CN110156923A - 一种羧基和多肽修饰的aie聚合物纳米粒子的制备方法 - Google Patents

一种羧基和多肽修饰的aie聚合物纳米粒子的制备方法 Download PDF

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Abstract

一种羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的制备方法，包括：1)制备乳化剂水溶液；2)将AIE分子、奥氏熟化效应抑制剂和油溶性引发剂溶于羧基功能单体和疏水单体的混合液中得到油相溶液；3)将乳化剂水溶液加至油相溶液中搅拌预乳化得到粗乳液，超声处理制得单体细乳液；通氮除氧制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；4)将碳二亚胺缩合剂溶解在酸性pH缓冲液中，再将其加入步骤3)制得的乳液中进行活化反应；5)将ω‑氨基马来酰亚胺溶解于碱性pH缓冲液中；6)将ω‑氨基马来酰亚胺溶液加至步骤4)制得的乳液中进行反应；7)将末端含半胱氨酸序列单元的多肽水溶液加至步骤6)制得的乳液中，反应制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子。

Description

一种羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的制备方法
(一)技术领域
本发明涉及一种表面修饰的聚集诱导发光(AIE)聚合物纳米粒子的制备方法。
(二)背景技术
荧光纳米粒子是一类重要的功能纳米材料，其具有水分散性好、光稳定性高、细胞毒性低和表面可修饰等特点，在细胞成像、疾病诊断及生物传感等众多高端领域有重要的应用价值。但以传统聚集诱导淬灭(ACQ)型荧光分子为功能组分的纳米粒子，往往存在荧光量子产率低、荧光强度调控区间窄等缺陷，一定程度上限制了其应用。2001年，唐本忠院士课题组首先报道了一类具有AIE效应的新型荧光分子,其在聚集状态下，由于分子内旋转受限，会发射强烈的荧光【Chem Soc Rev 2011,40,5361–5388.】。AIE分子非常适合于制备高荧光强度和高ФF的聚合物纳米粒子。因为，一方面AIE分子浓度越高，分子聚集程度越大，荧光越亮；另一方面，以聚合物为基体的粒子内部，分子受限程度高，亦有利于增强AIE分子的荧光。
目前，已发展了多种制备AIE聚合物纳米粒子的方法，比如有学者开发了一系列自组装与RAFT聚合、Schiff碱缩合反应、Mannich反应、点击反应和动态共价键相互作用等相结合的方法来制备不同的AIE聚合物纳米粒子【Colloids Surf,B 2017,150,114–120.；JColloid Interface Sci 2018,519,137–144；Polym Chem 2017,8,4746–4751.；Dye Pigm2018,151,123–129.】。但是自组装的方法一般需要预先合成嵌段共聚物，且组装过程往往需控制在较低的浓度下进行，因此其存在合成效率不高的问题。
细乳液聚合体系是以单体液滴为分散相，水为连续相的非均相聚合体系，在聚合过程中，聚合物粒子通过单体液滴成核形成【Prog Polym Sci 2002,27,1283–1346.AdvPolym Sci 2005,175,129–255.】。单体液滴既是单体的储存场所，也是聚合场所。通过预先向单体液滴引入不同的功能组分，能方便地通过细乳液聚合制备各种聚合物纳米粒子【Angew Chem Int Ed 2009,48,4488–4507.】。发明人课题组首先提出利用细乳液聚合来制备AIE聚合物纳米粒子【Polym Chem2015,6,6378–6385.】。
迄今为止，细乳液聚合制备的AIE聚合物纳米粒子表面并未进行特异性多肽的修饰，限制了其在细胞选择性成像领域的应用价值。因此在现有研究的基础上，本发明提出以苯乙烯、丙烯酸酯和(或)甲基丙烯酸酯为单体，添加羧基功能单体，并以AIE分子为荧光组分，经一步细乳液聚合制备表面羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子；再利用ω-氨基马来酰亚胺与碳二亚胺缩合剂活化的AIE聚合物纳米粒子表面的羧基反应，实现纳米粒子表面的马来酰亚胺基团修饰；最后，利用多肽分子中半胱氨酸序列单元上的巯基与马来酰亚胺基团间的Micheal加成反应，实现AIE聚合物纳米粒子表面的多肽修饰。制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子具有荧光亮度高、光稳定性好、储存稳定性佳和细胞成像能力强等优点。
(三)发明内容
本发明旨在提供一种基于细乳液聚合技术的制备羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的新方法，所制的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子具有荧光强度高、光稳定性好、储存稳定性佳和细胞成像能力强等特点。
本发明采用的技术方案是：
一种羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将乳化剂溶于去离子水中，得到乳化剂水溶液，其中乳化剂的质量用量为去离子水质量用量的0.1％～10％；
所述乳化剂选自下列至少一种：阴离子乳化剂、两性乳化剂和非离子乳化剂；
(2)将AIE分子、奥氏熟化效应抑制剂和油溶性引发剂溶于羧基功能单体和疏水单体的混合液中，得到油相溶液，其中AIE分子质量用量为单体总质量的0.1％～30％；奥氏熟化效应抑制剂的质量用量为单体总质量的1％～12％；油溶性引发剂的质量用量为单体总质量0.05％～10％；羧基功能单体的质量用量为单体总质量用量的0.1％～20％；所述的单体总质量是指羧基功能单体和疏水单体的总质量；
所述羧基功能单体为式(I)所示的丙烯酸和甲基丙烯酸以及式(II)所示的亚甲基丁二酸单体中的至少一种；
式(I)中，R1为H或CH3
