CN110128364A - 一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及催化反应，具体的说是一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物及其应用。双功能小分子化合物为被至少一个催化基团取代的C5‑10羧酸、C5‑10氟代羧酸、芳杂环取代的羧酸、杂环取代的羧酸、C5‑10羧酸酰胺衍生物、C5‑10氟代羧酸酰胺衍生物、芳杂环取代的羧酸酰胺衍生物或杂环取代的羧酸酰胺衍生物，其中，所述羧基或酰胺衍生物作为锚定基团。本发明方法的建立既可以使引入的催化基团数量不受限制，又可以实现催化功能基团的取向以及与活性中心距离的精细调控。这样可以更好的增强H2O2活化效率，提高催化活性及立体选择性。

Description

一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物及其应用
技术领域
本发明涉及催化反应，具体的说是一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物及其应用。
背景技术
细胞色素P450酶具有十分重要的应用价值，它可以催化各种不同类型的化学反应，如羟基化，环氧化，氮、氧、硫部位上的脱烷基化，氮、硫等杂原子的氧化，氧化性的脱氨、脱卤及C-C键断裂等一系列反应。尤其是选择氧化惰性C-H键在有机合成方面有巨大潜力，应用P450酶开发手性药物生物合成技术已成为当前国内外研究热点。
细胞色素P450BM3作为P450酶超家族一员，因其超高的催化效率和成熟高效的表达系统，对其研究和应用十分广泛，已在医药中间体制备等领域有良好应用。但是P450BM3和绝大多数P450酶一样，其催化过程中都需要辅因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(还原型辅酶I，NADH)或者还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(还原型辅酶II，NADPH)提供两个电子，经由还原伴侣蛋白传递到反应活性中心，与来自蛋白质外部的两个质子一道，还原活化氧分子而生成反应活性中间体compound I，由后者负责底物氧化[1]。昂贵的辅因子和复杂的电子传递体系导致了其体外催化的低效，制约其在生物化工和有机合成上的进一步应用。
虽然在P450的催化循环中有过氧化氢支路(H2O2 shunt)的存在，但也仅有少数P450酶(如属于CYP152亚族的一些酶)可以利用此一催化途径[2,3]。由于过氧化氢路径不需要辅因子NAD(P)H和还原伴侣蛋白(酶)，可极大地简化催化路径，提高催化效率。另外过氧化氢价格便宜、反应中仅生成水作为副产物具有环境友好性，因此开发基于过氧化氢的P450酶催化体系可以极大地释放P450酶在生物化工和有机合成上的应用潜力。鉴于P450-H2O2催化体系的巨大潜在应用价值，尽管由于蛋白结构上的原因，绝大多数P450酶不能直接利用过氧化氢作为氧源。科学家已经尝试利用定点突变和定向进化的方法构建过氧化氢依赖的P450过加氧酶(Peroxygenase)。研究发现BMP-F87A可以利用过氧化氢羟化肉豆蔻酸，最高催化活性可达162nmol/min/nmol P450[4]；F87V可以将吲哚转化为靛蓝(Indigo)[5]。Cirino等[6]以F87A为模板用定向进化技术得到的突变体21B3，把对硝基酚氧基月桂酸的氧化活性提高18倍。尽管定点突变和定向进化的策略在P450-H2O2人工催化体系开发中取得一定进展，但其催化活性普遍较低。主要还是因为无论野生型P450酶还是其突变体，在活性中心部位都缺乏类似天然过氧化物酶和过加氧酶中可以起到“酸-碱”催化作用的氨基酸残基，而正是这样的氨基酸残基担负了过加氧酶催化过程中活化过氧化氢的任务。科学家也曾尝试利用定点突变在P450的活性部位引入这样的氨基酸残基，然而催化效果并不理想。这是因为只有引入的氨基酸残基与活性中心保持适当距离，才能真正起到“酸-碱”催化剂的作用，从而实现P450对过氧化氢的利用。例如，P450BM3的三个单点突变体F87H、F87D和F87E中，仅有F87H显示较低的过氧化氢催化活性，F87D和F87E则完全没有活性，就是由于该位点距离血红素铁离子活性中心过近[7,8]。
综上所述，蛋白质工程技术为开发过氧化氢依赖的P450酶变异体提供了支持，但对催化活性的提高有限，开发更加高效稳定的P450-H2O2催化体系有十分重要的价值和前景。
[1]Rittle J,Green M T.Cytochrome P450compound I:capture,characterization,and C-H bond activation kinetics[J].Science,2010,330(6006):933-937.
