CN110095420A - 一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用 - Google Patents
一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用,所述检测方法是用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,选用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,其中本发明用的金属有机骨架纳米材料对过氧化氢具有较高的亲和力,无需加入过氧化物酶色源底物,利用反应前后金属有机骨架纳米材料自身吸光光度值的变化即可完成对过氧化氢的检测,且能完成复杂体系中葡萄糖或黄嘌呤的检测,在食品、环境分析或生物医学检测领域具有很大的实用价值;检测方法具有分析周期短、操作过程简单、数据准确、灵敏度高、检出限低等优点。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,涉及一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用。
背景技术
过氧化氢作为一种重要的工业原料和医用消毒剂,被广泛应用于化工、环境、食品、生物、医药等领域。过氧化氢的过量使用对环境和人体健康均会造成一定影响。因此,过氧化氢的测定对环境监测和临床分析具有十分重要的意义。构建一种快速简便、准确、灵敏、有效的检测新方法有着重要的应用价值。目前,过氧化氢的定量分析方法主要有化学发光法、荧光法、分光光度法、酶化学法、电化学方法等。其中,分光光度法因具有操作简单、快速且肉眼可视化等优点被得到广泛应用。
糖尿病作为全球范围内的一种高发疾病,对人类的健康具有很大的威胁。人体血液中葡萄糖浓度作为判断糖尿病的一个重要指标,对糖尿病的监测和治疗具有重要意义。因此,建立快速、经济、灵敏的葡萄糖检测分析方法异常重要。目前,葡萄糖的检测方法主要有色谱法、光谱法和电化学法等。色谱法和电化学法由于仪器昂贵,对操作人员技术要求较高等原因,其应用容易受到较多限制。光谱法因检测速度快、操作简单的优点受到广泛关注。
嘌呤是生物体内核酸的重要组成部分,并且在辅酶组成、代谢调节以及能量供应等方面均起着重要作用。黄嘌呤、次黄嘌呤和尿酸是人体中嘌呤降解代谢的主产物,主要存在于血液、肝脏和尿液中。人体中黄嘌呤、次黄嘌呤和尿酸的浓度变化可以直接反映人体免疫和代谢等机能的状况,同时也可检测与嘌呤代谢有关的疾病。当嘌呤代谢出现异常时,会出现如痛风、高尿酸血症、肾功能衰竭、白血病和肺炎等病症。因此,建立简便、灵敏、准确的检测分析黄嘌呤、次黄嘌呤和尿酸的方法是十分必要的。
葡萄糖、黄嘌呤经相应的氧化酶处理后,都可以定量地转化成过氧化氢。因此,完成对过氧化氢的检测可以间接实现对葡萄糖和黄嘌呤的检测。
金属有机骨架化合物(Metal-Organic Frameworks,MOFs)是一种由金属离子或离子簇与有机配体通过配位作用自组装形成的具有周期性结构的新型多孔骨架纳米材料。近年来,金属有机骨架化合物在催化、荧光、传感、电化学、吸附分离、药物传递等诸多领域受到人们的广泛关注。普鲁士蓝类似物作为一种最古老且最简单的金属有机骨架化合物,因其在气体吸附、储能、催化及载药等领域的广泛应用,得到了大量的研究。目前,已有报道称普鲁士蓝类似物纳米颗粒具有过氧化物模拟酶的催化活性,其对过氧化氢的检测具有高的灵敏度和高专一性,但是模拟酶催化显色反应在复杂体系中的应用容易受到影响。
因此,开发建立一种利用纳米材料自身性质变化完成对目标物质检测,且有利于拓展纳米材料在复杂环境中的应用的过氧化氢的分析方法非常有必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用,所述检测方法是用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,其中本发明用的金属有机骨架纳米材料对过氧化氢具有较高的亲和力,无需加入过氧化物酶色源底物,利用反应前后金属有机骨架纳米材料自身吸光光度值的变化即可完成对过氧化氢的检测,且能完成复杂体系中葡萄糖或黄嘌呤的检测,在食品、环境分析或生物医学检测领域具有很大的实用价值;所述检测方法具有分析周期短、操作过程简单、数据准确、灵敏度高、检出限低等优点。
为达此目的,本发明采用以下技术方案:
本发明的目的之一在于提供一种过氧化氢浓度的检测方法,所述检测方法是用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料的化学式为Xm[Fe(CN)6]n·yH2O,其中X为锰离子、铜离子或钴离子中的任意一种,m:n:y=(1-6):(1-4):(1-25),例如m:n:y为1:1:1、6:1:5、5:2:10、4:3:15、3:4:20、2:3:25、1:2:25、2:3:20、3:4:15、4:3:10、5:2:5等。
本发明的检测方法中使用的金属有机骨架纳米材料对过氧化氢具有较高的亲和力,无需加入过氧化物酶色源底物,利用反应前后金属有机骨架纳米材料自身吸光光度值的变化即可完成对过氧化氢的检测。
本发明通过金属有机骨架纳米材料检测过氧化氢的浓度。金属有机骨架纳米材料和过氧化氢反应,金属有机骨架纳米材料的离子价态会发生改变,配位情况会发生改变,导致金属有机骨架纳米材料本身的立方体结构被破坏,从而带来吸光度的变化,进而通过吸光度的变化检测过氧化氢的浓度。
