受各种过敏原影响有关。一般认为是在一定遗传背景或环境因素作用下，造成机体皮肤屏障功能障碍或直接引起机体的免疫反应失调，导致的变异性或非变异性炎症反应。

皮肤屏障主要由皮肤表面脂质、角质细胞、细胞间脂质和天然保湿因子四部分构成。健康的皮肤屏障能够将机体与外界有害因素隔离，抵抗它们对机体的侵袭和损伤，防止体内营养物质、水分的丢失。患有湿疹皮炎等问题的肌肤，表皮屏障受损，外界刺激物和过敏原进入皮肤，刺激相关炎症介质(如组胺和P物质等)的释放，产生瘙痒、红肿等炎症反应。皮肤屏障功能障碍为变应原局部致敏或微生物定植创造条件，是诱发或加重婴儿湿疹的重要基础。因此重建皮肤屏障同时结合抗炎在湿疹治疗中非常重要。

目前市场上有很多治疗湿疹的药物，如抗生素、糖皮质激素等，但此类药物副作用大、容易造成依赖性，导致湿疹反复，破坏肌肤屏障，不宜给婴儿使用。由于婴儿肌肤与成人肌肤有很大差别，如角质层薄弱、表皮水分散失高、屏障功能不完善、免疫系统和防御能力差等特点，更易受到外界刺激物侵袭。若环境不适宜或护理不恰当，可导致湿疹的加重或复发，进一步对肌肤屏障造成损伤，因此需要保护婴儿娇嫩的肌肤和增强肌肤的屏障功能。虽然市场上有很多治疗湿疹的产品，但是真正安全、有效、不添加激素和抗生素类的产品很少，而具有高效抗炎、保湿、增强肌肤屏障功能的产品则几乎没有，因此急需发明一种能有效增强婴儿肌肤屏障的、更加温和安全的治疗湿疹类产品来填补市场空白。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺通过模拟皮肤角质层中双分子膜的三个主要成分脂肪酸、胆甾醇、神经酰胺的摩尔比例1:1:1，重塑环境造成的皮肤屏障损伤，增强肌肤屏障功能，并搭配燕麦β-葡聚糖、四氢甲基嘧啶羧酸等高效修复成分，增强肌肤抵抗力。同时，选取黄芩、甘草、苦参等多种抗菌、抗病毒、抗炎的天然中药成分，分别在湿疹的起始阶段、传递阶段和湿疹效应阶段发挥其功效，有效抑制炎症因子的释放、传递，缓解湿疹症状，协同增效，安全无刺激，预防湿疹反复发生。

本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：

一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述组合物由以下质量百分比的原料组成：

而且，所述的组合物制备方法如下：

(1)将氢化卵磷脂和水投入乳化锅中，加热搅拌升温到80-85℃，保温20分钟，加入原料燕麦β-葡聚糖、四氢甲基嘧啶羧酸、黄芩根提取物、胀果甘草根提取物、苦参根提取物、芍药根提取物、牡丹根提取物，搅拌降温至60-65℃溶解均匀；

(2)将燕麦仁油、植物甾醇异硬脂酸酯、四氢胡椒碱投入油相锅中，加热升温至60-65℃，保温15分钟，得到油相，备用；

(3)将步骤(2)制得的油相抽入乳化锅，在真空度为-0.05MPa条件下高速搅拌，搅拌速度为800转/分钟，乳化5分钟，恢复大气压条件下降温，搅拌速度为400转/分钟，冷却至38℃，检测感官、理化指标，检验合格后，200目滤网过滤出料，得到粒径为100-200nm 的组合物。

而且，所述组合物应用在膏霜中，该膏霜中所述组合物的重量百分比为3-10％。

4、根据权利要求3所述高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述膏霜由以下质量百分比的原料组成：