[2]Matsunaga I,Kusunose E,Yano I,et al.Separation and partialcharacterization of soluble fatty acid alpha-hydroxylase from Sphingomonaspaucimobilus[J].Biochem Bioph Res Co,1994,201(3):1554-1560.
[3]Lee D S,Yamada A,Sugimoto H,et al.Substrate recognition andmolecular mechanism of fatty acid hydroxylation by cytochrome P450frombacillus subtilis[J].J Biol Chem,2003,278(11):9761-9767.
[4]Li Q S,Ogawa J,Shimizu S.Critical role of the residue size atposition 87in H2O2-dependent substrate hydroxylation activity and H2O2inactivation of cytochrome P450BM-3[J].Biochem Biophy Res Co,2001,280(5):1258-1261.
[5]Li Q S,Ogawa J,Schmid R D,et al.Indole hydroxylation by bacterialcytochrome P450BM-3 and modulation of activity by cumene hydroperoxide[J].Biosci Biotechnol and Biochem,2005,69(2):293-300.
[6]Cirino P C,Arnold F H.A self-sufficient peroxide-drivenhydroxylation biocatalyst[J].Angew Chem Int Ed,2003,42(28):3299-3301.
[7]Reinen J,Ferman S,Vottero E,et al.Application of a fluorescence-based continuous-flow bioassay to screen for diversity of cytochromeP450BM3mutant libraries[J].J Biomol Screen,2011,16(2):239-250.
[8]Vottero E,Rea V,Lastdrager J,et al.Role of residue 87in substrateselectivity and regioselectivity of drug-metabolizing cytochrome P450CYP102A1 M11[J].J Biol Inorg Chem,2011,16(6):899-912.
发明内容
本发明目的在于提供一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物及其应用。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物，双功能小分子化合物带有催化基团和锚定基团，具体双功能小分子化合物为被至少一个催化基团取代的C5-10羧酸、C5-10氟代羧酸、芳杂环取代的羧酸、杂环取代的羧酸、C5-10羧酸酰胺衍生物、C5-10氟代羧酸酰胺衍生物、芳杂环取代的羧酸酰胺衍生物或杂环取代的羧酸酰胺衍生物，其中，所述羧基或酰胺衍生物作为锚定基团。
其中，所述芳杂环或杂环取代的羧酸为以芳杂环或者杂环化合物为骨架的羧酸，其三维结构的长度和C5-10羧酸长度相当。
所述酰胺衍生物为羧酸与天然氨基酸的氨基缩合产物；进一步的说可采用缩合剂催化缩合氨基酸和羧酸形成酰胺键或将羧基取代为酰卤后，氨基亲核取代等方法制得。
所述双功能小分子化合物中的催化基团和锚定基团分别置于化合物两侧。
所述催化基团为酸性基团或碱性基团；所述的“酸-碱”催化基团可由卤代腈或者卤代羧酸酯为基质，通过亲核取代制得，也可通过其他的有机反应缩合产生“酸-碱”催化基团等方法制得，
其中，酸性基团为-COOH或-SO3H；
碱性基团为
所述双功能小分子化合物为：
n＝1～4
其中。
进一步的说双功能小分子化合物为
其中
一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物的应用，所述双功能小分子化合物在激活P450酶利用H2O2对底物进行催化反应的应用。反应过程中不需要额外添加辅因子NAD(P)H及还原伴侣蛋白(酶)就能实现催化氧化。所述方法包括如下步骤：
所述BMP的突变体可以是单点突变也可以是多点组合突变，BMP及其突变体在应用时可以是其重组表达的生长态细胞培养液、重组表达的BMP及其突变体的静息细胞或者重组表达的BMP及其突变体的无细胞提取液或重组表达的BMP及其突变体的纯酶；
一般的说所述的BMP及其突变体是通过构建含有目的基因的质粒，转化重组质粒至大肠杆菌感受态细胞获得表达BMP及其突变体的基因工程菌株，然后对基因工程菌株发酵，进行BMP及其突变体的诱导表达。
上述发酵液即为生长态细胞培养液作为催化剂；
上述发酵液通过离心分离收集的BMP及其突变体的重组大肠杆菌细胞，即为静息态全细胞作为催化剂；
上述静息细胞经超声破碎，获得的BMP及其突变体的无细胞粗提液作为催化剂；
或者上述发酵液经重组酶His-tag与Ni-NTA的亲和层析所得的纯酶作为催化剂。