本发明的检测方法具有分析周期短、操作过程简单、数据准确、灵敏度高、检出限低等优点。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料的制备方法包括如下步骤:
(1)将金属盐和分散剂在混合溶液中混合,得到混合液,其中金属盐为锰盐、铜盐或钴盐中的任意一种;
(2)将步骤(1)得到的混合液和铁氰酸钾溶液混合,反应,得到所述金属有机骨架纳米材料。
在本发明中,步骤(1)所述分散剂包括聚乙烯吡咯烷酮和/或二水合柠檬酸三钠。
在本发明中,步骤(1)所述混合溶液为水和醇类溶剂的混合。
在本发明中,所述水和醇类溶剂的体积比为(5-15):1,例如5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1,优选9:1。
在本发明中,所述醇类溶剂为乙醇。
在本发明中,步骤(1)所述锰盐包括一水合硫酸锰、硝酸锰或四水合氯化锰中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中,步骤(1)所述铜盐包括硝酸铜、氯化铜、一水合乙酸铜、五水硫酸铜或乙酰丙酮铜中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中,步骤(1)所述钴盐包括四水合乙酸钴、六水合硝酸钴、六水合氯化钴或乙酰丙酮钴中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中,步骤(1)所述混合液中金属盐的浓度为10-20mM,例如10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM等。
在本发明中,步骤(2)所述铁氰酸钾溶液中铁氰酸钾的浓度为15-30mM,例如15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM等,优选20mM。
在本发明中,步骤(2)所述混合是在搅拌条件下进行混合的。
在本发明中,步骤(2)所述反应的温度为15-45℃,例如15℃、18℃、20℃、22℃、25℃、27℃、30℃、33℃、35℃、37℃、40℃、42℃、45℃等。
在本发明中,步骤(2)所述反应的时间为1-2h,例如1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h、2h等。
在本发明中,所述步骤(2)还包括将反应得到的反应物进行后处理。
在本发明中,所述后处理包括离心、清洗以及干燥。
在本发明中,所述清洗用溶剂为乙醇。
在本发明中,所述检测方法包括如下步骤:
S1、将浓度梯度的过氧化氢标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据浓度和吸光度的关系,绘制标准曲线;
S2、将待测样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测样品中的过氧化氢浓度。
本发明中检测方法具有分析周期短、操作过程简单、数据准确、灵敏度高、检出限低等优点。
在本发明中,步骤S1所述浓度梯度的过氧化氢标准溶液是通过磷酸缓冲盐溶液稀释过氧化氢得到的。
在本发明中,所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1 M,例如0.01 M、0.02M、0.03M、0.04 M、0.05 M、0.06 M、0.07 M、0.08 M、0.09 M、0.1 M等。
在本发明中,以步骤S1所述浓度梯度的过氧化氢标准溶液的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL,例如10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、90μL、100μL等。
在本发明中,以步骤S2所述待测样品的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL,例如10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、90μL、100μL等。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL,例如2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL、5mg/mL、5.5mg/mL、6mg/mL、6.5mg/mL、7mg/mL、7.5mg/mL、8mg/mL等,优选5mg/mL。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇。
在本发明中,所述反应的时间为5-20min,例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min等。
在本发明中,所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍,例如5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在本发明中,所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的。
在本发明中,所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
本发明的目的之二在于提供一种如目的之一所述的检测方法在葡萄糖或黄嘌呤检测中的应用。
