CN110146641B - 一种蓖麻叶的鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物鉴定技术领域，特别涉及一种蓖麻叶的鉴定方法，将供试品经显微鉴别后，得到供试品的显微特征为蓖麻叶显微特征时，再经薄层色谱鉴别；所述薄层色谱鉴别包括如下步骤：1)分别制备供试品溶液、对照品溶液；2)吸取供试品溶液和对照品溶液分别点于同一薄层色谱板上，以石油醚‑乙酸乙酯‑甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，加热至斑点显色清晰，置可见光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蓖麻叶；本发明科学合理、准确率高、安全性强，避免了人体危害，还具有较强的稳定性、鉴别成本低、鉴别时间短的优点。
Description
技术领域
本发明属于植物鉴定技术领域，特别涉及一种蓖麻叶的鉴定方法。
背景技术
蓖麻为一年生粗壮草本或草质灌木，高达5米；小枝、叶和花序通常被白霜，茎多液汁。叶轮廓近圆形，长和宽达40厘米或更大，掌状7-11裂，裂缺几达中部，裂片卵状长圆形或披针形，顶端急尖或渐尖，边缘具锯齿。网脉明显；叶柄粗壮，中空，长可达40厘米，顶端具2枚盘状腺体，基部具盘状腺体；托叶长三角形，长2-3厘米，早落。总状花序或圆锥花序，长15-30厘米或更长；苞片阔三角形，膜质，早落；雄花：花萼裂片卵状三角形，长7-10毫米；雄蕊束众多；雌花：萼片卵状披针形，长5-8毫米，凋落；子房卵状，直径约5毫米，密生软刺或无刺，花柱红色，长约4毫米，顶部2裂，密生乳头状突起。蒴果卵球形或近球形，长1.5-2.5厘米，果皮具软刺或平滑；种子椭圆形，微扁平，长8-18毫米，平滑，斑纹淡褐色或灰白色；种阜大。《唐本草》：主脚气风肿不仁，捣蒸敷之。油除叶炙热熨囟上，止衄尤验也；《纲目》：治痰喘咳嗽；《陆川本草》：治恶疮；《广东中药》Ⅱ：煎水外洗，治盗汗；《贵州省中药材民族药材质量标准》2003年版：蓖麻叶夏、秋二季采摘，除去杂质，鲜用或晒干，具有有消炎拔毒、泻下通滞、镇静解痉、祛风散瘀等功效。
蓖麻叶为大戟科植物蓖麻的新鲜或干燥叶，夏、秋二季采摘，鲜用或晒干。经对蓖麻叶的文献调研和实际观察：鲜品常被白霜，轮廓近圆形，长和宽达40厘米或更大，掌状7～11裂，裂缺几达中部，裂片卵状长圆形或披针形，顶端急尖或渐尖，边缘具锯齿。网脉明显；叶柄粗壮，中空，长可达40厘米，顶端具2枚盘状腺体，基部具盘状腺体；托叶长三角形，长2～3厘米。干品多缩皱破碎，完整叶片展平后呈盾状圆形，掌状分裂，深达叶片的一半以上，裂片一般7～9，先端长尖，边缘有不规则的锯齿，齿端具腺体，下表面被白粉。根据《贵州省中药、民族药质量标准》2003年版的规定：蓖麻叶性味苦、辛、平，消毒，具有清热解毒，拔毒消肿，祛风除湿。用于风湿痹痛，咳嗽痰喘，子宫下垂，脱肛，痈疮肿毒，疥癣瘙痒，脚气。我省民间使用蓖麻叶治疗风湿痹痛，咳嗽痰喘，子宫下垂，脱肛，痈疮肿毒，疥癣瘙痒，脚气。
根据文献《蓖麻叶挥发油化学成分分析》(陈月华等于2012年发表)中采用GC-MS对蓖麻叶挥发油进行研究，共分离到52个组分，鉴定了其中的31个，占挥发油总量的77.2％，其主要成分为壬醛、二环[3.2.0]庚-2-酮(7.773％)、2,4-葵二烯醛(6.237％)、(E)-4-(2，2，6-三甲基-1-环己烯-1-基)-3-丁烯-2-酮(6.056％)、(E)-2-葵醛(5.967％)、(E)-6,10-二甲基-5，9-十一碳二烯-2-酮(5.063％)。《蓖麻中的萜类和甾体及抗糖尿病活性研究》(黎伸华等人于2014年发表)中对蓖麻地上部分(无果实)中的萜类和甾体化合物进行研究，分离得到ficusic acid、叶绿醇、callyspinol、羽扇豆醇、30-降羽扇豆-3β-醇-20-酮、羽扇豆-20(29)-烯-3β，15а-二醇、acetylaleuritolic acid、豆甾-4-烯-3-酮、豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮、豆甾-4-烯-3,6-二酮。文献《蓖麻中的萜类和甾体及抗糖尿病活性研究》(邓青等人于2014年发表)中从蓖麻地上部分(无果实)的甲醇提取物中分离得到2个生物碱和5个酚性化合物，分别为蓖麻碱、N-去甲蓖麻碱、没食子酸甲酯、黄花菜木质素A、反式阿魏酸和槲皮素。根据《蓖麻毒蛋白的研究进展》(李楠等人于2013年发表)、《蓖麻毒蛋白研究及应用进展》(曾佑炜等人于2004年发表)以及《蓖麻毒素检测方法研究进展》(郎立伟等人于2009年发表)的文献可知：蓖麻毒蛋白是从蓖麻籽中提取的一种强毒性毒素，是一种核糖体失活蛋白，它由分子量分别为32KD和34KD的A、B两条链组成，具有很强的细胞毒性，它可以通过吸入、食入及静脉注射等方式致人中毒。因此，对蓖麻叶鉴别是必要的，而仅依靠人工观察品闻鉴定，具有过分依赖经验而导致准确性降低以及食用蓖麻叶容易造成健康受损的确定。故，亟需科学、有效的鉴别方法。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供了一种蓖麻叶的鉴定方法。