一种激活P450酶催化反应的方法，利用所述双功能小分子化合物诱导BMP实现H2O2对不同底物进行催化反应。
所述小分子可诱导的不同类型的催化反应，不仅能实现不同的催化反应类型，而且还可以提高反应的区域选择性和立体选择性。
所述不同催化类型包括但不限于不同取代基烯烃的环氧化，不同取代基硫醚的亚磺化，脂肪烃的羟化，芳香烃、杂芳烃化合物环上碳氢键的羟化或侧链取代基上的羟化等。
进一步说，将0.01μM～1mM BMP或其突变体与0.1μM～300mM底物加入至pH4～10的缓冲溶液中，再添加1μM～300mM的所述双功能小分子化合物和1μM～600mM H2O2在0℃～60℃反应1min～24h来实现底物的催化氧化。
所述缓冲溶液为Tris-HCl或PB缓冲液。
所述底物为：
所述反应后加入乙酸乙酯或正己烷对反应体系进行萃取分析，反应的TON为10～20000。
本发明所具有的优点：
本发明提供的小分子一方面在小分子的合适部位引入催化基团，并通过小分子将其精确带入酶的合适区域实现H2O2的活化，进而实现BMP对底物的高效催化；另一方面利用小分子主体结构和锚定基团的优化调整，实现对活性中心区域的合理占据和合适空间构像调节，进而实现新的高效底物催化及立体选择；此方法的建立既可以使引入的催化基团数量不受限制，又可以实现催化功能基团的取向以及与活性中心距离的精细调控。这样可以更好的增强H2O2活化效率，提高催化活性及立体选择性。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图2为本发明实施例2提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图3为本发明实施例3提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图4为本发明实施例4提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图5为本发明实施例5提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图6为本发明实施例6提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图7为本发明实施例7提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图8为本发明实施例8提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图9为本发明实施例9提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图10为本发明实施例10提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图11为本发明实施例11提供的催化图，control为不加小分子的催化反应。
图12为本发明实施例12提供的催化图。
图13为本发明实施例13提供的催化图。
图14为本发明实施例14提供的催化图。
图15为本发明实施例15提供的催化图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的解释说明。
各小分子化合物的制备实施例
1)不同链长咪唑基羧酸的合成
以制备ImC6为例，
Tomko R.；Overberger,C.G.J.Polym.Sci.Pol.Chem.,1985,23,265–277.
Hack,S.；B.；G.；Pabel,J.；Wanner,K.T.Eur.J.Med.Chem.2011,46,1483–4984.
Groves,J.T.；Neumann,R.J.Am.Chem.Soc.1989,111,2900-2909.
通用方法1(以6-咪唑基己酸为例):
将咪唑(1.4g,20.0mmol)加入到含15mL甲苯的烧瓶中，搅拌下缓慢加入氢化钠(0.5g,20.0mmol)，120℃回流3h,冷却至室温，缓慢滴加溴己酸乙酯(2.3g,10.0mmol)的甲苯溶液，回流过夜，TLC检测反应进程。
反应结束后，冷却至室温，用旋转蒸发仪将甲苯浓缩旋干，加入适量乙酸乙酯溶解，用饱和碳酸钠和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥浓缩后得粗产物，经柱层析(DCM/MeOH＝100：1)后得到1.2g无色透明液体(Yield＝57％)，1H-NMR鉴定。
将上述柱层析产物(420mg 2mmol)加入到含2mLNaOH(1M)和2mL乙醇的烧瓶中回流，反应结束后冷却至室温，用浓盐酸调节pH至酸性，旋干后用异丙醇溶解，过滤除去NaCl，经异丙醇重结晶得白色固体目标产物300mg(Yield＝82.3％)，1H-NMR鉴定。
ImC6
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoic acid(CZF-1-2):
Colorless solid(82％yield),mp:139–140℃.1H NMR(600MHz,
1.78(m,2H),1.66–1.56(m,2H),1.35–1.28(m,2H).
1.55(m,2H).
ImC7
7-(1H-Imidazol-1-yl)Heptanoic acid(CZF-3-2):
Colorless solid(68％yield),mp:132℃.1H NMR(600MHz,
1.25(m,2H),1.25–1.18(m,2H).
