CN110144358A - 一种苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用，SWEET1b基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,所述SWEET1b基因的编码区核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示,所述SWEET1b基因编码的蛋白质序列如序列表SEQ ID NO:3所示,以及上述苜蓿SWEET1b基因在促进苜蓿根系菌根率中的应用。本发明公开了苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用。本发明将SWEET1b基因在苜蓿中进行超量表达，根据转基因植株与野生型转空载体的株系进行差异比较，确定了SWEET1b基因对苜蓿根系菌根率具有提高作用。

Description

一种苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用。

背景技术

植物通常会与丛枝菌根真菌形成互利共生体，依赖于丛枝菌根真菌从土壤中获得养分，尤其是磷和氮元素。生产中，植物与丛枝菌根真菌形成的菌根率通常较低。提高植物菌根率，将促进植物营养的吸收。

丛枝菌根真菌是严格的活体寄生型真菌，自身不能合成碳源，必须依赖寄主植物获得碳源，主要形式为脂肪酸和糖分(尤其葡萄糖)。菌根真菌从植物获得足够碳源，才能促进菌丝在寄主植物根内与根外更好的生长，从而帮助植物获得更多的矿质营养元素。

但植物如何将碳源输送给丛枝菌根真菌，尤其如何将糖分输出给丛枝菌根真菌的，之前一直并没有报道。植物细胞中参与糖分输出的转运蛋白主要是SWEET家族。在苜蓿等植物中，一些SWEET转运蛋白在菌根共生过程中受到菌根诱导表达，暗示某些特异性的SWEET蛋白可能在寄主植物向丛枝菌根真菌输出糖源的过程中起重要作用。因此，可以通过基因工程方法来调控菌根形成过程中负责糖分输出的基因的表达，从而改良提高植物菌根形成率，从而解决生产中植物菌根率低，营养吸收不足的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种苜蓿SWEET1b基因，SWEET1b基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

所述SWEET1b基因的编码区核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

所述SWEET1b基因编码的蛋白质序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

上述苜蓿SWEET1b基因在促进苜蓿根系菌根率中的应用。

本发明的有益效果为：本发明公开了苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用。本发明将SWEET1b基因在苜蓿中进行超量表达，根据转基因植株与野生型转空载体的株系进行差异比较，确定了SWEET1b基因对苜蓿根系菌根率具有提高作用。

附图说明

图1为苜蓿SWEET1b在转基因根系中的表达量情况；

图2为超表达SWEET1b(OE-MtSWEET1b)和空载体(EV)转基因苜蓿植株根系的菌根共生率；

图3为丛枝菌根真菌的RiEF基因在超表达SWEET1b(OE)和空载体(EV)转基因苜蓿植株根系中的表达量。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

本发明首先从苜蓿中克隆得到SWEET1b基因片段，全长为2134bp。该基因片段为具有特定序列的DNA分子，其对应的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了苜蓿SWEET1b基因的编码序列(编码247个氨基酸)，其对应的氨基酸编码核苷酸序列如SEQID NO:1中下划线和SEQ ID NO:2所示，SWEET1b基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:3所示。本发明还提供了用于克隆获得苜蓿样品中SWEET1b基因的引物对序列。该引物对示根据苜蓿SWEET1b核苷酸序列设计，以苜蓿根组织样品的DNA作为模版进行PCR扩增，获得2134bp的片段。扩增上述基因引物对的DNA序列如下所示：

P1正向引物(F):5’ATGCATGTTGCACATCTTTTG 3’

P2反向引物(R):5’TCATCCTTGAATTTCATTTTCATAAGAC 3’。

本发明还提供了用于检测苜蓿SWEET1b基因在转基因根系中表达的引物序列。该引物对是根据MtSWEET1b编码区核苷酸序列设计，以转基因根系样品cDNA为模板进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析，来检测SWEET1b是否在转基因根系中超表达。所述引物对的核苷酸序列如下所示：

P3正向引物(F):5’CATGTATGGTTCACCACTCTCAATT 3’,

P4反向引物(R):5’AATGGCATGAACTCCACACTCTT 3’；

本研究还提供了用于检测丛枝菌根真菌看家基因RiEF基因在转基因根系中表达的引物序列。该引物对是根据RiEF编码区核苷酸序列设计，以转基因根系样品cDNA为模版进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析，来检测转基因根系中的RiEF表达量，代表着菌的含量。所述引物对的核苷酸序列如下所示：

P5正向引物(F):5’GCTATTTTGATCATTGCCGCC 3’