A相

B相

C相

组合物 3-10％

而且，所述膏霜的制备工艺及步骤如下：

(1)将A相投入油相锅中，加热升温到80-85℃，保温15分钟，得到油相；

(2)将B相投入乳化锅中，加热搅拌升温至80-85℃，恒温搅拌20分钟；

(3)把步骤(1)得到的油相抽入乳化锅，在真空度为-0.05MPa条件下进行搅拌，搅拌速度为800转/分钟，均质乳化5分钟，均质速度为3000转/分，80℃下恒温搅拌20分钟，恢复大气压条件后转慢速搅拌降温冷却至45℃，搅拌速度为400转/分钟；

(4)向步骤(3)得到的混合物中加入组合物，慢速搅拌冷却至38℃，检测感官、理化指标，检验合格后，200目滤网过滤出料，即得化妆品。

本发明的优点和积极效果是：

1、本发明成分中的燕麦仁油，含有抗氧化作用的多酚类物质、甾醇(酯)、燕麦蒽酰胺、 VE等营养成分，不饱和脂肪酸含量在80％左右，是天然的嫩肤成分，可增强皮肤的天然屏障功能，提高皮肤的光滑与弹性，且对皮肤具有抗过敏作用，保持皮肤富有弹性和光泽。

2、本发明成分中的植物甾醇异硬脂酸酯，来源于大豆压榨的一部分，对皮肤具有很高的渗透性，可以保持皮肤表面水分，促进皮肤新陈代谢、抑制皮肤炎症，其特有β-谷甾醇及其糖苷可刺激淋巴细胞增殖，作为一种免疫调节因子，具有增强免疫力的功能，同时具有良好的皮肤修复功能。

3、本发明成分中的神经酰胺3，是由神经鞘氨醇长链碱基与脂肪酸组成的神经鞘氨脂质体之一，角质层中40％-50％的皮脂由神经酰胺构成，神经酰胺是细胞间基质的主要部分，其特有的粘合能力在维持皮肤屏障功能和保持角质层水分的平衡中起着重要作用，帮助肌肤抵御外界刺激。

4、本发明成分中的燕麦β-葡聚糖，是一种源自燕麦的纯天然多糖，燕麦β-葡聚糖独特的1,3与1,4直链分子结构，透皮吸收性能良好，可作为活性成份的释放载体。燕麦β-葡聚糖具有长期高效保湿性能，能赋予皮肤如丝绸般滋润光滑的触感，还能够促进真皮层中胶原蛋白形成，显著提高皮肤的免疫功能，增强对皮肤的保护，提高皮肤抵抗外界刺激的能力，具有良好的皮肤修复功能。

5、本发明成分中的四氢甲基嘧啶羧酸，又称为依克多因(Ectoin)，来源于高嗜盐菌，其独特的分子结构具有很强的水分子络合能力，能确保高嗜盐菌在高盐环境下不会脱水死亡，是非常优异的保湿剂。同时依克多因还能有效提升皮肤细胞的免疫防护能力，增加细胞修复能力，使皮肤能有效对抗微生物及过敏原的入侵，对皮肤有很好的修复保护作用。

6、本发明成分中的黄芩根提取物，由黄芩根提取，富含黄芩素、黄芩苷、黄芩黄酮、挥发油等生物活性成分，在湿疹、皮炎起始阶段，有效抑制角质形成细胞释放炎症介质。同时对大肠杆菌、葡萄球菌、铜绿假细胞杆菌、白喉杆菌等也有一定的抑制作用，具有良好的镇痛、抗敏消炎及抗微生物作用。

7、本发明成分中的胀果甘草根提取物，由甘草根提取，甘草根自古以来就作为药用，具有解毒、消炎抗过敏的功效。现代药理研究表明：甘草中含有异甘草素、甘草黄酮(Glabridin)、甘草酸、甘草次酸等成分，甘草酸被人体吸收后在细胞中分解为甘草次酸及葡萄糖酸 (Glucuronic acid)，前者具有很强的消炎活性，能有效降低TSLP、白介素等炎症因子的水平，后者有很强的解毒作用，对治疗皮炎、湿疹有很好的功效。