本发明中所述的检测方法用于检测葡萄糖或黄嘌呤的浓度是首先通过氧化酶将葡萄糖或黄嘌呤转换为过氧化氢,检测葡萄糖或黄嘌呤的浓度其实也就是检测过氧化氢的浓度。
在本发明中,所述应用包括用氧化酶处理葡萄糖或黄嘌呤。
在本发明中,所述处理葡萄糖用氧化酶为葡萄糖氧化酶。
在本发明中,所述处理黄嘌呤用氧化酶为黄嘌呤氧化酶。
在本发明中,所述检测方法在葡萄糖检测中的应用包括如下步骤:
A1、将预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据浓度和吸光度的关系,绘制标准曲线;
A2、将预处理后的待测葡萄糖样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测葡萄糖样品中的葡萄糖浓度。
在本发明中,步骤A1中所述浓度梯度的葡萄糖标准溶液的预处理包括:将葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到浓度梯度的葡萄糖标准溶液中,孵育,得到预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液。
在本发明中,步骤A2中所述待测葡萄糖样品的预处理包括:将葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到待测葡萄糖样品中,孵育,得到预处理后的待测葡萄糖样品溶液。
在本发明中,所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1 M,例如0.01 M、0.02M、0.03M、0.04 M、0.05 M、0.06 M、0.07 M、0.08 M、0.09 M、0.1 M等。
在本发明中,所述葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液中葡萄糖氧化酶的浓度为1-5mg/mL,例如1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL、5mg/mL等。
在本发明中,以所述葡萄糖的体积为100μL计,所述葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液的体积为10-40μL,例如10μL、15μL、20μL、25μL、30μL、35μL、40μL等,优选30μL。
在本发明中,所述孵育的温度为37-50℃,例如37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃等,优选50℃。
在本发明中,所述孵育的时间为60-90min,例如60min、65min、70min、75min、80min、85min、90min等,优选90min。
在本发明中,以所述葡萄糖标准溶液或待测葡萄糖样品的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL,例如10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、90μL、100μL等。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL,例如2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL、5mg/mL、5.5mg/mL、6mg/mL、6.5mg/mL、7mg/mL、7.5mg/mL、8mg/mL等。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇。
在本发明中,所述反应的时间为5-20min,例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min等。
在本发明中,所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍,例如5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在本发明中,所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的。
在本发明中,所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
在本发明中,所述检测方法在黄嘌呤检测中的应用包括如下步骤:
B1、将预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据浓度和吸光度的关系,绘制标准曲线;
B2、将预处理后的待测黄嘌呤样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测黄嘌呤样品中的黄嘌呤浓度。
在本发明中,步骤B1中所述浓度梯度的黄嘌呤标准溶液的预处理包括:将黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到浓度梯度的黄嘌呤标准溶液中,孵育,得到预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液。
在本发明中,步骤B2中所述待测黄嘌呤样品的预处理包括:将黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到待测黄嘌呤样品中,孵育,得到预处理后的待测黄嘌呤样品。