所述的AIE分子选自下列AIE-1至AIE-42分子中的至少一种：
1.具有典型基础结构的AIE分子
2.氰基基团修饰的AIE化合物
3.TPE修饰的花青染料衍生物
4.TPE修饰的BODIPY衍生物类
5.TPE、TPA或蒽酮修饰的DDP衍生物类
6.二氰基亚甲基-4H-吡喃衍生物
7.苯并双(噻二唑)和TPA构成的AIE化合物
8.TPE修饰的苯并噻二唑衍生物
所述奥氏熟化效应抑制剂选自下列至少一种：C14～C22的脂肪烃、C14～C22的脂肪醇；
所述油溶性引发剂选自下列至少一种：偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、偶氮二异戊腈、偶氮二异丁酸二甲酯、过氧化二苯甲酰、过氧化叔戊酸叔丁酯、过氧化二碳酸二异丙酯、过氧化二月桂酰；
所述的疏水单体选自下列至少一种：苯乙烯、式(III)所示的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯；
式(III)中，R7为H或甲基；R8为C1～C5的烷基；
(3)将按步骤(1)所制的乳化剂水溶液加至步骤(2)所制的油相溶液中，使油相溶液中的单体总质量为水溶液中水质量用量的1％～50％，经搅拌预乳化，得到粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中,在25W～950W的功率下超声处理0.5min～60min，制得单体细乳液；通氮除氧，在40℃～90℃的温度下，在氮气保护下反应1h～48h，制得表面羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，透析得到纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；
(4)将碳二亚胺缩合剂溶解在pH值在5.0～7.0范围内的酸性pH缓冲液中，配成质量分数在0.005％～10％范围内的碳二亚胺缩合剂缓冲溶液，再将其加入步骤(3)制得的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，其中碳二亚胺缩合剂的质量用量为羧基功能单体用量的50％～600％，活化1min～6h，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；所述酸性pH缓冲液选自下列一种：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液；
所述碳二亚胺缩合剂选自N,N’-二环己基碳二亚胺、N,N’-二异丙基碳二亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐中的一种；
(5)将ω-氨基马来酰亚胺溶解于pH值在7.0～9.0之间的碱性pH缓冲液中，ω-氨基马来酰亚胺的质量分数控制在0.01％～10％范围内；所述碱性pH缓冲液选自下列一种：三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、磷酸缓冲盐(PBS)溶液；所述ω-氨基马来酰亚胺选自式(IV)所示化合物中的一种：
式(IV)中，R9为C1～C6的烷基；
(6)将步骤(5)配置的ω-氨基马来酰亚胺溶液加至步骤(4)制得的活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，使ω-氨基马来酰亚胺的质量用量为羧基功能单体质量用量的10％～1000％，用pH调节剂将乳液的pH值调节至7.0～9.0之间，室温反应1h～72h，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，透析得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；所述pH调节剂选自下列至少一种：柠檬酸钠、硼砂、氢氧化钠、碳酸盐及其水合物、碳酸氢盐、碳酸盐、氨水；
(7)将末端含半胱氨酸序列单元的多肽溶解于去离子水中，配制多肽水溶液，其中多肽的质量分数控制在0.01％～10％范围内；将多肽水溶液加至步骤(6)制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，使多肽的质量用量为羧基功能单体质量用量的5％～100％，室温反应1h～72h，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子，透析得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；
所述末端含半胱氨酸序列单元的多肽，选自表1中的至少一种；
表1.末端含半胱氨酸序列单元的多肽
本发明步骤(1)中，所述乳化剂选自下列至少一种：阴离子乳化剂、两性乳化剂和非离子乳化剂。所述阴离子乳化剂，可选自下列至少一种：烷基磺酸盐乳化剂R10-SO3M、烷基硫酸盐乳化剂R11-OSO3M和烷基苯磺酸盐乳化剂R12-C6H4-SO3M，其中R10和R11为C10～C20的脂肪链，R12为C10～C18的脂肪链，M为Na+或K+。
所述两性乳化剂，可选自下列至少一种：十二烷基氨基丙酸、十八烷基二羟乙基氧化胺、羧酸基甜菜碱R13N+(CH3)2CH2COO–、磺酸基甜菜碱R14N+(CH3)2CH2CH2SO3–或R15N+(CH3)2CH2CH2CH2SO3–，其中R13、R14和R15为C12～C18的脂肪链。
所述非离子型乳化剂，可选自下列至少一种：OP-系列乳化剂、O系列乳化剂、MOA系列乳化剂、吐温系列乳化剂和SG系列乳化剂。其中OP-系列乳化剂可以是OP-9、OP-10和OP-15中至少一种。O系列乳化剂可以是O-10、O-20、O-30和O-50；MOA系列乳化剂可以是MOA-7、MOA-9、MOA-15和MOA-23中至少一种。吐温系列乳化剂可以是吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80和吐温-85中至少一种。SG系列乳化剂可以是SG-40和/或SG-100。