8、本发明成分中的苦参根提取物，由苦参根提取得到，苦参根中含多种具有药用功效的生物碱,主要成分为D-苦参碱(D-matrine)，D-氧化苦参碱(D-oxymatrine)。苦参根提取物具有极强的消炎抗敏作用，可降低过敏介质的释放，是极好的免疫抑制剂，对婴儿湿疹、皮肤搔痒症状有很好的缓解作用。同时能清除皮肤内毒素杂质，促进受损血管神经细胞的生长和修复，恢复皮下毛细血管细胞活力，具有良好的皮肤修复功能。

9、本发明成分中的芍药根提取物，由芍药根提取，富含芍药甙和安息香酸等活性成分，能够抑制5-脂氧合酶和环氧合酶的合成，从而抑制白三烯和前列腺素的生成，同时对白介素 -1α的生成也有一定的抑制效果。在湿疹信息传递阶段，抑制THP-1细胞活化和影响炎症的信号传递，具有镇静、舒缓、抗炎、清除自由等作用，对湿疹引起的红肿、皮肤搔痒症状有很好的缓解作用。

10、本发明成分中的牡丹根提取物，由牡丹根提取，含没食子酸、芍药苷和丹皮酚三种主要有效成分，没食子酸具有抗炎、抗突变、抗氧化、抗自由基等多种生物学活性，芍药苷具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热等作用，且具有一定的免疫调节作用，丹皮酚具有消炎、消肿止痛、抗过敏、抗病毒等作用，对色斑、肌肉痛、皮肤瘙痒、牛皮癣、带状疮疹、湿疹具有较好的治疗和保健效果。

11、本发明成分中的氢化卵磷脂，从大豆中提取氢化而来，卵磷脂独特的亲油亲水结构，亲油端将油性原料分散在亲油层中，亲水端将水性原料包裹在脂质体球心，形成双分子层微囊的脂质体，脂质体外包裹膜的结构与细胞膜的磷脂双分子层的结构非常接近，有助于活性成分的渗透吸收。且磷脂可以将有效成分与空气隔离开，便于有效成分更长久的保存，延长产品的保质期。另外，油水相不需要额外添加乳化剂，通过高速剪切便可直接形成稳定的分散液。卵磷脂具有很强的锁水能力和修复能力，天然来源亦能够生物降解，安全无刺激，适用于婴儿产品。

12、本发明成分中的四氢胡椒碱，由黑胡椒或筚拨果实中的胡椒碱(Piperine)氢化而来，四氢胡椒碱除确定的抗惊厥、抗癫痫、镇痛以及抗蝇虫作用外，能显著改善和促进皮肤组织对功效成分的吸收利用，协助药品、化妆品功效成分快速渗透至皮肤底层，在最短时间内增加功效成分渗透至皮肤的“速率”。和传统促渗剂氮酮(Azone)相比，具有全天然、无刺激、用量少、成本低、发挥助渗作用快的优点，很少的用量即能改善和促进皮肤对功效成分的吸收和利用。

13、本发明中的组合物是利用卵磷脂制得的双分子层脂质体，使得皮肤对活性成分的吸收远远高于未用脂质体包裹的，有助于活性成分的高效吸收。并且双分子膜将空气与活性成分隔离，最大限度保护活性成分不被破坏，延长与肌肤的作用时间和保质期限，充分发挥其功效。本发明通过模拟皮肤角质层中三个主要成分脂肪酸、胆甾醇、神经酰胺的摩尔比例 1:1:1，来重塑环境造成的皮肤屏障损伤，并搭配燕麦β-葡聚糖、四氢甲基嘧啶羧酸等成分高效修复肌肤、增强肌肤抵抗力。同时，选取黄芩、甘草、苦参等多种天然中药成分，分别在湿疹的起始阶段、传递阶段和湿疹效应阶段发挥其功效，有效抑制角质细胞释放炎症因子和炎症因子的传递信号，治疗湿疹，协同增效，比单一成分效果更显著，具有很好的预防及治疗湿疹的功效。该组合物采用真空低能乳化法，乳化温度低，可有效减少能量损耗，真空操作确保乳化粒径分布更均匀，稳定性更佳，更利于皮肤吸收。操作工艺简单，不需额外添加乳化剂，通过高速剪切即可得到稳定的分散液。所用原材料获取容易、绿色安全，经实验证实对婴儿肌肤安全无刺激，易于接受，具有很好的应用前景和市场前景。