在本发明中,所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1 M,例如0.01 M、0.02M、0.03M、0.04 M、0.05 M、0.06 M、0.07 M、0.08 M、0.09 M、0.1 M等。
在本发明中,所述黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液中黄嘌呤氧化酶的浓度为0.02-0.08mg/mL,例如0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL、0.06mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL等。
在本发明中,以所述黄嘌呤的体积为100μL计,所述黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液的体积为10-40μL,例如10μL、15μL、20μL、25μL、30μL、35μL、40μL等,优选25μL。
在本发明中,所述孵育的温度为37℃。
在本发明中,所述孵育的时间为60-90min,例如60min、65min、70min、75min、80min、85min、90min等,优选75min。
在本发明中,以所述黄嘌呤标准溶液或待测黄嘌呤样品的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL,例如10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL、90μL、100μL等。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL,例如2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL、5mg/mL、5.5mg/mL、6mg/mL、6.5mg/mL、7mg/mL、7.5mg/mL、8mg/mL等。
在本发明中,所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇。
在本发明中,所述反应的时间为5-20min,例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min等。
在本发明中,所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍,例如5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在本发明中,所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的。
在本发明中,所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:
本发明选用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,其中本发明用的金属有机骨架纳米材料对过氧化氢具有较高的亲和力,无需加入过氧化物酶色源底物,利用反应前后金属有机骨架纳米材料自身吸光光度值的变化即可完成对过氧化氢的检测,且能完成复杂体系中葡萄糖或黄嘌呤的检测,在食品、环境分析或生物医学检测领域具有很大的实用价值;通过金属有机骨架纳米材料和过氧化氢反应,金属有机骨架纳米材料的离子价态会发生改变,配位情况会发生改变,导致金属有机骨架纳米材料本身的立方体结构被破坏,从而带来吸光度的变化,进而通过吸光度的变化检测过氧化氢的浓度。检测方法具有分析周期短、操作过程简单、数据准确、灵敏度高、检出限低等优点。
附图说明
图1为实施例1中金属有机骨架纳米材料的透射电镜图,标尺为0.2μm;
图2为实施例2中金属有机骨架纳米材料的扫描电镜图,标尺为2μm;
图3为实施例5中金属有机骨架纳米材料的透射电镜图,标尺为200nm;
图4为实施例7中吸光度和过氧化氢浓度的标准曲线图;
图5为实施例10中吸光度和葡萄糖浓度的标准曲线图;
图6为实施例11中吸光度和黄嘌呤浓度的标准曲线图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅仅是帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料,金属有机骨架纳米材料的化学式为Mn4[Fe(CN)6]2.667·15.84H2O。
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
(1)配置浓度为13mM的一水合硫酸锰的水-乙醇混合溶液10mL,向其中加入0.2g聚乙烯吡咯烷酮,搅拌溶解,得到溶液A,其中水和乙醇的体积比为9:1;
(2)配置浓度为20mM的铁氰酸钾水溶液,得到溶液B;
(3)在温度为25℃搅拌下,将4mL步骤(2)得到的溶液B慢慢滴加至步骤(1)得到的溶液A中,滴加完毕后,室温搅拌反应1h,反应完毕后,将混合液离心,去除上清液,固体用乙醇洗涤数次后,干燥,得到金属有机骨架纳米材料。
图1为本实施例制备的金属有机骨架纳米材料的透射电镜图,从图1可以看出,制备的金属有机骨架纳米材料具有良好的立方体形貌,且颗粒大小均一,粒径在600nm左右。
实施例2
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料,金属有机骨架纳米材料的化学式为Mn4[Fe(CN)6]2.667·15.84H2O。
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