考虑到细乳液体系的稳定性以及AIE聚合物纳米粒子的生物相容性，所述的乳化剂优选阴离子乳化剂、非离子型乳化剂或阴离子乳化剂和非离子乳化剂组成的复合乳化剂，非离子型乳化剂更优选O系列乳化剂、MOA系列乳化剂、吐温系列乳化剂中的至少一种，阴离子型乳化剂更优选十二烷基硫酸钠或十二烷基苯磺酸钠。
本发明步骤(2)中,考虑到本发明制备的AIE聚合物纳米粒子主要应用于细胞成像领域，优选发射波长大于500nm的AIE分子为荧光组分，AIE分子的质量用量优选为单体总质量用量的0.1％～10％。
本发明步骤(2)中，考虑到细乳液液滴的稳定性，奥氏熟化效应抑制剂优选C16～C22烷烃。
发明人经深入研究发现，在细乳液聚合制备羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子时，羧基功能单体的用量对体系的胶体稳定性、粒子的尺寸及其分布、多肽的修饰程度均有影响。一般而言，随羧基功能单体用量增加，AIE聚合物纳米粒子表面羧基修饰密度增加，有利于后续的马来酰亚胺基团和多肽的修饰。在一定范围内，羧基功能单体用量的增加对体系的胶体稳定性、纳米粒子的粒径及其分布影响不大，但是过高的羧基单体用量会使得体系胶体稳定性变差，粒子尺寸变大，尺寸分布变宽。因此，应根据体系胶体稳定性、AIE聚合物纳米粒子粒径以及后续羧基和多肽修饰程度的要求来确定合适的羧基功能单体用量。
本发明步骤(2)中，考虑到为后续多肽修饰提供足够的反应位点，且保证粒子具有较好的胶体稳定性，羧基功能单体的用量优选为单体质量用量的0.5％～15％。
本发明步骤(2)中，所述油溶性引发剂优选下列至少一种：偶氮二异丁腈、偶氮二异戊腈和偶氮二异庚腈。
本发明步骤(3)中，为防止超声过程中细乳液过热，将装粗乳液的容器置于冰水浴中进行超声处理，超声功率优选50W～600W，超声时间优选5min～30min。
本发明步骤(3)中，所述的透析优选按照如下操作：利用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次。
本发明步骤(4)中，碳二亚胺缩合剂活化羧基AIE聚合物纳米粒子的反应在弱酸性的缓冲液中进行，可以避免羧基的去质子化，提高活化效率。优选以pH值在6.0～6.5范围内的缓冲液为反应介质。综合考虑AIE聚合物纳米粒子表面羧基的活化效率和程度，活化反应时间优选为5min～3h。
本发明步骤(5)中，活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子与ω-氨基马来酰亚胺的反应在弱碱性反应介质中进行，可以避免氨基的质子化，提高酰胺缩合反应的效率；考虑到ω-氨基马来酰亚胺与纳米粒子表面羧基的反应效率，ω-氨基马来酰亚胺优选为N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺。
本发明步骤(6)中，活化的羧基AIE聚合物纳米粒子与ω-氨基马来酰亚胺的酰胺缩合反应在弱碱性介质中进行，可以避免氨基的质子化，提高酰胺缩合反应的效率。反应介质的pH值优选为7.0～8.5。综合考虑羧基与ω-氨基马来酰亚胺的反应效率和程度，反应时间优选为1h～36h。
本发明步骤(6)中，所述的透析优选按照如下操作：将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次。
本发明步骤(7)中，通过半胱氨酸序列单元的巯基和马来酰亚胺的双键之间的Micheal加成反应，将多肽连接到AIE聚合物纳米粒子表面。为保证多肽与纳米粒子表面的马来酰亚胺基充分反应，反应时间优选为3h～48h。
本发明步骤(7)中，所述的透析优选按照如下操作：将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次。
本发明制备的AIE聚合物纳米粒子应用于细胞成像时，为获得更好的成像效果，除了要求纳米粒子本身具有较高的荧光强度，还要求细胞能高效地摄取AIE聚合物纳米粒子，甚至要求细胞能选择性地高效摄取AIE聚合物纳米粒子。因此，需根据成像细胞类型的差异，选择不同的多肽修饰AIE聚合物纳米粒子。比如，RGD肽含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列，是肿瘤细胞中过度表达的整合素αⅤβ3的特异性配体，因此，RGD肽修饰的AIE聚合物纳米粒子可用于肿瘤细胞的检测。细胞穿膜肽HIV-1TAT能促进细胞对纳米粒子的摄取率，可对细胞的生理活动进行荧光示踪，因此HIV-1TAT修饰的AIE聚合物纳米粒子能用于研究细胞凋亡等生理过程。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：提出了一种结合细乳液聚合技术和点击反应的高效制备羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的新方法。通过羧基功能单体参与的细乳液共聚合反应，将AIE分子包埋于聚合物基体内的同时，实现对纳米粒子表面的羧基化修饰。利用ω-氨基马来酰亚胺与表面羧基被碳二亚胺缩合剂活化的AIE聚合物纳米粒子的酰胺缩合反应，将马来酰亚胺基连接到粒子表面。最后，与含巯基的多肽，经一步Micheal加成反应高效地实现对AIE聚合物纳米粒子表面的多肽修饰，制得生物相容性和细胞成像效果好的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子。该方法的优点是：(1)通过调节细乳液的合成参数能有效地调控AIE聚合物纳米粒子的颗粒特征；(2)AIE聚合物纳米粒子的发射波长和发射强度能通过AIE分子的类型和装载量在较宽的范围内灵活调控；(3)AIE聚合物纳米粒子表面的羧基修饰量以及多肽的修饰能力可以通过羧基功能单体的用量方便地调节；(4)马来酰亚胺与巯基的Micheal加成反应具有点击反应的特点，能高效地将不同功能的多肽连接到AIE聚合物纳米粒子表面。所制羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子发射波长和强度调控区间大、细胞摄取能力强，在细胞成像领域有重要的潜在应用价值。