附图说明

图1为炎症因子LDH检测结果；

图2为炎症因子IL-1检测结果；

图3为不同处理条件下表皮模型组织形态的形态学变化情况(放大40倍)；

图4为炎症因子TSLP检测结果；

图5为细胞组织活力检测结果；

图6为临床使用效果；

图7为皮肤含水量实验结果；

图8为TEWL改善实验结果；

图9为鸡胚绒毛尿囊膜的阴性对照和阳性对照。

具体实施方式

下面结合附图和表格并通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。

实施例1

高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的组合物(Ⅰ)

所述组合物(Ⅰ)包括以下重量份数的组分：

燕麦仁油7％、植物甾醇异硬脂酸酯5％、神经酰胺3 4％、燕麦β-葡聚糖8％、四氢甲基嘧啶羧酸5％、黄芩根提取物7％、胀果甘草根提取物8％、苦参根提取物10％、芍药根提取物 6％、牡丹根提取物5％、氢化卵磷脂3％、四氢胡椒碱0.5％、余量为水；

所述组合物(Ⅰ)的制备方法：

a1)将氢化卵磷脂和水投入乳化锅中，加热搅拌升温到80-85℃，保温20分钟，加入原料燕麦β-葡聚糖、四氢甲基嘧啶羧酸、黄芩根提取物、胀果甘草根提取物、苦参根提取物、芍药根提取物、牡丹根提取物，搅拌降温至60-65℃溶解均匀；

b1)将燕麦仁油、植物甾醇异硬脂酸酯、四氢胡椒碱投入油相锅中，加热升温至60-65℃，保温15分钟，得到油相，备用；

c1)将步骤b1)制得的油相抽入乳化锅，在真空度为-0.05MPa条件下高速搅拌，搅拌速度为800转/分钟，乳化5分钟，恢复大气压条件下降温，搅拌速度为400转/分钟，冷却至38℃，检测感官、理化指标，检验合格后，200目滤网过滤出料，得到粒径为100-200nm的组合物。

实施例2

高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的组合物(Ⅱ)

所述组合物(Ⅱ)包括以下重量份数的组分：

燕麦仁油8％、植物甾醇异硬脂酸酯7％、神经酰胺3 5％、燕麦β-葡聚糖6％、四氢甲基嘧啶羧酸3％、黄芩根提取物8％、胀果甘草根提取物6％、苦参根提取物5％、芍药根提取物6％、牡丹根提取物3％、氢化卵磷脂4％、四氢胡椒碱0.8％、余量为水；

所述组合物(Ⅱ)的制备方法同组合物(Ⅰ)的制备方法。

实施例3

高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的组合物(Ⅲ)

所述组合物(Ⅲ)包括以下重量份数的组分：

燕麦仁油12％、植物甾醇异硬脂酸酯8％、神经酰胺3 6％、燕麦β-葡聚糖10％、四氢甲基嘧啶羧酸6％、黄芩根提取物11％、胀果甘草根提取物6％、苦参根提取物6％、芍药根提取物5％、牡丹根提取物4％、氢化卵磷脂5％、四氢胡椒碱1％、余量为水；

所述组合物(Ⅲ)的制备方法同组合物(Ⅰ)的制备方法。

实施例4

本发明中高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜的制备(Ⅰ)

组分及用量，见表1

表1高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜(Ⅰ)组分及用量

制备工艺：

a2)将A相投入油相锅中，加热升温到80～85℃，保温15分钟，得到油相；

b2)将B相投入乳化锅中，加热搅拌升温至80～85℃，恒温搅拌20分钟；

c2)把步骤a2)得到的油相抽入乳化锅，在真空度为-0.05MPa条件下开启快速搅拌，搅拌速度为800转/分钟，均质乳化5分钟，均质速度为3000转/分，80℃下恒温搅拌20分钟，恢复大气压条件后转慢速搅拌降温冷却至45℃，搅拌速度为400转/分钟；

d2)向步骤c2)得到的混合物中加入组合物(Ⅰ)，慢速搅拌冷却至38℃，检测感官、理化指标，检验合格后，200目滤网过滤出料，即得化妆品。

实施例5

本发明中高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜的制备(Ⅱ)