P6反向引物(R):5’TCATTAAAACGTTCTTCCGACC 3’

利用发根农杆菌介导法将克隆得到的SWEET1b核苷酸序列导入植物中。使用本发明的基因片段构建植物超表达载体时，在其转录起始核苷酸序列前面需要添加苜蓿的PT4(磷转运蛋白基因)启动子序列。此外，该表达载体还携带有DsRed，红色荧光蛋白筛选标记，用于方便筛选转基因植物根的筛选。

对序列表的说明：

序列表中SEQ ID NO:1是本发明分离克隆的包含有MtSWEET1b基因的核苷酸序列，序列全长为2134bp。其中包括编码区的DNA片段，如下画线所示序列全长为744,编码247个氨基酸。

序列表中SEQ ID NO:2是SWEET1b基因的编码区核苷酸序列。

序列表中SEQ ID NO:3是SWEET1b基因片段编码的蛋白质序列。

实施例1:苜蓿SWEET1b基因的分离克隆

本发明的前期对苜蓿A17的根提取DNA，并根据SWEET1b的序列设计引物P1(正向引物)+P2(反向引物)，以所提取的苜蓿根DNA为模版，进行PCR扩增，扩增得到的片段如下所示(序列长度为2134bp):

ATGCATGTTGCACATCTTTTGTTTGGCATATTTGGTAGGTTAATTAATTTATTATCATTTTTACTCTTACTTTTACCTTGTTGTATAATTTTTTTTTTTCTGATTCTCACAGTTTGTTCTTTGTTGGTTCAGGGAATGCTTCTG CTTTGTTCCTCTTCTTGGCACCTGTGTATGTTTTACTTAGCTGCTTTCTTCTCTATGTTTTCTCTCTGTTAACCACGGACACTTCTAACTAAGACGTGTCTAGTGTCTAATATATGTCGTTTTCTCTCTTTTCTTATTTATTTTCTAGTTCCGGCTCTAGTACTTTGTTAAACTTTTTCATTTCTTAGAAATGAGACGAGTCTAACTCAACACCACAAAACCATTTCGTCGCCACTTATAAATATATTTAAGTGATAGTTTTATTTGATGTGAGACTTGGAACACAATTCAAATGCATGAAATCAACATTTATTTTTTATTATGTGGAGTACTAATTGAAGTTTTGATTGAAAATTGTGACTAATTGAGTTTTGTATAGG ATTACATTCAAGAGGATTATAGTCAACAAATCCACAGAGAAATTTTCAGGCTTACCATATGTTATGACTCTGCTCA ATTGTCTCCTTTCTGCTTGGTGAGCTAGCTTTTGCTTAAACTGTCTTTTTACTTTATGTCCACTTCACCCTAAGTCTTGTGTCAAGTCACGTGACTTGCTTCCTTCCAATTTTGTTGCTATTTGGTCCAACTGTCTCTCTTTTTGCTTCCACCATGCTGTAATTAATTTCCCTTTTTATACATTAATTGTGAAAAGTTTTCTTACATGCATAGCATCTTTTATGGTTAAACCTTAGAGGCATGCAATGTAGTGAATTTAGGTTGGATCTGGAAGTGTATGTCACATTTAGAGCATGATGACTTTATGAACATGATTGTCTTTAATAGGAACAAAACTATGGGATCATAATGATAAAAATCAAATAGCAATTGAATTTTTGCTTTCAATTGGTAAATCTTCACAGAGCAATTTATATCCTAAACCTTACTTGGTATTTTTTTTGCTTTTAATTAGTGTATTCCATTTTAAAAGGAATATTTCGGAAGGTTTCCTTCACTAGTCGAAGAAGAGGTGTGTGTGTGTGTACGCGTGCGCATGTATTTTTTTTTTAGTAGCTTCTGATTTCCAACATCTACAGGTACGGTCTGCCTTTTGTGTCTCCCAACAA CATACCGGTAACAACAGTAAATGGCACCGGAGCAGGGATTGAAATCATATATGTTTTGATATTCATCATATTTGCA CCTAAGAAGGAAAAAATCAAAATCTTTGCCCTATTCACCTTGGTACTGTCTGTGTTCTCTGCTGTTGTTTTTGTCT CCCTCTTTGCCTTCCATGGCAATCATAGGAAGGCCTTCTGCGGCTTTGCCATGGCTATATTTTCCGTCATCATGTA TGGTTCTCCACTCTCAATTATGGTAAGCCAAATTTACGGCACAACCATTTTTTTTATCAACTAGTAAGATACTCGAGCATTTGCACAAATATGACTTCTACGCAGATTTAAGACACATAGTTTCAAAATAAATTACCTCTGAAACAAAATTTTCTGATATCCAATATTAATGACTCAAAATATACTAGTTAATGTAATACTATCAAGCCAAATTTCAAAACATGCCATTAATTGTGGATTTTTAATTATATGCAGAGATTAGTGATCAAAACCAAGAGTGTGGAGTTCATGCCATTCTTCTTGT CGCTGTTTGTGTTTCTTTGCGGCAGTTCATGGTTTATATTCGGTCTGCTAGGCCGTGACCTATTTGTTGCTGTAAGTTAGTCCACTCGGCCTTAAATATAAGTAAAAAACAAAAATTAAAATGTCTTTGATTTAAATTTGGAAAAAATTTGCAAGTTTAAGTTAATAATTTAGTTTCAAGAACAAACTCATTGTAAGGGAATTTTATTACTTTTCAGGTACCTAATGG TCTTGGTTCTGTTTTGGGGACAATGCAACTAATATTGTATTTCATATACCGTGACAACAAAGGTAGTCCAAAACAG CAGGAACCAACAGAAGGGGAATCAATGGAGATGGGTAATGGAAAAAACCATCAAATGAAACAGTCTTATGAAAATG AAATTCAAGGATGA(序列中碱基下划线为编码区序列)，扩增产物中的下划线的区段就是本发明需要的编码蛋白质的核苷酸序列。

