CN110146633B

CN110146633B - 一种非甾体抗炎药物中特殊杂质的分离方法

Info

Publication number: CN110146633B
Application number: CN201910421083.4A
Authority: CN
Inventors: 何莉; 肖林利; 肖稳定; 文凤; 蒋岳
Original assignee: HUNAN PUDAO MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD; Hunan Jiudian Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: HUNAN PUDAO MEDICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.; Hunan Jiudian Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2019-05-23
Filing date: 2019-05-23
Publication date: 2022-02-22
Anticipated expiration: 2039-05-23
Also published as: CN110146633A

Abstract

本申请公开了一种非甾体抗炎药物中特殊杂质的分离方法，此方法使用了紫外检测器的高效液相色谱法，给出了独特的色谱条件并成功分离了此非甾体抗炎药物中的同分异构体杂质。本申请克服了分离同分异构体使用正相色谱法的技术偏见，使用了反相色谱法去分离同分异构体，节约了研发成本，降低了实验难度，并且我方技术方案使用了等度洗脱，操作简便，采集时间较为合理，重现性好。

Description

一种非甾体抗炎药物中特殊杂质的分离方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种经皮给药非甾体抗炎药物基质中特殊杂质的分离方法。

背景技术

吲哚美辛（Indomethacin），又称消炎痛，化学名为2-甲基-1-（4-氯苯甲酰基）-5-甲氧基-1H-吲哚-3-乙酸，CAS号：53-86-1，分子式为C₁₉H₁₆ClNO₄，分子量为357.79，结构式如下所示：

吲哚美辛是一种作用较强的非皮质激素类的消炎解热和镇痛药，通过抑制环氧酶减少前列腺素(PG)合成，制止炎症组织痛觉神经冲动的形成，抑制炎性反应，包括抑制白细胞的趋化性及溶酶体酶的释放等，从而产生解热、镇痛及消炎作用。吲哚美辛的消炎、解热作用很强，其抗炎作用比保泰松强84倍，比氢化可的松也强，与糖皮质激素、阿司匹林、保泰松联合使用，可减少它们的用量、毒性及副作用，提高疗效；其次是解热作用，为氨基比林的10倍；镇痛作用较弱，只对炎性疼痛有明显镇痛作用，但对炎性疼痛的效果好于保泰松、安乃近和水杨酸类。临床主要用于对水杨酸类药物不易耐受，或疗效不明显的急、慢性风湿性或类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、滑囊炎、腱鞘炎、关节囊炎、骨关节炎、急性痛风及癌性疼痛等。近年来研究人员尝试将吲哚美辛用于胆绞痛、痛经、偏头痛、肾小球肾炎、多尿、沙门菌性胃肠炎、体位性低血压、巴特综合征等，均有较好疗效。还可用于治疗眼科色素膜炎、角膜炎、巩膜炎、青光眼以及癌症引起的发热或其他难以控制的发热。皮肤科用于红斑狼疮、白塞综合征、硬皮病、结节性红斑、带状疱疹、关节型银屑病等。外用治疗湿疹、过敏性皮炎、光感性皮炎、局部疼痛。

中国专利CN201810556395.1公开了一种3-氯-4-甲氧基苄胺盐酸盐同分异构体的分离方法及检测方法，其在高效液相色谱仪中以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相，采用高效液相色谱方法进行直接拆分，乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液中乙腈的体积比为10％～20％。其通过本发明所示出的一种3-氯-4-甲氧基苄胺盐酸盐同分异构体的分离方法及检测方法，实现了对3-氯-4-甲氧基苄胺盐酸盐同分异构体，即2-氯-4-甲氧基苄胺盐酸盐的高效且快速分离，从而提高了3-氯-4-甲氧基苄胺盐酸盐的纯度。但是其主成分的取代氯是在间位，杂质是在邻位，与我方技术方案不同，且其并没有定义色谱柱的正反相。