2)咪唑基酰胺基氨基酸衍生物的合成
以制备ImC6-L-Phe为例
Haines,D.C.；Chen,B.；Tomchick,D.R,et al.Biochemistry 2008,47,3662–3670.
Cong,Z.；Shoji,O.；Kasai,C,et al.ACS Catal.2015,5,150-156.
通用方法2(以1-咪唑基己酰胺基苯丙氨酸衍生物为例):
将6-咪唑基己酸(182mg,1mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT，150mg,1.1mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC，170mg,1.1mmol)加入含10mL无水DMF的烧瓶中，室温搅拌1h,然后冰浴下缓慢滴加含氮甲基吗啉(202mg,2mmol)和L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(240mg,1.1mmol)的DMF溶液，缓慢升至室温反应18h。反应结束后加入适量蒸馏水，DCM萃取3次，合并有机相，用饱和碳酸钠和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥浓缩后得粗产物，经柱层析(EA/MeOH＝100:1)后得到无色透明液体，1H-NMR鉴定。
将上述柱层析产物(172mg 0.5mmol)加入到含2mL NaOH(1M)和1mL THF的烧瓶中,室温搅拌，反应结束后用浓盐酸调节pH至酸性，旋干后用乙醇溶解，过滤除去NaCl，浓缩后得无色油状液体目标产物162mg(Yield＝49％)，1H NMR、13C NMR及HRMS(ESI)鉴定。
ImC6-L-Phe
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Phenylalanine(CZF-28-1):
Colorless oil(49％yield)1H NMR(600MHz DMSO-d6)δ9.18(s
(m,2H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ173.61,172.49,138.29,135.57,129.56,128.57,126.80,122.27,120.57,53.82,48.59,37.14,35.10,29.60,25.31,24.83.HRMS(ESI):m/z[M+H]+:calcd.for C18H24N3O3:330.1812；found:330.1811.ImC6-L-Leu
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Leucine(CZF-35):
Colorless oil(45％yield),1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ7.47(s,
1.35–1.27(m,2H),0.93(dd,J＝6.1,2.4 Hz,6H).13C NMR(151 MHz,DMSO)δ174.72,172.54,135.52,122.41,120.20,50.52,48.78,35.12,29.57,25.46,24.93,24.80,23.34,21.68.ImC6-L-Ile
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Isoleucine(CZF-37):
Colorless oil(53％yield)，1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ9.19(s
1.44–1.31(m,1H),1.27–1.13(m,3H),0.87–0.76(m,6H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ173.67,172.65,135.60,122.39,120.37,56.57,48.78,36.69,35.05,29.61,25.52,25.16,25.02,16.08,11.71.
ImC6-L-Trp
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Tryptophan(CZF-39):
Yellow to brown oil(60％yield)1H NMR(600 MHz DMSO-d6)δ
＝14.6,4.9 Hz,1H),2.99(dd,J＝14.6,9.0 Hz,1H),2.08(dq,J＝14.2,7.1 Hz,2H),1.77–1.70(m,2H),1.48–1.40(m,2H),1.17–1.08(m,2H).13C NMR(151 MHz,DMSO)δ174.04,172.45,136.54,135.53,127.65,124.03,122.39,121.34,120.24,118.78,118.63,111.84,110.45,53.31,48.75,35.13,29.57,27.58,25.40,24.80.
ImC6-L-Ala
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Alanine(CZF-56):
Colorless oil(50％yield)，1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ9.18(s
1.76(m,2H),1.57–1.47(m,2H),1.24(d,J＝7.3 Hz,3H),1.23–1.18(m,2H).13CNMR(101 MHz,DMSO)δ174.73,172.26,135.57,122.41,120.27,48.78,47.80,35.05,29.61,25.47,24.84,17.66.
ImC6-L-Val
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Valine(CZF-58):
Colorless oil(68％yield)，1H NMR(600 MHz DMSO-d6)δ9.17(s
1H),7.95(d,J＝8.6Hz,1H),7.78(t,J＝1.6Hz,1H),7.69(t,J＝1.5Hz,1H),4.17(t,J＝7.2Hz,2H),4.13(dd,J＝8.6,5.9Hz,1H),2.24–2.12(m,2H),2.02(dd,J＝13.1,6.7Hz,1H),1.85–1.76(m,2H),1.58–1.47(m,2H),1.20(dt,J＝14.6,7.5Hz,2H),0.85(dd,J＝6.8,4.5Hz,6H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ173.65,172.76,135.56,122.42,120.25,57.49,48.79,35.06,30.19,29.60,25.51,25.04,19.66,18.54.