组分及用量，见表2

表2高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜(Ⅱ)组分及用量

所述高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜的制备(Ⅱ)同实施例4的膏霜(Ⅰ) 的制备工艺。

实施例6

本发明中高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜的制备(Ⅲ)

组分及用量，见表3

表3高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜(Ⅲ)组分及用量

所述高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的膏霜的制备(Ⅲ)同实施例4的膏霜(Ⅰ) 的制备工艺。

对比例7

实施例1中氢化卵磷脂用传统乳化剂A25替代，其他原料及用量不变。

对比例8

实施例4中的组合物用对比例7所得组合物替代。

本发明功效实验

一、抗炎功效实验

1.透明质酸酶抑制率通常可反映样品的抗炎活性，在一定范围内透明质酸酶抑制率越大则抗炎活性越强。

1.1实验试剂配制

1)透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；

2)透明质酸钠：0.5mg/ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；

3)Buffer：溶液A(0.2mol/L醋酸11.55ml冰醋酸溶于1L蒸馏水中)4.8ml；溶液B(0.2mol/L醋酸钠16.4g无水醋酸钠或27.2g三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中) 45.2ml，混合稀释至100ml，配制成PH＝5.6的醋酸缓冲液；

4)乙酰丙酮溶液：50ml 1.0mol/L碳酸钠溶液和3.5ml乙酰丙酮溶液混合均匀(临用现配)；

5)埃尔利希试剂：0.8g对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀；

6)氯化钙溶液CaCl2：2.5mol/L；

7)氢氧化钠溶液NaOH：5mol/L。

1.2透明质酸酶活性抑制率测定

1)取0.1mL 0.25mmol/L氯化钙溶液和0.5mL透明质酸酶溶液于37℃保温培养20min。

2)加入样品液0.5mL，继续37℃保温培养20min。

3)加入0.5mL透明质酸钠溶液，37℃保温培养30min，常温放置5min。

4)加入0.1mL 0.4mol/L氢氧化钠溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热15min后，立即用冰水进行冷却5min。

5)加入埃尔利希试剂1.0mL，并用3.0mL无水乙醇进行稀释，常温放置20min显色，待用分光光度计测定吸光值。

6)对试样进行450-700nm范围的波长扫描，以确定最大吸收波长，在该最大吸收波长处进行吸光值测定。

透明质酸酶抑制率(％)＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100

式中：A为空白组的吸光值，空白组指用醋酸缓冲溶液代替样品溶液。

B为空白对照组的吸光值，空白对照组指用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液。

C为样品组的的吸光值。

D为样品对照组的吸光值，样品对照组指用醋酸缓冲溶液代替酶液。

1.3试验结果如下表4所示，实施例均有较高的透明质酸酶抑制率。

表4透明质酸酶的抑制效果

2.角质形成细胞炎症因子抑制

利用活化的角质形成细胞培养试验，用0.2％SDS溶液处理30min形成刺激炎症，24h后分别加入0％(对照)、1％、3％的实施例2组合物，酶联免疫测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)和白细胞介素-1(IL-1)的含量。

试验结果如图1、图2所示，说明实施例2的组合物有显著降低炎症的作用。

二、去湿疹功效实验

2.1大鼠湿疹模型体外测试

研究表明湿疹皮损中会导致T淋巴细胞的激活，从而产生炎性细胞因子，后者损伤表皮和通过杀伤分子导致角质形成细胞凋亡，角质形成细胞启动修复机制以弥补受损的角质细胞。增生的角质形成细胞分泌多种具有生物学活性的细胞因子，再次损伤局部组织，导致湿疹的炎症进一步加重，致使湿疹表皮增厚和棘层肥厚。因此通过控制角质细胞增殖、促进角质细胞和淋巴细胞凋亡，可控制皮损增厚和增厚的皮损变薄，从而消退炎症。本发明采用TUNEL 法检测大鼠湿疹皮损角质形成细胞(KC)与淋巴细胞(KYM)的凋亡及IL-4的含量来评价治疗湿疹的功效。