实施例1：

一.采用常用的CTAB法，从苜蓿根中提取根的总DNA，具体操作步骤如下：

1)将苜蓿样品液氮冻存后，用钢珠震荡成粉末。加入700μl CTAB提取液(2％w/v比CTAB，1.4M NaCl，20mM EDTA(pH＝8)，100mM TRIS-HCL(pH＝8)，使用前0.2％w/vβ-巯基乙醇)，65℃水浴30min。中间摇匀一次；

2)加700μl氯仿：异戊醇(24：1)，混匀后，13000rpm离心10min；

3)转移上清液到新的离心管，再重复步骤2；

4)用2μl RNase A 37℃水浴30min；

5)加入1/10体积的3M醋酸钠(70μl)和0.6体积的异戊醇(420μl)，混合均匀后，4℃离心20min；

6)去除上清液，底部无色透明的为DNA，然后加入1ml 70–75％的乙醇浸洗，最好过夜；

7)13000rpm离心10min收集底部沉淀，加入50μl TE buffer(pH＝8)进行溶解；

二.利用以上提取的DNA为模版，用SWEET1b特异引物P1(正向引物)+P2(反向引物)将SWEET1b的DNA片段扩增出来，具体步骤如下：

1)以苜蓿A17的DNA为模板2μl，5×GC Buffer 10μl，2.5mM dNTP 4μl，10mM引物(F/R)各2μl，Phusion DNA聚合酶0.5μl，ddH₂0补足50μl。反应程序为：98℃30s，以下三步循环35次，98℃30s，62℃1min，72℃30s，最后72℃5min，16℃停止。将PCR产物回收。

三.将扩增到的目的片段SWEET1b连接到pENTR-TOPO-vector(Invitrogen)载体中。具体步骤如下：

反应体系为：PCR产物1μl，5×NaCl 1μl，pENTR-D-TOPO vector和酶的混合物1μl，混匀。置于20℃反应过夜，转化大肠杆菌，挑选阳性克隆测序，确定所需的基因正确连接到pENTR-D-TOPO vector载体中。

实施例2苜蓿SWEET1b基因超量表达载体的构建及转基因到苜蓿根中

为了能阐明该基因的功能，申请人将SWEET1b基因在苜蓿中进行超量表达，根据转基因植株与野生型转空载体的株系进行差异比较，来确定该基因的功能。具体操作步骤：

一)SWEET1b超表达载体的构建

为了获得MtPT4：：MtSWEET1b的超表达双元载体，我们将以上构建好的pENTR-p4p1r-MtPT4pro(荷兰瓦赫宁根大学分子生物学实验室惠赠)，pENTR-TOPO-MtSWEET1b及已有的pENTR-p2rp3-Terimal(荷兰瓦赫宁根大学分子生物学实验室惠赠)和终载体pKGW-RR-MGW双元载体(荷兰瓦赫宁根大学分子生物学实验室惠赠)。按照摩尔比1:1:1:2的比例混合各1μl，然后添加LR Plus重组酶混体1μl，用1×TE补足5μl。置于20℃反应过夜，然后加入1μl蛋白酶K于37℃反应5min终止反应。最后，取1μl转化大肠杆菌，用电转化方法，获得阳性克隆。对阳性克隆进行测序，确定插入序列和方向的正确性，最终获得MtPT4::MtSWEET1b超表达载体。