(1)配置浓度为13mM的一水合硫酸锰的水-乙醇混合溶液10mL,向其中加入0.15g二水合柠檬酸三钠,搅拌溶解,得到溶液A,其中水和乙醇的体积比为9:1;
(2)配置浓度为20mM的铁氰酸钾水溶液,得到溶液B;
(3)在温度为25℃搅拌下,将8.5mL步骤(2)得到的溶液B慢慢滴加至步骤(1)得到的溶液A中,滴加完毕后,室温搅拌反应1h,反应完毕后,将混合液离心,去除上清液,固体用乙醇洗涤数次后,干燥,得到金属有机骨架纳米材料。
图2为本实施例制备的金属有机骨架纳米材料的扫描电镜图,从图2可以看出,制备的金属有机骨架纳米材料具有良好的立方体形貌,且颗粒大小均一,粒径在600nm左右。
实施例3
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料,金属有机骨架纳米材料的化学式为Mn4[Fe(CN)6]2.667·15.84H2O。
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
(1)配置浓度为10mM的硝酸锰的水-乙醇混合溶液10mL,向其中加入0.15g二水合柠檬酸三钠,搅拌溶解,得到溶液A,其中水和乙醇的体积比为5:1;
(2)配置浓度为15mM的铁氰酸钾水溶液,得到溶液B;
(3)在温度为15℃搅拌下,将4mL步骤(2)得到的溶液B慢慢滴加至步骤(1)得到的溶液A中,滴加完毕后,室温搅拌反应2h,反应完毕后,将混合液离心,去除上清液,固体用乙醇洗涤数次后,干燥,得到金属有机骨架纳米材料。
本实施例得到的金属有机骨架纳米材料的透射电镜图与实施例1得到的材料具有相似的形貌和粒径大小。
实施例4
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料,金属有机骨架纳米材料的化学式为Mn4[Fe(CN)6]2.667·15.84H2O。
本实施例提供一种金属有机骨架纳米材料的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
(1)配置浓度为20mM的四水合氯化锰的水-乙醇混合溶液10mL,向其中加入0.15g二水合柠檬酸三钠,搅拌溶解,得到溶液A,其中水和乙醇的体积比为15:1;
(2)配置浓度为30mM的铁氰酸钾水溶液,得到溶液B;
(3)在温度为40℃搅拌下,将4.5mL步骤(2)得到的溶液B慢慢滴加至步骤(1)得到的溶液A中,滴加完毕后,室温搅拌反应1h,反应完毕后,将混合液离心,去除上清液,固体用乙醇洗涤数次后,干燥,得到金属有机骨架纳米材料。
本实施例得到的金属有机骨架纳米材料的透射电镜图与实施例1得到的材料具有相似的形貌和粒径大小。
实施例5
将实施例1中的锰离子替换为铜离子,其余组成以及制备方法均与实施例1相同。
图3为本实施例制备的金属有机骨架纳米材料的透射电镜图,从图3可以看出,制备的金属有机骨架纳米材料具有良好的立方体形貌,且颗粒大小均一,粒径在50nm左右。
实施例6
将实施例1中的锰离子替换为钴离子,其余组成以及制备方法均与实施例1相同。
实施例7
将实施例1-6制备得到的金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,检测方法包括如下步骤:
S1、将市售的28%的过氧化氢溶液用浓度为0.01 M的磷酸缓冲盐溶液稀释至浓度分别为0.025mM、0.05mM、0.075mM、0.1mM、0.25mM、0.5mM、0.75mM、1mM、2.5mM、5mM、7.5mM、10mM、12.5mM和15mM的浓度梯度的过氧化氢标准溶液;而后加入40μL浓度为5mg/mL的金属骨架纳米材料水溶液混合,将混合后的混合液用浓度为0.01 M的磷酸缓冲盐溶液均稀释至400μL,反应15min后,用分光光度计测试波长在420nm的吸光度,根据过氧化氢标准溶液的浓度和吸光度制定标准曲线;
S2、将100μL已知浓度的过氧化氢样品和40μL浓度为5mg/mL金属有机骨架纳米材料溶液混合,将混合后的混合液用浓度为0.01 M的磷酸缓冲盐溶液均稀释至400μL,反应15min,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测样品中的过氧化氢浓度。
图4为本实施例中过氧化氢标准溶液的浓度和吸光度的标准曲线图,根据吸光度和浓度作标准曲线,得到线性回归方程y=0.25x+0.11,由回归方程得到线性相关系数(R2)为0.98,说明该标准曲线线性良好;且其检测范围为25μM-15mM。
以该标准曲线为依据,对已知浓度(0.05mM、0.2mM、0.85mM、1.2mM、1.8mM和2mM)的过氧化氢样品进行测试,测试结果见表1:
表1
从表1可知,通过本实施例提供的检测方法检测过氧化氢的浓度,其相对误差均低于5%,说明检测方法准确可靠。
实施例8
将实施例1-6制备得到的金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,检测方法包括如下步骤:
将100μL已知浓度的过氧化氢样品和10μL浓度为8mg/mL金属有机骨架纳米材料溶液混合,将混合后的混合液用浓度为0.1 M的磷酸缓冲盐溶液均稀释至400μL,反应20min,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据实施例7得到的标准曲线定量待测样品中的过氧化氢浓度。
以实施例7得到的标准曲线为依据,对已知浓度(0.03mM、0.4mM、0.95mM、1.5mM、1.75mM和2.1mM)的过氧化氢样品进行测试,测试结果见表2:
表2
从表2可知,通过本实施例提供的检测方法检测过氧化氢的浓度,其相对误差均低于5%,说明检测方法准确可靠。
实施例9
将实施例1-6制备得到的金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度,检测方法包括如下步骤:
将100μL已知浓度的过氧化氢样品和100μL浓度为2mg/mL金属有机骨架纳米材料溶液混合,将混合后的混合液用浓度为0.05 M的磷酸缓冲盐溶液均稀释至400μL,反应5min,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据实施例7得到的标准曲线定量待测样品中的过氧化氢浓度。
以实施例7得到的标准曲线为依据,对已知浓度(0.08mM、0.35mM、0.7mM、1.3mM、1.65mM和2.2mM)的过氧化氢样品进行测试,测试结果见表3:
表3
从表3可知,通过本实施例提供的检测方法检测过氧化氢的浓度,其相对误差均低于5%,说明检测方法准确可靠。
实施例10
将实施例1-6制备得到的金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测葡萄糖的浓度,检测方法包括如下步骤:
A1、将市售的浓度为1M的葡萄糖溶液用浓度为0.01M的磷酸缓冲盐溶液稀释至浓度分别为0.01mM、0.025mM、0.05mM、0.075mM、0.1mM、0.25mM、0.5mM、0.75mM、1mM、1.5mM、2mM、3mM、4mM、5mM、6mM、7mM、8mM和9mM的浓度梯度的葡萄糖标准溶液;
A2、将30μL浓度为2mg/mL的葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到100μL的步骤A1得到的浓度梯度的葡萄糖标准溶液中,37℃孵育60min,得到预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液,而后向其加入40μL浓度为5mg/mL的金属有机骨架纳米材料水溶液,而后用0.01M磷酸盐缓冲溶液稀释至400μL,反应20min,测试各溶液在420nm处的吸光光度值,建立浓度和吸光度的标准曲线;
A3、将30μL浓度为2mg/mL的葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到100μL的待测葡萄糖样品中,37℃孵育60min,得到预处理后的待测葡萄糖溶液,而后向其加入40μL浓度为5mg/mL的金属有机骨架纳米材料水溶液,而后用0.01M磷酸盐缓冲溶液稀释至400μL,反应20min,测试溶液在420nm处的吸光光度值,根据A2建立的标准曲线,测试待测葡萄糖样品中葡萄糖的浓度。
图5为本实施例中葡萄糖标准溶液的浓度和吸光度的标准曲线图,根据吸光度和浓度作标准曲线,得到回归方程y=0.084x+0.15,由回归方程得到线性相关系数(R2)为0.99,说明该标准曲线线性良好,且其线性检测范围为0.25-7mM,检测限为10μM。
以该标准曲线为依据,对已知浓度(0.5mM、1.0mM、1.8mM、2.5mM、4.0mM和6.5mM)的葡萄糖样品进行测试,测试结果见表4:
表4
从表4可知,通过本实施例提供的检测方法检测葡萄糖的浓度,与已知值相比,其相对误差均低于5%,说明检测方法准确可靠。
实施例11
将实施例1-6制备得到的金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测黄嘌呤的浓度,检测方法包括如下步骤:
B1、将市售的浓度为1M的黄嘌呤溶液用浓度为0.01M的磷酸缓冲盐溶液稀释至浓度分别为0.01mM、0.025mM、0.05mM、0.075mM、0.1mM、0.25mM、0.5mM、0.75mM、1mM、2mM和3mM的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液;
B2、将25μL浓度为0.05mg/mL的黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到100μL的步骤A1得到的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液中,37℃孵育75min,得到预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液,而后向其加入30μL浓度为5mg/mL的金属有机骨架纳米材料水溶液,而后用0.01 M磷酸盐缓冲溶液稀释至400μL,反应15min,测试各溶液在420nm处的吸光光度值,建立浓度和吸光度的标准曲线;
B3、将25μL浓度为0.05mg/mL的黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到100μL的待测黄嘌呤样品中,37℃孵育75min,得到预处理后的待测黄嘌呤溶液,而后向其加入40μL浓度为5mg/mL的金属有机骨架纳米材料水溶液,而后用0.01M磷酸盐缓冲溶液稀释至400μL,反应15min,测试溶液在420nm处的吸光光度值,根据B2建立的标准曲线,测试待测黄嘌呤样品中黄嘌呤的浓度。
图6为本实施例中黄嘌呤标准溶液的浓度和吸光度的标准曲线图,根据吸光度和浓度作标准曲线,得到回归方程y=0.38x+0.26,由回归方程得到线性相关系数(R2)为0.98,说明该标准曲线线性良好,且其线性检测范围为0.1-1mM,检测限为10μM。