实验方法：采用大鼠慢性皮炎-湿疹模型进行研究，造模方法如下：取SD大鼠40只，给予2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，在每只大鼠背部标记面积约1cm×1cm，去除鼠毛，用6％硫化钠混合淀粉糊涂抹在剃毛区，4分钟后轻轻揩去硫化钠淀粉糊形成剃毛区。空白组10只不做刺激，剩余组在剃毛区处涂7％2,4-二硝基氯苯丙酮溶液致敏，每周激发1次，疗程4周。阴性对照组无药物干预，阳性对照组用地塞米松干预，实验组用实施例5所得化妆品进行干预，每次取药0.6g，轻轻按摩10圈，以不黏腻为度，每日涂药2次，疗程2周。给药2周后分别处死各组中的大鼠，分离大鼠湿疹皮损组织块，投入10％甲醛进行固定后石蜡切片，采用TUNEL法检测大鼠湿疹皮损角质形成细胞(KC)与淋巴细胞(KYM)的凋亡及IL-4的含量，具体结果如下表5。

实验分组	数量(只)	KC凋亡率(％)	LYM凋亡率(％)	IL-4的IOD值
					空白组	10	8.5±0.8	9.1±1.1	75±6
阴性对照组	10	9.2±0.5	9.8±0.7	179±5
					阳性对照组	10	48.6±1.2	43.7±0.9	85±4
实验组	10	46.7±0.7	42.2±1.1	82±6

表5 KC、LYM凋亡率和IL-4的含量

由此可见，实验组所用的实施例5所得的化妆品和对照组具有同样的抑制角质形成细胞增殖、促进角质细胞和淋巴细胞凋亡的作用，有效降低炎症因子水平，从而消退炎症，且实施例5所得的化妆品不含激素更安全，更适合婴幼儿使用。

2.2 3D皮肤屏障模型

本方案主要以屏障弱化的3D表皮模型模拟婴幼儿皮肤屏障功能不全的易感状态，以 PolyI:C与LPS联合刺激构建类湿疹损伤模型，通过检测模型组织形态学结构变化、过敏性启动因子TSLP释放量，评价待测样品在类湿疹损伤模型上的抗炎功效，以及待测样品促进损伤模型活力提升方面的功效。具体实验方案见表6。

表6 3D皮肤模型检测

实验结果如图3所示，其中a为空白对照组,b为阴性对照组，c为样品组，与空白对照组相比，阴性对照组的角质层增厚、排列疏松、空泡明显且分化不完全；活细胞层(颗粒层、棘层、基底层)活细胞数目减少，基底层细胞空泡明显，排列疏散。样品组有效改善刺激后的角质层疏松度，保护基底层细胞，减少对角质层和活细胞层的刺激。

与空白对照组相比，经实施例6的样品组能有效降低炎症因子TSLP分泌水平，促进组织活力水平的增加，对改善刺激有显著的效果，如图4、图5所示。

2.3临床测试

使用实施例6所得的化妆品治疗湿疹50例。男26例，女24例，年龄最大为6岁，最小为出生后17天，平均年龄2.3岁，病程为2d至1年。病变部位，头面部30例，颈部8例，四肢3例，全身9例，临床诊断符合皮炎湿疹诊断标准。将50例患者随机分为治疗组和对照组各25例，两组患者在性别、年龄、病程和严重程度上均无统计学差异，具有可比性。

治疗方法：治疗组使用本发明的实施例6所得化妆品，对照组使用市售的某种湿疹产品，每天早晚两次，连续使用2周。

评价方法：显效：湿疹症状基本完全消除，红斑消失，水疱结痂，无渗出液，无瘙痒感，无复发；有效：湿疹症状得到缓解，红斑消退，水疱变小，局部偶有瘙痒，表皮潮湿或少许渗液；无效：湿疹症状没有明显变化。