欧洲药典9.0版本也公开了吲哚美辛有关杂质的检测和分离。此药典中列出了吲哚美辛制药过程中由降解和工艺中带入的10种杂质A-J的检测和分离方法，其色谱柱为苯基柱（4.6*150mm，3μm），流动相为乙腈-水（50:50），检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，柱温：40℃，进样量：20μl。但是该方法使用了梯度洗脱，且此药典中介绍的吲哚美辛与其同分异构体杂质（药典中的杂质E）不能分离。

因此，在现今文献和专利介绍的吲哚美辛与特定杂质分离存在各种问题的情况下，研发出一种分离吲哚美辛和其特定的同分异构体杂质，并且符合操作简单，试剂易得，重现性好，环境污染小的方法非常有意义。

发明内容

本申请的主要目的是提供一种非甾体抗炎药物中特殊杂质的分离方法。

我方技术方案所要分离的杂质是吲哚美辛生产过程中所产生的同分异构体杂质，其在欧洲药典9.0版本中被标记为杂质E，此杂质为在吲哚美辛的生产过程中由生产工艺而带入的，因此在吲哚美辛的生产过程中不可避免的会产生这种杂质，使得分离掉这种杂质的意义很大。这种杂质与吲哚美辛的化学结构差别较小，为其同分异构体，其结构如下式所示：

其与吲哚美辛的化学结构区别在于，吲哚美辛的氯取代基为对位，此杂质为间位。

为了实现上述目的及解决吲哚美辛生产当中存在的问题，本申请采用了以下技术方案：

一种非甾体抗炎药物中特殊杂质的分离方法，方法为使用了紫外检测器的高效液相色谱法，其中，

色谱柱为C18反相色谱柱；

在高效液相色谱仪中的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶填料，流动相为乙腈-0.1%甲酸，且乙腈和0.1%甲酸的溶液体积比为30～40：60～70之间。

优选的，非甾体抗炎药物的为吲哚美辛，给药方式为经皮给药。

优选的，吲哚美辛的剂型包括但不限于有片剂、胶囊剂、贴剂、贴膏剂、搽剂、栓剂、软膏剂、酊剂、溶液剂。

优选的，片剂包括有口服片剂、肠溶片剂、缓释片剂，胶囊剂包括有肠溶胶囊、缓释胶囊，软膏剂包括有乳膏剂，栓剂包括有沙丁胺醇栓、呋喃唑酮栓、冰片栓，溶液剂包括有滴眼液。

优选的，所要分离的特殊杂质为吲哚美辛中的工艺杂质，在欧洲药典9.0中吲哚美辛的分离章节被标记为杂质E，其结构如下式所示：

优选的，高效液相色谱仪的色谱柱型号为Thermo hypersil BDS C18，色谱柱尺寸为3*150mm，3μm。

优选的，高效液相色谱法的流速为0.6～0.8ml/min，更优选的，为0.6 ml/min。

优选的，色谱柱的洗脱方式为等度洗脱。

对于同分异构体的色谱分离领域来说，绝大多数的同分异构体的化学结构之间相差很小，正相色谱柱也被称为极性柱，因此使用正相色谱柱来分离极性差距很小的物质为本领域所熟知的公知常识。但是使用正相色谱法分离存在着诸多问题：

1.正相色谱柱中不能有水，否则就不能达成实验目的或对实验结果造成严重影响，使用正相色谱柱必须严控水。

2.正相色谱柱要使用的流动相一般为正已烷，四氢呋喃之类的试剂，而为本领域技术人员所公知，正已烷、四氢呋喃毒性很大，操作不慎则会对实验人员的身体健康造成严重的危害，排除到环境中也对环境造成了很大的污染。

3.使用正相色谱法对仪器的损耗很大，因为使用的流动相为正已烷，四氢呋喃之类的试剂，该类流动相不仅仅毒性大，而且腐蚀性很强，并且正相色谱柱中需要用该类试剂且使用量大，长期使用对仪器所造成的腐蚀作用会很强，经常会造成密封圈被腐蚀，导致出现漏液的情况。

4.使用正相色谱法的价格高昂，正相色谱所使用的流动相如正已烷和四氢呋喃之类的试剂价格普遍高于反相色谱法所使用的试剂，在大批量的分析实验中，会造成成本的大幅度上涨，不利于大规模分离检测。