二)超表达载体利用毛根转化体系转化苜蓿

具体操作如下：

1)将以上获得的SWEET1b超表达载体，转化发根农杆菌MSU440。阳性鉴定后，用于侵染苜蓿毛根。

2)苜蓿种子消毒：苜蓿A17种子用浓硫酸处理3-5min，倒出浓硫酸；用无菌水洗5次，加4％NaClO消毒10min；再用无菌水洗5次；将种子均匀铺放有滤纸固体FM培养基上，用锡箔纸包裹，倒置于4℃冰箱一天。(注：为了保证种子都能萌发，可以适当缩短浓硫酸处理时间；为了保证种子萌发整齐或早开花，可以在4℃冰箱放置2天)。第一天

3)苜蓿种子催芽：于25℃黑暗放置一天。第二天

4)光照培养：在FM固体培养基上，放一半滤纸，每皿均匀放铺放6株萌发的种子(去除种皮可以保证植株生长一致)；培养皿密封2/3部分，垂直放置于培养箱生长(21℃)。第三天

5)农杆菌预培养：植株生长三天后，开始准备转化所用的农杆菌。通常挑单克隆，在液体培养基上培养一天后，涂在培养对应抗性的LB固体培养基上，28℃培养两天

6)转化：从植株的上胚轴位置切除根；去除根后，在伤口处，涂上预培养好的农杆菌(农杆菌需要把这个伤口都覆盖，这样会增加转化效率)；平铺于FM培养基上；培养皿密封2/3部分，垂直放置于培养箱生长(21℃)。第8天

7)转移植株到EM培养基：将转化后的植株，转移到含300μg/ml头孢霉素(Cefotaxime)的EM固体培养基上(转移前，切除已长出来的根。通常这个阶段长出来的根，为非转基因根)；植株根上盖上滤纸。培养皿密封2/3部分，垂直放置于培养箱生长(21℃)。第13天

8)去除滤纸：一周后，去除覆盖在根上的滤纸；为了防止农杆菌污染，最好将植株转移到新的EM培养基上。第18-20天

9)阳性转化植株鉴定。利用转基因植株携带的红色荧光DsRed筛选标记，在体视显微镜下筛选转基因的阳性根，用于下一步试验。第20-30天

10)FM培养基配制：FM培养基全称medium。

调节pH 6.7，0.9％Daichifa琼脂(固体培养基配制所需)，120℃灭菌30min。灭菌后，培养皿分装前，分别加入单独灭菌的1M Ca(NO₃)₂ 0.76ml，1M CaCl₂·2H₂O 0.7ml。

Spore-element-β母液配方为：

11)EM培养基配制：

配制好后，调节pH至5.8，0.9％琼脂，110℃高温高压灭菌30min。

实施例3 SWEET1b超表达转基因植株表型观察及定量PCR检测

为了验证SWEET1b对菌根形成的影响，本发明将超表达SWEET1b的转基因苜蓿和空载体转基因对照，接种丛枝菌根真菌R.irregularis五周后，统计转基因根系菌根共生率。分别包括三个指数，F％被侵染根段占总根段的比例；M％总根中菌丝侵染率；m％被侵染根段中的菌丝侵染率。

首先，利用P3和P4引物对，如图1所示，检测了超表达系(OE-MtSWEET1b)和空载体系(EV control)中的SWEET1b的表达量，图1中，OE表示超表达SWEET1b转基因植株根系；EV，表示空载体对照转基因植物根系。柱形图数值代表的是来自于6个独立转基因系的均值，Bar代表着各自数值的均方差。“**”代表P<0.01,说明EV和OE数值间存在极显著差异。统计学方法为Student’s t-test；通过图1发现SWEET1b确实在超表达系中显著超量表达。

如图2所示，进一步分析共生率的差异发现，图2为转基因植物接种R.irregularis5周后进行检测的结果。每个柱形值代表的是6株独立的转基因植株的均值，Bar表示的是6个独立转基因植株的值的均方差。F％，表示被侵染根段占总根段的比例；M％，表示的是总根中菌丝侵染率；m％，表示的是被侵染根段中的菌丝侵染率。“*”，表示P<0.05,说明对应数据在超表达系(OE)和空载体(EV)间存在显著差异。通过图2发现超表达转基因根(OE-MtSWEET1b)相比空载体转基因根(EV control)的被侵染根段比例F％(p<0.05)显著增加,且菌丝率也趋向于显著增加(M％，p＝0.1047)。