实验结果见表7。

组别	例数	显效	有效	无效	有效率
						治疗组	25	20	4	1	96％
对照组	25	17	5	3	88％

表7临床治疗效果

由上表7可知，使用本发明实施例6所得的化妆品治疗皮肤湿疹疗效明显，有很好的去湿疹功效，总有效率高达96％，比某市售产品效果明显。且纯植物来源，无毒副作用，滋润保湿锁水，皮肤易吸收，无过敏反应，使用前后对比效果如图6所示。

三、皮肤屏障功效评价和活性成分的吸收率评价

利用皮肤测试仪测定皮肤含水量和皮肤水分散失量(Transepidermal waterloss,TEWL)，来表征产品增强皮肤屏障的能力和活性成分的吸收率，含水量越高，水分散失量越低，则说明皮肤屏障功能越好，对活性成分的吸收率高；反之，则皮肤屏障功能越弱，吸收率低。

1.测试仪器:皮肤水分含量测试用德国CK Corneometer CM825，

皮肤水分散失(TEWL)测试仪器用德国CK Tewameter TM 330T。

2.实验样品：实施例1、实施例4；对照组：对比例7、对比例8、某市售品。

3.测试方法：选取健康受试者50名，年龄在20～40岁,10人一组。测试场所室温(25±1)℃，相对湿度(45±5)％，测试前受试者应保持机体为稳定状态。测试前要求受试者清洁脸部后于测试环境下静坐30分钟，选取眉心正上方2cm处为测试中心点，测试初始状态的皮肤含水量和皮肤水分散失量。测试结束后，受试者按要求每天早晚各1次进行全脸的产品涂抹，连续使用28天，每隔7天测试一次，实验结束做最终测试，每次测试需连续测量6组数据取其平均值。

4.实验结果：如下表8所示。

表8皮肤含水量和TEWL改善值

由表8制作图表，如图7、图8所示，可知，对比实施例1和对比例7、实施例4和对比例8，实施例比对比例具有更好的提高皮肤水分、降低表皮水分散失的功效，说明脂质体结构具有更好的皮肤吸收效果。对比实施例4和市售品，28天后皮肤含水量明显升高，表皮水分散失降低，比某市售产品具有更好的保湿及增强皮肤屏障的效果。

四、安全性评价实验

1.鸡胚绒毛尿囊膜实验(HET-CAM)

鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验是一种较早被采用的眼刺激性体外评估方法，眼刺激性评价是化妆品原料及产品安全性评价的主要内容。本试验利用孵化的鸡胚中期绒毛尿囊膜血管系统完整、清晰和透明的特点，将一定量受试物直接与鸡胚尿囊膜接触，作用一段时间后观察绒毛尿囊膜毒性效应指标(如：出血、凝血和血管融解)的变化，这些指标反映血管及血管网的形态结构、颜色和通透性的变化，以及反映绒毛尿囊膜蛋白质变性等现象及其受损程度，用于评估受试物的刺激性和安全性。

1.1鸡胚准备

规格要求：鸡胚应新鲜、干净、完好，质量50g～60g。孵化至9日龄时，照蛋检查，弃去未受精、无活性或有缺陷的鸡胚，严重畸形、破壳或薄壳鸡胚也不能使用。

孵化条件：室温20℃～25℃，相对湿度45％～70％。孵化温度37.5℃±0.5℃，相对湿度55％～70％，转盘频率3次/h～6次/h。

1.2实验方法

本发明采用终点评价法：9日龄鸡胚进行照蛋检查，在蛋壳表面标记气室位置，用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分，暴露白色蛋膜，小心操作不破坏蛋膜完整性。用吸管滴加适量0.9％氯化钠溶液使蛋膜湿润，全部润湿后倾出溶液，小心用镊子去除内膜，保证血管膜不受损。取0.3mL受试物直接作用于CAM，确保至少50％的CAM表面被受试物覆盖，或直接将涂布膏状物的薄膜与CAM膜接触。作用3分钟后，用生理盐水轻轻冲洗CAM膜上的受试物，冲洗操作可能很快将CAM膜上轻度的出血变化掩盖，因此应在30s冲洗完成后观察结果，观察每种毒性效应变化的程度。每种受试物做6次平行试验。以质量分数为0.9％NaCl溶液为阴性对照，质量分数为1％烷基磺酸钠盐(SLS)为阳性对照，见图9。