我方技术人员通过实验找出了能够有效分离吲哚美辛与其同分异构体杂质（欧洲药典9.0版本中的吲哚美辛杂质E）的方法：

一种吲哚美辛中特殊杂质的分离方法，包括以下步骤：

（1）取吲哚美辛原料于容量瓶中，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液；

（2）色谱条件：采用C18反相色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，乙腈-0.1%甲酸为流动相，且乙腈和0.1%甲酸的溶液体积比为30～40：60～70之间，流速为0.6ml/min，洗脱方式为等度洗脱；

（3）取已分装好的特殊杂质，加入1ml甲醇溶解，再移取1ml原料溶液与之混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

本申请还包括了使用上述分离方法制备得到的非甾体抗炎药物。

本申请还包括了上述分离方法在药物杂质分离当中的应用。

由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：

（1）吲哚美辛与其同分异构体杂质分离度达到1.5，能够有效分离。

（2）我方的技术方案克服了分离同分异构体使用正相色谱法的技术偏见，使用常规C18反相色谱柱即可解决分离的问题，不需使用正相或手性专用色谱柱，节约了研发成本，降低了实验难度。

（3）流动相仅需使用乙腈及甲酸溶液即可，试剂简单易得，不需使用有害有机试剂，从成本上来说，正相色谱法使用的试剂价格较高，使用反相色谱法在经济上收益很大。

（4）我方的技术方案使用了等度洗脱，相较于欧洲药典9.0版本当中梯度洗脱方式更加操作简单，重现性好。

（5）采集时间较为合理，基本可以保持在75min以内。

附图说明

图1是我方实施例1所用色谱条件所测得的色谱峰图；

图2是我方实施例2所用色谱条件所测得的色谱峰图；

图3是我方实施例3所用色谱条件所测得的色谱峰图；

图4是我方对比实施例1所用色谱条件所测得的色谱峰图；

图5是我方对比实施例2所用色谱条件所测得的色谱峰图；

图6是我方对比实施例3所用色谱条件所测得的色谱峰图；

图7是我方对比实施例4所用色谱条件所测得的色谱峰图。

具体实施方式

下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。

所要分离的特殊杂质为吲哚美辛中的工艺杂质，在欧洲药典9.0中吲哚美辛的分离章节被标记为杂质E，我方延用其称呼，实施例中也称杂质E，其结构如下式所示：

实施例1

称取约10mg吲哚美辛原料于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的吲哚美辛的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 4.6*250mm,5μm；流速：0.8ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（35:65）。在该色谱条件下，杂质E和吲哚美辛能完全分离，但保留时间较长，其主峰的到达时间约为105.093min，按照采集时间为主峰到达时间的2.5～3倍的计算方式，其采集时间较长，其色谱峰图如图1所示。

实施例2

称取约10mg吲哚美辛原料于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 3*150mm,3μm；流速：0.8ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（35:65）。两者能完全分离，其主峰的到达时间约为21.679min，保留时间合适，其采集时间也较为合适，但其流速较快，色谱柱压力较高，其色谱峰图如图2所示。

实施例3

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 3*150mm,3μm；流速：0.6ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（35:65）。两者能完全分离，其主峰的到达时间约为29.175min，且两者保留时间合适，其采集时间也较为合适，流速也比较合适，仪器压力处于正常范围，此实施例为最佳实施例，其色谱峰图如图3所示。将最佳实施例的实验条件全部不变重复三次，结果如下表所示：

	分离度	保留时间
			第一次实验	1.576	29.175min
第二次实验	1.602	28.853min
			第三次实验	1.583	29.366min

结果证明，本实施例条件下的重复性良好，具有可重现性。

实施例4

称取约10mg布洛芬原料于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 3*150mm,3μm；流速：0.6ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（35:65）。两者能完全分离，其采集时间和保留时间也较为合适。

实施例5

称取约10mg双氯芬酸原料于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 4.6*250mm,5μm；流速：0.8ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（32:68）。两者能完全分离，其采集时间和保留时间也较为合适。