具体是通过以下技术方案来实现的：
一种蓖麻叶的鉴定方法，是将供试品经显微鉴别后，得到供试品的显微特征为蓖麻叶显微特征时，再经薄层色谱鉴别；所述薄层色谱鉴别，包括如下步骤：
1)供试品溶液的制备：称取供试品粉末1-4g，加无水乙醇10-40mL，冷浸20-60min，过滤，取滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末1-4g，加无水乙醇10-40mL，冷浸20-60min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
3)薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液和对照品溶液各1-5μL，分别点于同一薄层色谱板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，加热至斑点显色清晰，置可见光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蓖麻叶。
所述薄层色谱板为硅胶G薄层色谱板。
所述展开剂是石油醚、乙酸乙酯、甲醇按体积比为石油醚：乙酸乙酯：甲醇＝(20～30):(1～6):(0.05～0.15)组成；进一步优选，石油醚：乙酸乙酯：甲醇＝25:4:0.1组成。
所述展开温度为20-35℃。
所述展开湿度为30-70％。
所述加热温度为103-108℃，优选105℃。
所述供试品溶液以及所述对照品溶液制备完成后72h内进行薄层色谱鉴定，鉴定结果有效。
所述显微鉴别，包括如下步骤：
A1：取所述供试品粉末置载玻片上，滴加水合氯醛溶液，将所述载玻片置于火焰上加热透化，加稀甘油封片，得供试品切片；
A2：通过显微镜观察供试品切片，得到供试品的显微特征。
所述蓖麻叶显微特征包括：①气孔在表皮细胞中，呈平轴式，直径21～23μm；②导管多为螺纹，直径3～42μm；③草酸钙簇晶多见，直径9～39μm；④晶鞘纤维多，直径8～14μm；⑤纤维散在，直径7～23μm，壁厚，纹孔明显。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明利用显微鉴别和薄层色谱鉴别相结合，科学合理、准确率高、安全性强，避免了人体危害，还具有较强的稳定性、鉴别成本低、鉴别时间短的优点。
附图说明
图1：本发明实施例1的色谱图；
图2：本发明实施例5的色谱图(薄层色谱板：青岛海洋硅胶G板)；
图3：本发明实施例5的色谱图(薄层色谱板：烟台江友黄海HSG)；
图4：本发明实施例5的色谱图(薄层色谱板：青岛鼎康硅胶G板)；
图5：本发明实施例6的色谱图(图中1-5分别对应表1中序号1、2、3、4、6的蓖麻叶)；
图6：本发明实施例7的色谱图(图中6-10分别对应表1中序号7-11的蓖麻叶)；
图7：本发明实施例7的气孔显微鉴别图；
图8：本发明实施例7的导管显微鉴别图；
图9：本发明实施例7的草酸钙簇晶显微鉴别图；
图10：本发明实施例7的晶鞘纤维显微鉴别图；
图11：本发明实施例7的纤维显微鉴别图；
图12：本发明试验例1在条件1下的薄层色谱图(序号1、2、3、5、6对应表1中1、2、3、4、7的蓖麻叶；序号4为对照药材)；
图13：本发明试验例1在条件2下的薄层色谱图(序号1、2、3、5、6对应表1中1、2、3、4、7的蓖麻叶；序号4为对照药材)；
图14：本发明试验例1在条件3下的薄层色谱图(序号1、2、3、5、6对应表1中1、2、3、4、7的蓖麻叶；序号4为对照药材)；
图15：本发明试验例1在条件4下的薄层色谱图(序号1、2、3对应表1中1、2、3的蓖麻叶；序号4为对照药材)；
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
本发明试验方法及参数：
1.试验材料(蓖麻叶样品见表1)
表1：
2.试验材料质量检测：
2.1水分(干蓖麻叶)