1.3评分标准

采用终点评价法进行的试验，应计算终点评分(ES)，结果保留小数点后两位：

每只鸡胚记分＝每只鸡胚观察到的出血、凝血和血管融解程度的和；

ES＝6只鸡胚得分的数学总和的平均值(结果保留小数点后两位)。根据ES数值对受试物眼刺激性进行分类，见表9。

终点评分	刺激性分类
		ES≤12	无/轻刺激性
12＜ES＜16	中度刺激性
		ES≥16	强刺激性/腐蚀性

表9终点评分法结果评价

1.4实验结果见表10。

表10血管及血管网受损表现、ES值及刺激性

因此可见，本发明所得的三例化妆品安全性良好，没有刺激，可直接作用于人体，适合婴幼儿使用。

2.人体封闭式斑贴试验

本实验方法依据《化妆品安全技术规范》2015版，实施例4、实施例5、实施例6分别进行封闭式斑贴，考察样品对人体造成不良反应的可能性。

2.1皮肤不良反应分级标准见下表11：

表11皮肤不良反应分级

2.2实验结果：观察受试者去除斑试器30分钟、24h及48h时的皮肤反应情况，实验结果如表12所示。

表12皮肤封闭型斑贴试验结果。

Claims (5)

1.一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述组合物由以下质量百分比的原料组成：

2.根据权利要求1所述一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述的组合物制备方法如下：

(1)将氢化卵磷脂和水投入乳化锅中，加热搅拌升温到80-85℃，保温20分钟，加入原料燕麦β-葡聚糖、四氢甲基嘧啶羧酸、黄芩根提取物、胀果甘草根提取物、苦参根提取物、芍药根提取物、牡丹根提取物，搅拌降温至60-65℃溶解均匀；

(2)将燕麦仁油、植物甾醇异硬脂酸酯、四氢胡椒碱投入油相锅中，加热升温至60-65℃，保温15分钟，得到油相，备用；

(3)将步骤(2)制得的油相抽入乳化锅，在真空度为-0.05MPa条件下高速搅拌，搅拌速度为800转/分钟，乳化5分钟，恢复大气压条件下降温，搅拌速度为400转/分钟，冷却至38℃，检测感官、理化指标，检验合格后，200目滤网过滤出料，得到粒径为100-200nm的组合物。

3.根据权利要求1所述一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述组合物应用在膏霜中，该膏霜中所述组合物的重量百分比为3-10％。

4.根据权利要求3所述一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述膏霜由以下质量百分比的原料组成：

A相

B相

C相

组合物 3-10％。

5.根据权利要求3或4所述一种高效抗炎、防治婴儿湿疹及增强屏障功能的天然组合物及其膏霜的制备工艺，其特征在于：所述膏霜的制备工艺及步骤如下：

(1)将A相投入油相锅中，加热升温到80-85℃，保温15分钟，得到油相；

(2)将B相投入乳化锅中，加热搅拌升温至80-85℃，恒温搅拌20分钟；

(3)把步骤(1)得到的油相抽入乳化锅，在真空度为-0.05MPa条件下进行搅拌，搅拌速度为800转/分钟，均质乳化5分钟，均质速度为3000转/分，80℃下恒温搅拌20分钟，恢复大气压条件后转慢速搅拌降温冷却至45℃，搅拌速度为400转/分钟；

(4)向步骤(3)得到的混合物中加入组合物，慢速搅拌冷却至38℃，检测感官、理化指标，检验合格后，200目滤网过滤出料，即得化妆品。