(五)附图说明
图1为实施例1所制羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的透射电镜图。
图2为实施例1所制羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液荧光发射光谱及紫外灯激发的乳液照片。
(六)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不限于此：
本发明实施例使用的多肽来自上海吉尔生化有限公司。
实施例1：
称取0.2g O-50乳化剂溶于12.5g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.01g的AIE-6分子和0.02g偶氮二异丁腈溶于0.06g正十六烷、0.1g丙烯酸、0.45g苯乙烯和0.45g甲基丙烯酸甲酯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为400W的超声波超声9min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至65℃,在氮气保护下，反应6h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.3wt％；
称取0.19g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1M MES缓冲液(pH＝6)中，并将其加入到纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
称取0.16gN-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的1M三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH＝7.5)中，并加入活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1M NaHCO3将体系的pH值调节至7.5，室温反应12小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.015g末端含半胱氨酸序列单元的HIV-1TAT肽溶于15g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应12小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为90nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为592nm，乳液在紫外光激发下发射明显的橙色荧光。双辛可宁酸(BCA)法多肽测定实验结果显示，HIV-1TAT肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
对比例1：
采用与实施例1相同的配方和制备条件，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.3wt％。
称取0.19g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1M MES缓冲液(pH＝6)中，并将其加入到纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
称取0.16gN-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的1M三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH＝7.5)中，并加入活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，用NaOH将体系的pH值调节至10，室温反应12小时，制得产物；将制得的产物用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的产物。由于反应体系pH过高，马来酰亚胺基团发生水解副反应，产物的1H NMR谱图中观察不到马来酰亚胺基团的特征峰，粒子表面的马来酰亚胺修饰失败。
对比例2：
采用与实施例1相同的配方和制备条件，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.3wt％。
称取0.19g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1M MES缓冲液(pH＝6)中，并将其加入到纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
称取0.16gN-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的1M三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH＝7.5)中，并加入活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，用HCl将体系的pH值调节至2，室温反应12小时，制得产物；将制得的产物用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的产物。由于酸性反应条件下，氨基的质子化，显著降低了其参与酰胺缩合反应的能力，因此纯化产物的1H NMR谱图中观察不到马来酰亚胺基团的特征峰，粒子表面的马来酰亚胺修饰失败。
实施例2：