照《中国药典》2015年版通则0832水分测定法(第二法烘干法)测定，取本品粉末(过二号筛)2g，精密称定，平铺于干燥恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，开启瓶盖在100～105℃干燥5小时，将盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次干燥的差异不超过5mg为止，根据减失重量，计算含水量(％)，干蓖麻叶水分测定结果如表2所示；
表2
从表2结果可见：11批干蓖麻叶水分平均含量为9.69％～13.8％，平均值为13.85％，暂定本品水分不得过15.0％；
2.2总灰分
照《中国药典》2015年版通则2302灰分测定法测定，取本品粉末2g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确0.01g)缓缓炽灼，注意避免燃烧，至完全炭化，逐渐升高温度至550℃，使完全炭化并恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(％)，干蓖麻叶总灰分测定结果见表3；
表3
从表3结果可见：6批干蓖麻叶中总灰分为8.53％～12.12％，平均值为10.39％，暂定本品总灰分不得过13.0％。
2.3浸出物
根据蓖麻叶民间习用方法为水煎煮或捣碎，故选择以水为溶剂进行水溶性浸出物研究。照《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法中水溶性浸出物测定法热浸法，采用水为溶剂进行浸出物测定，以浸出物作为本品质量控制指标之一；
取本品粉末(过二号筛)2g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时，放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用乙醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(％)；干蓖麻叶水溶性浸出物测定结果如表4所示；
表4
从表4结果可见：11批干蓖麻叶水溶性浸出物为16.34％～24.48％，平均值为20.51％，暂定本品水溶性浸出物不得少于18.0％；
3.试验仪器与试剂
50i显微镜及DS-Fi2显微成像系统(日本尼康公司)；REPROSTAR3薄层数码成像系统(瑞士CAMAG)；EL204电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；E240十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；CQ250A-TS超声波清洗机(250W，频率40kHz，上海跃进医用光学器械厂)；DK-98-Ⅱ型水浴锅(天津泰斯特有限公司)；WP-ΜP-II-20实验室超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司)。水合氯醛(AR，国药集团化学试剂有限公司)，丙三醇(AR，天津市致远化学试剂有限公司)；青岛海洋硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)；烟台江友黄海硅胶HSG板(烟台江友硅胶开发有限公司)；青岛鼎康硅胶G板(青岛鼎康硅胶有限公司)；氢氧化钾、无水乙醇、甲醇、乙醚购自国药集团化学试剂有限公司，三氯甲烷、乙酸乙酯购自上海申博化工有限公司，硫酸购自重庆川东化工(集团)有限公司，环己烷、磷钼酸、香兰素购自天津市科密欧化学试剂有限公司，石油醚购自科安隆博华(天津)医药化学有限公司，乙酸丁酯购自国营重庆无机化学试剂厂，以上试剂均为分析纯。
对照药材：如表1所示的序号5的蓖麻叶；
供试品：如表1所示的序号1-4和序号6-11的蓖麻叶；
供试品粉末：将供试品研磨粉碎后过24-80目筛得供试品粉末；
蓖麻叶对照药材粉末：将蓖麻叶对照药材研磨粉碎后过24-80目筛得蓖麻叶对照药材粉末。
实施例1
供试品溶液的制备：称取供试品粉末1g，加无水乙醇10mL，冷浸20min，过滤，取滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末1g，加无水乙醇10mL，冷浸20min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
薄层色谱板：硅胶G薄层色谱板；
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点1μL；
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)；
显色剂：磷钼酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距8cm；