ImC6-L-Met
6-(1H-Imidazol-1-yl)Hexanoyl-L-Methionine(CZF-60):
Colorless oil(78％yield),1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.20(s,
2.14(t,J＝7.1Hz,2H),2.03(s,3H),1.97–1.83(m,2H),1.83–1.78(m,2H),1.57–1.48(m,2H),1.27–1.18(m,2H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ173.93,172.71,135.55,122.42,120.22,51.27,48.78,35.12,31.07,30.21,29.59,25.46,24.89,15.03.
按照上述记载的制备合成过程还可合成得到本发明其它小分子化合物。
采用上述合成的小分子化合物进行激活P450酶催化反应，具体为：
实施例1
BMP利用(Im-C6-Phe)催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶BMP(PatrickC.Cirino,Frances H.Arnold.Advanced Synthesis&Catalysis,2010,344(9):932-937.)，0.5mM的小分子，20mMH2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表1)。反应结果如下：
表1
由图1和表1可见的加入对的环氧化反应有少许的促进作用。
实施例2
F87A利用催化的环氧化反应：
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A(PatrickC.Cirino,Frances H.Arnold.Advanced Synthesis&Catalysis,2010,344(9):932-937.)，0.5mM的小分子，20mMH2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表2)。反应结果如下：
表2
由图2和表2可见的加入对的环氧化反应有极大的促进作用。
实施例3
F87G利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87G(以F87A为模板通过现有通用PCR突变方法进行定点突变获得)，0.5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表3)。反应结果如下：
表3
由图3和表3可见的加入对的环氧化反应有极大的促进作用。
实施例4
F87A/T268V利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A/T268V(以F87A为模板，通过通用PCR突变方法进行定点突变获得)，0.5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表4)。反应结果如下：
表4
由图4和表4可见的加入对的环氧化反应有极大的促进作用。
实施例5
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，0.5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表5)。反应结果如下：
表5
由图5和表5可见的加入对的环氧化反应有少许的促进作用。
实施例6
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表6)。反应结果如下：
表6
由图6和表6可见的加入对的环氧化反应有较大的促进作用。
实施例7
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表7)。反应结果如下：
表7
由图7和表7可见的加入对的环氧化反应有较大的促进作用。
实施例8
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表8)。反应结果如下：
表8
由图8和表8可见的加入对的环氧化反应有较大的促进作用。
实施例9
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表9)。反应结果如下：
表9
由图9和表9可见的加入对的环氧化反应有较大的促进作用。
实施例10
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，10mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表10)。反应结果如下：
表10
由图10和表10可见的加入对的环氧化反应有少许的促进作用。
实施例11
F87A利用催化的环氧化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，0.5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，加入125μL4-(4-硝基苄基)吡啶(0.4g)的无水乙醇(10mL)溶液，，80℃水浴30min后冰浴10min，加入1mL丙酮/三乙胺的混合溶液(1:1)。用紫外分光光度计(Shimadzu Spectrophotometer UV-1800)测其570nm吸收，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表11)。反应结果如下：
表11
由图11和表11可见的加入对的环氧化反应有少许的促进作用。
实施例12
F87A利用催化的亚磺化反应
反应体系如下：将4mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A，0.5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，25℃水浴反应30min后，用乙酸乙酯(1mL)萃取，取450μL的有机相加入50μL二苯甲酮作为内标(终浓度为1mM)，然后进行GC测定。GC条件：DB-5柱；进样口温度280℃；FID检测器温度300℃；程序升温条件为100℃保留1min，15℃/min升至200℃不保留，60℃/min升至280℃保留4min；总分析时间为13min，同时以不加小分子化合物的催化反应作为对照(表12)。反应结果如下：