进一步的，我们利用丛枝菌根真菌R.irregularis的看家基因RiEF，检测了转基因根系内的菌的丰度，如图3所示，图3为转基因植物接种R.irregularis 5周后进行检测的结果。每个柱形值代表的是6株独立的转基因植株的均值，Bar表示的是6个独立转基因植株的值的均方差。“*”，表示P<0.05,说明对应数据在超表达系(OE)和空载体(EV)间存在显著差异。通过图3发现超表达的系中的RiEF表达量，确实显著增加，且近50％。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> 一种苜蓿SWEET1b基因及其在促进苜蓿根系菌根率中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2134

<212> DNA

<213> 苜蓿(Medicago sativa)

<400> 1

atgcatgttg cacatctttt gtttggcata tttggtaggt taattaattt attatcattt 60

ttactcttac ttttaccttg ttgtataatt tttttttttc tgattctcac agtttgttct 120

ttgttggttc agggaatgct tctgctttgt tcctcttctt ggcacctgtg tatgttttac 180

ttagctgctt tcttctctat gttttctctc tgttaaccac ggacacttct aactaagacg 240

tgtctagtgt ctaatatatg tcgttttctc tcttttctta tttattttct agttccggct 300

ctagtacttt gttaaacttt ttcatttctt agaaatgaga cgagtctaac tcaacaccac 360

aaaaccattt cgtcgccact tataaatata tttaagtgat agttttattt gatgtgagac 420

ttggaacaca attcaaatgc atgaaatcaa catttatttt ttattatgtg gagtactaat 480

tgaagttttg attgaaaatt gtgactaatt gagttttgta taggattaca ttcaagagga 540

ttatagtcaa caaatccaca gagaaatttt caggcttacc atatgttatg actctgctca 600

attgtctcct ttctgcttgg tgagctagct tttgcttaaa ctgtcttttt actttatgtc 660

cacttcaccc taagtcttgt gtcaagtcac gtgacttgct tccttccaat tttgttgcta 720

tttggtccaa ctgtctctct ttttgcttcc accatgctgt aattaatttc cctttttata 780

cattaattgt gaaaagtttt cttacatgca tagcatcttt tatggttaaa ccttagaggc 840

atgcaatgta gtgaatttag gttggatctg gaagtgtatg tcacatttag agcatgatga 900

ctttatgaac atgattgtct ttaataggaa caaaactatg ggatcataat gataaaaatc 960

aaatagcaat tgaatttttg ctttcaattg gtaaatcttc acagagcaat ttatatccta 1020

aaccttactt ggtatttttt ttgcttttaa ttagtgtatt ccattttaaa aggaatattt 1080

cggaaggttt ccttcactag tcgaagaaga ggtgtgtgtg tgtgtacgcg tgcgcatgta 1140

tttttttttt agtagcttct gatttccaac atctacaggt acggtctgcc ttttgtgtct 1200

cccaacaaca taccggtaac aacagtaaat ggcaccggag cagggattga aatcatatat 1260

gttttgatat tcatcatatt tgcacctaag aaggaaaaaa tcaaaatctt tgccctattc 1320

accttggtac tgtctgtgtt ctctgctgtt gtttttgtct ccctctttgc cttccatggc 1380

aatcatagga aggccttctg cggctttgcc atggctatat tttccgtcat catgtatggt 1440

tctccactct caattatggt aagccaaatt tacggcacaa ccattttttt tatcaactag 1500

taagatactc gagcatttgc acaaatatga cttctacgca gatttaagac acatagtttc 1560

aaaataaatt acctctgaaa caaaattttc tgatatccaa tattaatgac tcaaaatata 1620

ctagttaatg taatactatc aagccaaatt tcaaaacatg ccattaattg tggattttta 1680

attatatgca gagattagtg atcaaaacca agagtgtgga gttcatgcca ttcttcttgt 1740

cgctgtttgt gtttctttgc ggcagttcat ggtttatatt cggtctgcta ggccgtgacc 1800

tatttgttgc tgtaagttag tccactcggc cttaaatata agtaaaaaac aaaaattaaa 1860

atgtctttga tttaaatttg gaaaaaattt gcaagtttaa gttaataatt tagtttcaag 1920

aacaaactca ttgtaaggga attttattac ttttcaggta cctaatggtc ttggttctgt 1980

tttggggaca atgcaactaa tattgtattt catataccgt gacaacaaag gtagtccaaa 2040

acagcaggaa ccaacagaag gggaatcaat ggagatgggt aatggaaaaa accatcaaat 2100

gaaacagtct tatgaaaatg aaattcaagg atga 2134

<210> 2

<211> 744

<212> DNA

<213> 苜蓿(Medicago sativa)