称取0.5g吐温20溶于15g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.0075g的AIE-12分子和0.015g偶氮二异庚腈溶于0.08g正十六烷、0.15g甲基丙烯酸和1.35g甲基丙烯酸甲酯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为200W的超声波超声20min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至60℃,在氮气保护下，反应12h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.9wt％；
称取0.25g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1M MES缓冲液(pH＝6)中，并将其加入纯化后羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液。
称取0.16g N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的0.1M三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH＝7.5)中，并加入活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1M NaOH将体系的pH值调节至7.5，室温反应12小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.015g末端含半胱氨酸序列单元的RGD肽溶于15g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应12小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为105nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为642nm，乳液在紫外光激发下发射明显的红色。BCA法多肽测定实验结果显示，RGD肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
实施例3：
称取0.3g MOA-9溶于15g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.003g的AIE-15分子和0.05g偶氮二异丁腈溶于0.08g正十六烷、0.05g甲基丙烯酸、0.45g甲基丙烯酸甲酯和0.55g苯乙烯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为600W的超声波超声5min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至60℃,在氮气保护下，反应24h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.2wt％；
称取0.2g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH＝6.2)中，并加入纯化后羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液。
称取0.16gN-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于120g的0.2M硼酸-硼砂缓冲液(pH＝7.5)中，并加入羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1MNa2CO3溶液将体系的pH值调节至7.6，室温反应8小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.04g末端含半胱氨酸序列单元的RGD肽溶于10g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应10小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为79nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为640nm，乳液在紫外光激发下发射明显的橙红色荧光。BCA法多肽测定实验结果显示，RGD肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
实施例4：
称取0.2g十二烷基硫酸钠溶于50g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.006g的AIE-21分子和0.09g偶氮二异丁腈溶于0.30g正十六烷、0.54g亚甲基丁二酸、1g丙烯酸丁酯和4.46g甲基丙烯酸甲酯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为500W的超声波超声10min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至65℃,在氮气保护下，反应24h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为3.7wt％；
称取2.5g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于500g的0.2M乙酸-乙酸钠缓冲液(pH＝6.2)中，并加入纯化后羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，活化2h，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液。