表12
由图12和表12可见的加入对的亚磺化反应有极大的促进作用。
实施例13
F87G/T268V利用催化的羟化反应
反应体系如下：将1mM(2％DMSO助溶)，0.5μM酶F87G/T268V(以F87A/T268V为模板，通过通用PCR突变方法进行定点突变获得)，1mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的20mM Tris-HCl(pH＝7.4,含100mM KCl)buffer中，25℃水浴反应30min后，用乙酸乙酯(1mL)萃取，取450μL的有机相加入50μL二苯甲酮作为内标(终浓度为1mM)，然后进行GC测定。GC条件：DB-5柱；进样口温度280℃；FID检测器温度300℃；程序升温条件为100℃保留1min，15℃/min升至200℃不保留，60℃/min升至280℃保留4min；总分析时间为13min，同时以不加小分子化合物进行催化反应作为对照(表13)。反应结果如下：
表13
由图13和表13可见的加入对的羟化反应有明显的促进作用。
实施例14
F87V/T268V利用催化的羟化反应
反应体系如下：将10mM(2％DMSO助溶)，0.5μM酶F87V/T268V(以F87A/T268V为模板，通过通用PCR突变方法进行定点突变获得)，1mM的小分子，60mM H2O2加入到终体积为1mL的20mM Tris-HCl(pH＝7.4,含100mM KCl)buffer中，25℃水浴反应30min后，用乙酸乙酯(1mL)萃取，取450μL的有机相加入50μL二苯甲酮作为内标(终浓度为1mM)，然后进行GC测定。GC条件：DB-5柱；进样口温度280℃；FID检测器温度300℃；程序升温条件为100℃保留1min，15℃/min升至200℃不保留，60℃/min升至280℃保留4min；总分析时间为13min，同时以不加小分子化合物进行催化反应作为对照(表14)。反应结果如下：
表14
由图14和表14可见的加入对的羟化反应有明显的促进作用。
实施例15
F87A/T268I利用催化的羟化反应
反应体系如下：将1mM(10％MeOH助溶)，0.5μM酶F87A/T268I(以F87A/T268V为模板，通过通用PCR突变方法进行定点突变获得)，0.5mM的小分子，20mM H2O2加入到终体积为1mL的pH8.0的PBS(100mM)中，4℃水浴反应30min后，添加30μL 5M HCl，150μL 1MpH8.0的PBS，然后取450μL体系加入50μL2-己醇作为内标(终浓度为1mM)，然后进行GC测定。GC条件：HP-Innovax柱；进样口温度280℃；FID检测器温度300℃；程序升温条件为100℃保留1min，15℃/min升至200℃不保留，60℃/min升至280℃保留4min；总分析时间为13min，同时以不加小分子化合物进行催化反应作为对照(表15)。反应结果如下：
表15
由图15和表15可见的加入对的羟化反应有极大的促进作用。

Claims (9)

1.一种激活酶催化反应的双功能小分子化合物，其特征在于：双功能小分子化合物为被至少一个催化基团取代的C5-10羧酸、C5-10氟代羧酸、芳杂环取代的羧酸、杂环取代的羧酸、C5-10羧酸酰胺衍生物、C5-10氟代羧酸酰胺衍生物、芳杂环取代的羧酸酰胺衍生物或杂环取代的羧酸酰胺衍生物，其中，所述羧基或酰胺衍生物作为锚定基团。
2.按权利要求1所述的激活酶催化反应的双功能小分子化合物，其特征在于：所述催化基团为酸性基团或碱性基团；其中，酸性基团为-COOH或-SO3H；
碱性基团为
3.按权利要求1或2所述的激活酶催化反应的双功能小分子化合物，其特征在于：双功能小分子化合物为
R1＝-COOH，-SO3H
R2＝-COOH，-COOR’，-CONH2
其中R＝-H，-Me，-iPr
4.按权利要求3所述的激活酶催化反应的双功能小分子化合物，其特征在于：双功能小分子化合物为
其中R＝-H，-Me，-iPr
5.一种权利要求1所述的激活酶催化反应的双功能小分子化合物的应用，其特征在于：所述双功能小分子化合物在激活P450酶利用H2O2对底物进行催化反应的应用。
6.一种激活P450酶催化反应的方法，其特征在于：利用所述双功能小分子化合物诱导P450酶的氧化结构域(BMP)实现利用H2O2对不同底物进行催化反应。
7.按权利要求6所述的激活酶催化反应的方法，其特征在于：将0.01μM～1mM BMP或其突变体与0.1μM～300mM底物加入至pH4～10的缓冲溶液中，再添加1μM～300mM的所述双功能小分子化合物和1μM～600mM H2O2在0℃～60℃反应1min～24h来实现底物的催化氧化。
8.按权利要求7激活酶催化反应的方法，其特征在于：所述缓冲溶液为Tris-HCl或PB缓冲液。
9.按权利要求6或7激活酶催化反应的方法，其特征在于：所述底物为
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112760298A (zh) * 2021-01-26 2021-05-07 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种细胞色素p450bm3氧化酶突变体及其制备方法和应用
CN113106074A (zh) * 2021-01-26 2021-07-13 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种催化乙苯等烷基苯及衍生物羟化的突变体及其应用
CN113106073A (zh) * 2020-01-20 2021-07-13 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种协同选择性催化甲苯及类似物羟化的突变体及其应用
CN115073550A (zh) * 2022-07-06 2022-09-20 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种激活酶催化反应的二肽双功能小分子化合物及其应用