<400> 2

atgcatgttg cacatctttt gtttggcata tttgggaatg cttctgcttt gttcctcttc 60

ttggcacctg tgattacatt caagaggatt atagtcaaca aatccacaga gaaattttca 120

ggcttaccat atgttatgac tctgctcaat tgtctccttt ctgcttggta cggtctgcct 180

tttgtgtctc ccaacaacat accggtaaca acagtaaatg gcaccggagc agggattgaa 240

atcatatatg ttttgatatt catcatattt gcacctaaga aggaaaaaat caaaatcttt 300

gccctattca ccttggtact gtctgtgttc tctgctgttg tttttgtctc cctctttgcc 360

ttccatggca atcataggaa ggccttctgc ggctttgcca tggctatatt ttccgtcatc 420

atgtatggtt ctccactctc aattatgaga ttagtgatca aaaccaagag tgtggagttc 480

atgccattct tcttgtcgct gtttgtgttt ctttgcggca gttcatggtt tatattcggt 540

ctgctaggcc gtgacctatt tgttgctgta cctaatggtc ttggttctgt tttggggaca 600

atgcaactaa tattgtattt catataccgt gacaacaaag gtagtccaaa acagcaggaa 660

ccaacagaag gggaatcaat ggagatgggt aatggaaaaa accatcaaat gaaacagtct 720

tatgaaaatg aaattcaagg atga 744

<210> 3

<211> 247

<212> PRT

<213> 苜蓿(Medicago sativa)

<400> 3

Met His Val Ala His Leu Leu Phe Gly Ile Phe Gly Asn Ala Ser Ala

1 5 10 15

Leu Phe Leu Phe Leu Ala Pro Val Ile Thr Phe Lys Arg Ile Ile Val

20 25 30

Asn Lys Ser Thr Glu Lys Phe Ser Gly Leu Pro Tyr Val Met Thr Leu

35 40 45

Leu Asn Cys Leu Leu Ser Ala Trp Tyr Gly Leu Pro Phe Val Ser Pro

50 55 60

Asn Asn Ile Pro Val Thr Thr Val Asn Gly Thr Gly Ala Gly Ile Glu

65 70 75 80

Ile Ile Tyr Val Leu Ile Phe Ile Ile Phe Ala Pro Lys Lys Glu Lys

85 90 95

Ile Lys Ile Phe Ala Leu Phe Thr Leu Val Leu Ser Val Phe Ser Ala

100 105 110

Val Val Phe Val Ser Leu Phe Ala Phe His Gly Asn His Arg Lys Ala

115 120 125

Phe Cys Gly Phe Ala Met Ala Ile Phe Ser Val Ile Met Tyr Gly Ser

130 135 140

Pro Leu Ser Ile Met Arg Leu Val Ile Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe

145 150 155 160

Met Pro Phe Phe Leu Ser Leu Phe Val Phe Leu Cys Gly Ser Ser Trp

165 170 175

Phe Ile Phe Gly Leu Leu Gly Arg Asp Leu Phe Val Ala Val Pro Asn

180 185 190

Gly Leu Gly Ser Val Leu Gly Thr Met Gln Leu Ile Leu Tyr Phe Ile

195 200 205

Tyr Arg Asp Asn Lys Gly Ser Pro Lys Gln Gln Glu Pro Thr Glu Gly

210 215 220

Glu Ser Met Glu Met Gly Asn Gly Lys Asn His Gln Met Lys Gln Ser

225 230 235 240

Tyr Glu Asn Glu Ile Gln Gly

245

Claims (4)

1.一种苜蓿SWEET1b基因，其特征在于，SWEET1b基因的核苷酸序列如序列表SEQ IDNO:1所示。

2.根据权利要求1所述的苜蓿SWEET1b基因，其特征在于，SWEET1b基因的编码区核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的苜蓿SWEET1b基因，其特征在于，SWEET1b基因编码的蛋白质序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

4.根据权利要求1所述苜蓿SWEET1b基因在促进苜蓿根系菌根率中的应用。