称取1.35gN-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于135g的0.2M PBS缓冲液(pH＝7.5)中，并加入羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1MNaOH溶液将体系的pH值调节至7.5，室温反应36小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.16g末端含半胱氨酸序列单元的T7肽溶于20g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应24小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为80nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为596nm，乳液在紫外光激发下发射明显的橙色荧光。BCA法多肽测定实验结果显示，T7肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
实施例5：
分别称取0.25g十二烷基硫酸钠和0.5g吐温80溶于50g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.12g的AIE-28分子和0.225g偶氮二异戊腈溶于0.675g正十六烷、0.8g亚甲基丁二酸、1.25g丙烯酸甲酯和7.95g甲基丙烯酸甲酯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为400W的超声波超声10min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至60℃,在氮气保护下，反应24h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为4.5wt％；
称取2.7g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于100g的0.5M磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(pH＝6.4)中，并加入纯化后羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，活化3h，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液。
称取1.8g N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的0.1M PBS缓冲液(pH＝7.2)中，并加入羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1MNaOH溶液将体系的pH值调节至7.5，室温反应36小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.225g末端含半胱氨酸序列单元的RGD肽溶于100g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应30小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为85nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为600nm，乳液在紫外光激发下发射明显的橙色荧光。BCA法多肽测定实验结果显示，RGD肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
实施例6：
分别称取0.2g O-50溶于12.5g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.012g的AIE-33分子和0.02g偶氮二异丁腈溶于0.06g正十六烷、0.15g甲基丙烯酸、0.85g甲基丙烯酸甲酯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为400W的超声波超声9min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至65℃,在氮气保护下，反应6h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.3wt％；
称取0.19g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1M MES缓冲液(pH＝6.0)中，并加入纯化后羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液。
称取0.15g N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的0.1M PBS缓冲液(pH＝7.2)中，并加入羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1MNaOH溶液将体系的pH值调节至7.5，室温反应12小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.03g末端含半胱氨酸序列单元的HIV-1TAT肽溶于10g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应12小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为82nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为600nm，乳液在紫外光激发下发射明显的橙色荧光。BCA法多肽测定实验结果显示，HIV-1TAT肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
实施例7：
分别称取0.06g十二烷基苯磺酸钠溶于15g去离子水中，得到水相溶液。