展开环境：25℃，RH50％；
检视：置可见光下检视；
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
试验色谱图如图1所示，图1中1-4分别对应表示表1中序号1-4的蓖麻叶。
实施例2
供试品溶液的制备：称取供试品粉末2g，加无水乙醇30mL，冷浸30min，过滤，取滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末2g，加无水乙醇30mL，冷浸30min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
薄层色谱板：硅胶G薄层色谱板；
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点1.5μL；
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)；
显色剂：磷钼酸溶液，103℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距10cm；
展开环境：30℃，RH60％；
检视：置可见光下检视；
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例3
供试品溶液的制备：称取供试品粉末3g，加无水乙醇20mL，冷浸25min，过滤，取滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末3g，加无水乙醇20mL，冷浸25min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
薄层色谱板：硅胶G薄层色谱板；
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点1μL；
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)；
显色剂：磷钼酸溶液，108℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距12cm；
展开环境：35℃，RH30％；
检视：置可见光下检视；
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例4
供试品溶液的制备：称取供试品粉末4g，加无水乙醇40mL，冷浸35min，过滤，取滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末4g，加无水乙醇40mL，冷浸35min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
薄层色谱板：硅胶G薄层色谱板；
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点1.5μL；
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)；
显色剂：磷钼酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距15cm；
展开环境：20℃，RH70％；
检视：置可见光下检视；
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5
供试品溶液的制备：称取供试品粉末1g，加无水乙醇10mL，冷浸20min，过滤，取滤液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末1g，加无水乙醇10mL，冷浸20min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
薄层色谱板：分别为青岛海洋硅胶G板、烟台江友黄海硅胶HSG板和青岛鼎康硅胶G板；
点样：供试品溶液与对照品溶液分别点1μL；
展开剂：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)；
显色剂：磷钼酸溶液，105℃烘至斑点清晰。
展开方式：上行展开，展距6cm；
展开环境：25℃，RH50％；
检视：置可见光下检视；
色谱识别：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
图2、图3、图4分别为青岛海洋硅胶G板、烟台江友黄海HSG、青岛鼎康硅胶G板的薄层色谱板展开效果；图中1-3分别对应表示表1中序号1-3的蓖麻叶，5为蓖麻叶对照药材；结果显示：上述三种品牌硅胶G薄层色谱板均能较好的对斑点进行分离。