以该标准曲线为依据,对已知浓度(0.15mM、0.3mM、0.5mM、0.65mM、0.8mM和0.95mM)的黄嘌呤样品进行测试,测试结果见表5:
表5
从表5可知,通过本实施例提供的检测方法检测黄嘌呤的浓度,与已知值相比,其相对误差均低于5%,说明检测方法准确可靠。
申请人声明,以上所述仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,所属技术领域的技术人员应该明了,任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种过氧化氢浓度的检测方法,其特征在于,所述检测方法是用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述金属有机骨架纳米材料的化学式为Xm[Fe(CN)6]n·yH2O,其中X为锰离子、铜离子或钴离子中的任意一种,m:n:y=(1-6):(1-4):(1-25);
优选地,所述金属有机骨架纳米材料的化学式为Mn4[Fe(CN)6]2.667·15.84H2O。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,所述金属有机骨架纳米材料的制备方法包括如下步骤:
(1)将金属盐和分散剂在混合溶液中混合,得到混合液,其中金属盐为锰盐、铜盐或钴盐中的任意一种;
(2)将步骤(1)得到的混合液和铁氰酸钾溶液混合,反应,得到所述金属有机骨架纳米材料。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)所述分散剂包括聚乙烯吡咯烷酮和/或二水合柠檬酸三钠;
优选地,步骤(1)所述混合溶液为水和醇类溶剂的混合;
优选地,所述水和醇类溶剂的体积比为(5-15):1,优选9:1;
优选地,所述醇类溶剂为乙醇;
优选地,步骤(1)所述锰盐包括一水合硫酸锰、硝酸锰或四水合氯化锰中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,步骤(1)所述铜盐包括硝酸铜、氯化铜、一水合乙酸铜、五水硫酸铜或乙酰丙酮铜中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,步骤(1)所述钴盐包括四水合乙酸钴、六水合硝酸钴、六水合氯化钴或乙酰丙酮钴中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,步骤(1)所述混合液中金属盐的浓度为10-20mM。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述铁氰酸钾溶液中铁氰酸钾的浓度为15-30mM,优选20mM;
优选地,步骤(2)所述混合是在搅拌条件下进行混合的;
优选地,步骤(2)所述反应的温度为15-45℃;
优选地,步骤(2)所述反应的时间为1-2h;
优选地,所述步骤(2)还包括将反应得到的反应物进行后处理;
优选地,所述后处理包括离心、清洗以及干燥;
优选地,所述清洗用溶剂为乙醇。
6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括如下步骤:
S1、将浓度梯度的过氧化氢标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据浓度和吸光度的关系,绘制标准曲线;
S2、将待测样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测样品中的过氧化氢浓度。
7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,步骤S1所述浓度梯度的过氧化氢标准溶液是通过磷酸缓冲盐溶液稀释过氧化氢得到的;
优选地,所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1M;
优选地,以步骤S1所述浓度梯度的过氧化氢标准溶液的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL;
优选地,以步骤S2所述待测样品的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL;
优选地,所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL,优选5mg/mL;
优选地,所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇;
优选地,所述反应的时间为5-20min;
优选地,所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍;
优选地,所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的;
优选地,所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
8.根据权利要求1-7任一项所述的检测方法在葡萄糖或黄嘌呤检测中的应用;
优选地,所述应用还包括用氧化酶处理葡萄糖或黄嘌呤;
优选地,所述处理葡萄糖用氧化酶为葡萄糖氧化酶;
优选地,所述处理黄嘌呤用氧化酶为黄嘌呤氧化酶。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述检测方法在葡萄糖检测中的应用包括如下步骤:
A1、将预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据浓度和吸光度的关系,绘制标准曲线;
A2、将预处理后的待测葡萄糖样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测葡萄糖样品中的葡萄糖浓度;
优选地,步骤A1中所述浓度梯度的葡萄糖标准溶液的预处理包括:将葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到浓度梯度的葡萄糖标准溶液中,孵育,得到预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液;
优选地,步骤A2中所述待测葡萄糖样品的预处理包括:将葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到待测葡萄糖样品中,孵育,得到预处理后的待测葡萄糖样品;
优选地,所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1M;
优选地,所述葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液中葡萄糖氧化酶的浓度为1-5mg/mL;
优选地,以所述葡萄糖标准溶液或待测葡萄糖样品的体积为100μL计,所述葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液的体积为10-40μL,优选30μL;
优选地,所述孵育的温度为37-50℃,优选50℃;
优选地,所述孵育的时间为60-90min,优选90min;
优选地,以所述葡萄糖标准溶液或待测葡萄糖样品的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL;
优选地,所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL;
优选地,所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇;
优选地,所述反应的时间为5-20min;
优选地,所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍;
优选地,所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的;
优选地,所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述检测方法在黄嘌呤检测中的应用包括如下步骤:
B1、将预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据浓度和吸光度的关系,绘制标准曲线;
B2、将预处理后的待测黄嘌呤样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合,反应,得到反应液,而后通过分光光度法测试反应液的吸光度,根据步骤S1得到的标准曲线定量待测黄嘌呤样品中的黄嘌呤浓度;
优选地,步骤B1中所述浓度梯度的黄嘌呤标准溶液的预处理包括:将黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到浓度梯度的黄嘌呤标准溶液中,孵育,得到预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液;
优选地,步骤B2中所述待测黄嘌呤样品的预处理包括:将黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到待测黄嘌呤样品中,孵育,得到预处理后的待测黄嘌呤样品;
优选地,所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1M;
优选地,所述黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液中黄嘌呤氧化酶的浓度为0.02-0.08mg/mL;
优选地,以所述黄嘌呤标准溶液或待测黄嘌呤样品的体积为100μL计,所述黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液的体积为10-40μL,优选25μL;
优选地,所述孵育的温度为37℃;
优选地,所述孵育的时间为60-90min,优选75min;
优选地,以所述黄嘌呤标准溶液或待测黄嘌呤样品的体积为100μL计,所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL;
优选地,所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL;
优选地,所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇;
优选地,所述反应的时间为5-20min;
优选地,所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍;
优选地,所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的;
优选地,所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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