称取0.005g的AIE-37分子和0.02g偶氮二异丁腈溶于0.06g正十六烷、0.05g丙烯酸、0.95g苯乙烯的混合溶液中，得到油相溶液；将水相溶液加至油相溶液中，经搅拌预乳化后制得粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中，用功率为400W的超声波超声9min，制得稳定的单体细乳液；通氮除氧，温度升至70℃,在氮气保护下，反应4h，制得羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天每隔2h换一次，第二天每隔3h换一次，第三天每隔6h换一次，制得纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，测得乳液的固含量为2.5wt％；
称取0.15g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶解于200g的0.1MMES缓冲液(pH＝6.2)中，并加入纯化后羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，活化60min，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液。
称取0.15g N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺溶解于100g的0.1M PBS缓冲液(pH＝7.2)中，并加入羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子的中间体乳液中，用0.1MNaOH溶液将体系的pH值调节至7.5，室温反应12小时，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；将制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
将0.03g末端含半胱氨酸序列单元的HIV-1TAT肽溶于15g去离子水中，将多肽水溶液与纯化后的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液均匀混合，在室温反应12小时，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子；将制得的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液用截留分子量5000g·mol–1的透析袋渗析三天，换水频率为第一天隔2h换一次，第二天隔3h换一次，第三天隔6h换一次，得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液。
用透射电子显微镜观察羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的形貌，结果显示羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子为球形颗粒，数均粒径约为78nm。羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液的荧光光谱显示，其最大荧光发射波长为600nm，乳液在紫外光激发下发射明显的橙色荧光。BCA法多肽测定实验结果显示，RGD肽已成功修饰到AIE聚合物纳米粒子表面。
本发明的上述实施例是对本发明的说明而不能限制本发明，在于本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何变化，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

Claims (10)

1.一种羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
(1)将乳化剂溶于去离子水中，得到乳化剂水溶液，其中乳化剂的质量用量为去离子水质量用量的0.1％～10％；
所述乳化剂选自下列至少一种：阴离子乳化剂、两性乳化剂和非离子乳化剂；
(2)将AIE分子、奥氏熟化效应抑制剂和油溶性引发剂溶于羧基功能单体和疏水单体的混合液中，得到油相溶液，其中AIE分子质量用量为单体总质量的0.1％～30％；奥氏熟化效应抑制剂的质量用量为单体总质量的1％～12％；油溶性引发剂的质量用量为单体总质量0.05％～10％；羧基功能单体的质量用量为单体总质量用量的0.1％～20％；所述的单体总质量是指羧基功能单体和疏水单体的总质量；
所述羧基功能单体为式(I)所示的丙烯酸和甲基丙烯酸以及式(II)所示的亚甲基丁二酸单体中的至少一种；
式(I)中，R1为H或CH3
所述的AIE分子选自下列AIE-1至AIE-42分子中的至少一种：
AIE-7分子，其中R2＝H，R3＝N(C2H5)2
所述奥氏熟化效应抑制剂选自下列至少一种：C14～C22的脂肪烃、C14～C22的脂肪醇；
所述油溶性引发剂选自下列至少一种：偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、偶氮二异戊腈、偶氮二异丁酸二甲酯、过氧化二苯甲酰、过氧化叔戊酸叔丁酯、过氧化二碳酸二异丙酯、过氧化二月桂酰；
所述的疏水单体选自下列至少一种：苯乙烯、式(III)所示的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯；
式(III)中，R7为H或甲基；R8为C1～C5的烷基；
(3)将按步骤(1)所制的乳化剂水溶液加至步骤(2)所制的油相溶液中，使油相溶液中的单体总质量为水溶液中水质量用量的1％～50％，经搅拌预乳化，得到粗乳液；将装有粗乳液的容器置于冰水浴中,在25W～950W的功率下超声处理0.5min～60min，制得单体细乳液；通氮除氧，在40℃～90℃的温度下，在氮气保护下反应1h～48h，制得表面羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，透析得到纯化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；