实施例6
按照实施例1-5任一方法对11各批次进行薄层色谱鉴别，对如表1所收集的11批不同产地蓖麻叶供试品进行鉴别，结果均符合规定；图5中1-5分别对应表1中序号1、2、3、4、6的蓖麻叶；图6中6-10分别对应表1中序号7-11的蓖麻叶；图中以表1中序号5为对照药材。
实施例7
本实施例提供了一种蓖麻叶的鉴定方法，是将供试品经显微鉴别后，得到供试品的显微特征为蓖麻叶显微特征时，再经薄层色谱鉴别；所述显微鉴别方法，包括如下步骤：
A1：取所述供试品粉末置载玻片上，滴加水合氯醛溶液，将所述载玻片置于火焰上加热透化，加33％(V/V)稀甘油封片，得供试品切片；
A2：通过显微镜观察供试品切片，得到供试品的显微特征；
所述蓖麻叶显微特征包括：①气孔在表皮细胞中，呈平轴式，直径21～23μm，如图7所示；②导管多为螺纹，直径3～42μm，如图8所示；③草酸钙簇晶多见，直径9～39μm，如图9所示；④晶鞘纤维多，直径8～14μm，如图10所示；⑤纤维散在，直径7～23μm，壁厚，纹孔明显，如图11所示。
试验例1
展开剂筛选试验
为了能使样品的斑点具有良好的分离度，考察了4种展开系统对样品的展开效果；
条件1：三氯甲烷-甲醇-水(17:1:2；下层)
条件2：三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水(40:1:4:4；下层)
条件3：石油醚-乙酸丁酯-甲醇(20:4:0.1)
条件4：石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)
根据以上五种展开条件展开结果如下图12所示：
结果显示，展开剂为石油醚-乙酸乙酯-甲醇(25:4:0.1)，分离度好，斑点出现多且清晰，特征斑点易识别，大部分斑点的Rf值在0.2至0.6之间，所以选择展开剂石油醚-乙酸丁酯-甲醇(25:4:0.1)作为薄层鉴别的色谱条件。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对发明型作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (7)
1.一种蓖麻叶的鉴定方法，是将供试品经显微鉴别后，得到供试品的显微特征为蓖麻叶显微特征时，再经薄层色谱鉴别；其特征在于，所述薄层色谱鉴别，包括如下步骤：
供试品溶液的制备：称取供试品粉末1-4g，加无水乙醇10-40mL，冷浸20-40min，过滤，取滤液作为供试品溶液；对照品溶液的制备：称取蓖麻叶对照药材粉末1-4g，加无水乙醇10-40mL，冷浸20-60min，过滤，取滤液作为对照品溶液；
薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液和对照品溶液各1-5.0μL，分别点于同一薄层色谱板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，加热至斑点显色清晰，置可见光下检视，所述供试品溶液的色谱与所述对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点时，判定所述供试品含有蓖麻叶；
所述展开剂是石油醚、乙酸乙酯、甲醇按体积比为石油醚：乙酸乙酯：甲醇=(20~30):(1~6):(0.05~0.15)组成；
所述薄层色谱板为硅胶G薄层色谱板。
2.如权利要求1所述蓖麻叶的鉴定方法，其特征在于，所述展开温度为20-35℃。
3.如权利要求1所述蓖麻叶的鉴定方法，其特征在于，所述展开湿度为30-70%。
4.如权利要求1所述蓖麻叶的鉴定方法，其特征在于，所述加热温度为103-108℃。
5.如权利要求1所述蓖麻叶的鉴定方法，其特征在于，所述供试品溶液以及所述对照品溶液制备完成后72h内进行薄层色谱鉴定，鉴定结果有效。
6.如权利要求1所述蓖麻叶的鉴定方法，其特征在于，所述显微鉴别，包括如下步骤：
A1：取所述供试品粉末置载玻片上，滴加水合氯醛溶液，将所述载玻片置于火焰上加热透化，加稀甘油封片，得供试品切片；
A2：通过显微镜观察供试品切片，得到供试品的显微特征。
7.如权利要求1或6所述蓖麻叶的鉴定方法，其特征在于，所述蓖麻叶显微特征包括：①气孔在表皮细胞中，呈平轴式，直径21～23μm；②导管多为螺纹，直径3～42μm；③草酸钙簇晶多见，直径9～39μm；④晶鞘纤维多，直径8～14μm；⑤纤维散在，直径7～23μm，壁厚，纹孔明显。
Priority Applications (1)
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