实施例6

称取约10mg吲哚美辛片于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 3*150mm,3μm；流速：0.6ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（31:69）。两者能完全分离，其采集时间和保留时间也较为合适。

实施例7

称取约10mg吲哚美辛软膏于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 3*150mm,3μm；流速：0.6ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（34:66）。两者能完全分离，其采集时间和保留时间也较为合适。

实施例8

剪贴出约10mg吲哚美辛凝胶贴膏的膏药部分放于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

实施例9

称取约10mg吲哚美辛呋喃唑酮栓于100ml容量瓶，加入甲醇使其完全溶解并定容，作为原料溶液。取一瓶已分装好的杂质E（40μg/瓶），加入1ml甲醇使溶解，再移取1ml原料溶液与该小瓶，混合均匀，注入色谱仪，记录色谱图。

摸索实验

在进行吲哚美辛中有关物质方法开发时，发现在目前条件下杂质E与吲哚美辛的主峰完全重合，无法进行分离，以欧洲药典9.0版本为基础进行了多次摸索，参考实施例和对比实施例罗列如下：

参考实施例1

欧洲药典9.0版本：涉及吲哚美辛原料中杂质的检测方法，其中使用的色谱柱为苯基柱（4.6*150mm，3μm），流动相为10g/L乙酸水溶液-乙腈，检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，柱温：40℃，进样量：20μl。

洗脱梯度如下表所示：

由表可知，其流动相A为10g/L的乙酸溶液，流动相B为乙腈，根据梯度进行洗脱。其列出了从A-J的10种吲哚美辛杂质，其中的同分异构体杂质E，是所有杂质中化学结构和吲哚美辛最为接近的，只有氯原子的取代基位置稍有不同，使得分离这样的同分异构体在技术上难度较大，按照此药典中的条件进行操作，发现杂质E与吲哚美辛的主峰完全重合，无法分离。

对比实施例1

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 4.6*250mm,5μm；流速：1.0ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（45:55）。两者有分离趋势，但分离度仍小于1.5，分离标准依然不够高，无法达成完全分离的效果。其主峰的到达时间约为21.470min，保留时间合适，其采集时间也较为合适，其色谱峰图如图4所示。

对比实施例2

所用色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 3*150mm,5μm；流速：1.0ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（45:55）。两者未达到基线分离，分离度小于1.0，完全无法达成分离的效果。其主峰的到达时间约为7.268min，保留时间很快，其采集时间也较快，其色谱峰图如图5所示。

对比实施例3

所用色谱柱：Promosil C18 4.6*150mm,5μm；流速：0.8ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（35:65）。两者有分离趋势，但分离度仍小于1.5，分离标准依然不够高，无法达成完全分离的效果。其主峰的到达时间约为85.593min，保留时间较长，其采集时间也会相应拖长，其色谱峰图如图6所示。

对比实施例4

所用色谱柱：Thermo hypersil BDS C18 4.6*250mm,5μm；流速：0.8ml/min；流动相：乙腈-0.1%甲酸（45:55）。两者有分离趋势，但分离度仍小于1.5，分离标准依然不够高，无法达成完全分离的效果。其主峰的到达时间约为27.661min，保留时间合适，其采集时间也合适，其色谱峰图如图7所示。

以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。

Claims

1.一种非甾体抗炎药物中特殊杂质的分离方法，其特征在于，所述非甾体抗炎药物为吲哚美辛，所述特殊杂质为吲哚美辛中的工艺杂质，其结构如下式所示：

；

所述方法为使用了紫外检测器的高效液相色谱法，其中，

色谱柱为C18反相色谱柱；色谱柱型号为Thermo hypersil BDS C18，流速为0.6～0.8ml/min，流动相为乙腈-0.1%甲酸，且乙腈和0.1%甲酸的溶液体积比为31～35：65～69之间；所述色谱柱的洗脱方式为等度洗脱。

2.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述吲哚美辛的剂型包括有片剂、胶囊剂、贴剂、贴膏剂、搽剂、栓剂、软膏剂、酊剂、溶液剂。

3.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，色谱柱尺寸为3*150mm，3μm。