(4)将碳二亚胺缩合剂溶解在pH值在5.0～7.0范围内的酸性pH缓冲液中，配成质量分数在0.005％～10％范围内的碳二亚胺缩合剂缓冲溶液，再将其加入步骤(3)制得的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，其中碳二亚胺缩合剂的质量用量为羧基功能单体用量的50％～600％，活化1min～6h，制得活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；所述酸性pH缓冲液选自下列一种：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液；
所述碳二亚胺缩合剂选自N,N’-二环己基碳二亚胺、N,N’-二异丙基碳二亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐中的一种；
(5)将ω-氨基马来酰亚胺溶解于pH值在7.0～9.0之间的碱性pH缓冲液中，ω-氨基马来酰亚胺的质量分数控制在0.01％～10％范围内；所述碱性pH缓冲液选自下列一种：三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、磷酸缓冲盐溶液；所述ω-氨基马来酰亚胺选自式(IV)所示化合物中的一种：
式(IV)中，R9为C1～C6的烷基；
(6)将步骤(5)配置的ω-氨基马来酰亚胺溶液加至步骤(4)制得的活化的羧基修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，使ω-氨基马来酰亚胺的质量用量为羧基功能单体质量用量的10％～1000％，用pH调节剂将乳液的pH值调节至7.0～9.0之间，室温反应1h～72h，制得马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液，透析得到纯化的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；所述pH调节剂选自下列至少一种：柠檬酸钠、硼砂、氢氧化钠、碳酸盐及其水合物、碳酸氢盐、碳酸盐、氨水；
(7)将末端含半胱氨酸序列单元的多肽溶解于去离子水中，配制多肽水溶液，其中多肽的质量分数控制在0.01％～10％范围内；将多肽水溶液加至步骤(6)制得的马来酰亚胺修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液中，使多肽的质量用量为羧基功能单体质量用量的5％～100％，室温反应1h～72h，制得羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子，透析得到纯化的羧基和多肽修饰的AIE聚合物纳米粒子乳液；
所述末端含半胱氨酸序列单元的多肽，选自表1中的至少一种；
表1.末端含半胱氨酸序列单元的多肽
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述阴离子乳化剂，选自下列至少一种：烷基磺酸盐乳化剂R10-SO3M、烷基硫酸盐乳化剂R11-OSO3M和烷基苯磺酸盐乳化剂R12-C6H4-SO3M，其中R10和R11为C10～C20的脂肪链，R12为C10～C18的脂肪链，M为Na+或K+；
所述两性乳化剂，选自下列至少一种：十二烷基氨基丙酸、十八烷基二羟乙基氧化胺、羧酸基甜菜碱R13N+(CH3)2CH2COO–、磺酸基甜菜碱R14N+(CH3)2CH2CH2SO3 –或R15N+(CH3)2CH2CH2CH2SO3 –，其中R13、R14和R15为C12～C18的脂肪链；
所述非离子型乳化剂，可选自下列至少一种：OP-系列乳化剂、O系列乳化剂、MOA系列乳化剂、吐温系列乳化剂和SG系列乳化剂。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的AIE分子为发射波长大于500nm的AIE分子，AIE分子的质量用量为单体总质量用量的0.1％～10％。
4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述羧基功能单体的用量为单体质量用量的0.5％～15％。
5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，超声功率为50W～600W，超声时间为5min～30min。
6.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的酸性pH缓冲液的pH值在6.0～6.5范围内，活化反应时间为5min～3h。
7.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，所述ω-氨基马来酰亚胺为N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺。
8.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(6)中，用pH调节剂将乳液的pH值调节至7.0～8.5之间，室温反应1h～36h。
9.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(7)中，反应时间为3h～48h。
10.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的乳化剂为阴离子乳化剂、非离子型乳化剂或阴离子乳化剂和非离子乳化剂组成的复合乳化剂，所述的非离子型乳化剂选自O系列乳化剂、MOA系列乳化剂、吐温系列乳化剂中的至少一种，所述的阴离子型乳化剂为十二烷基硫酸钠或十二烷基苯磺酸钠；所述奥氏熟化效应抑制剂为C16～C22烷烃；所述油溶性引发剂选自下列至少一种：偶氮二异丁腈、偶氮二异戊腈和偶氮二异庚腈；所述的ω-氨基马来酰亚胺为N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺；所述的酸性pH缓冲液的pH值在6.0～6.5范围内；步骤(6)中，用pH调节剂将乳液的pH值调节至7.0～8.5之间。
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