CN115109758A (zh) * 2021-03-17 2022-09-27 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种催化靛蓝生物合成的p450突变酶

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005083100A1 (en) * 2004-02-23 2005-09-09 Isis Innovation Limited Oxidation by hydrogen peroxide
WO2007020428A1 (en) * 2005-08-15 2007-02-22 University Of Sussex Novel peroxidases and uses
CN103270040A (zh) * 2010-11-05 2013-08-28 因基迪亚有限公司 高效催化剂及其制备和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005083100A1 (en) * 2004-02-23 2005-09-09 Isis Innovation Limited Oxidation by hydrogen peroxide
WO2007020428A1 (en) * 2005-08-15 2007-02-22 University Of Sussex Novel peroxidases and uses
CN103270040A (zh) * 2010-11-05 2013-08-28 因基迪亚有限公司 高效催化剂及其制备和用途

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ACS: "RN：2159774-29-3等", 《STN REGISTRY数据库》 *
OSAMI SHOJI等: "Direct Hydroxylation of Benzene to Phenol by Cytochrome P450BM3 Triggered by Amino Acid Derivatives", 《ANGEW. CHEM. INT. ED.》 *
OSAMI SHOJI等: "Hydrogen peroxide dependent monooxygenations by tricking the substrate recognition of cytochrome P450BSβ", 《ANGEW. CHEM. INT. ED.》 *
PATRICK C. CIRINO等: "Regioselectivity and Activity of Cytochrome P450 BM-3 and Mutant F87A in Reactions Driven by Hydrogen Peroxide", 《ADV. SYNTH. CATAL.》 *
RINA D. KOYANI等: "Enzymatic Activation of the Emerging Drug Resveratrol", 《APPL BIOCHEM BIOTECHNOL》 *
ZHIQI CONG等: "Activation of Wild-Type Cytochrorne P450BM3 by the Next Generation of Decoy Molecules: Enhanced Hydroxylation of Gaseous Alkanes and Crystallographic Evidence", 《ACS CATAL.》 *
丛志奇: "化学调控细胞色素P450单加氧酶的催化功能与催化活性", 《第十届全国化学生物学学术会议报告摘要集》 *
王斌等: "细胞色素P450的结构与催化机理", 《有机化学》 *
王曦翎: "过氧化氢驱动的细胞色素P450酶研究进展", 《生物资源》 *
陈置丰: "双功能小分子的设计与合成：调控细胞色素P450的过氧化氢羟化反应活性", 《中国学位论文全文数据库》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113106073A (zh) * 2020-01-20 2021-07-13 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种协同选择性催化甲苯及类似物羟化的突变体及其应用
CN113106073B (zh) * 2020-01-20 2022-09-20 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种协同选择性催化甲苯及类似物羟化的突变体及其应用
CN112760298A (zh) * 2021-01-26 2021-05-07 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种细胞色素p450bm3氧化酶突变体及其制备方法和应用
CN113106074A (zh) * 2021-01-26 2021-07-13 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种催化乙苯等烷基苯及衍生物羟化的突变体及其应用
CN112760298B (zh) * 2021-01-26 2022-11-15 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种细胞色素p450bm3氧化酶突变体及其制备方法和应用
CN115109758A (zh) * 2021-03-17 2022-09-27 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种催化靛蓝生物合成的p450突变酶
CN115109758B (zh) * 2021-03-17 2024-05-07 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种催化靛蓝生物合成的p450突变酶
CN115073550A (zh) * 2022-07-06 2022-09-20 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种激活酶催化反应的二肽双功能小分子化合物及其应用

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